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环磷酰胺致大鼠膀胱黏膜JNK1表达下调
目的:探讨JNK1在环磷酰胺处理后膀胱黏膜中的作用.方法:SD大鼠12只,随机分处理组(n=6)和对照组(n=6),处理组大鼠腹腔注射环磷酰胺100mg/kg,对照组给予相同剂量生理盐水腹腔注射,24h后无菌取膀胱,HE染色观察膀胱形态结构,免疫组织化学方法检测JNK1蛋白的定位,Real-time PCR检测JNK1 mRNA表达水平,蛋白印迹(Western Blotting)检测JNK1蛋白的表达量,并行数据统计,P＜0.05差异具有统计学意义.结果:HE染色,处理组膀胱黏膜肿胀、弯曲减少,膀胱黏膜呈现毛刺样改变,膀胱黏膜上皮粗糙;免疫组化,JNK1蛋白只表达在膀胱黏膜;Real-time PCR,JNK1 mRNA的表达量处理组显著低于对照组(P＜0.05),Western Blotting,处理组JNK1表达量显著低于对照组(P＜0.05).结论:大鼠腹腔注射环磷酰胺致JNK1在膀胱黏膜中表达下调.
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基于MAPK通路研究五味甘露药浴散加减方治疗类风湿关节炎的药效机制
研究发现五味甘露药浴散加减方药浴有良好的抗炎活性,可以明显改善关节炎症程度,对类风湿性关节炎具有一定的治疗作用,推测其可能与调控滑膜细胞MAPK通路有关.该实验通过建立佐剂关节炎大鼠(AA)模型,进一步探讨其调控滑膜细胞MAPK通路的机制.采用酶联免疫法测定给药2周AA大鼠血清中TNF-α的水平,免疫组化法测定给药4周踝关节滑膜组织蛋白激酶ERK1/2,p38的含量,采用荧光定量PCR (RT-PCR)法检测膝关节滑膜组织中JNK1,ERK1,p38的mRNA表达.结果显示,与模型组比较,给药2周,可明显降低AA大鼠血清中TNF-α的水平(P＜0.05);给药4周,降低踝关节滑膜组织中p38,ERK1/2的蛋白表达(P＜0.05或P＜0.01),降低膝关节滑膜组织JNK1,p38,ERK1的基因表达(P＜0.05或P＜0.01).综上可见,五味甘露药浴散加减方有效治疗类风湿关节炎的作用机制可能与其降低血清中TNF-α的水平和滑膜组织中p38,ERK1/2的表达以及JNK1,p38,ERK1的基因表达,调控MAPK通路有关.
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超声靶向微泡破坏技术介导基因JNK1在小鼠肝癌细胞株中表达及对细胞迁移和侵袭作用的研究
目的 探讨应用超声靶向微泡破坏(UTMD)技术介导小鼠肝癌细胞株Hca-P JNK1基因的表达以及肝癌细胞迁移和侵袭.方法 构建并鉴定pCDNA3.1-JNK1载体.将小鼠肝癌细胞株Hca-P分组如下:A组(空白对照组),B组(质粒组),C组(脂质体+质粒组),D组(超声微泡+质粒+超声辐照组),E组(脂质体+超声微泡+质粒+超声辐照组).采用倒置荧光显微镜观察各组细胞的转染率,荧光定量PCR和Western Blot法检测JNK1的基因和蛋白质表达水平,以CCK-8法检测5组细胞的细胞活性,应用Transwell实验检测各组细胞的体外迁移和侵袭能力.结果 成功构建了pCDNA3.1-JNK1载体.各组转染率比较:E组均大于B、C、D组(P均＜0.05),C、D组转染率均高于B组(P均＜0.05),C、D组之间差异无统计学意义(P＞0.05).E组JNK1 mRNA和蛋白表达水平均高于其他各组(P均＜0.05);E组细胞活性、迁移和侵袭能力均高于其他各组(P均＜0.05)结论 UTMD技术结合脂质体转染法可以提高pCDNA3.1-JNK1载体转染小鼠肝癌细胞株Hca-P的效率,加大基因JNK1表达的上调幅度,增强细胞活性、迁移和侵袭能力.
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JNK1基因沉默对肺成纤维细胞增殖的影响
目的 研究C-Jun氨基末端激酶1(JNK1)基因表达沉默对肺成纤维细胞MRC-5增殖的影响.方法 设计针对JNK1基因的小RNA分子(siRNA),以脂质体转染法将双链siRNA转入MRC-5细胞后,采用流式细胞术检测佳转染浓度,RT-PCR检测JNK1 mRNA表达变化,Western blot检测总JNK、磷酸化JNK(P-JNK)蛋白表达,用CCK-8法检测siRNA对MRC-5细胞增殖的影响.结果 siRNA转染MRC-5细胞的佳浓度为50nmol/L；设计的两个靶位点siRNA,均可有效降低JNK1 mRNA表达,其中siRNA1抑制效果较siRNA2明显；siRNA1降低总JNK及P-JNK蛋白表达,有效抑制MRC-5细胞的增殖.结论 体外合成的siRNA可降低MRC-5细胞中JNK1基因的表达,降低JNK磷酸化水平,明显抑制细胞增殖.
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盐酸法舒地尔对脂多糖致大鼠大脑皮质神经元损伤的保护作用及机制研究
目的 探讨盐酸法舒地尔对脂多糖致大鼠大脑皮质神经元损伤的保护作用及可能机制.方法 提取新生大鼠大脑皮质神经元体外培养,7 d后将培养的神经元随机分为对照组、脂多糖组、不同浓度盐酸法舒地尔(50 μmol/L、100 μmol/L、200 μmol/L)+脂多糖组;采用倒置相差显微镜观察神经元形态学变化,测定乳酸脱氢酶(LDH)活性,并用AO/EB荧光染色、Hoechst 33258荧光染色检测神经元损伤和凋亡情况,FITC荧光染色法测定磷酸化c-Jun氨基端激酶1(JNK1)细胞内表达变化.结果 与对照组相比,脂多糖组可使体外培养神经元凋亡率明显增加(P＜0.05),JNK1表达显著升高(P＜0.05);与脂多糖组比较,不同浓度盐酸法舒地尔+脂多糖组可明显对抗脂多糖引起的神经元凋亡率,JNK1表达上调明显受抑.结论 盐酸法舒地尔对脂多糖诱导大鼠大脑皮质神经元损伤具有保护作用,这可能与抗凋亡、抑制JNK信号传导通路有关.
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辛伐他汀对大鼠肾缺血再灌注损伤中Wnt/JNK影响的研究
目的:探讨辛伐他汀(simvastatin SIM)对大鼠肾缺血再灌注损伤中Wnt/JNK的影响.方法:雄性wistar大鼠36只随机分为:假手术组、手术组、SIM干预组,每组12只,再将每组按取材时间不同分为6 h、48 h两个时相组.手术方法:假手术组开腹分离双侧肾动脉,但不夹闭,后关闭腹腔;手术组游离双侧肾动脉,动脉夹夹闭45 min后恢复灌注建立肾IRI模型;SIM干预组术前1周给大鼠灌胃SIM 20 mg·kg-1·d-1,其余处理同手术组.肾IRI后6 h、48 h,检测血清Scr值,肾组织行病理学观察及免疫组织化学法测定Wnt4、JNK1及其信号通路下游炎症因子TNFα的表达,并采用real time PCR法测定肾组织Wnt4 mRNA、JNK1 mRNA的表达.结果:肾组织病理学观察:假手术组肾组织形态结构基本正常;手术组肾小管上皮细胞有不同程度的肿胀、坏死和脱落、排列紊乱,管腔扩张,肾间质水肿、炎细胞浸润明显,以IRI后6 h为著;SIM干预组肾组织损伤程度较手术组明显减轻.Scr值测定:手术组Scr值较假手术组明显升高(P＜0.01);SIM干预组Scr值较手术组有所下降 (P＜0.01);以IRI后6 h,Scr值较高(P＜0.01).免疫组化检测:假手术组肾小管上皮细胞Wnt4、JNK1、TNFα表达较弱;手术组IRI后肾小管上皮细胞胞浆内Wnt4、JNK1、TNFα表达均比假手术组增强(P＜0.01),以6 h时为著(P＜0.01).SIM干预组Wnt4、JNK1、TNFα表达水平较手术组减弱(P＜0.05).real time PCR检测:假手术组肾小管上皮细胞Wnt4 mRNA、JNK1 mRNA表达较弱;手术组肾小管上皮细胞Wnt4 mRNA、JNK1 mRNA表达均较假手术组增强(P＜0.01),以6 h为著(P＜0.01);SIM干预组Wnt4 mRNA、JNK1 mRNA表达比手术组均有所下降(P＜0.01).相关性分析:JNK1与Wnt4、TNFα均成正相关(rs=0.94,rs=0.95);Wnt4 mRNA、JNK1 mRNA成正相关(rs=0.75);且均与Scr成正相关(rs分别为rs=0.93,rs=0.96,rs=0.94,rs=0.70,rs=0.35).结论:辛伐他汀预处理可能通过抑制Wnt/JNK信号通路的表达,从而减轻肾IRI程度.
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JNK1信号分子参与调控糖尿病大鼠心肌细胞肥大和纤维化
目的:探讨c-junN端蛋白激酶1(JNK1)信号分子在糖尿病(DM)大鼠心肌细胞肥大和纤维化过程中的作用.方法:使用60mg/kg链脲佐菌造模后,将造模成功的48只大鼠分为3组,依次为糖尿病模型组(A组,n=16),腹腔注射生理盐水20 μg/(kg·d);AngⅡ给药组(B组,n=16),将血管紧张素Ⅱ +0.9％生理盐水的ALZET微渗透泵植入皮下,以剂量700 ng/kg,d血管紧张素Ⅱ连续给药6周;SP600125给药组(C组,n=16),一次性尾静脉注射15 mg/kg SP600125.另外,选取20只大鼠为正常对照组(D组),给予等量溶媒.连续喂养两个月后检测相关指标.每周检测大鼠的空腹血糖水平,并称重,之后处死大鼠,称量心脏重量,计算心体比值和左室指数,同时应用免疫组化法检测心肌组织中Vimentin、collagen Ⅰ和α-actin的表达情况,另外,应用RT-PCR检测心肌组织中PI3KmRNA和Akt-lmRNA的表达情况.结果:D组大鼠状态良好,无死亡现象;A组和B组大鼠状态不佳,C组大鼠状态较好,三组大鼠均有死亡现象;A组、B组和C组大鼠的体重、心重明显低于D组,而心体比值显著高于D组,且差异具有统计学意义(P＜0.05);A、B、C三组大鼠的体重、心重和心体比值之间的差异具有统计学意义(P＜0.05);A、B、C组大鼠造模后空腹血糖水平明显高于D组,差异具有统计学意义(P＜0.05);与D组相比,A组、B组和C组大鼠心肌组织中Vimentin、collagen Ⅰ和α-actin的平均光密度值明显升高;C组大鼠心肌组织中Vimentin、collagen Ⅰ和α-actin的平均光密度值显著低于A组和B组,同时B组大鼠心肌组织中Vimentin、collagen Ⅰ和α-actin的平均光密度值明显高于A组,差异均具有统计学意义(P＜0.05);A组、B组和C组大鼠心肌组织中PI3KmRNA和Akt-1mRNA表达水平明显高于D组,C组大鼠心肌组织中PI3KmRNA和Akt-1mRNA表达水平显著低于A组和B组,而A组大鼠心肌组织中PI3KmRNA和Akt-lmRNA表达水平明显低于B组,差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论:JNK1信号分子可以通过IRS-1-PI3K-Akt途径影响信号传导,进而诱发糖尿病心肌病,Vimentin、collagen Ⅰ和α-actin表达水平升高,加速心肌细胞肥大和纤维化的进程.使用抑制剂后能明显改善这些蛋白的表达,这为临床上的治疗提供理论基础.
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亚硒酸钠介导人结肠癌HCT116细胞死亡的机制研究
目的:探讨亚硒酸钠杀伤结肠癌HCT116细胞的潜在机制.方法:应用MTS方法和DCFH-DA法分别检测亚硒酸钠对人结肠癌细胞系HCT116存活率和细胞内活性氧水平的影响,同时应用小分子干扰RNA片段研究JNK1和p53在亚硒酸钠介导的细胞死亡过程中的作用.结果:亚硒酸钠可显著提高HCT116细胞内的活性氧水平,使细胞发生氧化应激,激活应激相关蛋白JNK1和p53,从而达到杀伤肿瘤细胞的作用.结论:亚硒酸钠能有效杀伤结肠癌肿瘤细胞,同时JNK1和p53在亚硒酸钠介导的细胞死亡过程中发挥了重要作用.
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非小细胞肺癌中Livin和JNK1的表达及相关性研究
目的 探讨在非小细胞肺癌(non small cell lung cancer,NSCLC)中的Livin、JNK1蛋白的表达及相关性.方法 采用免疫组织化学(二步法)检测187例NSCLC肺癌组织Livin、JNK1[包括总JN1蛋白(t-JNK1),磷酸化JNK1(p-JNK1)]蛋白的表达情况,采用Spearman等级相关分析探讨其相关性.结果 Livin主要在胞浆中定位表达,在肺癌中的表达阳性率明显高于肺良性病变对照组;在鳞癌中表达阳性率明显高于腺癌和其他癌类(P＜0.05).其在肺癌表达的积分明显高于良性对照组(P＜0.05),其在鳞癌中表达的积分明显高于腺癌及其他癌类组织.t-JNK1、p-JNK1在肺癌细胞上及在假复层纤毛柱状上皮均可见表达,主要在胞浆中定位表达,t-JNK1未见核内定位表达,而p-JNK1偶见核内定位表达.t-JNK1在肺癌组表达阳性率明显低于对照组(P＜0.05),t-JNK1在肺癌中表达的积分低于对照组;而p-JNK1在肺癌组表达阳性率明显高于对照组(P＜0.05).p-JNK1在肺癌中表达的积分高于对照组,但两者无统计学意义(P＞0.05).Livin与t-JNK1呈现显著的负相关,Livin与p-JNK1呈现显著的正相关.结论 Livin在肺癌中高表达,其在鳞癌中表达高于腺癌和其他类型癌.t-JNK1在肺癌中低表达,而p-JNK1在肺癌中高表达.Livin与p-JNK1表达正相关,推测Livin可促JNK1蛋白磷酸化.
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高强度周期性牵张应力促进体外培养成肌细胞凋亡的机制探讨
目的:探讨高强度应力作用下体外培养成肌细胞凋亡的分子机制.方法:采用Flexercell Strain Unit系统对体外培养成肌细胞施加牵张应力,通过DNA ladder实验观察细胞凋亡情况.Western Blot检测磷酸化和总体JNK1的水平,通过NFkappa B报告系统检测其活性.通过JNK1的RNAi实验观察抑制JNK1后,是否补救被抑制的NFkappa B活性.结果:10%表面拉伸幅度的牵张应力作用24 h后,细胞形态梭形稍变长,且排列方向有一致性的趋势,DNA ladder实验证实15%以上较高强度应力引起C2C12细胞凋亡,高强度应力条件下成肌细胞凋亡过程中,JNK1通路被激活,抑制JNK1的活化,补救被抑制的NFkappa B活性.结论:高强度周期性牵张应力促进体外培养成肌细胞凋亡是通过激活JNK1通路而抑制NFkappa B活性实现的.
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雷公藤多甙对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364表达JNK1蛋白的影响
目的 探讨雷公藤多甙(Tripterygium Glycosides,TG)对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364JNK1的影响,进一步阐明雷公藤多甙治疗类风湿性关节炎的作用机制.方法 运用Western-blot检测不同浓度的雷公藤多甙(0、5、10、20 mg/L)对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364 JNK1蛋白的表达.结果 雷公藤多甙明显地抑制IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364对JNK1蛋白的表达.结论 雷公藤多甙抑制IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364对JNK1蛋白的表达,可能是其治疗类风湿性关节炎的重要作用机制之一.
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RAGE-MKK4/MKK7-JNK1通路在2型糖尿病合并肝细胞癌中的作用
目的 探讨晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、丝裂原活化蛋白激酶激酶4(MKK4)、丝裂原活化蛋白激酶激酶7(MKK7)及c-Jun 氨基末端蛋白激酶1(JNK1)在2型糖尿病合并肝细胞癌中的表达及意义.方法 收集肝胆外科手术切除的2型糖尿病合并肝细胞癌(DMHC组)癌组织和相应癌旁组织标本18例及30例肝细胞癌(HCC组)癌组织和相应癌旁组织,用Western blot法检测其RAGE、MKK4、MKK7及JNK1的蛋白表达情况.结果 (1)DMHC及HCC组癌组织中RAGE、MKK7及JNK1蛋白表达均较相应癌旁组织高,MKK4蛋白表达水平均较相应癌旁组织表达低,差异均有统计学意义(P<0.01).DMHC组癌组织中MKK7和JNK1蛋白表达高于HCC组癌组织,差异有统计学意义(P<0.05).(2)HCC组低分化的癌组织RAGE、MKK7和JNK1蛋白表达水平均较高分化的癌组织高,而DMHC组低分化的癌组织MKK7和JNK1蛋白表达水平较高分化的癌组织表达高,差异均有统计学意义(P<0.01).(3)DMHC组发生转移的患者癌组织MKK4蛋白表达水平较未发生转移者降低,差异有统计学意义(P<0.05).(4)DMHC及HCC组癌组织RAGE与MKK7、RAGE与JNK1、MKK7与JNK1蛋白表达水平均呈显著正相关关系(P<0.05),且DMHC组的相关性更显著.结论 RAGE蛋白表达增加可能参与了肝细胞癌的发生和发展;MKK4降低可能是单纯肝细胞癌及2型糖尿病合并肝细胞癌的危险因素之一;糖尿病状态下MKK7、JNK1蛋白更高的表达可能促进了2型糖尿病时肝细胞癌的发生和发展,MKK4降低可能导致了肝癌细胞的转移.MKK7和JNK1可能在一定水平上受RAGE的调控.
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烧伤早期肝组织JNK1及其磷酸化的变化
目的:观察烧伤小鼠早期肝组织JNK1及其磷酸化的时相变化特点,初步探讨烧伤后应激的分子机制.方法:将36只BALB/C小鼠随机分为正常对照组和实验组,实验组给予背部Ⅲ° 15%-20%烧伤.分别于伤后2h、4h、6h、12h、24h用western blot测定肝组织JNK1的蛋白表达及其磷酸化水平.结果:烧伤后各时相点肝组织JNK1在蛋白水平与正常对照相比没有统计学意义的变化;而烧伤后早期(2h)JNK1磷酸化程度显著增加,4h达到高峰,6h时仍显著高于正常对照组水平(P＜0.01),以后逐渐恢复至正常.结论:烧伤早期引起小鼠肝组织JNK1的磷酸化程度显著增强,而蛋白表达无明显变化.
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艾叶制炭对人主动脉内皮细胞TFPI、vWF、NO和活化血小板JNK1表达的影响
目的 研究艾叶制炭前后对入主动脉内皮细胞组织因子途径抑制物(TFPI)、内皮细胞血管性假血友病因子(vWF)、NO含量的影响,以及对大鼠血小板氨基末端激酶-1(JNKl)表达水平的影响,阐明艾叶炭止血机制.方法 将体外培养的人主动脉内皮细胞(HEAC)随机分组,分别给予不同极性(石油醚、二氯甲烷、醋酸乙酯、正丁醇、水、水提物、鞣质、总黄酮)部位的艾叶生、炭品,终质量浓度为200、100、50 μg/mL,培养48 h后,取细胞培养液试剂盒法测定TFPI、vWF、NO含量;采用免疫蛋白印迹方法检测艾叶制炭前后各部位对大鼠血小板JNK1磷酸化水平的影响.结果 与对照组及相应生品组比较,艾叶炭品二氯甲烷和鞣质部位TFPI、NO含量显著降低,vWF含量显著升高(P＜0.01);大鼠血小板JNK1磷酸化水平显著升高(P＜0.01).与对照组比较,艾叶鞣质部位TFPI、NO含量显著降低,vWF含量显著升高(P＜0.01);大鼠血小板JNK1磷酸化水平显著升高(P＜0.01).结论 二氯甲烷和鞣质部位是艾叶炭的主要止血作用部位,其止血机制为降低TFPI、NO含量、增加vWF的含量;明显提高血小板JNK1的磷酸化水平.
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西黄丸调节JNK1/AP-1通路抑制荷4T1小鼠乳腺癌细胞生长
目的研究西黄丸抑制荷4T1小鼠乳腺癌肿瘤的生长及其可能机制.方法建立荷4T1小鼠乳腺癌模型,以低、中、高剂量(0.39、0.78、1.95 g/kg)ig给予西黄丸两周,分离肿瘤组织,称质量并计算抑瘤率;切片,TUNEL染色检测肿瘤细胞凋亡;实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测肿瘤组织JNK1、AP-1 mRNA表达;免疫荧光染色和Western Blotting检测肿瘤组织中JNK1、AP-1蛋白表达.结果与模型组比较,肿瘤质量随西黄丸剂量的升高显著下降;TUNEL荧光染色结果显示,肿瘤细胞凋亡数量随西黄丸剂量的升高显著升高;qRT-PCR结果显示,肿瘤组织中JNK1、AP-1 mRNA表达水平随西黄丸剂量的升高显著上调;免疫荧光染色和Western Blotting结果显示,肿瘤组织中JNK1、AP-1蛋白表达随西黄丸剂量的升高显著增加;且高、中、低剂量组差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论西黄丸显著抑制肿瘤生长,其作用机制与激活JNK1/AP-1信号通路促进肿瘤细胞凋亡相关.
关键词： 西黄丸 荷4T1小鼠乳腺癌细胞 JNK1 AP-1 凋亡
