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几种植物雌激素对细胞间隙连接通讯的影响
目的了解植物雌激素对细胞的细胞间隙连接通讯(GJIC)的影响.方法用荧光漂白后恢复技术,在激光扫描共聚焦显微镜下观察典型的植物雌激素(槲皮素、染料木黄酮、拟雌内醇和肠内脂)对正常人皮肤角质形成细胞株(HaCaT细胞)GJIC的影响.结果不同种类的植物雌激素在不同浓度下对GJIC的影响不完全相同.槲皮素在0.1～10.0 μmol/L浓度下对HaCaT细胞的GJIC功能无明显影响.染料木黄酮、拟雌内醇和肠内脂在0.1～10.0 μmol/L浓度下,能不同程度地抑制GJIC功能,荧光恢复率为31.77%～37.06%,显著低于溶剂对照组(44.74%).结论除黄酮类槲皮素外,常见的植物雌激素(染料木黄酮、拟雌内醇和肠内脂)在人体可能达到的血清浓度下,对HaCaT细胞的GJIC功能都有不同程度的抑制,提示在一定条件下可能有促癌作用.因此,将其用作药品或保健食品时应该慎重.
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香豆雌酚对大鼠骨髓基质干细胞增殖和成骨分化的调控研究
目的 观察香豆雌酚(coumestrol) 对大鼠骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells BMSCs)增殖和成骨分化的影响,探讨香豆雌酚对骨髓基质干细胞的调节及其对骨骼系统的影响.方法 用不同浓度(0,10-10～10-5 mol·L1-)香豆雌酚干预6～8周雌性sD大鼠的骨髓基质干细胞,并设17-βE2(17β雌二醇,10-8 mol·L-1) 为阳性对照,在干预不同时间分别用MTT法测细胞增殖率、Von kossa 染色鉴定钙化结节形成、全自动生化仪测碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活性、酶消化法测羟脯氨酸(Hydroxyproline,Hyp)含量、放免法测骨钙素(Osteocalcin,OC)含量.并用 Western-Blot 法测干预7天时骨保护素(Osteoprotegerin,OPG)蛋白的表达,用Reahime-PCR法测干预7天、14天时OPG、RANKL(receptor activator of nuclear factor-kB ligand,核因子KB受体活化因子配基)基因的表达.结果 ①细胞增殖:干预24、48、72 h,10-8、10-7 mol·L-1香豆雌酚均能显著促进大鼠骨髓基质干细胞的增殖,而10-5mol·L-1 香豆雌酚在干预24、72 h抑制细胞增殖.②成骨分化:10-8 mol·L-1香豆雌酚干预25天后开始出现钙化结节;10-1、10-7 mool·L-1 香豆雌酚干预组ALP在14、21天时显著增加、Hyp在28天时显著增加,10-8 mol·L-1香豆雌酚干预组OC表达在28天时显著增加,高浓度(10-5 mol·L-1)则呈现抑制作用.③OPG/RANKL表达:干预7、14天,10-7mol·L-1 香豆雌酚能增加骨髓基质干细胞OPG mRNA及其蛋白的表达,提高OPG/RANKL基因的相对表达.结论 香豆雌酚能促进大鼠骨髓基质干细胞的增殖和成骨分化,并能通过影响OPG/RANKL 的表达来发挥骨骼系统的保护作用.
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香豆雌酚对成骨细胞分化过程中骨指标表达的影响
目的 观察植物雌激素香豆雌酚对成骨细胞增殖分化的作用并探讨其作用机制.方法 从小鼠颅盖骨获得成骨细胞并用0,10-9～10-5 M香豆雌酚孵育48 h,以17β雌二醇为阳性对照,用酶消化法测定碱性磷酸酶及Ⅰ型胶原含量,放免法测定骨钙素含量,RT-PCR法测定OPG及RANKL mRNA表达情况,Western Blot测定OPG蛋白含量.结果 干预48 h,不同浓度香豆雌酚呈剂量依赖性增加碱性磷酸酶及Ⅰ型胶原含量,10-6 M时达到大效应(P<0.05),但10-5 M效应有所降低,香豆雌酚轻度增加成骨细胞骨钙素含量,各组间无统计学差异.香豆雌酚呈剂量依赖性增加OPG基因及蛋白的表达(P<0.05),轻度降低RANKL基因的表达.结论 香豆雌酚能增加成骨细胞增殖及分化,可能其部分通过OPG/RANKL发挥作用.
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香豆雌酚对去卵巢大鼠骨代谢生化指标的影响
目的 研究香豆雌酚对去卵巢大鼠骨代谢生化指标的影响,探讨香豆雌酚对绝经后骨质疏松的防治作用.方法 36只6月龄雌性SD大鼠,随机分为去卵巢模型组,香豆雌酚组,17β-雌二醇组和假手术组,手术后14d,各组开始进行干预治疗.17β-雌二醇组按300μg/kg皮下注射,每周两次；香豆雌酚组按60 mg/kg皮下注射,1次/d；去卵巢模型组与假手术组每日皮下注射与17β-雌二醇组和香豆雌酚组同等体积的生理盐水.在干预治疗开始的第1～10周,每周测1次大鼠质量.第11周时测定尿钙、尿磷、尿肌酐和尿脱氧吡啶啉；计算大鼠子宫系数；测血钙、血磷、血碱性磷酸酶、血雌二醇浓度；测量大鼠右侧股骨密度.结果 与去卵巢模型组相比,香豆雌酚组大鼠骨密度( g/cm2)明显升高(0.141 ±0.002和0.126±0.003,P＜0.05),血碱性磷酸酶(1.26±0.15和2.42±0.70)、尿钙/尿肌酐(0.207±0.059和0.217+0.047)、尿脱氧吡啶啉/尿肌酐(6.056±1.715和0.572±3.140)(P均＜0.05)下降,差异有显著性意义,血雌二醇(7.13±4.11和3.41 ±1.98)升高；与17β-雌二醇组相比,香豆雌酚组子宫系数(g/kg)明显降低(1.056±0.715和4.133±1.121,P＜0.01),差异有显著性意义.结论 香豆雌酚具有减少骨吸收,促进骨形成,增加骨密度的作用,而其对子宫组织的副作用弱于雌激素.
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香豆雌酚对去卵巢大鼠成骨细胞MT1-MMP和TIMP-1基因表达的影响
目的 通过观察香豆雌酚(Coumestrol)对去卵巢骨质疏松模型大鼠成骨细胞膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)及其抑制因子TIMP-1(tissue inhibitors of matrix metalloproteinase-1)基因表达的作用,探讨香豆雌酚治疗绝经后骨质疏松的可能的分子机制.方法 利用去卵巢大鼠骨质疏松(OVX)模型,观察香豆雌酚对骨密度和骨组织形态计量学参数的影响;行原位杂交检测OVX大鼠胫骨近端成骨细胞中MT1-MMP、TIMP-I mRNA表达,免疫组化检测骨组织MT1-MMP、TIMP-1蛋白表达.结果 COU组大鼠(经eoumestrol处理)第3～5腰椎骨密度(0.165±0.015)较OVX组(0.143±0.014)明显增加,骨小梁体积比(32.7±7.9)厚度(43.3±6.7)和数目(5.5±0.9)分别较OVX组(9.7±3.3)、(35.7±8.1)、(2.5±0.6)明显升高,COU组骨小梁间隔(165.4±27.1)较OVX组(591.1±113.8)明显减小;COU组成骨细胞MT1-MMP mRNA与蛋白质表达上调,而TIMP-1基因表达无差异.结论 MT1-MMP低表达是发生绝经后骨质疏松的分子机制之一,香豆雌酚可使成骨细胞MT1-MMP基因表达上凋,对TIMP-1表达无明显影响.
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香豆雌酚对体外破骨细胞分化和骨吸收活性的影响
目的:观察植物雌激素香豆雌酚对破骨细胞的影响,分析其抗骨质疏松的作用方式.方法:实验于2005-07/2006-03在东南大学医学院临床实验中心和分子影像实验室、南京师范大学物理实验中心完成.以1,25(OH)2D3诱导大鼠骨髓细胞形成破骨样细胞,通过相差显微镜下的形态观察,抗酒石酸酸性磷酸酶染色和骨片上骨吸收陷窝的形成来鉴定破骨细胞.分别加入0,10-9,10-8,10-7,10-6,10-5 mol/L香豆雌酚,以10-9 mol/L 17 β-雌二醇为阳性对照,于培养3,6和9 d分别计数抗酒石酸酸性磷酸酶阳性细胞个数,磷酸苯二钠法测定破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶的活性,于培养12 d利用图像分析系统对骨吸收陷窝的面积进行测量分析,原子吸收光谱法测定破骨细胞和骨片联合培养的上清中钙的浓度.结果:①利用1,25(OH)2D3成功诱导出破骨样细胞.②香豆雌酚抑制破骨细胞的形成和分化:随香豆雌酚浓度增加,每孔抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性的破骨细胞数量呈剂量依赖性减少(香豆雌酚10-9,10-8,10-7,10-6,10-5 mol/L组分别为357±8,347±11,303±17,275±18,268±6,空白对照组为360±15,17 β-雌二醇组为200±12,P＜0.05).③破骨细胞噬骨活性:骨吸收陷窝面积香豆雌酚各浓度组与空白对照组相比均有显著下降,香豆雌酚10-9与10-8,10-7,10-6,10-5 mol/L组之间,香豆雌酚10-8,10-7mol/L组与10-6,10-5 mol/L组之间差异均有显著性.④破骨细胞和骨片联合培养的上清中钙的浓度:应用香豆雌酚10-8～10-5 mol/L处理后共培养体系中的钙浓度与空白对照组相比分别下降了24.7%,36.2%,36.9%,39.1%.结论:香豆雌酚可通过抑制破骨细胞的形成、抗酒石酸酸性磷酸酶的活性和骨吸收作用,抑制破骨细胞分化和骨吸收活性,从而具有抗骨质疏松作用.
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香豆雌酚对新生大鼠成骨细胞增殖分化的影响
目的:观察香豆雌酚对大鼠成骨细胞(OBs)增殖分化的影响,初步探讨香豆雌酚对OBs的作用机制.方法:用不同浓度香豆雌酚干预OBs,根据不同时间分别用酶消化法测碱性磷酸酶活性和羟脯氨酸含量、放免法测骨钙素含量及半定量RT-PCR法检测OBs内OPG/RANKL基因的表达. 结果:香豆雌酚呈浓度和时间依赖性促进大鼠OBs增殖及碱性磷酸酶表达;干预12h,各浓度组羟脯氨酸含量呈浓度依赖性增高,其中10-8mol·L-1作用大(P=0.022);培养12h,OBs表达骨钙素呈浓度依赖性,24h达高峰,其中10-8mol·L-1有显著性差异(P=0.012),48h有所下降;不同浓度、时间组香豆雌酚均能促使OBs增加表达OPG mRNA,同时有抑制RANKL mRNA表达的作用,其在24h 10-8mol·L-1浓度作用强度大(P=0.038),10-5mol·L-1则呈现抑制作用.结论:香豆雌酚能促进OBs的增殖分化,其作用呈浓度和时间依赖性,且至少部分有OPG/RANKL途径的参与.
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香豆雌酚对膝骨关节炎患者软骨细胞OPG/RANKL及MMP-1、MMP-3表达的影响
目的：：研究香豆雌酚( coumestrol)对膝骨关节炎患者软骨细胞OPG/RANKL及MMP-1、MMP-3表达的影响,初步探讨其对骨关节炎的治疗机制。方法：分离、培养因膝骨关节炎行膝关节置换患者的膝关节软骨细胞,运用Ⅱ型胶原免疫荧光染色进行软骨细胞鉴定。用不同浓度(10-9、10-8、10-7 mol·L-1)香豆雌酚干预第3代细胞,并设0浓度为空白对照组,分别于培养后3、7 d用real-time PCR法测定细胞骨保护素( osteoprotegerin,OPG)、核因子κB受体活化因子配基( receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)、基质金属蛋白酶-1(matrix metalloproteinase-1,MMP-1)和基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3) mRNA的表达。结果：干预3 d,10-8 mol·L-1组OPG及RANKL mRNA表达均增加,其OPG/RANKL相对表达是空白对照组的2.59倍(P <0.05)；干预7 d,10-9和10-8 mol·L-1组 OPG mRNA 表达均增加,10-7 mol·L-1组RANKL mRNA表达增加,10-8 mol·L-1组OPG/RANKL相对表达是空白对照组的3.85倍(P<0.05)。干预3 d,10-8 mol·L-1组MMP-1 mRNA 表达减少(P <0.05)；干预7 d,10-8 mol·L-1组MMP-1和MMP-3 mRNA表达均减少( P<0.05)。结论：香豆雌酚能增加膝骨关节炎患者关节软骨细胞OPG表达及OPG/RANKL值,减少其MMP-1、MMP-3表达,具有一定的软骨保护作用。
