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几种植物雌激素对细胞间隙连接通讯的影响
目的了解植物雌激素对细胞的细胞间隙连接通讯(GJIC)的影响.方法用荧光漂白后恢复技术,在激光扫描共聚焦显微镜下观察典型的植物雌激素(槲皮素、染料木黄酮、拟雌内醇和肠内脂)对正常人皮肤角质形成细胞株(HaCaT细胞)GJIC的影响.结果不同种类的植物雌激素在不同浓度下对GJIC的影响不完全相同.槲皮素在0.1～10.0 μmol/L浓度下对HaCaT细胞的GJIC功能无明显影响.染料木黄酮、拟雌内醇和肠内脂在0.1～10.0 μmol/L浓度下,能不同程度地抑制GJIC功能,荧光恢复率为31.77%～37.06%,显著低于溶剂对照组(44.74%).结论除黄酮类槲皮素外,常见的植物雌激素(染料木黄酮、拟雌内醇和肠内脂)在人体可能达到的血清浓度下,对HaCaT细胞的GJIC功能都有不同程度的抑制,提示在一定条件下可能有促癌作用.因此,将其用作药品或保健食品时应该慎重.
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卡维地洛对大鼠心肌间隙连接通讯的影响及作用机制研究
目的研究卡维地洛对大鼠心肌缺血再灌注损伤、心肌间隙连接通讯(GJIC)及连接蛋白43(CX43)的影响,验证卡维地洛可通过改变CX43磷酸化状态抑制GJIC起到防止心肌再灌注损伤的假设.方法将大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和卡维地洛组.结扎左冠状动脉前降支致缺血30 min后复灌4 h,建立心肌缺血再灌注损伤模型,于再灌注4 h末测定心肌酶及心肌梗死范围变化;制作Langendorf心脏灌流模型,随机分为假手术组、缺血再灌注组、卡维地洛组和庚醇组,于整体缺血30 min末期用改良的划痕标记染料示踪技术测定GJIC;用Western blot技术检测缺血30 min CX43磷酸化状态的改变.结果与假手术组相比,缺血再灌注组心肌酶及心肌梗死范围明显增加,GJIC无明显变化,非磷酸化CX43升高.与缺血再灌注组比较,卡维地洛组心肌酶及心肌梗死范围显著减少,同间隙连接抑制剂庚醇作用相似,GJIC也明显受到抑制,伴非磷酸化CX43水平明显上升.结论卡维地洛具有使CX43去磷酸化进而抑制GJIC防止心肌再灌注损伤的作用.
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极低频磁场辐照对细胞间隙连接通讯功能的作用及其阈值研究
目的探讨极低频(ELF)磁场可能存在的促癌或协同促癌作用.方法应用光漂白后的恢复技术,观察ELF磁场对细胞间隙连接通讯(GJIC)的作用及其阈值.结果0.4mT及以上强度的ELF磁场辐照能明显抑制细胞GJIC功能;0.2 mT及以上强度的ELF磁场单独虽无抑制GJIC的效应,但可增强TPA所诱导的GJIC的抑制;0.1mT的ELF磁场既无单独抑制作用,也无协同TPA的作用.结论一定强度的ELF磁场辐照可能具有促癌或协同促癌作用.
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全反式维甲酸对肝癌细胞连接蛋白基因表达及细胞间隙连接通讯功能的影响
目的观察肝癌细胞株SMMC-7721和BEL-7404经全反式维甲酸(ATRA)诱导前后CX26、CX32、CX43基因在转录水平的改变以及对细胞间隙连接功能的影响.方法分别用常规培养基和含ATRA浓度为10-5mol/L的培养基培养SMMC-7721和BEL-7404两种肝癌细胞株细胞,于药物诱导细胞24、48、72 h时,收集各组细胞并提取总mRNA, RT-PCR法检测CX26、CX32、CX43基因表达的情况.通过染料传输实验,观察细胞间隙连接通讯功能的变化.结果 SMMC-7721细胞和BEL-7404细胞在ATRA处理前没有CX26 mRNA和CX32 mRNA的表达,但均有CX43 mRNA的表达.经ATRA处理后出现CX26 mRNA和CX32 mRNA的表达.经ATRA处理后SMMC-7721细胞间隙连接通讯功能增强,而且随ATRA作用时间延长,细胞间隙连接通讯功能增强越明显.BEL-7404细胞经ATRA处理24、48、72 h后细胞间隙连接通讯功能没有明显的改变.结论全反式维甲酸能够在转录水平上调CX26、CX32基因在肝癌细胞SMMC-7721和BEL-7404中的表达.肝癌细胞SMMC-7721在CX26、CX32基因转录水平上调的同时伴有细胞间隙连接通讯功能的增强.肝癌细胞BEL-7404在CX26、CX32基因转录水平上调的同时不伴有细胞间隙连接通讯功能的增强.这说明两种细胞的间隙连接通讯功能调节机制不同.
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1α,25-二羟维生素D3对大鼠成骨细胞骨架、间隙连接通讯及[Ca2+]i的影响
目的 研究不同浓度1α,25-二羟维生素D3[1,25-(OH)2·D3]0、10-9、10-8、10-7 mol/L对体外培养3～4d龄SD大鼠成骨细胞(OB)骨架F-actin、间隙连接通讯(GJIC)及细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的影响.方法 1,25-(OH)2·D3作用20 min、24 h后测定[Ca2+]i;作用24、48 h后观察F-actin及GJIC.结果 20 min时,不同浓度1,25-(OH)2·D3组[Ca2+]i均显著高于对照组;24 h时10-9 mol/L组[Ca2+]i则显著低于对照组,其余各组间差异不显著.此时10-8、10-7mol/L组大部分细胞变得扁平,F-actin排列较对照组有序,形成应力纤维;48 h时,对照组及10-9 mol/L组F-actin表达减少,10-9mol/L组GJIC非常显著地弱于对照组,而10-8、10-7mol/L组大部分细胞F-actin表达完好,GJIC均非常显著地强于其余两组.结论 高浓度1,25-(OH)2 D3能够维持OB形态,增强OB间通讯,而低浓度1,25-(OH)2 ·D3抑制细胞间通讯.
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DEHP对大鼠睾丸支持细胞间隙连接蛋白43表达和间隙连接通讯功能的影响
目的 通过对原代培养的大鼠睾丸支持细胞进行邻苯二甲酸二乙基己酯(di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)染毒,探讨DEHP体外对大鼠睾丸支持细胞间隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)表达及间隙连接通讯(gap junction intercellular communication,GJIC)功能的影响.方法 体外分离和原代培养大鼠睾丸支持细胞,应用不同浓度的DEHP(10、50、100nmol/L)作用于支持细胞24h,应用荧光定量PCR法检测Cx43基因mRNA表达,用Weastern blot方法检测Cx43蛋白表达,划痕标记荧光染料示踪方法检测GJIC功能.结果 与对照组相比,DEHP各组支持细胞Cx43基因mRNA和蛋白表达均下降(P＜0.05),呈浓度依赖关系,同时支持细胞GJIC功能降低.结论 DEHP在体外可通过抑制大鼠睾丸支持细胞Cx43基因表达而抑制GJIC功能,进而影响支持细胞功能.
关键词： 邻苯二甲酸二乙基己酯 支持细胞 间隙连接蛋白43 间隙连接通讯 -
不同分化胃癌细胞系中间隙连接蛋白的表达
目的 探讨间隙连接蛋白(Cx)Cx26、Cx32、Cx43、Cx45在转化的人胃细胞系(GES-1)、胃高分化腺癌细胞系(N87)和胃低分化腺癌细胞系(BGC-823)中的表达及其与胃癌发生、发展的关系.方法 采用间接免疫荧光方法检测Cx26、Cx32、Cx43、Cx45在不同分化程度胃癌细胞株中的表达,并分析该蛋白表达与胃癌发生、发展的关系.结果 在不同分化胃癌细胞株中,Cx26、Cx32、Cx43、Cx45表达呈现1个由高水平到低水平表达直至无表达的梯度分布,既Cx26、Cx32、Cx43、Cx45在GES-1中高水平表达,在N87表达减少,在BGC-823中无表达,并且表达部位有差异.结论 Cx26、Cx32、Cx43、Cx45的表达与胃癌细胞的分化关系密切,在胃癌的发生、发展中有一定作用.
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对苯二甲酸对NIH-3T3细胞间隙连接通讯功能的影响
目的研究对苯二甲酸(TPA)对NIH-3T3细胞间隙连接通讯(GJIC)功能的影响.方法采用噻唑蓝(MTT)比色法及划痕标记示踪技术(scrape-loading and dye transfer,SLDT),以0、125、250、500、1 000、2 000 μg/ml 的剂量染毒细胞,同时设立溶剂对照及阳性对照,观察TPA对GJIC的影响.结果 TPA对细胞GJIC功能抑制随着染毒剂量增大和染毒时间延长而逐渐增强,呈现剂量-效应和时间-效应关系,在250 μg/ml或更高剂量染毒1 h或更长时间时,细胞GJIC功能被明显抑制,在染毒8 h时各剂量组细胞GJIC功能抑制效应均显著;去除TPA后,GJIC功能有恢复倾向,但在12 h内仍不能恢复至正常水平;加入哺乳动物肝脏微粒体酶(S9)能加重TPA对细胞GJIC功能抑制作用.结论 TPA原形及其代谢产物对NIH-3T3细胞GJIC功能均具有抑制作用.
关键词： 对苯二甲酸(TPA) 噻唑蓝(MTT)比色法 间隙连接通讯 致癌性 -
间隙连接蛋白在卵泡发育过程中的作用
间隙连接广泛分布于各种组织细胞中,由其构成的通道允许小分子信号物质在相邻细胞间直接传递,在细胞间的通讯方面起着非常重要的作用.间隙连接由连接蛋白(Cx)组成,目前已经发现Cx家族有20多个成员[1],它们在相邻细胞间组成同种或异种间隙连接,调控着细胞的增殖和分化.在哺乳动物卵泡发育过程中,卵母细胞与周围的颗粒细胞之间形成的缝隙连接,介导胞间通讯,对生殖细胞迁移、卵母细胞减数分裂能力恢复、颗粒细胞分层、卵泡成腔、黄体形成、促性腺激素信号传递有非常重要的调节作用.本文根据近年来相关的研究报道,对卵泡发育过程中间隙连接的作用进行综述.
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间隙连接分子Cx43相关蛋白及其功能研究进展
间隙连接是细胞间直接进行信息交流的唯一膜通道结构.Cx43是构成间隙连接中分布广、研究多的间隙连接分子,目前运用免疫共沉淀、免疫荧光共定位、pull-down以及酵母双杂交等多种方法研究发现了众多的Cx43相关蛋白.这些蛋白通过与Cx43相互作用在间隙连接蛋白的组装、运输、膜定位,间隙连接通道的形成以及对间隙连接通讯的调控等一系列过程中均发挥十分重要的作用.本文就目前已经研究发现的Cx43相关蛋白及其新的功能研究进展进行综述.
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间隙连接蛋白家族中Cx26、Cx32、Cx43在前列腺癌组织中的表达
目的:研究间隙连接蛋白家族中Cx26、Cx32、Cx43在前列腺癌(PCa)及良性前列腺增生(BPH)组织中的表达情况,分析三者与PCa生物学行为关系,探索其在PCa发生、发展中的作用机制,为PCa的诊断及治疗提供新的实验依据. 方法:随机收集我院近4年存档的PCa石蜡标本31例、BPH 23例,采用免疫组化染色SABC法回顾性研究Cx26、Cx32、Cx43在PCa和BPH组织中的表达情况,半定量研究Cx26、Cx32、Cx43的表达与PCa、BPH的临床和病理参数的关系. 结果:①Cx26、Cx32、Cx43在BPH、PCa组织中的阳性表达率分别为82.6％与74.2％ (x2=0.541,P＞0.05)、78.3％与61.3％(x2=1.763,P＞0.05)和87.0％与38.7％ (x2=12.730,P＜0.01),Cx43在PCa组织中的阳性表达率较BPH中显著降低.②Cx26、Cx43在PCa组织中的阳性表达强度与肿瘤的恶性程度呈负相关(rcx26=-0.476,P＜0.01; rcx43=-0.484,P＜0.01);Cx32的表达与肿瘤恶性程度无相关性(r=-0.242,P＞0.05).③3种Cx表达与年龄、血清PSA浓度及组织中PSA表达强度无相关性,且3种Cx间的表达亦无相关性. 结论:Cx26、Cx32、Cx43在BPH和PCa组织中均有不同程度表达,其中Cx43在PCa的发生、发展中可能起到一定的作用,其也许可作为PCa除PSA外的另一标志物以及PCa生物治疗的新靶点,Cx26在PCa进展过程中可能起一定的作用,但其机制尚需进一步研究.
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细胞间隙连接通讯与肿瘤
细胞间隙连接通讯(GJIC)在多细胞动物细胞的生长、分化和凋亡等生理过程中发挥着重要调节作用.研究表明大多数转化细胞和肿瘤细胞GJIC功能减弱或消失.阻止肿瘤促进剂对细胞GJIC功能的抑制或恢复癌细胞GJIC功能将对肿瘤的预防和治疗具有重要意义.
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细胞间隙连接通讯与肺癌
细胞间隙连接通讯(gap junction intercellular communication,GJIC)是细胞间的1种重要连接方式,在细胞分化、生长控制及维持体内环境平衡等方面起重要作用.近几年来,国内外对GJIC与癌变的关系进行了大量的研究,发现多数肿瘤细胞无GJIC功能,其间隙连接(GJ)少或无,邻近的正常组织或良性肿瘤的间隙连接正常.少数肿瘤细胞有脆弱的连接通讯,但很容易受到破坏,其间隙连接数量少;或连接通讯功能比正常细胞低.认为GJIC在癌变发生过程中扮演着极为重要的角色[1].已有学者对GJIC在肺癌发生、发展中的作用进行了研究,本文对它们之间的关系作一综述.
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β-榄香烯对小鼠B16黑色素瘤细胞粘附、运动和间隙连接通讯功能的影响
目的:探讨β-揽香烯对小鼠B16黑色素瘤细胞粘附和运动能力的影响.方法:采用细胞培养、电镜及划痕染料示踪技术,研究了β-榄香烯对小鼠B16黑色素瘤细胞粘附与运动能力、间隙连接结构及其间隙连接通讯功能的影响.结果:20～40μg/ml的β-榄香烯可显著抑制B16细胞对纤维结合蛋白和层粘连蛋白两种基质的粘附,抑制B16细胞的运动,延迟吸管尖部所致细胞单层损伤的愈合.结论:提示β-榄香烯对B16细胞粘附和运动能力的抑制可能是其抗肿瘤转移作用的机制之一.
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CON43蛋白及mRNA在子宫内膜异位症中表达及意义
目的:探讨间隙连接蛋白CON43mRNA及蛋白在子宫内膜异位症中的表达及意义.方法:对20例子宫内膜异位症内膜用免疫组化法检测CON43蛋白的表达,用RT-PCR检测其mRNA表达,并与21例其他良性疾病子宫的内膜进行比较.结果:CON43蛋白主要在内膜腺上皮细胞浆中表达,内异症组中CON43蛋白表达较对照组显著降低;且内异症组中CON43mRNA较对照组显著降低.结论:子宫内膜异位症中间隙连接蛋白CON43在mRNA水平和蛋白水平较对照组显著降低,可能是导致内膜上皮细胞间的物质和信号传递减低或缺失,内膜细胞在它处游走、粘附的重要原因.
