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shRNA干扰胸腺瘤细胞Wnt4基因后JNK基因表达下调
目的：研究shRNA干扰Wnt4基因对胸腺瘤细胞JNK基因表达的影响及Wnt4基因发挥作用可能依赖的信号通路。方法：根据shRNA设计原则，设计针对Wnt4基因的4个干扰靶点，构建Wnt4-shRNA干扰质粒，经鉴定片段成功插入后，将空白质粒、TR001质粒和重组的4个干扰质粒分别转染体外培养的胸腺瘤细胞。采用RT-PCR检测转染后Wnt4基因表达，挑选对Wnt4基因抑制效果好的干扰质粒进行后续实验。将胸腺瘤细胞分3组：空白对照组；转染TR001质粒组；转染干扰质粒组。用LipofectamineTM2000转染，采用RT-PCR及Western blot检测细胞Wnt4和JNK的mRNA及蛋白表达。结果：shRNA-Wnt4-3质粒能显著抑制Wnt4基因表达，抑制率为52.37%（P＜0.05）。 Wnt4基因下调后胸腺瘤细胞内JNK基因表达也显著下调（P＜0.01），差异有统计学意义。结论：采用shRNA干扰Wnt4基因后胸腺瘤细胞内JNK基因表达显著下调，说明Wnt4基因与JNK基因的表达有相关性， Wnt4基因可能依赖于非经典的Wnt/JNK信号通路发挥作用。
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三七总皂苷预处理对缺血再灌注损伤大鼠肾脏wnt4蛋白的影响
目的 探讨三七总皂苷(PNS)预处理对缺血再灌注损伤肾脏wnt4蛋白的影响.方法 取72只SD雄性大鼠随机分为对照(CON)组、缺血再灌注损伤(IR)组、PNS组.实验干预:(1)CON组切除右肾后,左肾暴露30 min后关腹.(2)IR组采用右肾切除,左侧肾动脉夹闭30 min恢复血流方法 造模.(3)PNS组实验前尾静脉注射PNS(150 mg/kg),共3 d,其余处理同IR组.在缺血再灌注后24 h、48 h、72 h,每个时间点每组处死8只大鼠,取血清检测肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),留取左肾行HE染色,光镜下观察病理变化并进行肾小管损伤评分,免疫组化检测wnt4在肾组织内的表达情况,蛋白印记检测各组wnt4表达量.结果 IR组可见明显的肾脏病理损伤,肾小管损伤评分、Scr、BUN在24 h达到损伤顶峰,此后逐渐下降,72 h仍高于CON组(P<0.05),而PNS组各时间点肾小管损伤评分、Scr、BUN均较IR组降低(P<0.05).wnt4的免疫组化及蛋白印迹结果 一致,即IR组、PNS组wnt4表达量在24 h达到高峰,但PNS组各时间点表达量均较IR组升高(P<0.05).结论 PNS对缺血再灌注损伤的肾脏具有保护作用,其作用机制可能与其增强wnt4蛋白表达有关.
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益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠肾间质Wnt与NF-κB影响的研究
目的:观察益肾胶囊对糖尿病肾病(DN)大鼠模型肾间质Wnt4、磷酸化糖原合成酶激酶-3β(PGSK-3β)及核因子-κB(NF-κB)表达水平的影响.方法:健康雄性Wistar大鼠32只,体重(200±20 g),随机选取8只作为正常组,其余予腹腔注射链脲佐菌素,制备糖尿病肾病动物模型,造模成功后随机分成4组:模型组(n=8),益肾胶囊组(n=8)和氯沙坦组(n=8).连续给药12周.12周末,检测各组大鼠24 h尿蛋白定量,血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),取肾组织行HE染色、免疫组化.光镜下观察肾间质病理变化情况,用免疫组化法检测Wnt4、PGSK-3β与NF-κB表达水平,行实时荧光定量(FQ-PCR)法测定肾组织中Wnt4、NF-κB mRNA的表达.结果:12周末,与正常组比较,模型组大鼠24 h尿蛋白定量、血Scr、BUN明显增加,肾间质Wnt4、PGSK-3β与NF-κB表达水平明显升高,肾组织Wnt4、NF-κB mRNA表达水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05).与模型组比较,益肾胶囊治疗组大鼠24 h尿蛋白定量、血Scr、BUN明显减少,肾间质Wnt4、PGSK-3β与NF-κB表达水平明显降低,肾组织Wnt4、NF-κB mRNA表达水平明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05).氯沙坦治疗组与益肾胶囊治疗组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论:益肾胶囊可能通过调节DN肾间质Wnt4、PGSK-3β、NF-κB的表达,影响了NF-κB和Wnt通道的信号转导,延缓了DN的进展.
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辛伐他汀对大鼠肾缺血再灌注损伤中Wnt/JNK影响的研究
目的:探讨辛伐他汀(simvastatin SIM)对大鼠肾缺血再灌注损伤中Wnt/JNK的影响.方法:雄性wistar大鼠36只随机分为:假手术组、手术组、SIM干预组,每组12只,再将每组按取材时间不同分为6 h、48 h两个时相组.手术方法:假手术组开腹分离双侧肾动脉,但不夹闭,后关闭腹腔;手术组游离双侧肾动脉,动脉夹夹闭45 min后恢复灌注建立肾IRI模型;SIM干预组术前1周给大鼠灌胃SIM 20 mg·kg-1·d-1,其余处理同手术组.肾IRI后6 h、48 h,检测血清Scr值,肾组织行病理学观察及免疫组织化学法测定Wnt4、JNK1及其信号通路下游炎症因子TNFα的表达,并采用real time PCR法测定肾组织Wnt4 mRNA、JNK1 mRNA的表达.结果:肾组织病理学观察:假手术组肾组织形态结构基本正常;手术组肾小管上皮细胞有不同程度的肿胀、坏死和脱落、排列紊乱,管腔扩张,肾间质水肿、炎细胞浸润明显,以IRI后6 h为著;SIM干预组肾组织损伤程度较手术组明显减轻.Scr值测定:手术组Scr值较假手术组明显升高(P＜0.01);SIM干预组Scr值较手术组有所下降 (P＜0.01);以IRI后6 h,Scr值较高(P＜0.01).免疫组化检测:假手术组肾小管上皮细胞Wnt4、JNK1、TNFα表达较弱;手术组IRI后肾小管上皮细胞胞浆内Wnt4、JNK1、TNFα表达均比假手术组增强(P＜0.01),以6 h时为著(P＜0.01).SIM干预组Wnt4、JNK1、TNFα表达水平较手术组减弱(P＜0.05).real time PCR检测:假手术组肾小管上皮细胞Wnt4 mRNA、JNK1 mRNA表达较弱;手术组肾小管上皮细胞Wnt4 mRNA、JNK1 mRNA表达均较假手术组增强(P＜0.01),以6 h为著(P＜0.01);SIM干预组Wnt4 mRNA、JNK1 mRNA表达比手术组均有所下降(P＜0.01).相关性分析:JNK1与Wnt4、TNFα均成正相关(rs=0.94,rs=0.95);Wnt4 mRNA、JNK1 mRNA成正相关(rs=0.75);且均与Scr成正相关(rs分别为rs=0.93,rs=0.96,rs=0.94,rs=0.70,rs=0.35).结论:辛伐他汀预处理可能通过抑制Wnt/JNK信号通路的表达,从而减轻肾IRI程度.
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Wnt信号通路在氟中毒肾脏中表达及其意义
目的 观察Wnt/β-catenin信号通路及其相关信号分子蛋白及mRNA表达水平在实验性氟中毒大鼠肾组织中的变化,探讨氟中毒发病机制.方法 选择健康成年SD大鼠36只,雌雄各半,随机分为:对照组(饮水含氟量＜1 mg/L),低、高氟组(饮水加氟量5、50 mg/L),每组12只,观察大鼠氟斑牙发生情况,测定尿氟、骨氟含量及肾功能变化;光镜观察肾组织病理形态学变化;采用实时荧光定量PCR和免疫组化方法检测肾组织中Wnt4、β-连环蛋白(β-catenin)、E-粘钙蛋白(E-cadherin)蛋白及mRNA表达.结果 低氟组大鼠氟斑牙检出率为75％(9/12),高氟组为91.7％(11/12),与对照组比较,染氟组大鼠尿氟、骨氟含量随染氟浓度增加而逐渐升高,差异有统计学意义(P＜0.05);染氟组大鼠血清肌酐及尿素氮明显高于对照组(均P＜0.05);光镜观察染氟组大鼠肾小管上皮细胞明显水肿、渗出、坏死,细胞间界限不清,且随着染氟浓度增高,损伤加重;低、高氟组大鼠肾组织中Wnt4、β-catenin、E-cadherin蛋白表达分别为[(7.78±1.17)、(6.66±0.59)、(3.23±0.82)]和[(17.46±3.18)、(12.46±0.89)、(1.23±0.35)],mRNA表达分别为[(3.01 ±0.81)、(1.86±0.43)、(0.276±0.12)]和[(5.79±0.86)、(5.84±1.19)、(0.12±0.46)],与对照组比较,氟中毒组大鼠肾组织中Wnt4 、β-catenin蛋白和mRNA表达升高,而E-cadherin蛋白及mRNA表达降低.结论 慢性氟中毒时,氟通过刺激Wnt信号通路中Wnt4、β-catenin过表达、E-cadherin低表达,导致肾小管上皮细胞间充质转分化(EMT).
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阿托伐他汀对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织Wnt4/β-catenin信号通路的干预作用
目的 探讨阿托伐他汀对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织Wnt4/β-catenin信号通路的干预作用.方法 36只SD大鼠,随机分为假手术组、模型组和阿托伐他汀组,各组分别设7 d、14 d两个时间点.HE、Masson、PAS染色法观察肾脏病理改变;免疫组化观察Wnt4和β-catenin蛋白在肾组织的表达;Western印迹检测各组大鼠肾皮质Wnt4、β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β、E-cadherin、α-SMA和CollagenⅠ蛋白的相对表达量.结果 与假手术组相比,模型组肾皮质Wnt4和β-catenin、p-GSK-3β、α-SMA蛋白表达显著增多(P<0.05),CollagenⅠ沉积增多(P<0.01),E-cadherin蛋白表达显著减少(P<0.01),GSK-3β在各组大鼠肾组织表达无差异;与模型组相比,阿托伐他汀组肾组织Wnt4、β-catenin、p-GSK-3β和α-SMA蛋白表达减少(P<0.05),CollagenⅠ蛋白沉积显著减少(P<0.05),并伴有E-cadherin蛋白表达显著增多(P<0.05),而GSK-3β蛋白表达无明显变化(P>0.05).结论 Wnt4/β-catenin信号通路的活化促进了UUO大鼠肾脏纤维化的发生发展,阿托伐他汀能改善肾脏纤维化病变,减轻肾间质细胞外基质的沉积,可能与其抑制Wnt4/β-catenin信号通路的激活和传导有关.
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自主跑轮运动上调成年小鼠海马齿状回区细胞增殖及BDNF、IGF1和WNT4的表达水平
成年海马神经发生在调控学习记忆和情感过程中有重要作用.外界刺激因素,如自主运动能影响成年海马神经发生过程.自主运动能显著增强海马齿状回区的细胞增殖,并使新生神经元增多,但其具体机制仍不是十分清楚.本研究采用跑轮实验这种啮齿动物自主运动模型,使两月龄的C57BL/6成年小鼠跑轮15天后,用BrdU掺入实验观察海马齿状回区的细胞增殖情况.采用逆转录实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马齿状回区、阿蒙角区和皮层区成年神经发生相关因子的mRNA和蛋白表达水平.结果显示,自主跑轮运动15天后的成年小鼠海马齿状回区增殖细胞数目显著上调;齿状回区Bdnf、Igf1的mRNA和蛋白表达水平显著升高,Wnt4的mRNA表达水平显著升高,提示15天自主运动可能通过特异地增加海马齿状回区BDNF、IGF1和WNT4的表达产生上调成年海马神经发生的作用.
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“清化固肾排毒颗粒”对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织Wnt4和TGF-β1表达的影响
目的:观察清化固肾排毒颗粒对肾间质纤维化大鼠肾组织Wnt4和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响,从而探讨其对肾间质纤维化的作用机制.方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、洛丁新组及清化固肾排毒方高、中、低剂量组,除假手术组外,其余各组大鼠均采用单侧输尿管结扎手术方法(UUO)建立大鼠肾间质纤维化模型,术后各组分别予相应药物或生理盐水灌胃,每日1次.给药第7、14、21日后,各组大鼠禁食不禁水1d,处死,取手术侧肾组织做病理检测,Masson染色观察其病理变化,免疫组织化学染色检测Wnt4及TGF-β1在肾间质的阳性染色表达.结果:经Masson染色后,模型组与各给药组大鼠肾组织胶原纤维蓝染部分较假手术组明显增多,肾纤维化程度显著加重;与模型组比较,清化固肾排毒方各剂量组和洛丁新组大鼠肾组织胶原纤维蓝染部分明显减少,肾纤维化程度相对减轻.免疫组化结果显示,清化固肾排毒方各剂量组和洛丁新组大鼠肾组织Wnt4及TGF-β1阳性表达显著低于模型组(P＜0.05).结论:清化固肾排毒颗粒能有效改善肾间质纤维化模型大鼠肾纤维化程度,其可能通过下调Wnt4、TGF-β1改善肾功能,从而达到改善肾纤维化的作用.
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去甲斑蝥素对梗阻性肾病Wnt/β-catenin表达的影响
目的:观察去甲斑蝥素(NCTD)对梗阻性肾病(UUO)大鼠模型及人近端肾小管上皮细胞(HK-2)纤维化模型Wnt/β-catenin表达的影响. 方法:(1)动物实验:第一批SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、UUO 3d组、UUO 7d组及UUO 14d组,每组各4只.将第二批SD大鼠随机分为假手术组(sham)、模型组(UUO 14d)、NCTD 0.05 mg/kg干预组,NCTD 0.1 mg/kg干预组,每组4只.(2)细胞实验:体外培养HK-2细胞,分对照组、转化生长因子β1(TGF-β1)5 ng/ml刺激组、TGF-β1 5 ng/ml刺激+NCTD(2.5 mg/L、5 mg/L)干预组.免疫组化、Western Blot检测Wnt4、β-catenin蛋白表达情况,Real-time PCR检测Wnt4、β-catenin mRNA表达情况. 结果:随着UUO大鼠梗阻时间延长,β-catenin蛋白表达逐渐升高,UUO14d表达强.与UUO组相比,NCTD组Wnt4、β-catenin蛋白及mRNA表达明显下降(P＜0.05);与对照组相比,TGF-β1刺激组Wnt4、β-catenin蛋白表达上调;与TGF-β1刺激组相比,NCTD不同浓度干预组Wnt4、β-catenin蛋白表达下调,且呈浓度依赖(P＜0.05). 结论:NCTD干预可以下调梗阻性肾病大鼠肾组织及TGF-β1刺激的HK-2细胞中Wnt4和β-catenin的表达.
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厄贝沙坦对高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中Wnt/β-catenin信息途径表达的影响
目的 探讨Wnt/β-catenin信号途径在高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中的表达及血管紧张素受体拮抗剂(ARB)厄贝沙坦对该途径活性的影响.方法 体外培养人近端肾小管上皮细胞(HKC),分为正常糖组、甘露醇对照组、高糖组、高糖+厄贝沙坦干预组.采用免疫细胞化学观察β-连环蛋白(β-catenin)表达情况;Western印迹检测Wnt4、β-catenin、E-钙粘蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平;逆转录-聚合酶链反应检测Wnt4和β-catenin mRNA表达水平.结果 高糖组较正常糖及渗透浓度对照组Wnt4蛋白及mRNA、α-SMA蛋白表达增高,E-cadherin表达降低,β-catenin总蛋白及mRNA水平无明显变化,细胞质及核蛋白表达增强.Wnt4和β-catenin核蛋白表达在高糖诱导24 h达高峰;厄贝沙坦下调Wnt4、α-SMA及β-catenin核蛋白表达,升高E-cadherin表达水平.结论 Wnt/β-catenin信号途径可能参与了高糖介导的肾小管上皮细胞转分化过程.厄贝沙坦可能通过调节Wnt/β-catenin信号途径活性而抑制该过程.
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宫内生长受限仔鼠肾脏发育和细胞外信号调节激酶的表达与活性
目的 研究宫内生长受限( IUGR)仔鼠肾组织中调控输尿管芽分支发生的关键因子细胞外信号调节激酶(ERK1/2)及下游基因Wnt4的表达与活性,探讨其与肾脏发育不良和高血压发生的关系.方法 孕鼠随机分为对照组(n=30)和IUGR组(n=30),孕期低蛋白饮食法建立IUGR模型,自然分娩后部分新生仔鼠(0 d)处死取其双肾称重,其他仔鼠常规饲养.测定3周龄和8周龄仔鼠的肾指数、肾小球数目、肾功能和血压,采用蛋白印迹法测定出生0d和3周仔鼠肾脏中ERK1/2和Wnt4蛋白水平和磷酸化水平,荧光定量反转录(RT) -PCR法检测其肾脏Wnt4 mRNA水平.结果 新生和3周龄IUGR仔鼠体质量和肾质量均低于对照组,8周IUGR仔鼠体质量超过对照组,但肾指数依然降低,肾小球数目明显减少(Pa＜0.05).8周IUGR仔鼠血压升高、内生肌酐清除率(CCr)减低,且肾小球数目与血压呈负相关(Pa＜0.05).出生0d和3周时IUGR仔鼠肾组织中ERK1/2磷酸化水平降低(Pa＜0.05),Wnt4的表达水平始终低于同龄对照组(Pa＜0.05).结论 在肾单位发生和生长成熟阶段,宫内蛋白营养不良的子代肾组织ERK蛋白活性降低及诱导Wnt4表达异常可能是肾小球数目减少、成年肾滤过率降低引发高血压易感的机制之一.
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辛伐他汀减轻UUO大鼠肾纤维化及可能机制的研究
目的 本研究旨在探讨辛伐他汀改善输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织纤维化以及可能的机制.方法 30只SD大鼠,随机分为假手术对照组(Sham组)、模型组(UUO组)和辛伐他汀治疗组(Sim组),治疗组术前3d予20 mg·kg-1·d-1辛伐他汀生理盐水混悬液3 mL灌胃治疗,对照组及模型组予等体积生理盐水灌胃.成模后7d处死各组大鼠.行HE、Masson、PAS染色方法光镜下观察大鼠肾脏病理改变;免疫组化观察Wnt4和β-catenin蛋白在肾组织的表达;Western blotting检测各组大鼠肾皮质β-catenin、Wnt4、GSK-3β、p-GSK-3β、CollagenⅠ、α-SMA和E-cadherin蛋白在各组大鼠肾组织的相对表达量.结果 与Sham组相比,UUO组大鼠肾组织纤维化病变明显,肾组织β-catenin、Wnt4、α-SMA、p-GSK-3β、CollagenⅠ蛋白的表达明显增多(P＜0.05),E-cadherin蛋白表达减少(P＜0.01),与UUO组相比,Sim组肾组织α-SMA、Collagen Ⅰ、Wnt4、β-catenin和p-GSK-3β蛋白表达减少(P＜0.05),E-cadherin蛋白表达多(P＜0.05).结论 辛伐他汀能改善肾脏纤维化病变,可能与其抑制Wnt4/β-catenin信号通路的激活和传导有关.
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大鼠垂体瘤垂体组织Wnt4表达的变化
目的 检测己烯雌酚诱导的大鼠垂体瘤动物模型成瘤过程中垂体组织中Wnt4表达的动态变化,探讨Wnt4信号转导通路在垂体瘤发生发展过程中的作用及其机制.方法 将60只标准Wistar-Furth大鼠随机分成己烯雌酚注射组(30只)、灭菌花生油注射组及假处理组(各15只),观察处理后大鼠外观、体质量及行为学改变,并分别于4、8及12周处死大鼠,观察成瘤情况、垂体外观及重量变化,应用苏木素-伊红(HE)染色及免疫组织化学染色的方法鉴别肿瘤类型及检测Wnt4表达.结果 3个处死时间点实验组成瘤率分别为30％、90％、100％,垂体组织Wnt4阳性表达积分分别为5.80±3.32、8.40±2.22、9.70±1.64;对照组成瘤率均为0,垂体组织Wnt4阳性表达积分分别为0.80±0.83、1.40±1.14、1.20±0.83.无论成瘤与否,Wnt4阳性表达积分与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05),随着建模时间延长,实验组垂体组织中Wnt4的表达呈进行性增高.结论 雌激素诱导大鼠垂体泌乳素腺瘤动物模型成瘤效果确切稳定,可作为治疗研究模型,Wnt4信号通路在垂体瘤的发病与进展中起重要作用.
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内异康复片对EMT大鼠VEGF、MMP-9、HGF及Wnt4、Wnt5α的调控机制研究
目的:分析内异康复片对子宫内膜异位症(EMT)大鼠异位内膜黏附、浸润及增生的调控作用,并探讨其作用机制.方法:建立子宫内膜异位症大鼠模型,随机分为模型对照组、阳性对照组、中药低、中、高剂量组,每组10只.治疗3周后,测量各组大鼠异位内膜体积;另取模型动物的异位内膜组织,分离异位内膜细胞,体外培养,设空白对照组、阳性对照组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组,每组4个复孔.采用ELISA法测定血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶(MMP)、肝细胞生长因子(HGF)含量;Western Blot检测Wnt4、Wnt5α的表达.结果:动物实验结果:与模型对照组比较,中药各剂量组、阳性对照组的异位内膜体积显著缩小,异位内膜厚度变薄,腺体面积减少,差异均有统计学意义(P＜ 0.01,P＜0.05);中药高剂量组、阳性对照组的腺体数目显著少于模型对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05);中药高剂量组VEGF、MMP-9含量显著低于模型对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).细胞实验结果:中药低、中、高各剂量组培养上清液的VEGF含量显著低于空白对照组,中药高剂量组MMP-9含量显著低于空白对照组,中药高剂量组和阳性对照组Wnt4、Wnt5α表达水平均显著低于空白对照组,差异均有统计学意义(P＜ 0.05,P＜0.01).结论:内异康复片治疗EMT的机理可能与抑制异位内膜细胞分泌VEGF、MMP-9,以及调节Wnt信号转导通路有关.
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肾衰方及其拆方对肾间质纤维化Wnt4、β-catenin蛋白表达的影响
目的 观察中药肾衰方及其拆方对大鼠肾间质纤维化肾组织Wnt4、β-catenin蛋白表达的影响.方法 将72只大鼠随机分为:假手术组、模型组、肾衰方组、祛邪方组、补虚方组、贝那普利组,采用单侧输尿管梗阻动物模型,术后7、14 d分别观察检测24 h尿蛋白定量、血清肌酐、尿素氮水平以及梗阻侧大鼠肾组织Wnt4、β-catenin含量的表达.结果 7、14 d时模型组大鼠24 h尿蛋白定量、血尿素氮、血清肌酐、Wnt4、β-catenin水平均高于假手术组(P<0.05),与模型组比较,经肾衰方、祛邪方、补虚方和贝那普利治疗后24 h尿蛋白定量、血尿素氮、血清肌酐、Wnt4、β-catenin水平明显降低(P<0.05),第14 d肾衰方优于其拆方(祛邪方、补虚方)及贝那普利(P<0.05).结论 肾衰方及其拆方可能是通过抑制Wnt4、β-catenin蛋白的表达,减轻肾间质的纤维化,改善肾功能,从而延缓慢性肾脏病进展,且肾间质纤维化中医为本虚标实之证.
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大鼠口腔正畸骨压力侧Wnt3a和Wnt4的表达
目的:通过检测大鼠口腔压力侧Wnt3a和Wnt4是否表达,初步探讨其与口腔正畸骨改建的关系.方法:共采用20只成年雄性Wistar大鼠,分别在正畸加力4个时间点:第1,3,7,14天取材,用于HE染色和免疫组织化学检测.结果:免疫组化中,Wnt3a在4个时间点均有阳性细胞表达,Wnt4未检测到.结论:在大鼠口腔正畸骨改建中Wnt3a表达与口腔正畸相关.
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白藜芦醇对肾功能衰竭大鼠timp-1mRNA、BAX及wnt4蛋白表达的影响
目的:探讨白藜芦醇对肾功能衰竭大鼠肾脏基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(tissue inhibitors of metalloproteinases-1,TIM P-1)mRNA、凋亡调节因子Bax和Wnt4蛋白表达的影响.方法:选取60只SD大鼠,随机分为空白对照组(A组)、模型组(B组)、氯沙坦组(C组)、低剂量白藜芦醇组(D组)和高剂量白藜芦醇组(E组),每组14只.除空白对照组外,其余各组大鼠均应用腺嘌呤灌胃法制作慢性肾衰竭大鼠模型,建模成功后,对氯沙坦组 、低剂量白藜芦醇组和高剂量白藜芦醇组大鼠分别给与氯沙坦 、白藜芦醇进行治疗.应用HE染色对各组大鼠的肾组织细胞形态结构进行观察,检测并比较各组大鼠肾脏组织timp-1mRNA、Bax mRNA、Bax蛋白及Wnt4蛋白表达情况.结果:HE染色显示B组大鼠肾脏组织存在显著的病理学改变,而C、D、E组大鼠较模型组有显著改善.B组大鼠血肌酐 、尿素氮水平显著高于A组,白蛋白水平显著低于A组,差异具有统计学意义(P<0.05);C、D、E组大鼠的血肌酐 、尿素氮水平则显著低于B组,白蛋白水平显著高于B组,差异具有统计学意义(P<0.05).B组大鼠肾脏timp-1基因 、Bax基因mRNA表达水平显著升高,Bax和Wnt蛋白表达水平也显著升高,而C、D、E组大鼠肾脏timp-1基因 、Bax基因mRNA和Bax和Wnt蛋白表达水平较B组则明显降低,以D组降低幅度大,D组与C组 、D组与E组比较也存在显著差异(P<0.05),E组和C组比较则无明显差异(P>0.05).结论:低剂量的白藜芦醇通过抑制timp-1、Bax基因和Wtn4蛋白的表达来发挥减轻肾脏纤维化损害 、抑制肾组织细胞凋亡和保护肾脏的作用,从而可延缓慢性肾衰竭的进展.
关键词： 慢性肾功能衰竭 白藜芦醇 金属蛋白酶组织抑制因子1 Bax Wnt4 -
肾病Ⅰ号方对单侧输尿管梗阻大鼠Wnt通路Wnt4和β-catenin表达的影响
目的 研究肾病Ⅰ号方对Wnt通路中Wnt4和β-catenin表达的影响及肾病Ⅰ号方抗肾纤维化的机理.方法 雄性SPF级SD大鼠108只,随机分为假手术组、模型组、西药组(盐酸贝那普利)、肾病Ⅰ号方高、中、低剂量组,每组18只.假手术组仅游离左侧输尿管,其余5组行左侧输尿管结扎术,于术后第2天灌胃.各组分别于灌胃后第7、14、21天随机选取6只大鼠留取24 h尿液,检测24 h尿蛋白(24 h UP);心脏取血,检测血肌酐(Scr)和尿素氮(BUN);处死大鼠,取肾脏组织行Masson染色,光学显微镜下观察肾脏组织病理改变;免疫组化方法观察Wnt4和β-catenin在肾间质的阳性表达情况.结果 模型组和给药组大鼠血Scr和BUN较假手术组显著升高(P＜0.05),24 h UP无统计学差异(P＞0.05),Masson染色示蓝色胶原组织增多,Wnt4和β-catenin表达增加(P＜0.05).西药组和肾病Ⅰ号方高、中、低剂量组大鼠血Scr和BUN较模型组显著降低(P＜0.05),24 h UP差异无统计学意义(P＞0.05),Masson染色示蓝色胶原组织减少,Wnt4和β-catenin表达降低(P＜0.05).与西药组比较,肾病Ⅰ号方高、中、低剂量组大鼠各检测指标无统计学差异(P＞0.05).结论 肾病Ⅰ号方可保护肾小管,并可能通过降低肾小管上皮细胞中Wnt4和β-catenin的表达,减少细胞外基质堆积,从而达到抗肾纤维化的作用.
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益气养血方对膝骨关节炎模型大鼠血清Wnt4和WIF1的影响
目的:探讨益气养血方对膝骨关节炎大鼠血清Wnt4、WIF1水平及膝关节软骨组织的影响,揭示其治疗骨关节炎的部分机制.方法:将70只SD大鼠随机分为益气养血方低、中、高剂量组,阳性对照组,模型对照组,空白对照组及假手术组,每组10只.除空白对照组和假手术组外,其余各组大鼠采用改良Hulth法构建膝骨关节炎模型;假手术组仅切开关节囊,不切断韧带和半月板.造模成功后,益气养血方低、中、高剂量组分别予益气养血方1.89 g?kg-1?d-1、3.78 g?kg-1?d-1、7.56 g?kg-1?d-1灌胃,阳性对照组给予双氯芬酸钠肠溶片混悬液4 mg?kg-1?d-1灌胃,模型对照组、假手术组给予生理盐水2.5 mL?d-1灌胃,空白对照组不予任何药物.给药8周后,腹主动脉取血,检测血清中Wnt4、WIF1的含量;取右膝关节,HE染色,并进行病理评分.结果:与模型对照组比较,益气养血方各剂量组及阳性对照组病理评分降低(P<0.05);与空白对照组、假手术组比较,模型对照组大鼠血清中Wnt4水平升高、WIF1水平降低(P<0.05);与模型对照组比较,益气养血方中、高剂量组大鼠血清中Wnt4水平降低,WIF1水平升高(P<0.05或P<0.01);与阳性对照组比较,益气养血方中、高剂量对WIF1的上调作用更为明显(P<0.05).结论:益气养血方能延缓骨关节炎软骨退变,保护关节软骨,其机制可能与下调Wnt4的表达,上调WIF1的水平,抑制关节软骨退变相关.
