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D980nm激光不同治疗频次对SD大鼠皮肤紧肤效果的对比性研究
目的:研究经过D980nm半导体激光不同治疗频次照射后,SD大鼠皮肤的胶原纤维、成纤维细胞、TGFβ1的变化,探讨激光对大鼠皮肤紧肤效果的对比性变化,旨在作为D980nm半导体激光今后研究的实验依据.方法:选取18只SD大鼠建立动物模型,分为I、II、III三组,每组6只,大鼠脊柱左侧皮肤作为激光照射实验组,脊柱右侧皮肤作为自身对照组.调节D980nm半导体激光仪设定参数,在皮下照射SD大鼠脊柱左侧皮肤,I组照射1次,II组照射2次,间隔2min,III组照射3次,间隔2 min,各组间隔1周处理一次,共3个疗程.第3个疗程结束休息1周后,引颈处死大鼠,背部皮肤脱毛取材切片,通过应用HE染色、免疫组化法,观察激光照射前后大鼠皮肤胶原纤维和成纤维细胞变化,检测分析TGFβ1表达在大鼠皮肤组织中的变化.结果:D980nm半导体激光进行皮下照射后大鼠皮肤胶原纤维含量增加、成纤维细胞数量增加、TGFβ1表达增强明显,其中激光照射3次组,大鼠皮肤胶原纤维含量、成纤维细胞数量增加、TGFβ1表达增强明显,定量分析与各组比较,有显著性差异(P<0.01).结论:经D980nm半导体激光皮下照射后SD大鼠皮肤的紧肤效果明显,合适的治疗频次可以提高皮肤的紧肤效果,并且紧肤效果强弱和治疗频次有关.
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乌鸡白凤丸对肾虚血亏大鼠血清雌二醇、孕酮水平及子宫内膜TGFβ1蛋白表达影响
目的 探讨乌鸡白凤丸对肾虚血亏大鼠子宫内膜修复影响及作用机制.方法 采用放血、饥饿加灌服羟基脲制备肾虚血亏大鼠模型,用乌鸡白凤丸进行干预;采用HE染色观察子宫内膜形态学变化;放射免疫法测定各组大鼠血清雌二醇、孕酮的水平;免疫组化法检测子宫内膜TGFβ1蛋白表达.结果 与空白组比较,模型组血清雌二醇水平降低(P＜0.05)、孕酮水平增高(P＜0.01)、子宫内膜TGFβ1蛋白表达减少(P＜0.01);与模型组比较,乌鸡白凤丸高剂量组雌二醇水平增高(P＜0.01)、子宫内膜TGFβ1蛋白表达增加(P＜0.05).结论 乌鸡白凤丸可能通过调节血清雌二醇、孕酮水平及子宫内膜TGFβ1蛋白表达,促进子宫内膜修复,达到调节月经作用.
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TGFβ1基因单核苷酸多态性与疾病的关系
转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGFβ1)是TGFβ家族的重要成员之一,现在其染色体定位、基因结构、基因表达、蛋白结构、受体结合、信号转导、生物学效应等均基本明确.而自从发现其单核苷酸多态性(single nu-cleotide polymorphisms,SNP)以来,越来越多的研究发现其与多种疾病的发生发展相关.文章综述了TGFβ1基因单核苷酸多态性与多种疾病的相关性,并在此基础上就其具体机制进行了复习,以进一步了解TGFβ1在多种疾病中的病理意义及可能的预防、诊断、治疗前景.
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氧化苦参碱对大鼠肝星状细胞旁分泌活化途径的抑制作用
目的观察氧化苦参碱对大鼠激活肝星状细胞(HSC)这一旁分泌活化途径的影响.方法分离正常及CCl4损伤肝库普弗细胞(KC),进行体外培养,收集损伤肝KC条件培养液(IKCM)及药物(氧化苦参碱,Oxy)干预后的条件培养液(Oxy-IKCM),以IKCM及Oxy-IKCM添加于原代培养的未活化HSC培养体系中,观察Oxy对KC旁分泌激活HSC的影响,生物学方法检测Oxy对活化的KC分泌TGFβ1的影响.结果急性损伤肝KC对HSC的增殖有促进作用,氧化苦参碱可抑制KC对HSC增殖的促进作用,并可抑制活化KC分泌的TGFβ1.结论氧化苦参碱可通过抑制旁分泌途径抑制HSC活化及活化KC分泌的TGFβ1.
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TGFβ1检测在慢性肝病肝纤维化诊断中的初步应用
目的探讨血清TGFβ1水平检测在慢性肝病肝纤维化的诊断意义及其影响因素.方法采用双抗体夹心ELISA法检测20例正常人血清、10例正常人血浆及76例慢性肝病患者血清TGFβ1水平,比较正常人与慢性肝病患者、正常人血清与血浆TGFβ1水平及慢性肝病患者血清TGFβ1水平与肝穿病理检查结果的相关性.结果慢性肝病在纤维化早期及炎症改变期TGFβ1水平较正常人显著上升,但在不同的炎症、纤维化级期间TGFβ1水平无显著差异,慢性肝病患者血清TGFβ1水平与其血小板计数高度相关.正常人血清TGFβ1水平较血浆值高近4倍(21.4±10.4μg/L对4.8±3.0μg/L),两者间有显著差异(P＜0.01).结论TGFβ1水平可反映肝脏的炎症和早期纤维化性改变;血小板数及标本血清、血浆的选择将影响TGFβ1检测水平.虽然血清TGFβ1水平在一定程度上反映慢性肝病肝脏炎症及纤维化性改变,但选用血浆更能准确反映体内TGFβ1的真实水平.
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携TGFβ1正、反义基因载体对膀胱癌细胞体外生长的作用
目的:探讨表达TGFβ1正、反义基因的复制缺陷型逆转录病毒载体,对人膀胱癌细胞生长及细胞周期调控的作用.方法:以逆转录病毒pRevTRE为载体,构建表达TGFβ1正、反义基因的复制缺陷型逆转录病毒载体pRevTβ和pRevTβ-AS;分别转染膀胱癌细胞株EJ,观察不同载体对膀胱癌细胞体外增殖、克隆形成和细胞周期时相的影响.结果:pRevTβ、pRevTβ-AS载体病毒滴度分别为0.84、0.88×105CFU/ml,对EJ细胞的整合率为100%,并有效表达;抑制TGFβ1表达可以降低靶细胞的生长速度和克隆形成率,同时出现G0/G1期细胞比例增高和S期细胞比例降低.结论:携TGFβ1反义基因的复制缺陷型逆转录病毒载体可以下调EJ细胞内源性TGFβ1表达,诱导肿瘤细胞G1期阻滞,抑制肿瘤细胞体外生长增殖.
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HSP47和TGFβ1在大鼠皮肤瘢痕形成中的作用
目的:探讨HSP47和TGFβ1在皮肤瘢痕形成中的作用,以及能否用HSP47反义寡核苷酸探针有效的抑制皮肤创伤性瘢痕形成.方法:取SD大鼠背部正常皮肤组织分离培养,获得成纤维细胞.用10ng/ml的TGFβ1处理后,用免疫组化SP法,免疫印记法和RT-PCR检测,TGFβ1对HSP47和Ⅰ型胶原表达水平的影响.将制作皮肤创口的72只SD新生鼠分为3大组,每大组又各分2小组,共6组:W组,不注射核酸探针,作为对照;A组,2小组分别注射HSP47和TGFβ1的反义核酸探针;S组,2小组分别注射HSP47和TGFβ1的正义核酸探针.每组分别有3只鼠在创伤后第1、第3、第5和第7天被处死.切取创伤处皮肤,用免疫印记法Northern blot和Western blot检测皮肤标本中HSP47和Ⅰ型胶原蛋白在成纤维细胞内的表达情况.结果:在使用TGFβ1处理后,皮肤组织中HSP47和Ⅰ型胶原蛋白的表达都明显升高.HSP47和Ⅰ型胶原蛋白的表达都受到TGFβ1的调控,而同时HSP47可以调控Ⅰ型胶原蛋白的表达.每日注射HSP47反义寡核苷酸探针(As-ODN)连续7d,能够有效的降低创口处皮肤中HSP47和Ⅰ型胶原蛋白的表达.而每日注射TGFβ1反义核酸探针能够有效的降低创伤处TGFβ1、HSP47和Ⅰ型胶原蛋白的表达,同时创口愈合过程中胶原纤维排列的紊乱程度减轻.结论:TGFβ1和HSP47在瘢痕形成中发挥了重要作用,反义寡核苷酸治疗能够有效降低Ⅰ型胶原蛋白的表达,从而抑制皮肤愈合过程中瘢痕的形成,具有潜在的应用价值.
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人转化生长因子基因重组克隆及高效表达
目的克隆人转化生长因子(TGFβ 1)基因并且在大肠杆菌中表达.方法从人的血小板中抽提总RNA,经逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)得到全长TGFβ 1 cDNA,将其克隆于表达质粒pBLMVL2中,构建了在PL启动子控制的含有T GFβ 1 cDNA重组子,转化到大肠杆菌RR1菌株中,进行温敏诱导表达.结果表达产物经SDS-PAGE电泳染色后,显示其相对分子质量为12.5×103,计算机灰度扫描分析,表达产物约占全菌蛋白的20%左右,Western-blot分析证实,表达产物为TGFβ 1,细胞实验显示其具有一定的生物活性.结论在大肠杆菌中表达出具有活性的人TGFβ 1.这为我们下一步研究其功能和临床应用打下了基础.
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当归对高脂血清所致ECV304细胞损伤的保护作用
实验观察了高脂血清对培养的人脐静脉内皮细胞(ECV304)的损伤及传统中药当归的保护作用,以探讨当归的抗动脉粥样硬化作用及其可能机制.培养人脐静脉内皮细胞,以高脂血清作损伤因子,用扫描电镜观察细胞的超微结构,分光光度法检测细胞培养液中一氧化氮(NO)的含量,免疫细胞化学方法检测细胞表面细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及转化生长因子β1(TGFβ1)的表达.与高脂血清孵育24 h后,内皮细胞的超微结构明显收损,且细胞表面ICAM-1、bFGF的表达明显增加,而细胞培养液中NO的量及细胞表达TGFβ1明显减少.加入当归后,高脂血清对内皮细胞的这些作用均可被逆转.当归对内皮细胞中ICAM-1、bFGF、TGFβ1及NO表达改变的影响可能与其抗动脉粥样硬化的作用有关.
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多氯联苯对大鼠睾丸bcl-2及TGFβ1表达影响的研究
目的:探讨多氯联苯(PCB)对大鼠睾丸结构及功能的影响.方法:选用Wistar雄性大鼠40只随机分为4组,A组饲喂正常饲料,B组饲喂含10-8mol/L PCB饲料,C组饲喂含10-7mol/L PCB饲料,D组饲喂含10-6mol/LPCB饲料,饲喂3个月后建立慢性PCB毒性动物模型,用光镜、免疫组化技术研究PCB对大鼠睾丸结构及功能的影响.结果:PCB对大鼠睾丸结构的损伤同PCB剂量呈正相关,高剂量PCB组睾丸组织结构受损严重;PCB能诱导bcl-2和TGFβ1表达,PCB能诱导睾丸组织bcl-2和TGFβl的表达,两者的表达强度同PCB的浓度相关;高浓度组TGFβl的阳性率明显高于对照组和其他组(P＜0.01),C组bcl-2阳性率明显高于对照组和其他组(P＜0.01).结论:PCB对大鼠睾丸组织结构及功能产生明显的损伤作用.
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双虎清肝颗粒对四氯化碳诱发肝纤维化大鼠血清TGFβ1、TMP1、MMP2及MMP9的影响
目的 探讨双虎清肝颗粒对四氯化碳诱发肝纤维化大鼠血清TGGβ1、TMP1、MMP2及MMP9的影响.方法 清洁级SD大鼠60只,随机分成6组:正常对照组、模型组、双虎清肝颗粒低、中、高剂量组、水飞蓟素对照组.除正常对照组外,均皮下注射400 mL/L四氯化碳3 mL/kg体重,8周后各治疗组给予不同剂量双虎清肝颗粒干预8周,给予水飞蓟素干预8 周,ELISA法检测大鼠血清TGFβ1、MMP2、MMP9及TMP1.结果 正常对照组与模型组比较,4项指标均有极显著差异(P<0.01);其他各组与模型组比较,4项指标均有显著差异(P<0.05).结论 双虎清肝颗粒能够通过降低大鼠血清TGFβ1、TMP1,提高大鼠血清MMP2、MMP9而发挥抗肝纤维化作用,并且量效关系明显.
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FAP和TGFβ1在宫颈癌中的表达及其意义
[目的] 检测FAP和TGFβ1在宫颈癌中的表达及其意义.[方法] 应用免疫组织化学方法对54例宫颈癌进行FAP和TGFβ1的检测.[结果] 在54例宫颈癌间质中FAP表达阳性率为88.89%,正常宫颈组织中无表达.FAP表达与宫颈癌的临床分期有关,与淋巴结转移和病理分级无关.在54例宫颈癌组织中,TGFβ1表达阳性率为87.04%.TGFβ1表达与宫颈癌的临床分期和病理分级有关,与淋巴结转移无关.FAP表达与TGFβ1阳性表达呈正相关(r=0.546,P=0.000).[结论] FAP的表达与宫颈癌演进有关.TGFβ1可诱导癌组织中反应性间质产生.从而促进FAP表达和肿瘤演进.
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骨形成蛋白7在糖尿病大鼠肾脏中的表达及意义
[目的]观察骨形成蛋白7(BMP7)、转化生长因子β1(TGFβ1)在糖尿病大鼠肾脏组织中的表达及其与病程的关系，以探讨BMP7在糖尿病肾病发病中的作用。[方法]64只SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组各32只。以四氧嘧啶复制糖尿病模型。动态观察空腹血糖(FBG)、24h尿微量蛋白，光镜(PAS染色)观察肾脏病理，RT-PCR技术检测肾脏组织中BMP7、TG-Fβ1mRNA表达。[结果]与正常组比较，糖尿病模型大鼠BMP7mRNA表达降低，而TGFβ1mRNA表达升高(P＜0.01)；并且随着病变的加重，BMP7mRNA表达水平呈下降趋势，而TGFβ1mRNA表达逐渐升高。相关性分析显示，与肾功能分别呈负相关和正相关。[结论]在糖尿病大鼠肾脏组织中BMP7表达减少，而TGFβl表达增加，表明在DN发生和发展过程中其重要作用。
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细胞因子在慢性病毒性心肌炎心肌纤维作用及清心Ⅱ号的干预作用
[目的]探讨TGFβ1在反复病毒感染致慢性病毒性心肌炎心肌纤维化对纤维连接蛋白及其受体整合素β1表达的影响与清心Ⅱ号干预作用.[方法]建立病毒性心肌炎慢性期心肌纤维化模型后小鼠随机分为模型组、卡托普利治疗组、清心Ⅱ号高、中、低治疗组,正常组和模型组给予生理盐水灌胃,治疗组分别给予卡托普利和清心Ⅱ号高中低剂量灌胃.疗程结束后分别采集心脏,应用RT-PCR技术检测CVB3-RNA;免疫组化技术检测TGFβ1和FN;免疫荧光染色-共激焦扫描分析整合素β1.[结果]造模后TGFβ1、整合素β1、FN明显增高,应用RT-PCR在心肌中可检测出病毒,清心Ⅱ号干预后TGFβ1、整合素β1、FN减低,各治疗组病毒减少.[结论]病毒、TGFβ1、整合素β1及FN在心肌纤维化形成中具有重要作用,清心Ⅱ号具有抗病毒、抗心肌纤维化作用.
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糖肾汤对ox-LDL诱导的大鼠系膜细胞增殖及TGFβ1表达的影响
[目的]观察糖肾汤对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的大鼠系膜细胞增殖及TGFβ1mRNA表达的作用.[方法]培养大鼠系膜细胞,分为空白对照组、ox-LDL组、糖肾汤高、中、低剂量组和罗格列酮组,培养24h后,采用MTT法检测细胞增殖,用RT-PCR技术检测系膜细胞TGFβ1mRNA表达情况.[结果]50 μg/ml的ox-LDL可促进细胞增殖和TGFβ1mRNA表达;糖肾汤和罗格列酮具有明显抑制ox-LDL诱导的MC增殖和TGFβ1mRNA表达增加的作用.[结论]糖肾汤可抑制ox-LDL诱导的MC增殖和TGFβ1表达的增加,从而在糖尿病肾病的治疗中起作用.
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肿瘤相关巨噬细胞促进胃癌上皮-间质转化的机制
目的 探讨胃癌中肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)促进上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的相关机制.方法 采用免疫组化法检测90例胃癌组织和20例癌旁正常组织中TAMs、TGFβ1及EMT标志物(E-cadherin、vimentin)的表达,并分析其相关性.结果 TAMs和TGFβ1在胃癌中的阳性率均高于正常胃黏膜(P＜0.05),且均与Lauren分型、分化程度、浸润深度、临床分期、淋巴结转移相关(P均＜0.05);胃癌中E-cadherin阳性率低于正常胃黏膜而vimentin阳性率高于正常胃黏膜(P均＜0.001),当胃癌分化程度为低～未分化、浸润深度达浆膜、临床分期达Ⅲ+Ⅳ期及有淋巴结转移时,E-cadherin表达减少而vimentin表达增加.胃癌中TAMs与TGFβ1表达呈正相关,与E-cadherin表达呈负相关,与vimentin表达呈正相关.结论 TAMs可能通过调节TGFβ1促进胃癌EMT,进而促进肿瘤浸润和转移.
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子痫前期患者胎盘中MMP-9、TIMP-1、TGFβ1和Endoglin的表达及意义
目的 探讨MMP-9、TIMP-1、转化生长因子31(transforming growth factorβ1,TGFβ1)和Endoglin在子痫前期患者胎盘组织中的表达及意义.方法 采用免疫组化SP法检测正常妊娠晚期(对照组)、轻度子痫前期、重度子痫前期各30例患者胎盘组织中MMP-9、TIMP-1、TGFβ1和Endoglin的表达.结果 MMP-9在对照组、轻度子痫前期、重度子痫前期中的表达呈逐渐减弱趋势,各组间差异有显著性(P＜0.05).TGFp1、TIMP-1在重度子痫前期组中的表达显著升高,与对照组和轻度子痫前期组比较差异有显著性(P＜0.05);Endoglin在对照组、轻度子痫前期、重度子痫前期的表达呈逐渐增强趋势,各组间差异有显著性(P＜0.05).结论 子痫前期患者胎盘组织中MMP-9、TIMP-1、Endoglin和TGFβ1的异常表达可能与滋养细胞浸润障碍有关,且共同参与子痫前期的发病.
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双氢青蒿素干预实验大鼠肺纤维化机制的研究
目的：研究双氢青蒿素干预肺纤维化的作用机制。方法构建博来霉素诱导的大鼠肺纤维化模型[1]，造模后行灌胃治疗。用 HE 染色、Masson 染色法观察大鼠肺组织病理变化，碱水解法检测羟脯氨酸含量，Ellisa 法检测血清中 TGFβ1（转化生长因子β1）含量，荧光定量 PCR 法检测 TGFβ1、SMAD2、SMAD3基因表达，免疫组化法检测大鼠肺组织中 TGFβ1、SMAD2/3、pSMAD2/3蛋白表达。结果双氢青蒿素可减轻肺纤维化模型大鼠肺组织炎症和纤维化程度，抑制 TGFβ1、SMAD2、SMAD3基因表达和 TGFβ1、SMAD2/3、pS-MAD2/3蛋白表达。结论双氢青蒿素可能通过抑制 TGFβ1-SMAD2/3通路干预肺纤维化。
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促肝细胞生长素联合丹参治疗慢性乙型肝炎患者46例
目的观察促肝细胞生长素联合丹参治疗慢性乙型肝炎的疗效.方法83例慢性乙型肝炎患者,随机分为治疗组和对照组,治疗组在对照组治疗基础上加用促肝细胞生长素100mg、丹参 30ml静脉滴注,每日一次,两组均治疗3个月,疗程结束后两组测定血清转化生长因子β1(TGFβ1),血清肝纤维化指标(HA、LN、PCⅢ)、肝功能及B超检查肝脏门脉的变化.结果疗程结束后治疗组以上测定项目明显下降而对照组下降不明显,疗程结束后两组以上测定项目比较有显著性差异(P＜0.01和P＜0.05).结论促肝细胞生长素联合丹参治疗慢性乙型肝炎有一定的作用.
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中国被毛孢菌丝体提取物抗肾损伤作用体内外实验研究
目的 探讨中国被毛孢菌丝体提取物(HSW)抗肾损伤的药理作用.方法 采用体外培养的人肾小管上皮细胞株(HK2)模型,观察HSW对马兜铃酸(AA)造成的HK2细胞损伤的逆转作用,及对于肾衰竭相关功能指标的影响.并在庆大霉素致大鼠急性肾衰竭(ARF)模型上验证HSW的作用.结果 HSW可以逆转AA对HK2细胞所造成的损伤,有效地抑制AA 引起的HK2 细胞TGFβ1、PAI-1 mRNA表达的上调,并可保护庆大霉素造成的大鼠急性肾损伤.结论 HSW对肾损伤的体内外模型有较好的药理作用.
