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电针对去卵巢大鼠骨形成及骨吸收活性的影响
目的 研究电针刺对去卵巢骨质疏松模型大鼠的全身骨密度(BMD)、骨矿物含量(BMC)及其血清对体外培养成骨细胞的骨形成因子骨钙素(OPG)和骨吸收因子(RANKL)蛋白表达的影响.方法 选取SPF级2月龄SD雌性大鼠40只,随机分为空白组、电针组、药物组和模型组,每组10只.其中空白组不做任何处理,后3组采用手术方法切除双侧卵巢.饲养3个月后,骨密度检测结果显示造模成功.随后药物组大鼠灌胃服用戊酸雌二醇3个疗程,电针组大鼠采用针刺后通电治疗3个疗程并服用药物组相同体积的蒸馏水,模型组服用相应体积的蒸馏水,空白组常规饲养.各组大鼠于SPF级实验室处理3个月后,双能X射线骨密度仪检测全身骨密度和骨矿含量.随后,水合氯醛麻醉各组大鼠,心脏采血,各组血液分别经滤网过滤、56℃水浴处理后加入体外培养的大鼠成骨细胞培养液中,处理3d后多聚甲醛固定成骨细胞,采用免疫细胞化学染色法检测成骨细胞内OPG、RANKL蛋白的表达量.结果 与空白组相比,模型组大鼠BMD,BMC显著降低(P＜0.05),服用药物或针刺处理后,BMD和BMC显著增高(P＜0.05),与模型组相比差异具有统计学意义.各组大鼠血清处理成骨细胞后,模型组骨形成指标OPG蛋白表达量较低,经药物或针刺后,OPG蛋白表达量显著升高(P＜0.01).此外,模型组骨吸收指标RANKL的表达量较高,经药物和针刺处理后,RANKL蛋白表达量显著下降(P＜0.01).结论 针刺能有效升高大鼠BMD和BMC,同时针刺处理后的大鼠血清具有很好的促进骨形成和抑制骨吸收的能力.
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骨保护素体外抑制小鼠单核巨噬细胞成熟分化的实验研究
目的 研究骨保护素(Osteoprotegerin,OPG)抑制核因子NF-κB受体活化因子配体(Receptor activator of nuclear kappa B ligand,RANKL)诱导小鼠单核细胞RAW264.7成熟分化而导致的溶骨效应.方法 50 ng/mL RANKL诱导RAW264.7细胞1d后,加入100 ng/mL OPG(实验组,即OPG+RANKL组)或不加入OPG(对照组,即RANKL组)分别培养7d和9d,经细胞形态学观察其变化,抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色法观察TRAP阳性多核细胞,扫描电镜下观察在骨片上的破骨细胞所致的骨吸收陷窝形成情况.结果 对照组培养7d时,在倒置相差显微镜、透射电镜、光镜下可见细胞形状为椭圆形或不规则形,胞体明显较RAW264.7细胞增大,胞核多为6 ～10个,扫描电镜下还可见大量伪足形成,而实验组培养7d后,细胞形状多为圆形,且扫描电镜下未见明显伪足形成；对照组9d时可见大量TRAP染色阳性的多核巨细胞(含3个或3个以上的细胞核),而实验组中TRAP染色阳性的多核破骨细胞偶见多核巨细胞,培养9d时很难找到多核巨细胞；仅用RANKL诱导RAW264.7细胞分化7d时,对照组中破骨细胞表面可见大量伪足伸出,并形成明显的骨吸收陷窝,实验组中破骨细胞见少许伪足突出,不能看到明显的骨陷窝形成.结论 单用50 ng/mL RANKL体外连续诱导RAW264.7细胞7d时,可以促进成熟的破骨细胞显著分化.100 ng/mL OPG培养9d能有效地抑制破骨细胞的分化,减少破骨细胞的骨吸收效应.
关键词： 骨细胞 骨质疏松 RAW264.7细胞 RANKL OPG -
阿仑膦酸钠和唑来膦酸预防兔激素性股骨头缺血性坏死的作用比较
目的 通过建造兔激素性股骨头坏死模型,使用阿仑膦酸钠和唑来膦酸进行干预,观察阿仑膦酸钠和唑来膦酸能否预防兔激素性股骨头缺血性坏死,并比较两种药物的作用强弱.方法 健康28周龄新西兰大白兔90只,体重(3.8±0.3)kg,雌雄不限.随机分为阳性对照组(A组)、阿仑膦酸钠组(B组)、唑来膦酸组(C组),每组各30只.各组动物均经耳缘静脉注射10 μg/kg大肠杆菌内毒素1次,24 h后于臀肌注射20 mg/kg甲基强的松龙,共3次,每次间隔24 h;B组同时给予阿仑膦酸钠150 μg/(kg·d),共45次,颈部皮下注射;C组同时给予唑来膦酸100 μg/kg,1次/4 w,共2次,耳缘静脉注射.6 w后取双侧兔股骨头骨组织,沿正中矢状面剖为两半,一半行石蜡包埋、切片,HE染色,计算空骨陷窝率,鉴定股骨头坏死情况.另一半股骨头骨组织再剖为两半,一半提取总RNA,采用实时定量聚合酶链反应(RTQ-PCR) 技术检测OPG mRNA和RANKL mRNA的表达水平,并计算OPG/RANKL mRNA比值;一半提取骨蛋白,采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)测出OPG和RANKL蛋白表达量,并计算OPG/RANKL比值.结果 A、B、C 3组动物死亡率分别为16.67%(5/30)、13.33%(4/30)、10%(3/30);空骨陷窝率(%)分别为26.33±1.17、20.85±1.47、18.55±2.43;股骨头坏死率分别为76.0%(19/25)、30.77%(8/26)、7.41%(2/27);RTQ-PCR检测股骨头骨组织OPG mRNA分别为0.85±0.086、1.22±0.085、1.62 ±0.097,RANKL mRNA分别为3.23±0.78、2.84±0.95、1.43±0.93;Western Blot检测股骨头骨组织OPG蛋白表达量分别为0.48±0.09、0.54±0.09、0.74±0.08;RANKL蛋白表达量分别为1.51±0.10、1.23±0.08、0.63±0.08.B、C两组股骨头坏死率低于A组,C组低于B组,差异有统计学意义(P<0.05);B组与C组比较,其OPG mRNA和蛋白表达量较低,RANKL mRNA和蛋白表达量较高,OPG/RANKL比值较低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 唑来膦酸和阿仑膦酸钠能够有效预防兔激素性股骨头坏死的发生,其作用与对股骨头骨组织中RANKL/RANK/OPG系统的调控有关,与阿仑膦酸钠相比唑来膦酸的效果更好.
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RANKL/OPG在青少年特发性脊柱侧凸患者低骨量发生机制中的作用
目的 从骨髓问质干细胞(MSCs)水平探讨RANKL及OPG与青少年特发性脊柱侧凸(AIS)患者骨量降低的关系.方法 46例12～17岁志愿者分为2组,其中AIS组30例,年龄12～17岁,平均14.1岁.正常对照组16例,年龄12～17岁,平均14.7岁.AIS组Lenke 1型14例,2型2例,3型6例,5型8例.2组均采用双能x线吸收测量仪测量BMD,测量部位包括非优势侧股骨近端及腰椎.分别从2组志愿者髂前上棘处骨穿刺抽取10ml骨髓,肝素抗凝.体外密度梯度离心法分离培养MSCs,扩增至P3代行表型鉴定,RT-PCR法检测2组MSCs中RANKL及OPG的mRNA表达强度.结果 AIS组腰椎(L2～L3)及股骨近端的BMD值明显低于正常对照组.AIS组RANKL的mRNA表达显著强于对照组(P＜0.01),而OPG的mRNA表达显著低于对照组(P＜0.01).结论 RANKL及OPG在MSCs水平表达强度的异常可能与AIS骨量降低的分子机制相关.
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香豆雌酚对成骨细胞分化过程中骨指标表达的影响
目的 观察植物雌激素香豆雌酚对成骨细胞增殖分化的作用并探讨其作用机制.方法 从小鼠颅盖骨获得成骨细胞并用0,10-9～10-5 M香豆雌酚孵育48 h,以17β雌二醇为阳性对照,用酶消化法测定碱性磷酸酶及Ⅰ型胶原含量,放免法测定骨钙素含量,RT-PCR法测定OPG及RANKL mRNA表达情况,Western Blot测定OPG蛋白含量.结果 干预48 h,不同浓度香豆雌酚呈剂量依赖性增加碱性磷酸酶及Ⅰ型胶原含量,10-6 M时达到大效应(P<0.05),但10-5 M效应有所降低,香豆雌酚轻度增加成骨细胞骨钙素含量,各组间无统计学差异.香豆雌酚呈剂量依赖性增加OPG基因及蛋白的表达(P<0.05),轻度降低RANKL基因的表达.结论 香豆雌酚能增加成骨细胞增殖及分化,可能其部分通过OPG/RANKL发挥作用.
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1α，25（OH）2D3对不同分化阶段成骨细胞RANKL及OPG基因表达的影响
目的：研究高剂量1α，25（OH）2D3对RANKL/OPG表达的调控是否随成骨细胞（osteoblasts，OB）分化成熟而变化。方法体外诱导MC3T3-E1细胞成骨分化，并分别于成骨诱导第0、7、14、21、28 d向细胞加以1α，25（OH）2D3（10 nM）的刺激，4 h后提取细胞总RNA，进行RT-PCR检测OB RANKL及OPG mRNA表达水平。对照组则以无水乙醇刺激。同时，对不同分化阶段OB进行茜素红染色，以检测钙结节的形成。结果在OB分化过程中，对照组RANKL表达无显著变化；OPG 基因表达逐渐增多，在第14天达高水平，之后逐渐下降；RANKL/OPG比值始终低于未成骨诱导时的RANKL/OPG比值。1α，25（ OH）2 D3持续促进RANKL基因的表达，并且持续抑制OPG基因表达；实验组RANKL/OPG比值一直高于对照组，尤其在矿化阶段，差异有统计学意义。结论1α，25（OH）2D3对RANKL和OPG的调控随OB分化成熟而变化。
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去势大鼠骨组织中OPG、VEGF在雌激素治疗前后的变化
目的 制备去卵巢大鼠骨质疏松模型,比较去势6、8周后胫骨上VEGF mRNA、OPG的表达,及雌激素治疗后的变化.方法 53只6月龄的SD雌性大鼠随机分成3组:ovx组(去势组),sham组(假手术组),ovx+E2组(雌激素治疗组);分别在去势后6周末和8周末股动脉放血处死大鼠,每组各8只.取右侧胫骨脱钙后,行组织形态学观察及VEGF原位杂交和OPG免疫组化镜下观察.结果 去势6周和8周后,可见:(1)OPG蛋白表达情况:①OPG阳性细胞主要表达在大鼠胫骨的关节软骨细胞,骺板肥大区软骨细胞,及骺板下初级骨小梁的黏合线上.成骨细胞和骨细胞呈弱阳性表达.骨髓腔间充质细胞表达弱或没有表达,巨核细胞可有弱阳性的表达;②与sham组相比, ovx组中关节软骨细胞,骺板肥大区软骨细胞阳性表达有升高趋势;③与ovx组相比,ovx+E2组关节软骨细胞,骺板肥大区软骨细胞阳性表达有升高趋势;(2)VEGF mRNA表达情况:①VEGF mRNA阳性细胞主要表达于关节软骨细胞、骺板肥大区细胞和增生区细胞、成骨细胞和骨细胞及骨髓间充质细胞和巨核细胞、皮质外侧的成纤维细胞;②与sham组相比, ovx组骺板肥大区软骨细胞、关节软骨细胞、骨髓间充质细胞阳性表达有升高趋势;③与ovx组相比,ovx+E2组关节软骨、骺板肥大区软骨细胞阳性信号有降低趋势;骨髓间充质细胞的阳性信号有升高趋势.结论 (1)去势后雌激素降低,骨重建加强,骨吸收和骨形成均增加,OPG一过性升高可调节破骨细胞的募集和形成.雌激素治疗后OPG表达增高提示OPG可能具有一定的雌激素依赖性.(2)去势后雌激素降低,VEGF生成增多,并参与到骨的血管形成过程中,参与骨丢失.VEGF可能作为破骨细胞的诱导物,促使破骨细胞形成.给予雌激素治疗后,雌激素可使VEGF参与血管形成过程,调节成骨细胞的骨形成过程.
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血清中Sclerostin、RANKL及OPG在老年股骨转子间骨折早期的含量改变及其临床意义
目的 观察正常成年男女、老年男女及低外力作用下发生髋部骨折的老年男女血清中sclerostin、RANKL及OPG的含量变化并分析其临床意义.方法 收集正常成年男女、老年男女及在2010年10月至201 1年10月我院收治的低外力作用下发生股骨转子间骨折的老年患者血清样本.采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各血清样本中sclerostin,RAN KL及OPG的水平.数据均以均数±标准差表示.采用SPSS1 3.0对数据进行统计分析.结果 正常成年组(A组):sclerostin 76.6±10.5 pmol/l、RANKL0.58 ±0.18 ng/ml、OPG 17.3 ±4.6 pmol/1;正常老年组(B组):sclerostin 102.0±12.3 pmol/l、RANKL 0.25 ±0.12 ng/ml、OPG 12.1 ±3.5 pmol/l;老年骨折组(C组):sclerostin 90.8±11.0 pmol/l、RANKL 0.23 ±0.13 ng/ml、OPG 11.7 ±3.5 pmol/l.结论 由以上结果经统计分析后得出,sclerostin,RANKL及OPG在不同年龄层次其表达水平具有明显差异,与年龄有相关性.在老年骨折的早期阶段(骨折后3天内)血清中sclerostin的含量已出现显著变化.而RANKL及OPG的含量在骨折早期阶段并无明显改变.由此我们认为,骨折早期血清sclerostin的水平下降在促进骨折愈合的过程中可能起到一定作用,通过人为干涉抑制sclerostin的水平对预防老年髋部骨折可能存在一定的价值.
关键词： Sclerostin RANKL OPG 老年骨折 骨质疏松 -
依替膦酸二钠对骨质疏松症模型大鼠股骨节段性骨缺损修复的影响及靶基因的探索
目的 ①观察依替膦酸二钠对骨质疏松症大鼠骨缺损修复的影响.②探求双膦酸盐类药物影响骨质疏松症大鼠骨缺损修复的靶基因.方法 取6月龄雌性SD大鼠60只,随机选取20只加入空白对照组(N组),余下40只药物干预组(D组)、模型组(M组).D组、M组予建立骨质疏松症模型,N组予行假手术.首次造模成功后饲养3个月,然后3组均建立节段性骨缺损模型.药物组每周给予依替膦酸二钠(4.0 mg/kg)肌注1次;模型组和空白组每周给予同体积生理盐水肌注1次.在骨缺损模型建立后第2、4、6、8周建立4个观察时间点,分别观察:①骨缺损断端影像学(DR)表现;②骨缺损区组织学改变③骨缺损区域骨痂中OPG的基因表达.结果 在骨缺损愈合过程中,DR表现及组织学改变示:N组好,M组差,D组愈合介于两者之间并偏向于N组.OPG基因的表达随时间变化而增加,各组趋势与上述改变基本一致.结论 依替膦酸二钠作为双膦酸盐类药物的代表对骨质疏松症大鼠节段性骨缺损的修复有促进作用,OPG基因可能是其作用位点.
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骨代谢相关因子研究进展
骨质疏松症是老年人的一种常见病和多发病,在发病过程受到多个骨代谢相关因子的调控.对骨代谢相关因子进行研究可为骨质疏松症研究预防和治疗提供理论依据.其中骨保护素(Osteoprotegerin,OPG)、骨形态发生蛋白(Bone morphogenetic proteins,BMP)、成纤维细胞生长因子(Fibroblast growth factors,FGF)是近年来研究热点.本文对它们的分子结构以及生物学功能做一综述.
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低氧诱导因子-1α参与骨发育及骨代谢调控的研究进展
低氧诱导因子-1α（ hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α）是组织细胞在低氧状态下激活相应基因转录的核心调节因子之一，在骨发育和代谢过程中起到非常重要的作用。通过敲除Vhl基因高表达HIF-1α可以促进血管和骨组织的生成，但这一过程的分子机制依然不明确。目前已知HIF-1α在骨的发育过程中可以调节多种蛋白因子和信号通路，如血管内皮生长因子（ vascular endothelial growth factor ，VEGF）和经典Wnt信号通路，而这些蛋白因子和信号通路大多能对细胞的分化、增殖及功能进行调节。本文综述骨组织发育和代谢过程中HIF-1α、Wnt信号通路、骨保护素（ osteoprotegerin ，OPG）等所起的作用以及它们之间的联系，从而进一步探讨HIF-1α在骨发育及骨代谢调控中的机制。
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续苓健骨方对骨质疏松模型大鼠骨密度及OPG和RANKL蛋白表达的影响
目的 研究续苓健骨方对骨质疏松模型大鼠骨密度的作用及其机制.方法 将SD雌性大鼠去卵巢造骨质疏松模型,随机分组:钙尔奇D组、续苓健骨方组和骨质疏松模型组,佐以假手术组对照,给药12周后取材,检测左胫骨骨密度,Elisa方法检测血清骨碱性磷酸酶(BALP)水平,Western blot法测OPG和RANKL蛋白表达.结果 (1)续苓健骨方组骨密度均明显高于其它3组,组间比较有统计学意义(与钙尔奇D组P＜0.05,与假手术组P＜0.01,与模型组P＜0.000).(2)续苓健骨方组BALP水平明显高于模型组,两组比较有统计学意义,P＜0.01,但与假手术组、钙尔奇D组比较无显著性差异,P＞0.05.(3)续苓健骨方组OPG蛋白表达水平明显高于模型组,比较有统计学意义,P＜0.05,RNAKL蛋白表达水平明显低于模型组,比较有统计学意义,P＜0.01.模型组RANKL蛋白表达明显高于假手术组,P＜0.05.结论 续苓健骨方能显著提高骨质疏松模型大鼠的骨密度,其机制与上调OPG、下调RNAKL蛋白表达有关.
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利塞膦酸钠对人成骨样细胞MG63 OPG及TNFα表达的影响
目的 研究利塞膦酸钠对人成骨样细胞MG 63护骨素(OPG)及肿瘤坏死因子α(TNFa)表达的影响,以阐明利塞膦酸钠发挥骨保护作用的机制.方法 以不同浓度(10-10 mol/L;10-9 mol/L;10-8 mol/L;10-7 mol/L)的利塞膦酸钠干预MG 63细胞72 h;EkLISA法测定细胞条件培养液中OPG及TNFa的含量.结果 利塞膦酸钠可下调MG 63细胞TNFa的表达;上调OPG的表达;并提高碱性磷酸酶(ALP)活性.结论 利塞膦酸钠可通过调节成骨样细胞MG 63 OPG、TNFa的表达,从而发挥其抗骨吸收的作用.
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三七总甙对成骨细胞增殖、分化及OPG表达影响的研究
目的观察不同剂量的三七总甙对体外培养大鼠成骨细胞增殖、分化及OPG表达的影响,探索体外作用的机制和佳剂量.方法第2代培养的成骨细胞分别加入终浓度为0μg/ml、10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml的三七总甙,观察细胞生长、钙结节形成情况,碱性磷酸酶(ALP)染色、分泌量检测,骨钙素(OCN)检测,MTT法观察成骨细胞增殖,免疫组化SP法结合阳性细胞计数法检测成骨细胞OPG表达.结果成骨细胞在7 d可铺满瓶壁,30d可形成钙结节,三七总甙可促进成骨细胞的增殖ALP、OCN的分泌,以50μg/ml时作用明显.三七总甙可促进成骨细胞OPG的表达,在50 μg/ml时作用明显.结论三七总甙可促进大鼠成骨细胞的增殖、分化,促进成骨细胞OPG的表达,以50μg/ml时作用明显.
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泼尼松龙与地塞米松介导腰椎骨量降低的差异及其对成骨成脂基因表达的影响
目的:比较泼尼松龙(PRE)和地塞米松(DXM)诱导腰椎骨量丢失差异程度并利用成脂成骨经典信号通路探讨其可能机制.方法:选取3月龄SPF级雌性大鼠24只,随机分成4组:基线组(BL组)6只、年龄对照组(CON组)6只、泼尼松龙组(PRE组)6只、地塞米松组(DXM组)6只.BL组于实验开始时麻醉处死,其余3组正常喂养,其中CON组不作任何药物干预,PRE组予5mg/kg PRE每天一次皮下注射、DXM组以1mg/kg DXM每周两次皮下注射.干预3个月后麻醉下取材.取材时立即分离右侧股骨,获取髓腔内骨髓细胞进行涂片,油红“O”检测骨髓性状;取L6椎体作反转录式-聚合酶连锁反应(RT-PCR)检测骨保护素(OPG)及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)表达;分离L1～L3椎体检测骨密度(BMD).结果:在两种糖皮质激素(GC)分别干预3个月后,其BMD值均较CON组有明显下降(P＜0.05),DXM组下降更为显著(P＜0.01),且明显低于PRE组(P＜0.05).DXM组骨组织OPG表达量明显低于其余三组(P＜0.05),但PPAR-γ则组间无明显差异.骨髓油红“O”涂片发现,两种GC组涂片阳性细胞数量多于BL组和CON组,但其组间无明显差异.结论:两种不同的糖皮质激素在诱导大鼠骨量丢失模型中,地塞米松诱导腰椎骨量减少的效果较泼尼松龙强,这可能与DXM通过OPG/RANKL/RANK信号通路中更大程度地抑制OPG表达有关.
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正畸牙移动压力侧牙槽骨中cathepsin K、RANKL和OPG mRNA及蛋白的表达
目的 检测大鼠正畸牙移动压力侧cathepsin K、RANKL和OPG mRNA及蛋白表达变化及时间分布特点.方法 选用80只6周龄SD雄性大鼠建立正畸牙移动模型,分别在加力后2d、5d、7d、10d和14d各处死16只大鼠.HE染色观察牙周组织的形态学变化.TRAP染色计数压力侧牙槽骨中的破骨细胞数量.免疫组化方法定位及相对定量检测cathepsin K、RANKL和OPG蛋白表达变化及时间分布特点.Real-time PCR检测cathepsin K、RANKL和OPGmRNA表达变化及时间分布特点.结果 骨改建的活跃期为正畸加力后的第7d.压力侧牙槽骨中的TRAP染色阳性破骨细胞计数随加力时间的增加而增加,第7d达到高峰,而后逐渐降低.压力侧牙槽骨中的cathepsin K、RANKL和OPG mRNA及蛋白的表达水平均随加力时间的增加而增加,第7d达到高峰,而后均逐渐降低.结论 cathepsin K、RANKL和OPG mRNA及蛋白表达的变化规律不仅与骨改建过程一致,而且也与TRAP染色阳性破骨细胞数量的变化规律一致.cathepsin K、RANKL和OPG与正畸牙移动骨改建过程中破骨细胞的分化、形成和功能密切相关.
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大鼠正畸压力侧牙槽骨改建中RANKL和OPG mRNA的表达
目的 研究破骨细胞核因子Κb受体活化因子配基(receptor activator nuclear factor kappa B ligand,RANKL)及其伪受体骨保护因子(osteoprotegerin,OPG)的Mrna在大鼠正畸牙移动压力侧牙槽骨改建中的表达变化及时间分布特点.方法 选用80只6周龄SD雄性大鼠建立正畸牙移动模型,分别在加力后2 d、5 d、7 d、10 d和14 d各处死16只大鼠.HE染色观察大鼠牙周组织的形态学变化;TRAP染色计数压力侧牙槽骨组织中的破骨细胞数量;实时定量PCR方法检测RANKL和OPG Mrna的表达变化及时间分布特点.结果 骨改建的活跃期为正畸加力后的第7 d,压力侧牙槽骨组织中的TRAP染色阳性破骨细胞计数随加力时间的增加而增加,第7 d达到高峰,而后逐渐降低.压力侧牙槽骨组织中的RANKL和OPG Mrna表达水平均随加力时间的增加而增加,第7 d达到高峰,而后均逐渐降低.结论 RANKL和OPG Mrna表达的变化规律不仅与骨改建过程一致,而且也与TRAP染色阳性破骨细胞数量的变化规律一致.RANKL和OPG与正畸牙移动骨改建过程中破骨细胞的分化、形成和功能密切相关.
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大鼠正畸牙移动压力侧牙槽骨中cath K、RANKL和OPG的表达
目的 检测大鼠正畸牙移动压力侧cath K、RANKL和OPG蛋白表达变化及时间分布特点.方法 选用80只6周龄SD雄性大鼠建立正畸牙移动模型,分别在加力后2d、5d、7d、10d和14d各处死16只大鼠.HE染色观察大鼠牙周组织的形态学变化;TRAP染色计数压力侧牙槽骨组织中的破骨细胞数量;免疫组化方法定位及相对定量检测压力侧牙槽骨中cath K、RANKL和OPG蛋白表达变化及时间分布特点.结果 压力侧牙槽骨组织中的TRAP染色阳性破骨细胞计数随加力时间的增加而增加,第7d达到高峰,此后逐渐降低;压力侧牙槽骨组织中的cath K、RANKL和OPG蛋白的表达水平均随加力时间的增加而增加,第7d达到高峰,以后均逐渐降低.结论 cath K、RANKL和OPG蛋白表达的变化规律与骨改建过程一致,与止畸牙移动骨改建过程中破骨细胞的分化、形成和功能密切相关.
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HU-308药物缓释涂层对骨质疏松大鼠种植体周围骨改建相关因子表达的影响
目的:研究HU-308药物缓释涂层对骨质疏松大鼠种植体周围骨组织内BMP-2、RANKL、OPG表达的影响.方法:60只大鼠随机分为去势手术组(M:M1、M2、M3) 45只和假去势手术组(S)15只,通过去卵巢的方法建立绝经后大鼠骨质疏松模型.建模成功后,在大鼠双侧胫骨骭骺端按组别植入钛种植体,S、M1植入普通碱热处理种植体,M2植入肝素/壳聚糖涂层种植体,M3植入携带HU-308的肝素/壳聚糖涂层种植体.种植术后4、8、12周,采用免疫组织化学染色法观察种植体周围BMP-2、RANKL、OPG的表达情况,采用人工方法计算阳性细胞百分数对结果进行分析.结果:1.BMP-2阳性细胞百分数:术后4周,S＞M2＞M1组(P＜0.05),M3＞M2＞M1组(P＜0.05),M3略低于S组(P＞0.05);术后8周,M3 ＞M1 ＞S组(P＜0.05),M3＞M2＞S组(p＜0.05),M2略大于M1组(P＞0.05);术后12周,S显著小于M1、M2及M3组(P＜0.05),M1、M2、M3组间差别无统计学意义;随着种植体植入时间增加,各组BMP-2阳性细胞百分数减小.2.RANKL阳性细胞百分数:术后4、8周,M1＞M2＞S组(P＜0.05),M1＞M3＞S组(P＜0.05),M2略大于M3组(P＞0.05);术后12周,S显著小于M1、M2及M3组(P＜0.05),M1、M2、M3组间差别无统计学意义;随着种植体植入时间增加,各组RANKL阳性细胞百分数减小.3.OPG阳性细胞百分数:术后4、8周,S＞M3＞M1组(P＜0.05),S＞M3＞M2组(P＜0.05),M2略大于M1组(P＞0.05);术后12周,S显著大于M1、M2及M3组(P＜0.05),M1、M2及M3组间差别无统计学意义;随着种植体植入时间增加,各组OPG阳性细胞百分数减小.结论:随着植入时间增加,种植体周围骨组织内BMP-2、RANKL、OPG阳性表达降低;植入后同期比较,骨质疏松症大鼠种植体周围骨组织内OPG阳性表达低于健康大鼠,RANKL阳性表达高于健康大鼠;HU-308药物缓释涂层在种植体植入早中期使骨质疏松症大鼠种植体周围骨组织内BMP-2、OPG表达上升,RANKL表达下降.
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运动对去卵巢骨质疏松大鼠OPG、RANKL表达的影响
目的:通过破骨细胞分化传导通路OPG-RANKL-RANK中的骨保护素(Osteoprotegrin,OPG)、破骨细胞分化因子(receptor activator of nuclear factor kappaB ligand,RANKL)蛋白及基因表达探讨运动防治骨质疏松的机理.方法:大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组、阳性对照组和运动组.模型组、阳性对照组和运动组大鼠摘除双侧卵巢,假手术组切除小块脂肪组织.1个月后运动组进行中等强度运动;阳性对照组大鼠灌服已烯雌酚,正常对照组、假手术组、模型组和运动组大鼠灌服等容积蒸馏水.持续干预3个月后检测胫骨骨组织形态计量学指标,成骨细胞和骨髓基质细胞的OPG、RANKL蛋白及mRNA表达.结果:与模型组相比,阳性对照组和运动组骨小梁体积百分比(TBV％)、OPG蛋白及mRNA表达显著升高(P＜0.05);骨小梁吸收表面百分比(TRS％)、骨小梁形成表面百分比(TFS％)、活性生成表面百分比(AFS％)、骨小梁矿化率(MAR)、骨小梁骨生成率(BFR)、类骨质平均宽度(OSW)、骨皮质矿化率(mAR)、成骨细胞/骨髓基质细胞(OB/MSC) RANKL蛋白及mRNA表达显著降低(P＜0.05);模型组各指标与假手术组相比均有显著性差异(P＜0.05).结论:运动对去卵巢大鼠骨组织形态计量相关指标有一定的改善作用,对破骨细胞分化传导通路OPG-RANKL-RANK中的OPG、RANKL蛋白及基因表达有一定调节作用,并对去卵巢所致大鼠骨质疏松症有一定的防治作用.
