特发性膜性肾病患者尿外泌体miRNA-193a表达的研究

目的 探讨特发性膜性肾病(IMN)患者尿外泌体miRNA-193a的表达变化.方法 选取年龄、性别匹配的IMN肾病综合征患者(IMN肾病综合征组)、IMN缓解患者(IMN缓解组)各14例及正常对照组14名.利用Exoquick试剂盒提取三组尿样本外泌体,并提取尿外泌体中RNA,利用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应 (qRT-PCR) 对miRNA-193a表达量进行测定.采用SPSS19.0软件进行统计学分析.结果 三组间尿外泌体miRNA-193a的表达存在差异,以正常对照组的2-△△CT 为1 作为基准校正,IMN患者尿外泌体miRNA-193a的表达明显高于正常对照组(相对表达倍数为4.30±0.66),差异有统计学意义(t=4.579,P<0.05);其中IMN肾病综合征组尿外泌体miRNA-193a表达显著高于IMN缓解组(相对表达倍数6.07±0.72 与2.54±0.43),差异有统计学意义(t=3.282,P<0.05).结论 IMN患者尿外泌体miRNA-193a表达显著高于正常组,并且随着疾病缓解表达下调.该结果提示尿外泌体miRNA-193a在IMN的发生发展过程中可能起到一定的作用.

脂肪干细胞来源的外泌体对三阴乳腺癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨脂肪干细胞(ADSCs)来源的外泌体对MDA-MB-231三阴乳腺癌细胞增殖、迁移及化疗耐药性的影响.方法 从吸脂患者的脂肪组织中分离培养ADSCs,流式细胞术检测表面标志物并鉴定其成脂和成骨诱导分化能力.收集ADSCs细胞培养上清,采用超滤ExoQuick-TCTM试剂盒提取外泌体并于透射电镜下鉴定其形态.采用浓度0、400μg/ml的外泌体处理MDA-MB-231细胞,CCK-8法测定细胞增殖情况,细胞划痕实验和Transwell迁移实验检测细胞迁移能力.采用CCK-8细胞毒性实验研究其对MDA-MB-231细胞阿霉素耐药性的影响.结果 CCK-8细胞增殖实验中经外泌体处理的MDA-MB-231细胞24、48 h增殖率分别为(98.24±19.24)％、(98.15±8.05)％,差异无统计学意义(P>0.05).细胞划痕实验中,6、16、24 h显微镜下实验组细胞相对迁移距离均明显增加,差异有统计学意义(P<0.01).Transwell迁移实验显示实验组和对照组穿透膜的细胞数分别为78.0±8.8和65.3±6.2,差异有统计学意义(P<0.05).0.2μg/ml阿霉素处理MDA-MB-231细胞48 h后,实验组与对照组细胞存活率为分别为(68.99±6.81)％和(61.64±3.17)％,差异无统计学意义(P>0.05).结论 脂肪干细胞来源的外泌体对MDA-MB-231细胞的增殖无明显影响,但可显著促进MDA-MB-231细胞的迁移,而对降低MDA-MB-231细胞对阿霉素的敏感性并不明显.

Crouzon综合征中FGFR2C342Y基因突变的血清exosome蛋白组学变化

目的 研究FGFR2C342Y基因突变引起的Crouzon综合征患者与正常人血清来源外泌体的蛋白组分的差异.方法 筛选出Crouzon综合征FGFR2C342Y突变患者的血清作为实验组,健康献血者的血清作为对照组,并使用超速离心法从中提取外泌体,展示了同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)蛋白组学分析结果,利用IPA通路分析软件分析其差异蛋白,以探讨exosome差异蛋白在颅缝早闭中的作用.结果 通过质谱分析共检测到62个蛋白,其中22个蛋白与骨相关数据库重合,其功能主要关于发育异常、遗传性异常、肌肉骨骼系统发育和功能、组织形态、视觉系统发育和功能等,均与Crouzon综合征的临床表现相关.网络分析发现“组织损伤和异常、血液系统的发育和功能、细胞信号转导和相互影响”相关的网络.结论 我们的研究显示了FGFR2C342Y Crouzon综合征患者的蛋白组学特点,展示了差异蛋白参与的功能和网络,并找到了关键蛋白FN1,FN1促进成骨细胞黏附增殖和矿化,这个蛋白可能对于Crouzon综合征的进一步研究提供新思路.

外泌体微小RNA与子痫前期发病机制的研究进展

子痫前期是妊娠期特有的并发症,其病因和发病机制尚未完全阐明.外泌体是由多种细胞分泌的膜性纳米囊泡,携带蛋白、mRNA、微小RNA和脂质等内容物,通过靶细胞传递内含物,介导细胞与细胞之间的调控.子痫前期患者体内外泌体的蛋白和微小RNA的表达水平发生了变化,使母体滋养细胞侵袭能力不足、内皮细胞的功能和血管生成能力降低.对子痫前期患者胎盘组织来源的外泌体微小RNA进行研究,有助于阐明子痫前期的发病机制.

肿瘤“液体活检”研究进展

“液体活检”不仅使肿瘤基因型的非侵袭性检查变为可能，而且很好地克服了肿瘤的时空异质性，为实现精准医疗提供了高效工具，发展前景十分广阔。近年来，“液体活检”技术已经逐渐渗透到了临床肿瘤的诊治过程，但由于其价格昂贵和检测标准不统一等限制因素，临床应用尚在起步阶段。本文就肿瘤领域目前主要开展研发的CTC、ctDNA及外泌体3个对象作一简要综述。

肿瘤外泌体的生物学特性及其临床应用的研究进展

目的 肿瘤细胞分泌的外泌体(tumor-derived exosomes,TDEs)中包含蛋白质、脂质和核酸等多种组分,能够参与细胞间的信息交流,从而调节肿瘤发生、血管生成、侵袭和转移等,为癌症的诊断提供了丰富的肿瘤生物标志物分子源.同时,也有越来越多的研究将TDEs及其加工修饰产物作为一种新的癌症疫苗和药物递送载体用于癌症的治疗.本研究总结国内外对TDEs在肿瘤诊断和治疗研究中的应用现状.方法 检索PubMed及CNKI期刊全文数据库检索系统,以"外泌体、肿瘤、生物标记物和治疗"为关键词,检索2006-01-2016-10关于外泌体研究的文献,共检索英文文献569篇,中文文献79篇.纳入标准:(1)TDEs的生物学功能;(2)TDEs作为作为肿瘤生物标记物的应用研究;(3)TDEs作为肿瘤治疗靶点的研究.根据纳入标准,符合分析的文献54篇.结果 TDEs作为细胞之间信息交流的载体,具有调节肿瘤发生、侵袭和转移等的生物学功能.TDEs中包含丰富的肿瘤标志分子,TDEs及其加工修饰产物可作为一种新的癌症疫苗和药物递送载体用于疾病的治疗.结论 TDEs可以成为肿瘤诊治的理想靶点,但在临床应用方面仍有很多问题需要解决.

外泌体在恶性胶质瘤诊治中的研究现状及进展

近年来,外泌体逐渐成为肿瘤研究的热点,外泌体在肿瘤增殖、分化、转移等多个方面发挥着重要的作用.同时,外泌体具有纳米级大小的特点,因此可以通过血脑屏障,使其可能成为恶性胶质瘤薪的诊治手段.该文通过复习57篇文献,将外泌体在恶性胶质瘤发生发展、液体活检、预后评估、治疗中的应用研究现状及进展作一综述.

外泌体：乳腺癌精确诊疗的新热点

精准医学概念已被广泛认可，但如何实现更为精准的诊疗，仍有漫长的路要探索。继高通量测序、液态活组织检查、单细胞分析之后，外泌体已逐渐成为肿瘤研究的新热点。外泌体是循环囊泡的一种，也是细胞间通讯的重要介质之一，其本身具有稳定、可捕获、有生物活性、实时检测等特征。外泌体内携带的生物活性分子，参与肿瘤微环境中肿瘤细胞之间、肿瘤细胞与基质细胞之间的通讯，影响肿瘤发生、生长、侵袭和转移。本文通过分析外泌体在肿瘤早期发展、转移和耐药等过程中的作用，阐明其作为诊断标志物的优势与不足；通过分析其发挥生物学作用的方式以及与基因治疗经典传递方法相比较，来探讨其作为治疗载体的可行性。

肺鳞癌患者血浆外泌体中蛋白标志物的诊断价值

目的 研究肺鳞癌患者治疗前血浆中外泌体所携带的肿瘤相关蛋白的表达特征,并分析其作为临床诊断标志物的价值.方法 使用超速离心法收集2例肺鳞癌患者治疗前血浆和2例正常对照血浆中的外泌体,采用蛋白质组学方法分析外泌体的蛋白表达谱,挑选候选分子,采用酶联免疫吸附法在15例肺鳞癌患者和15例正常对照者血浆外泌体中进行验证.结果 经过电镜和纳米颗粒追踪技术收集到高质量的外泌体,计数结果显示,2例肺鳞癌患者标本分布于45～135 nm的颗粒数目分别为7.89×1011个/ml和9.71×1011个/ml,明显高于2例正常对照者(分别为2.76×1011个/ml和1.41×1011个/ml).蛋白质组学分析显示,肺鳞癌患者外泌体中携带的蛋白信息与正常人有差异,部分蛋白与肺鳞癌发生发展中的重要功能相关.挑选外泌体中14-3-3ζ作为进一步验证的标志物,得到受试者工作特征曲线下面积为0.68,灵敏度为60.0％,特异度为80.0％,提示其可作为肺鳞癌的诊断标志物.结论 肺鳞癌患者血浆中的外泌体计数及其携带与肿瘤发生、发展密切相关的蛋白14-3-3ζ,可用于肺鳞癌的辅助诊断.

miR-1231在胰腺癌患者血浆和胰腺癌细胞外泌体中的表达及临床意义

目的 探讨miR-1231在胰腺癌患者血浆和胰腺癌细胞外泌体中的表达及其临床意义.方法 选取2016年4月至2017年8月在湖南省肿瘤医院确诊为胰腺癌的患者16例,选取16例同期健康志愿者作为正常对照组.收集16例胰腺癌患者和16例健康志愿者的血浆,采用实时荧光定量PCR法检测血浆外泌体中miR-1231的表达,分析外泌体中miR-1231的表达水平与胰腺癌患者临床病理特征的关系.分析胰腺癌细胞系MIA PaCa-2、PANC-1、SW1990、AsPC-1和BxPc-3以及正常胰腺上皮细胞(人胰腺导管上皮细胞和原代人正常胰腺上皮细胞)外泌体中miR-1231的表达.结果实时荧光定量PCR检测结果显示,胰腺癌患者血浆外泌体中miR-1231的表达水平为1.06±0.46,低于健康志愿者(2.30±0.99),差异有统计学意义(P<0.05).miR-1231在Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期胰腺癌患者血浆外泌体中的表达水平分别为1.515±0.531和0.848±0.224,miR-1231在有、无远处转移的胰腺癌患者血浆外泌体中的表达水平分别为0.757±0.278和1.236±0.461,miR-1231在有、无淋巴结转移的胰腺癌患者血浆外泌体中的表达水平为0.838±0.261和1.337±0.522,差异均有统计学意义(均P<0.05).胰腺癌患者血浆外泌体中miR-1231在不同年龄、性别、有无吸烟史、糖链抗原19-9(CA19-9)浓度和肿瘤部位的胰腺癌患者血浆外泌体中的表达水平差异均无统计学意义(均P>0.05),而在不同淋巴转移情况、不同远处转移情况和不同临床分期的胰腺癌患者血浆外泌体中的表达差异均有统计学意义(均P<0.05).miR-1231在胰腺癌细胞外泌体中的表达水平为0.142±0.135,低于正常胰腺上皮细胞(1.127±0.179),差异有统计学意义(P<0.05).结论 胰腺癌患者血浆和胰腺癌细胞外泌体中miR-1231的低表达可能与胰腺癌的发生发展有关,外泌体中miR-1231的表达可能成为胰腺癌新的诊断标志物或预后因子.

外泌体在多发性骨髓瘤中的研究进展

外泌体是由多囊泡体释放到胞外的小囊泡,可将其所携带的蛋白质、脂质、DNA、miRNA和mRNA等运输至受体细胞,并改变受体细胞的生物学行为.在多发性骨髓瘤(MM)中,外泌体可调节免疫系统、促进血管生成、癌相关成纤维细胞转化、与骨髓间充质干细胞相互作用、增强破骨细胞活性、诱导MM的耐药性等.血液中的外泌体可作为MM的早期诊断标志物,为MM患者提供一种新的诊断、治疗策略.文章就外泌体在MM中的功能与诊治研究进展作一综述.

外泌体在恶性肿瘤中的作用及其应用

外泌体是一种附着在细胞膜上、由细胞释放的囊泡结构，其包含许多生物活性分子，例如蛋白质、脂质、mRNA、微RNA以及DNA片段等。这些生物活性分子参与调控许多生物进程，不仅参与多种疾病的发生和发展，还与肿瘤的侵袭和转移有密切关系。目前研究发现，由肿瘤细胞释放出的大量外泌体可作为细胞功能的使者，参与多种病理生理过程。因此研究外泌体在恶性肿瘤中的作用十分必要。现将外泌体在一些恶性肿瘤中的作用及其应用进行阐述。

肿瘤源性外泌体微RNA在肿瘤中的研究进展

外泌体是多种细胞可以分泌的直径40~100 nm具有细胞间物质转运与信号转导等生理功能的囊泡样小体.外泌体中含有的核酸、蛋白质和脂质等为其具有源细胞的生物学特性奠定了基础.肿瘤细胞同样也可分泌大量外泌体,且肿瘤细胞外泌体中含有多种微RNA(miRNA),这些miRNA因其母体肿瘤细胞不同而有差异.文章主要就肿瘤源性外泌体中miRNA在肿瘤的早期诊断和肿瘤发生、发展进行综述.

外泌体在肿瘤免疫逃逸中的研究进展

外泌体是一种由不同类型的细胞主动分泌的纳米级的囊泡,被视为一种新的细胞通讯方式.外泌体可在细胞间运载各种蛋白质、脂质、miRNA和mRNA等物质,从而引起细胞间遗传信息的交换和受体细胞的重新编程.许多证据表明,肿瘤细胞分泌大量的外泌体,可通过多种方式调节肿瘤的进展、转移、免疫逃逸、耐药等诸多方面.在肿瘤微环境中,外泌体在肿瘤细胞、免疫细胞以及基质细胞之间相互传递,可使肿瘤细胞逃避免疫监视.文章综述了近些年外泌体在肿瘤免疫逃逸中的研究进展.

外泌体在多发性骨髓瘤中的研究进展

外泌体作为一种可运输生物活性物质的细胞外囊泡,具有抗肿瘤免疫及促进血管新生等生理功能.不同类型的细胞可以释放出不同种类的外泌体,在多种疾病发生、发展中起到了重要作用.近年来国内外研究发现外泌体的种类和数量与骨髓瘤患者的疾病状态及预后相关,这为骨髓瘤的诊断、预后评估及靶向治疗提供了新的思路.文章就外泌体在多发性骨髓瘤中的研究进展进行综述.

肿瘤液体活组织检查的研究进展

液体活组织检查是近年科学界的研究热点,主要通过检测外周血或体液中的肿瘤细胞、游离DNA、游离RNA、外泌体以及肿瘤血小板来实现对肿瘤的诊断、评估预后和指导治疗.液体活组织检查比传统的有创性活组织检查方法更为简便、快捷、经济、安全,可全面了解肿瘤的异质性,切合精准医疗的理念.文章将综述循环肿瘤细胞、循环DNA、循环RNA、肿瘤血小板及循环外泌体的研究进展,并对未来液体活组织检查的研究提出展望.

外泌体在脑梗死诊疗中的研究进展

高表达miR-132-3 p间充质干细胞外泌体对缺氧/复氧受损脑微血管内皮细胞功能的改善作用

目的 研究高表达miR-132-3p间充质干细胞(MSCs)释放的外泌体(EXs)对缺氧/复氧(H/R)受损内皮细胞功能的作用. 方法 原代培养从C57BL/6小鼠骨髓中提取的MSCs,采用装载miR-132-3p载体的慢病毒感染MSCs获得MSCmiR-132-3p,同时采用装载有scramble序列的对照慢病毒感染MSCs获得 MSCNC.分离提取 MSCNC及 MSCmiR-132-3p释放的 EXs,分别获得 MSC-EXs 及MSC-EXsmiR-132-3p.将所得EXs与H/R受损小鼠脑微血管内皮细胞(bend3)共培养,根据培养条件将细胞分为正常培养组(细胞正常培养)、H/R组(制作H/R模型)、 MSC-EXs处理组( MSC-EXs共培养)、 MSC-EXsmiR-132-3p处理组( MSC-EXsmiR-132-3p共培养)、 MSC-EXsmiR-132-3p+LY294002 组[细胞与MSC-EXsmiR-132-3p共培养前加入磷脂酰肌醇(-3)激酶(PI3K)信号通路阻断剂LY294002(20 μmol/L)处理].实时荧光定量聚合酶链反应检测MSCs、MSC-EXs及bend3细胞中miR-132-3p的表达.血管形成试剂盒检测bend3细胞血管形成能力,3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测bend3 细胞增殖能力,划痕实验检测bend3 细胞迁移能力,hochest33258 染色显示细胞的凋亡,Western blot检测蛋白激酶B( Akt)的磷酸化水平. 结果 与 H/R组相比,MSC-EXs处理组显著改善H/R诱导下bend3细胞受损的血管形成、增殖、迁移能力及Akt磷酸化水平[ H/R组分别为(3 ± 1)条、0. 275 ± 0. 020、(147 ± 8) μm和0. 89 ± 0. 12;MSC-EXs处理组分别为(8 ± 3)条、0. 358 ± 0. 030、(218 ± 10) μm和1. 37 ± 0. 25,均P<0. 01],细胞凋亡明显减少[(47 ± 2)%比(63 ± 2)%,均P<0. 01].与MSC-EXs处理组比较,MSC-EXsmiR-132-3p处理组bend3细胞的血管形成、增殖、迁移能力及Akt磷酸化水平增加[分别为(14 ± 3)条、0. 444 ± 0. 050、(357 ± 10) μm和1. 67 ± 0. 23,均P<0. 01],细胞凋亡明显减少[(34 ± 1)%,P<0. 01].与MSC-EXsmiR-132-3p处理组比较,MSC-EXsmiR-132-3p+LY294002组细胞的增殖、迁移、血管形成能力及Akt磷酸化水平明显减少[分别为(5 ± 2)条、0. 304 ± 0. 050、(175 ± 8) μm和0. 95 ± 0. 11,均P<0. 01]. 结论 高表达miR-132-3p的MSC-EXs能够通过激活PI3K/Akt信号通路改善H/R诱导受损脑血管内皮细胞多种生理功能.

髓源树突细胞源性外泌体对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠NK及NKT细胞的影响

目的 探讨他汀类药物诱导髓源树突细胞(BMDCs)源性外泌体(exosomes)对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠自然杀伤细胞(NK)及NK T细胞的影响.方法 阿托伐他汀和DMSO分别与BMDCs共培养,采用流式细胞术分析其表型.应用梯度离心法提取不同组BMDCs分泌的外泌体(分别记为他汀Dex和对照Dex),将不同组外泌体注射于EAMG大鼠体内,采用双盲法观察EAMG临床症状;通过流式细胞术检测各组大鼠淋巴结NK、NK T和干扰素γ(IFN-γ)阳性细胞、白细胞介素-10(IL-10)阳性细胞的表达水平;采用ELISA方法检测各组血清抗R97-116 IgG抗体及其亚型水平.结果 他汀类药物能够明显抑制BMDCs表面CD80和CD86的表达水平(CD80:1.10％比22.80％,P<0.01;CD86:30.78％比43.93％,P<0.01),这些BMDCs可进一步分泌他汀Dex.与对照Dex治疗组比较,他汀Dex治疗组EAMG大鼠淋巴结NK细胞比例增加(2.30％比1.63％,P<0.05),淋巴结单个核细胞(MNC)中IFN-γ+细胞比例(1.05％比2.24％,P<0.05)、血清抗R97-116 IgG抗体及其亚型IgG2a和IgG2b水平均明显降低(IgG:0.44比0.64,IgG2a:0.26比0.35,IgG2b:1.47比1.94;均P<0.05).结论 他汀Dex可缓解EAMG大鼠的临床症状,这种作用与上调淋巴结MNC中的NK细胞有关.

外泌体介导神经免疫与多发性硬化

目的 外泌体颗粒内部和表面均携带活性膜蛋白、脂质和遗传物质,这些物质可进行信息传递,参与多种生物信号通路,如免疫应答、炎性反应等过程.研究结果显示,外泌体在多发性硬化(MS)等多种自身免疫性疾病中含量明显增加,可作为潜在的信息载体参与MS的生理病理过程,但其具体作用及机制尚不清楚.外泌体信号在细胞与细胞间的传导加深了人们对MS发生、发展的认识,同时为MS和其他神经免疫性疾病的治疗和干预提供了新的策略.本文主要就外泌体在免疫细胞和神经细胞之间炎性反应诱导和炎性反应扩散的作用进行综述,并就外泌体对MS发生和发展的影响以及其在MS诊断和治疗中的作用做一介绍.