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硫化氢抑制糖基化终末产物引起上皮细胞钠通道异常激活的机制研究
目的：探讨糖基化终末产物（ AGEs）激活上皮细胞钠通道（ ENaC）的作用，及H2 S对抗AGEs引起ENaC异常激活的机制研究。方法：应用膜片钳记录爪蟾肾皮质集合管上皮细胞ENaC电流，研究H2 S对抗AGEs引起ENaC激活的机制；应用共聚焦显微镜技术观察H2 S对AGEs引起胞内活性氧水平升高的调节作用；应用分子生物学实验检测AGEs处理后过氧化氢酶的表达水平变化。结果：AGEs通过抑制过氧化氢酶的表达引起胞内活性氧水平升高进而上调ENaC活性；H2 S通过削弱AGEs引起活性氧水平增高从而逆转AGEs引起ENaC的激活；PTEN／PI3 K通路参与了AGEs上调ENaC活性。结论：AGEs通过抑制过氧化氢酶的表达上调胞内活性氧水平，并通过PTEN／PI3K途径调节ENaC活性，该作用可被H2 S逆转，并且AGEs上调ENaC活性具有代谢记忆现象。
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不同压力的二氧化碳气腹对胃癌细胞迁移运动和细胞骨架的影响
目的 通过体外模拟气腹环境,观察不同压力CO2或He(helium)对胃癌细胞MKN-45迁移运动和细胞骨架的影响.方法 将MKN-45细胞置于充满CO2或He的密闭培养箱中,按模拟气腹种类不同分为对照组、CO2气腹组和He气腹组,模拟气腹压力分别为12 mm Hg和15 mm Hg,作用时间均为4 h.于处理结束后即刻用血气分析仪检测培养液pH值;Transwell法观察细胞迁移运动变化;激光共聚焦显微镜观察细胞骨架变化.结果 CO2组细胞培养液呈酸性,He组细胞培养液呈碱性.CO2组和He组在12 mm Hg压力下MKN-45细胞穿过滤膜的数量较对照组差异无统计学意义(P＞0.05).CO215 mm Hg组细胞穿过滤膜的数量较对照组明显减少(P＜0.01);He 15 mm Hg组与对照组差异无统计学意义(P＞0.05);CO2 15 mm Hg组细胞微丝、微管结构模糊,伪足消失.结论 在临床常用气腹压力(12 mm Hg)下CO2对胃癌细胞迁移运动及细胞骨架无明显影响;在15 mm Hg压力下,CO2对胃癌细胞迁移运动起抑制作用,其作用机制可能与其细胞骨架受破坏有关.
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神经纤维在人长管状骨中的分布研究
目的研究人长管状骨组织中神经纤维的分布及与血管行走的关系.方法取新鲜尸体肱骨,分别做横切面和纵切面的骨磨片,为10μm厚,5mm × 5mm大小,银染色.分别在普通光学显微镜和共聚焦显微镜下,寻找神经纤维在骨组织中的分布及和骨细胞的关系.结果骨组织内有大量的神经纤维,神经纤维伴随着滋养血管同时进入骨中,沿哈佛氏系统和血管同时走行,神经纤维在哈佛氏系统内的直径为3～8μm.进入骨髓腔后,神经呈散在分布,在骨髓腔内有大量散在神经分布,其直径为0.3～3μm.结论人长管状骨中有大量的神经纤维存在,在骨矿物质中神经纤维沿哈佛氏系统排列,伴随血管走行,在骨髓腔内神经纤维散在分布,支配骨髓中细胞.
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活体共聚焦显微镜观察视网膜激光光凝术对角膜上皮下神经的影响
目的:应用活体共聚焦显微镜(in vivo confocal microscopy,IVCM)观察视网膜激光光凝术对角膜上皮下神经的影响.方法:收集行视网膜激光光凝术的患者36例46眼,分为糖尿病性视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)组(14例22眼)与非DR组(22例24眼),在治疗前及治疗后1周、1个月应用IVCM采集两组角膜基底层下神经纤维图像,使用Image J和Neuron J软件计算其长度及密度.结果:DR组术前角膜神经纤维主干密度(corneal nerve fiber density,CNFD)、角膜神经纤维分支密度(corneal nerve branch density,CNBD)和角膜神经纤维长度(corneal nerve fiber length,CNFL)均低于非DR组,角膜神经弯曲度(corneal nerve fiber tortuosity,CNFT)高于非DR组.两组间角膜神经总分支节点密度(corneal total branch node,CTBN)无显著差异.DR组光凝术后CNFD,CNFL测量值持续降低,术前、术后1周、术后1个月3个观察时段两两之间的差异有统计学意义;光凝术后1个月CNFT与术前的差异有统计学意义.非DR组光凝术后CNFD,CNFL持续降低,术前、术后1周、术后1个月3个观察时段两两之间的差异有统计学意义;CNBD持续升高,术后1周、术后1个月测量值与术前的差异有统计学意义;CNFT持续升高,术后1周、术后1个月测量值与术前的差异均有统计学意义.结论:IVCM结合附属软件可量化评估角膜上皮下神经,糖尿病状态和视网膜激光光凝均可对角膜上皮下神经造成损伤.
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共聚焦显微镜下观察糖尿病兔角膜细胞改变
目的:通过时糖尿病兔角膜连续活体观察,研究糖尿病角膜病理变化.方法:四氧嘧啶静脉注射12只新西兰大白兔,复制糖尿病疾病模型:另外3只为空白对照.用共聚焦显微镜在四氧嘧啶给药前和糖尿病模型建成后4、8、12周对角膜进行观察.结果:随疾病模型建立时间的延长,糖尿病兔角膜出现上皮细胞脱落增多,前、后基质细胞数目减少,内皮多形性细胞增加,内皮数目减少.结论:糖尿病兔角膜病变,上皮细胞、基质细胞、内皮细胞随病程时间延长而减少.
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共聚焦显微镜检测人子宫内膜异位症病灶血管形成53例报告
目的:探讨子宫内膜异位症(内异症)病灶的血管特点与形成机制.方法:采用LSM510激光共聚焦显微镜对53例卵巢和骶韧带内异症病灶(内异症病灶组)进行观察,并取同期20例子宫腺肌病在位内膜(子宫腺肌病组)与21例子宫肌瘤在位正常内膜(正常对照组)进行对比分析.结果:内异症病灶组内无论增殖期还是分泌期均以幼稚型血管为主;内异症病灶组中Ⅲ、Ⅳ期的子宫内膜血管内皮面积[(376±102)μm2]明显高于Ⅰ、Ⅱ期[(132±55)μm2](P＜0.05).内异症病灶组的分泌期内膜血管内皮面积、周径与直径与增殖期相比具有缩小趋势,导致其容易脱落与种植.结论:内异症病灶的血管随着病情的进展仅血管面积有所增大,但病灶内血管类型并未改变,以幼稚血管为主.子宫内膜异位症病灶的血管形成改变可能与其内膜的异位种植有关.
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脉络膜新生血管CNV动物模型的评估新方法
目的:建立C57BL/6小鼠脉络膜新生血管(Choroidal neovascularization,CNV)动物模型的评估方法.方法:①应用氪红激光对小鼠实验性视网膜进行光凝,激光的功率、光凝斑直径和曝光时间分别为250 mW、50 μtm及0.05 s诱导CNV动物模型.②分别于光凝后1、3、5、7、10d,用2×106FTTC-dextran荧光素灌注小鼠心脏.③mAb特定抗Elastin抗体标记Bruch膜.④视网膜色素上皮(Retinal pigmentepithelium,RPE)-脉络膜-巩膜复合体铺片.⑤激光共聚焦显微镜对RPE-脉络膜-巩膜复合体进行CNV形态进行观察和测量.结果:光凝后3 d可见新生血管及走向清晰可见,光凝后7 dCNV达到高峰.结论:用抗体标记Bruch膜.FITC-dextran荧光素灌注小鼠心脏,激光共聚焦显微镜对RPE-脉络膜-巩膜复合体进行氪红激光诱导C57BL/6小鼠的CNV模型进行评估,直观,可靠.
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浅谈激光扫描共聚焦显微镜的使用维护及保养
阐述激光扫描共聚焦显微镜的组成及工作原理,并根据使用共聚焦显微镜所积累的经验,提出激光扫描共聚焦显微镜的日常使用所遇见的问题,以及共聚焦显微镜主要部件的维护与保养方法.
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心理护理干预在真菌性角膜炎患者共聚焦显微镜检查中的应用研究
目的 心理护理干预在真菌性角膜炎患者共聚焦显微镜检查中的应用效果.方法 选择合适的患者60例,随机分为观察组和对照组各30例,观察组实施心理护理干预,对照组采用传统护理模式,比较两组患者焦虑及生命体征变化.结果 两组患者检查预约时HAMA-14量表评分相似,差异无统计学意义(P＞0.05);观察组检查开始时和检查结束时HAMA-14量表评分均低于对照组,差异存在显著性(P＜0.05).对照组检查预约时、检查开始时和检查结束时HAMA-14量表评分均相似,差异无统计学意义(P＞0.05);观察组检查开始时和检查结束时HAMA-14量表评分低于检查预约时,差异存在显著性(P＜0.05).两组患者检查预约时血压及心率相似,差异无统计学意义(P＞0.05);观察组检查开始时和检查结束时血压及心率均优于对照组,差异存在显著性(P＜0.05).观察组患者检查预约时、检查开始时和检查结束时血压及心率均相似,差异无统计学意义(P＞0.05);对照组检查开始时和检查结束时血压及心率高于检查预约时,差异存在显著性(P＜0.05).结论 真菌性角膜炎患者共聚焦显微镜检查过程中实施心理护理干预,可以有效减轻患者的焦虑,保持生命体征平稳,保证检查的顺利进行.
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血管内皮细胞缺氧模型的建立以及共聚焦显微镜观测缺氧状态下内皮细胞浆游离[Ca2+]i变化
许多文献都报道了内皮细胞缺氧模型的建立,并各自据此观察了内皮细胞缺氧时部分功能的变化.但通过共聚焦显微镜观测缺氧时血管内皮细胞胞浆钙离子浓度的变化报道甚少,以此变化推知细胞已受缺氧损伤者尚未见报道,本实验正是以共聚焦显微镜动态观察内皮细胞胞浆[Ca2+]i变化.1 材料与试剂人脐静脉内皮细胞6孔板有盖钢盒、石蜡、血气分析仪(COY公司),共聚焦显微镜(Bia-Rad公司)95%和5%混合气体,FLuo-3Am.
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Chlorin e6在S180肉瘤荷瘤小鼠体内的分布
目的 研究Chlorin e6在肿瘤组织的富集情况,探索给药后佳的超声辐射时间.方法 S180肉瘤荷瘤小鼠腹腔注射Chlorin e6后,利用共聚焦显微镜观测其在肿瘤和周围肌肉组织的富集变化及代谢.结果 腹腔给药18h后,Chlorin e6在肿瘤和周围肌肉组织含量均达高峰,且差异明显,此时为佳的超声辐射时间.结论 Chlorin e6具有肿瘤靶向性好、正常组织清除快的优点.Chlorin e6声动力疗法的时间点应选择在18h左右.
关键词： Chlorin e6 S180肉瘤 共聚焦显微镜 超声波 声动力疗法 -
抗角蛋白抗体进入活细胞的共聚焦显微镜观察
目的观察抗角蛋白抗体能否进入活细胞. 方法以鼠单克隆抗体(mAb)IgG作用于培养中的人Tca8113细胞, 以黑素瘤细胞和抗HBsAg抗体作用的Tca细胞作为阴性对照.细胞固定后与FITC标记的羊抗鼠IgG结合, 用荧光显微镜及共聚焦显微镜, 观察细胞的荧光着色. 结果抗角蛋白mAb作用的Tca8133细胞胞浆呈亮绿色, 着色较均匀, 细胞核未见着色.两种对照均未见着色. 结论抗角蛋白mAb可进入活细胞, 并结合于胞浆成分.
关键词： 抗角蛋白单克隆抗体 TCA8113 细胞 共聚焦显微镜 -
创伤性脑损伤后脑神经细胞内Ca2+变化实验研究
颅脑损伤是一种严重而复杂的创伤,创伤性颅脑损伤(traumatic brain injury, TBI)后引起的病理生理变化也较复杂.本研究通过建立Wistar大鼠TBI动物模型,采用荧光离子成像法,测定TBI后脑神经细胞内钙离子浓度的变化,研究钙离子在TBI后引起的病理生理改变,探讨钙离子与TBI程度之间的关系.
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炎症性皮肤病的共聚焦显微镜智能诊断
在体反射式共聚焦显微镜是一种非侵入性的影像学技术,可以获得细胞水平分辨率的水平扫描皮肤图像.在炎症性皮肤病常用光镜下炎症模式基础上明确了四种主要反射共聚焦显微镜炎症模式,以这四种主要炎症模式的“主要”特征和“次要”特征为主干可能进行模式诊断,基于这些模式诊断标准的明确将有可能通过深度学习的模型达到智能诊断的目的.
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皮肤影像联合应用:皮肤病诊断评估的更好选择
皮肤影像技术是以激光、超声和电磁波为基础等多种影像技术的总称,包括皮肤镜、反射式共聚焦显微镜(RCM)、皮肤高频超声(皮肤B超)、皮肤光学相干层析成像(OCT)、皮肤太赫兹成像、皮肤光声成像和多光子激光断层成像技术(多光子CT)等.因技术层面的局限性和侧重点,如穿透性和分辨率不足,相互补充可获得更多的皮损信息,相互印证可提高临床医生的诊断自信,皮肤影像技术的联合应用成为发展的方向.目前皮肤镜、RCM在临床的应用相对较为广泛,本文主要从两者联合应用在皮肤病诊断评估的国内外研究进展进行阐述.
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反射式共聚焦显微镜成像的现状与挑战
反射式共聚焦显微镜(RCM) 1995年开始在皮肤科应用,可以实现皮肤活体的细胞水平成像.经过20余年的发展,RCM技术在皮肤病筛查、辅助诊断和鉴别诊断,皮肤病和皮肤美容治疗评估等领域得到了广泛应用.本文就RCM技术的优势、应用现状以及应用过程中存在一些问题和挑战进行评述.
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反射式共聚焦显微镜在丘疹鳞屑性皮肤病诊断中的应用新进展
主要总结并探讨几种常见的丘疹鳞屑性皮肤病在反射式共聚焦显微镜(reflectance confocal microscopy,RCM)下的镜像特征以及RCM技术在丘疹鳞屑性皮肤病辅助诊断中的应用进展.其中寻常性银屑病的RCM研究较多且相对深入,已建立了观察银屑病不同病期及疗程的量化指标.玫瑰糠疹的RCM研究比较缺乏,可能与该病相对无特异性组织病理学表现和有限的RCM分辨率有关.扁平苔藓的RCM诊断可以达到类似于特异性组织病理学改变的水准,但毛发红糠疹应用RCM观察其特异性组织病理表现相对困难.硬化性萎缩性苔藓和光泽苔藓的RCM研究虽少但其表现较为特异.RCM技术已为皮肤病的诊断和鉴别诊断提供了极大帮助,有待设备技术的更新改良和更多简便实用的应用研究来进一步提高其应用效果及前景.
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共聚焦显微镜在真菌性角膜炎诊治中的临床应用
目的:评价共聚焦显微镜联合角膜刮片在真菌性角膜炎中的临床应用.方法:对我院临床诊断为真菌性角膜炎的患者56例56眼行共聚焦显微镜检查和角膜刮片检查,包括涂片后显微镜下检查和真菌培养,并进行药物或联合手术治疗,统计诊断的阳性率和治疗预后.结果:入院时共聚焦显微镜诊断阳性率为91％,角膜刮片病原学检测诊断阳性率为54％,共聚焦显微镜和角膜刮片联合诊断阳性率为95％.治疗后,单纯药物治疗达到临床治愈者44眼(79％),单纯药物治疗无法控制感染需要进行手术治疗者12眼(21％).结论:共聚焦显微镜具有非侵入性、快速、重复性好等特点,联合角膜刮片实验室检查可以提高真菌性角膜炎的诊断阳性率,更好地指导治疗.
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真菌培养和共聚焦显微镜检查诊断非首诊真菌性角膜炎的临床评价
目的:评价真菌培养和共聚焦显微镜检查在非首诊真菌性角膜炎患者诊断中的作用.方法:采用回顾性研究.对2016-09/2017-02于我院住院治疗的非首诊真菌性角膜炎患者的共聚焦显微镜检查和真菌培养检查进行汇总和分析,利用配对四格表资料的x2检验统计方法比较两种检查的阳性率.结果:非首诊真菌性角膜炎患者31例31眼中,真菌培养阳性18眼,阳性率58％,角膜共聚焦显微镜检查阳性6眼,阳性率19％,真菌培养检查的阳性率明显高于共聚焦显微镜检查的阳性率,差异有统计学意义(x2=7.56,P<0.01).真菌培养阴性的13例13眼患者中,2眼共聚焦显微镜检查阳性;共聚焦显微镜检查阴性的25例25眼患者中,14眼真菌培养阳性.结论:对非首诊真菌性角膜炎患者,真菌培养阳性率较角膜共聚焦显微镜检查阳性率更高.真菌培养是诊断非首诊真菌性角膜炎并明确真菌种属的重要辅助检查方法.在临床诊治过程中,共聚焦显微镜检查因其有着快速、无创、可重复操作的特点,也应作为怀疑真菌性角膜炎患者的首选辅助检查.两种检查方法联合应用可提高诊断阳性率.对于部分辅助检查阴性的患者,不可轻易否定其真菌感染的可能性.
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DR早期视网膜神经纤维层和角膜神经的变化及其相关性
目的:观察无视网膜微血管病变的糖尿病患者的视网膜神经纤维层(RNFL)和角膜神经纤维(CNF)变化,以及两者变化的相关性.方法:收集40例40眼2型糖尿病患者,经散瞳眼底检查未发现糖尿病视网膜病变,均接受光学相干断层扫描(OCT)检查和活体角膜共聚焦显微镜(IVCM)检查.另收集年龄匹配的80例80眼健康正常眼为对照,分为40例40眼只行OCT检查的RNFL对照组和40例40眼只行IVCM检查的CNF对照组.利用OCT观察视乳头上方、下方、颞侧、鼻侧和平均RNFL厚度,用IVCM观察角膜上皮下角膜神经纤维长度和角膜神经密度.结果:糖尿病组的视乳头上方、颞侧、鼻侧及平均RNFL与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),但视乳头下方RNFL糖尿病组比RNFL对照组减少,差异有统计学意义(P=0.003).糖尿病组的角膜神经纤维长度、角膜神经密度均比CNF对照组减少(P<0.01).糖尿病组中,平均RNFL与角膜神经纤维长度和角膜神经密度呈正相关(r=0.518,P<0.01;r=0.484,P=0.002),下方RNFL与角膜神经纤维长度和角膜神经密度呈正相关(r=0.607,P<0.01;r=0.573,P<0.01).结论:糖尿病患者在未发现糖尿病视网膜病变前同时存在视网膜神经纤维层和角膜神经的丢失,视网膜神经纤维层变薄主要表现在下方象限,视网膜神经纤维层的变薄与角膜神经的减少呈正相关.
