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外泌体在缺血性脑卒中的研究进展
外泌体是近年来医学领域研究的一大热点,可作为细胞间通信的新载体,在缺血性脑卒中的诊断和治疗方面显示出了极大的潜能.其所含有的microRNA更是在其中扮演重要角色.本文就生物标志物、药物载体、神经血管重塑、治疗等方面,对外泌体在缺血性脑卒中的研究进展做一综述.
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外泌体在乳腺癌发病过程及诊治中的研究进展
乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤,其发病机制十分复杂.新研究表明,外泌体与乳腺癌等多种肿瘤的发病过程密切相关,逐渐成为肿瘤研究的新热点.外泌体是循环囊泡的一种,能通过介导细胞间信号通信,影响乳腺癌等肿瘤的发生、发展、侵袭和转移,在肿瘤的发病过程和临床诊治等方面具有重要的研究价值.因此,本文就外泌体的结构与功能,外泌体在乳腺癌的发生发展、诊断和治疗中的作用作一综述,以期更好地理解乳腺癌的发病机制、为乳腺癌的临床诊治提供新思路.
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尿 exosomes 的分离方法及在临床中应用研究进展
尿 exosomes 是肾和泌尿生殖系统上皮细胞分泌至尿中直径为40～100 nm 的脂质双分子层结构圆形膜性小囊泡，能够反映分泌细胞的生理和功能状态，exosomes 中蛋白质及 RNA 等分子可作为疾病标记物用于疾病诊断。尿液标本易得且无创，其 exosomes 中蛋白质及 RNA 较尿液中可溶性蛋白质和 RNA 稳定，在各种疾病的诊断中具有广泛的应用前景。本文就近年来尿 exosomes分离纯化方法及其作为蛋白或 RNA 标记物应用于各种疾病诊断的研究进展作一综述。
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环磷酰胺致小鼠心脏功能损伤超声评价及其与血清外泌体miRNA的相关性
目的 分析环磷酰胺心脏毒性小鼠模型血清外泌体miRNA的改变,为更准确的评估环磷酰胺导致心脏功能损伤的程度提供新方法.方法 选用7～8周龄的C57BL/6小鼠,随机分为对照组和环磷酰胺组2组.环磷酰胺组小鼠给予环磷酰胺100 mg/(kg? 周),根据临床化疗方案,连续腹腔注射2周后,休息1周,再连续注射2周,共5周;对照组小鼠腹腔注射等量0.9％ 氯化钠溶液.第5周进行小鼠心脏超声检查,测量或计算左心室射血分数(LVEF)、短轴缩短率(FS)、左心室等容舒张期时间(IVRT)及Tei指数,同时行血清外泌体候选miRNA的q-PCR检测.采用t检验比较环磷酰胺组与对照组小鼠LVEF、FS、IVRT、Tei指数、血清外泌体miRNA表达量.结果 与对照组小鼠比较,环磷酰胺组小鼠LVEF、FS均降低[0.62±0.05 vs 0.72±0.06,(28.00±3.10)％vs(35.10±4.95)％],且差异均有统计学意义(t=3.591,P=0.003;t=3.453,P=0.004);Tei指数、IVRT均升高[0.71±0.17 vs 0.59±0.14,(27.42±8.42)ms vs(23.40±6.70)ms],但差异无统计学意义.与对照组小鼠比较,环磷酰胺组小鼠血清外泌体中miR-133a-3p、miR-146a-5p表达增高(1.931±1.460 vs 0.072±0.077,1.895±1.059 vs 0.790±0.296),且差异均有统计学意义(t=4.072,P=0.001;t=3.168,P=0.006);miR-30c-5p、miR-99a-5p表达差异无统计学意义(0.870±0.327 vs 0.530±0.670,0.404±0.134 vs 0.714±0.404).结论 C57BL/6小鼠腹腔注射环磷酰胺能够引起心脏功能明显损伤,心脏功能受损小鼠血清外泌体中miR-133a-3p和miR-146a-5p表达增高,使其有望成为诊断环磷酰胺心脏功能受损新的血清标志物.
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人血清外泌体癌胚抗原检测在结直肠癌诊断中的临床应用
目的 分离鉴定人血清中的外泌体,探讨将外泌体癌胚抗原(CEA)作为结直肠癌诊断指标的可行性.方法 回顾性研究.选择同济大学附属同济医院2015年10月至2016年12月确诊的结直肠癌病例组64例患者(血清CEA正常病例组41例及血清CEA增高病例组23例),良性结直肠疾病对照组20例患者及正常对照者40名.采用ExoQuick试剂盒从血清中提取外泌体,应用透射电镜、Western blot对外泌体进行形态学和分子表型鉴定;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清CEA及血清外泌体CEA浓度.利用U检验和受试者工作特征曲线(ROC)判断在结直肠癌中的诊断效能.结果 采用ExoQuick试剂盒成功提取血清中的外泌体.ELISA法检测64例结直肠癌病例组外泌体CEA浓度为(1056.36～28637.78)pg/ml,显著高于良性疾病对照组(394.61～2437.83)pg/ml以及正常对照组(610.89～2076.70)pg/ml(分别U=124.000,U=119.000,均P<0.001);41例血清CEA正常病例组外泌体CEA浓度为(1056.36～5832.07)pg/ml,显著高于良性良性疾病对照组和正常对照组(分别U=113.000,U=119.000,均P<0.001);血清Exosomal CEA浓度对结直肠癌诊断的ROC曲线下面积为0.954(95％CI=0.919～0.988),优于血清CEA浓度[0.636(95％CI=0.531～0.742)]对结直肠癌的诊断效能.结论 分离并检测血清外泌体CEA浓度对结直肠癌具有良好的诊断效能,有可能成为结直肠癌早期诊断标志物.
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血清中外泌体及外泌体 RNA 提取方法的比较
目的：评价超高速离心法、ExoQuick 与TEI试剂盒提取血清中外泌体的价值。方法方法学比较。收集2015年8至11月南方医科大学南方医院检验科健康者3名，采集静脉血至采血管，4℃静置12 h使其自然凝固后离心取上清液为血清，采用超高速离心法、ExoQuick与TEI试剂盒提取血清中外泌体，通过透射电子显微镜、蛋白印迹技术和NTA颗粒粒度分析仪检测外泌体形态结构、蛋白表达量和浓度与粒径分布，评估外泌体提取效率；采用超高速离心法＋Trizol LS法、ExoQuick＋SeraMir、TEI＋TER与ExoRNeasy 试剂盒提取法分离3例血清中外泌体总RNA（exo－RNA），利用Agilent生物分析仪分析RNA片段分布，实时荧光定量PCR仪检测miRNA表达水平。组间蛋白浓度与miRNA表达量的比较采用方差分析。结果外泌体提取方法中，比较外泌体浓度和其蛋白浓度， ExoQuick与TEI试剂盒提取浓度高于超高速离心法；超高速离心法提取外泌体同时表达CD9、CD63和TSG101蛋白，而ExoQuick与TEI试剂盒提取外泌体仅表达TSG101。外泌体RNA提取方法中，不同方法影响RNA片段分布和miRNA表达，未影响 miRNA相对表达趋势；ExoRNeasy提取RNA条带浓度较高，各miRNA表达水平较高；TEI＋TER法未见明显RNA条带，样本中各miRNA表达水平稳定；超高速离心法＋Trizol LS法与ExoQuick＋SeraMir法提取RNA可见范围较广的低浓度条带，此两法提取RNA中各miRNA表达无明显规律。结论外泌体提取方法中传统超高速离心法适用于蛋白组学方面研究，而ExoQuick与TEI试剂盒提取方法适用于血清等稀缺样本外泌体制备。（中华检验医学杂志，2016，39：427－432）
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血浆外泌体源性miR-422a在缺血性脑卒中患者中的表达变化及其作为诊断标志物的探讨
目的 通过研究缺血性脑卒中发病1～4 d患者的血浆外泌体源性miR-422a表达变化,来探讨其对缺血性脑卒中的诊断价值.方法 回顾性研究.收集广西医科大学第一附属医院神经内科2016年5至12月住院诊断为缺血性脑卒中的40例患者和10名同时段在我院体检的年龄性别匹配的健康对照者.通过试剂盒从血浆中提取外泌体源性miRNA,再采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)测定缺血性脑卒中不同时相(1、2、3和4 d)血浆外泌体源性miR-422a的表达变化,与对照组进行比较,通过ROC曲线评估其作为诊断标志物的价值,并采用单因素方差分析Games-Howell检验方法对不同分组中的血浆外泌体源性miRNA表达量进行比较.结果 从血浆中提取的外泌体呈圆形或椭圆形的囊泡,其平均粒径为128.2 nm,粒径主峰为186.9 nm;流式检测可见外泌体特异性标记蛋白CD63和CD81的阳性率分别为80.6％和91.7％;qRT-PCR检测证实miR-422a可在人体血浆外泌体中表达,且与对照组[1.221(95％CI:0.640～1.802)]相比,血浆外泌体miR-422a在缺血性脑卒中发病1、2和3 d患者中的表达水平[4.418(95％CI:2.642～6.193)、2.912(95％CI:2.262～3.562)和2.744(95％CI:2.000～3.487)]明显增高(F=13.57,P<0.05、P<0.01、P<0.05;ROC曲线下面积分别为0.920、0.945和0.870);同时,与对照组相比,miR-422a在缺血性脑卒中发病第4天患者的表达水平[0.449(95％CI:0.170～0.727)]虽无明显差异,但与发病1、2和3 d的患者相比,第4天患者的表达水平明显下降(F=13.57,P<0.005、P<0.001、P<0.001).结论 血浆外泌体源性miR-422a对于缺血性脑卒中早期(发病1～3 d)有极高的诊断价值.
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"新宠"外泌体正式进入临床检验,路还有多远?
外泌体是由细胞内囊泡与细胞膜融合后分泌到细胞外环境的纳米级囊泡.越来越多的证据表明外泌体是可以用作肿瘤和其他疾病诊断和预后判断的生物学标志物.但外泌体检测标准化工作在国内外仍处于起步阶段,检测结果的一致性和准确性亟待解决,在精准医学时代挑战和机遇并存.本文回溯外泌体检测的兴起过程,剖析外泌体检测在临床检验普及中所面临的挑战.
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外泌体:肿瘤诊断新型标志物
外泌体是一类由细胞释放的直径为30～150 nm的天然微囊泡,包含与来源和功能相关的生物活性分子,可以在细胞间和组织间进行信息传递,是细胞间通讯的重要介质.外泌体介导的信息传递参与调控机体的生理功能及病理状态,在肿瘤的发生发展过程中起着重要作用.本文综述了近年来外泌体在肿瘤研究领域的进展,分别从起源及生物学功能、分析检测方法和肿瘤诊治等方面进行阐述.
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重视外泌体的实验诊断价值
Exosomes是可由体内多种活细胞分泌的纳米级双层膜结构小囊泡,可运载核酸、蛋白质和脂质等生物信息物质.Exosomes可保护易在循环系统中失活或降解的信息物质(如miRNA),将它们安全转移至特异性的靶细胞中参与信号调节,在细胞间信息传递中发挥重要的作用.Exosomes广泛存在于人类血液、尿液、胸腹腔积液等多种体液样本中,并可提供丰富、稳定、灵敏且特异的生物信息,是应用价值很高的液体活检标本.
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外泌体miRNAs在胃癌中的作用
胃癌是常见的消化系统恶性肿瘤,起病隐匿,发病率和死亡率均较高,目前仍缺乏有效的干预策略.近期研究表明,外泌体微小RNAs(miRNAs)在胃癌的发生、发展中起重要作用.胃癌细胞自分泌的外泌体miRNAs可调控胃癌的生长、复发、转移及肿瘤耐药等.不仅如此,肿瘤微环境中的外泌体miRNAs也可与肿瘤细胞进行细胞间的信号传递和交换,进而影响胃癌进展.由于肿瘤细胞释放到循环中的外泌体含有丰富的特异性miRNAs,且稳定性较好,因此外泌体miRNAs有潜力成为胃癌诊断标志物及胃癌治疗的新靶点.
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外泌体开辟肝炎标志物检测的新视角
本文从外泌体的发生和释放机制出发,阐述了HBV和HCV标志物在外泌体中的存在情况和随外泌体释放的效应,探讨了由此产生的传染性、保护作用以及对治疗和检测的影响.并以研究数据初步证明了核酸检测这一金标准的重要性,指出隐匿性感染的又一新的原因是HBV和HCV标志物存在于外泌体.
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外泌体在心血管疾病中的研究进展
外泌体是来源于细胞的脂质微囊泡，内含多种蛋白质、脂质、核酸，可通过外泌体运输到靶细胞，影响靶细胞生物学活性。研究表明，外泌体介导细胞间信号传递在心肌损伤、血管再生、心脏重塑以及动脉粥样斑块形成等过程中发挥重要作用，因而具有潜在的临床应用价值，可能成为心血管疾病早期诊断、疗效监测、预后判断的循环标志物，以及更为有效的CVD靶向治疗药物载体。（中华检验医学杂志，2015，38：439－441）
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肿瘤液体活检临床应用的研究进展
近年来,针对恶性肿瘤患者血液中循环肿瘤细胞(CTC)、循环肿瘤DNA(ctDNA)和外泌体(exosomes)的液体活检(liquid biopsy)引起了医疗领域的巨大关注.与传统的组织活检相比,液体活检具有实时、全面、无创等优势.其检测技术的发展为肿瘤的精准诊疗开辟了新的途径,使得液体活检能够应用于肿瘤的早期筛查、诊断、治疗、疗效评估以及预后判断等众多领域.本文将从检测技术及临床应用等方面就近年来有关CTC、ctDNA及外泌体的研究进行阐述.
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外泌体在乳腺癌中的研究进展
外泌体是由不同类型细胞释放的膜性囊泡，直径约30～100 nm，能够通过mRNAs、miRNAs和蛋白质等的传递介导细胞间相互作用。外泌体作为肿瘤学研究的热点，其在肿瘤发生、发展、临床诊断和治疗方面具有重要的研究价值。本文对外泌体与乳腺癌微环境、耐药的关系及其在乳腺癌诊断和治疗中的研究进展进行综述，以期为寻找乳腺癌诊断与治疗新靶点提供思路。（中华检验医学杂志，2016，39：466－469）
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巨噬细胞外泌体抑制HBV DNA复制
目的 探讨巨噬细胞(macrophage, M?)外泌体抑制HBV DNA复制的机制及与慢性乙型肝炎(chronic viral hepatitis B, CHB)肝损伤的相关性.方法 体外分离鉴定M?外泌体,并将其与HepG2.2.15细胞共培养,利用实时定量 PCR检测共培养后HBV DNA复制的变化,分别分析M?及其上清外泌体中微小RNA(microRNA, miRNA)-638的表达;同时入组CHB免疫活化(immune activation, IA)期、低(非)复制(inactive carrier, IC)期患者 ,并以同期健康者作为对照组,通过实时定量PCR检测血清外泌体中miRNA-638的表达,并与肝损伤、HBV DNA载量进行相关性分析. 结果 M?外泌体可以抑制HBV DNA复制;M?及其上清外泌体中miRNA-638高表达;CHB患者IA期miRNA-638的表达水平低于IC期;CHB患者血清外泌体中miRNA-638的表达水平与ALT、AST和HBV DNA水平呈负相关.结论 M?外泌体可以抑制HBV DNA复制,外泌体中miRNA-638的表达水平与肝脏炎性损伤和病毒复制密切相关,M?外泌体相关miRNA可能是潜在的抑制HBV复制、减轻肝脏炎症的靶点.
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肝脏疾病中外泌体的作用和临床研究进展
外泌体是来源于细胞的囊泡小体,在脂质膜的保护下富含脂质、蛋白质、RNA等生物活性分子,对受体细胞发挥多向调节功能.本文主要对外泌体的基本特性、肝脏疾病中外泌体的作用及其在临床中的应用进行简要概述.
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Src激酶在胃癌细胞来源的exosome促进肿瘤细胞增殖中的作用
目的:研究胃癌细胞来源的外泌体(exosome)对肿瘤细胞增殖的影响,初步探讨Src蛋白激酶在此过程中的作用.方法:采用离心超滤和蔗糖密度梯度超速离心的方法从胃癌SGC7901细胞的上清液中分离出胃癌细胞来源的exosome.透射电子显微镜下观察exosome形态.MTT法检测细胞增殖能力,Western blot检测蛋白的表达.结果:透射电子显微镜下观察胃癌SGC7901细胞来源的exosome具有特征性的盘状结构.由双层膜构成,他们的直径30-1 00 nm.Westernblot结果显示exosome表面富含CD9和TSG101分子.MTT结果显示exosome能以时间和剂量依赖性的方式促进SGC7901细胞的增殖,200 mg/L和400 mg/L的exosome处理SGC7901细胞72 h,细胞的增殖比率分别是对照组的138%(P<0.001)和144%(P<0.001),在此过程中伴随有p-Src表达的上调.结论:胃癌细胞来源的exosome能促进肿瘤细胞的增殖,其机制可能与激活Src蛋白激酶有关.
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结直肠癌液体活检研究进展
近年来,包括循环肿瘤细胞、循环肿瘤DNA和外泌体在内的液体活检技术有效地应用在结直肠癌早期诊断、复发和耐药监测及预后评估等临床与基础研究中.现就液体活检在结直肠癌基础与临床的研究与应用作一综述.
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肝癌细胞外泌体的分离与鉴定
目的:针对目前尚缺理想的肿瘤细胞提取方案,探寻分离纯化肝癌细胞培养液中外泌体的新方法.方法:连续适应无血清培养肝癌SMMC-7721细胞,收集细胞上清液,采用改良超速离心法分离、纯化培养上清液中肝癌细胞外泌体;透射电镜观察其形态,Nanosight技术分析粒径;Western blot分析其特异蛋白Alix、CD63、CD9的表达并利用SDS-PAGE电泳分析肝癌细胞和外泌体的蛋白谱.结果:透射电镜观察到的肝癌细胞外泌体,外形呈圆形或椭圆形;Nanosight技术分析颗粒直径峰值为122 nm,直径30-150 nm之间颗粒占72.16％;Western blot证实在细胞培养上清液和外泌体提取液中均能检测到Alix、CD63、CD9的蛋白表达;SDS-PAGE电泳清晰显示外泌体中高丰度大分子结构蛋白明显少于肝癌细胞.结论:利用连续适应无血清细胞培养结合改良超速离心法能提取高纯度的外泌体,为肝癌细胞外泌体标志物研究奠定基础.
