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上皮细胞钠通道α亚基在大鼠和人睾丸、精子中的表达及其与精子活力的关系
目的:研究上皮细胞钠离子通道α亚基(ENaC-α)在大鼠和人的睾丸、精子上的表达及其与人精子活力之间的关系.方法:用western-blot检测ENaC-α在大鼠和人睾丸、精子上的表达,同时免疫荧光检测其在大鼠睾丸的分布特点.用计算机辅助精液分析检测ENaC-α的特异阻断剂EIPA[5-(N-ethyl-N-isopropyl)-amiloride hydrochloride]对精子活力的影响.结果:ENaC-α亚基表达于大鼠睾丸精母细胞、精子细胞,以及大鼠成熟精子的鞭毛中段;它也存在于人睾丸和成熟精子的鞭毛中段.体外精子活力实验表明,获能过程中ENaC的阻滞,可以促进人精子活力的增加,差异有显著性意义(P＜0.01).结论:ENaC-α构成的离子通道在生精细胞中表达,终局限分布于成熟精子的鞭毛中段的质膜中.而特异阻断剂EIPA可以抑制上皮细胞钠离子通道,从而提高精子活力.
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一个Liddle综合征患者的SCNN1B基因新突变及其临床随访研究
目的：Liddle综合征是一种常染色体显性遗传的单基因高血压病，其致病的分子基础为编码上皮钠通道β和γ亚基的基因发生突变。本研究旨在分析1例年轻疑似Liddle综合征患者的上皮细胞钠通道编码基因SCNN1B及SCNN1G的基因突变及其与临床表型的关系。
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上皮细胞钠离子通道β亚单位基因SCNN1B多态性与原发性高血压的关系研究
目的：研究上皮细胞钠离子通道β亚单位基因SCNN1 B羧基端单核苷酸多态性与北京市汉族高血压家系原发性高血压的关系。方法在北京市汉族常住人群中纳入原发性高血压家系108个(433人),分成高血压患者组(229人)、高血压患者第一代和第二代亲属(血压正常)组(118人)和高血压患者配偶(血压正常)组(86人)。检测生化指标及心电图 Sv1+Rv5数值,并分析SCNN1B基因13号外显子及两翼部分单核苷酸多态性。结果在SCNN1B基因13号外显子的两翼部分符合小等位基因频率≥5%的位点只有两个即rs3743966(A/T)、rs34618783(A/G)。3组间比较,高血压组的 AA/rs3743966基因型频率明显高于其他两组(55.5%比44.9%和32.6%,χ2=13.768,P﹤0.01),TT基因型频率明显低于其他两组(9.6%比15.3%和38.3%,χ2=37.205,P ﹤0.01)。 rs34618783位点基因型频率在3组间比较,差异无统计学意义。 TT/rs3743966纯合子组的收缩压和舒张压水平比AA纯合子组平均低15.69 mmHg和9.14 mmHg,差异有统计学意义(均为P﹤0.01),其他生化指标在3组间比较差异均无统计学意义(均为P﹥0.05)。多因素Logistic回归分析显示,TT/rs3743966基因型进入方程(OR：0.239,95%CI：0.117~0.489,P﹤0.001)。结论 SCNN1B基因rs3743966位点TT基因型可能是北京市汉族高血压家系原发性高血压的保护性因素之一。
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对一个Liddle综合征家系临床和上皮细胞钠通道基因突变的研究
目的通过对1个Liddle综合征家系的临床表现及其上皮细胞钠通道β亚单位(hβENaC)基因的研究, 揭示本家系发病的遗传机制，为诊断（尤其产前诊断）和治疗提供有力的佐证。方法（1）对家系成员进行常规体检及血钾、血浆肾素活性、醛固酮水平测定；（2）用单链变构多态性PCR-DNA测序等分子生物学方法对hβENaC基因进行分析。结果在这个Liddle家系中发现了hβENaC基因（SCNN1B）的1个移码突变（1bp，INS，600G），8个成员携带此突变基因，他们均有严重的高血压、低醛固酮及低肾素活性。50个无关正常人中无突变基因。结论在这个Liddle 综合征家系中发现的hβENaC基因的移码突变很可能为此家系的致病基因。
关键词： Liddle 综合征 上皮细胞钠通道 遗传学 -
TORC2信号通路调节上皮细胞钠通道的研究进展
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,属于磷脂酰肌醇激酶相关激酶蛋白质家族成员.mTOR进化上高度保守,可整合营养、能量及生长因子等多种细胞外信号,在细胞生长、增殖、凋亡及自噬等过程中发挥极为重要的作用.在生物体内,mTOR有2种多蛋白复合物:mTORC1和mTORC2,目前mTORC1信号通路与肿瘤的关系研究较多,而对mTORC2的研究相对较少,近年来有研究发现mTORC2信号通路参与了上皮细胞钠通道的调节作用.
关键词： 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 上皮细胞钠通道 信号通路 -
通腑泻肺方对ALI/ARDS大鼠AQP1/a-ENaC表达的影响
[目的]探讨通腑泻肺方对ALI/ARDS大鼠肺水肿的可能作用机制.[方法]27只大鼠按体质量随机分为空白组、模型组、中药组,每组9只.模型组与中药组尾静脉注射内毒素8 mg/kg,空白组大鼠静脉注射生理盐水.中药组在造模完成后给予通腑泻肺中药灌胃,每次0.01 mL/g,每日1次,共7 d,空白组与模型组予等量生理盐水灌胃.通过病理切片观察各组大鼠肺组织损伤情况,免疫组化染色方法检测肺组织水通道蛋白1(AQP1)和上皮细胞钠通道(a-ENaC)表达.[结果]模型组大鼠肺组织中AQP1和a-ENaC表达水平显著下降(P<0.01);与模型组相比,中药组AQP1和a-ENaC表达显著升高(P<0.05).[结论]通腑泻肺方能增强ALI/ARDS大鼠AQP1和a-ENaC表达而促进其肺部水液代谢,从而发挥其改善肺水肿的作用.
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mTORC2信号通路调节上皮细胞钠通道的研究进展
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,属于磷脂酰肌醇激酶相关激酶蛋白质家族成员.mTOR进化上高度保守,可整合营养、能量及生长因子等多种细胞外信号,在细胞生长、增殖、凋亡及自噬等过程中发挥极为重要的作用.在生物体内,mTOR有2种多蛋白复合物:mTORC1和mTORC2,目前mTORC1信号通路与肿瘤的关系研究较多,而对mTORC2的研究相对较少,近年来有研究发现mTORC2信号通路参与了上皮细胞钠通道的调节作用.
关键词： 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 上皮细胞钠通道 信号通路 -
上皮细胞钠通道α亚基Thr663Ala多态性与中国人群短暂性脑缺血发作的关系
目的 了解上皮细胞钠通道α亚基(αENaC)Thr663Ala多态性与中国人群短暂性脑缺血发作(TIA)之间的关系.方法 利用多聚酶链反应和分子杂交技术对该位点在中国人群TIA患者(99人)中的分布进行了检测和分析,并与对照组人群(104人)进行比较.结果 αENaC Thr663Ala多态性在两组人群中的分布符合HardyWeinberg遗传平衡定律,ThrThr、ThrAla、AlaAla 3种基因型在TIA组分布频率分别为21.21%、57.58%和21.21%,对照组中分别为31.73%、42.31%和25.96%,两组人群663Ala等位基因频率分别为50.00%和47.12%,均无统计学显著差异.此外,该多态性在缺血性脑卒中、脑出血以及TIA患者中也无明显不同.结论 αENaC Thr663Ala多态性与中国人群TIA发病以及脑血管病类型无关.
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上皮细胞钠通道α亚基Thr663Ala多态性与中国人群脑出血发病无关
目的 了解上皮细胞钠通道α亚基(αENaC)Thr663Ala多态性与中国人群脑出血之间的关系.方法 利用多聚酶链反应和分子杂交技术对该位点在中国人群脑出血患者(202例)中的分布进行了检测和分析,并与对照组人群(190例)进行比较.结果 αENaC Thr663Ala多态性在两组人群中的分布符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律,ThrThr、ThrAla、AlaAla三种基因型在脑出血组分布频率分别为30.69%、44.55%和24.75%,对照组中分别为25.26%、43.68%和31.05%,两组人群663Ala等位基因频率分别为47.03%和52.89%,差异均无统计学意义.此外,中国人群663Ala等位基因频率与日本人相仿,显著高于美国白人和黑人.结论 αENaC Thr663Ala多态性不是中国人群脑出血的分子遗传学标记物,663Ala等位基因频率分布在亚洲人和美国人中存在种族差异.
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小鼠急性肺损伤后肺内CFTR和ENaC的表达变化
目的：探讨囊性纤维化跨膜调节因子（cystic fibrosis transmembrane conductance regulator，CFTR）氯离子通道和上皮细胞钠通道（epithelial sodium channel，ENaC）蛋白在内毒素诱发急性肺损伤小鼠肺内的表达变化。方法：将内毒素经小鼠气管注入肺内后诱发急性肺损伤，24 h、48 h、72 h后取肺组织，检测其CFTR和ENaC的mRNA浓度变化、肺泡液体清除率、湿干重比。结果：小鼠急性肺损伤后24 h、48 h、72 h，CFTR在肺内的表达均降低（P＜0．05）。小鼠急性肺损伤后24 h、48 h、72 h，α-ENaC在肺内表达均降低（P＜0．05）；β-ENaC、γ-ENaC在急性肺损伤后24 h、48 h表达降低（P＜0．05），而在急性肺损伤后72 h恢复正常。小鼠急性肺损伤后24 h、48 h、72 h，肺泡液体清除率和肺湿干重比出现类似的改变。结论：内毒素诱发的小鼠急性肺损伤组织中，CFTR和ENaC的表达均下降，肺泡液体清除率与其一致，肺湿干重的变化与其相反。
关键词： 急性肺损伤 囊性纤维化跨膜调节因子 上皮细胞钠通道 内毒素 肺泡液体清除率 -
基因诊断遗传性高血压病获成功
瑞金医院高血压研究所首次采用基因技术，对一个家系中的4位单基因显性遗传性高血压病(Liddle综合征)病人明确了诊断。 Liddle综合征是一种以高血压、低血钾、低血浆肾素活性和低醛固酮为特征的继发性高血压病。病人主要表现为早年发现血压升高，而常用的降压药效果不佳，需要用肾小管上皮钠通道阻滞剂治疗。同时由于血钾较低，病人双下肢麻痹，严重时影响走路，甚至瘫痪，为生活带来诸多不便，要明确该病的诊断，需做多种实验室检测和一些特殊的试验。1994年国外应用基因技术，对抽取到的病人静脉血液标本进行检测，发现了病因。由于基因技术尚未普及，故国际上明确诊断的病人只有数十例。 瑞金医院高血压研究所1987年首次在国内发现河南两名同胞兄弟所患的高血压病与Liddle综合征类似。近日研究所的研究人员赴河南，抽取病人直系三代亲属共10名成员的DNA样本，对其上皮钠通道基因进行检测，发现该家系中4名成员均存在基因突变，即在13号外显子的616号密码子上发生一个点突变，导致肾小管上皮细胞钠通道激活、水钠重吸收功能增强而发病。遂对这4名病人进行对症治疗，较好地控制了病人的血压。在对该家系中3名年轻的子女的检测中未发现这一基因突变现象，说明他们无遗传缺陷，排除了他们患该病的可能性。4名病人的遗传来自母系，4人的母亲有多人因高血压中风而去世。 据了解，这种位点上基因突变的Liddle合征病例，目前国外文献报道仅有3例。 (摘自《健康报》2000年9月29日第3版)
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硫化氢通过氧化还原抑制游离脂肪酸引起上皮细胞钠通道异常激活的机制研究
目的：探讨游离脂肪酸（ free fatty acid， FFA）激活上皮细胞钠通道（ epithelial sodium channel， ENaC）的分子机制，以及H2 S对抗FFA引起ENaC异常激活的作用和机制。方法：应用肾皮质集合管上皮细胞，采用膜片钳技术研究H2 S对抗FFA引起ENaC异常激活的保护作用和分子机制；应用激光共聚焦显微镜技术观察FFA能否调节细胞内钙水平和细胞内ROS水平。结果：FFA通过胰岛素受体磷酸化、NADPH、PI3K和IP3受体介导的钙释放调节ENaC活性；H2 S通过氧化还原反应抑制FFA引起的ENaC的异常激活。结论：FFA通过诱导胰岛素受体磷酸化，引起细胞内钙释放，进而激活NADPH升高细胞内活性氧水平，引起ENaC异常激活。气体信号分子H2 S通过氧化还原反应抑制FFA引起的ENaC异常激活。
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硫化氢通过氧化还原抑制棕榈酸引起上皮细胞钠通道异常激活的机制研究
目的：探讨棕榈酸激活上皮细胞钠通道（ epithelial sodium channel ， ENaC）的分子机制，以及H2 S对抗棕榈酸引起的ENaC异常激活的作用和机制。方法：应用肾皮质集合管上皮细胞，采用膜片钳技术研究H2 S对抗棕榈酸引起ENaC异常激活的保护作用和分子机制；应用激光共聚焦显微镜技术观察棕榈酸能否调节细胞内钙水平和细胞内ROS水平变化。结果：棕榈酸引起的细胞ENaC活性升高可以被NaHS抑制；棕榈酸引起的细胞内ROS水平升高可以被NaHS抑制，且应用NADPH抑制剂APO可以抑制棕榈酸引起的ENaC活性升高；棕榈酸可以引起细胞内钙的升高；应用钙离子螯合剂BAPTA／AM或IP3受体抑制剂APB可以抑制棕榈酸引起的ENaC活性升高；胰岛素受体抑制剂HNMPA和PI3K抑制剂LY204002也可以抑制棕榈酸引起的ENaC活性升高；DTT可以模拟NaHS对棕榈酸引起ENaC异常激活的保护作用。结论：棕榈酸通过诱导胰岛素受体磷酸化，引起细胞内钙释放，进而激活NADPH升高细胞内活性氧水平，引起ENaC异常激活。气体信号分子H2 S通过氧化还原反应抑制棕榈酸引起的ENaC异常激活。
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硫化氢抑制糖基化终末产物引起上皮细胞钠通道异常激活的机制研究
目的：探讨糖基化终末产物（ AGEs）激活上皮细胞钠通道（ ENaC）的作用，及H2 S对抗AGEs引起ENaC异常激活的机制研究。方法：应用膜片钳记录爪蟾肾皮质集合管上皮细胞ENaC电流，研究H2 S对抗AGEs引起ENaC激活的机制；应用共聚焦显微镜技术观察H2 S对AGEs引起胞内活性氧水平升高的调节作用；应用分子生物学实验检测AGEs处理后过氧化氢酶的表达水平变化。结果：AGEs通过抑制过氧化氢酶的表达引起胞内活性氧水平升高进而上调ENaC活性；H2 S通过削弱AGEs引起活性氧水平增高从而逆转AGEs引起ENaC的激活；PTEN／PI3 K通路参与了AGEs上调ENaC活性。结论：AGEs通过抑制过氧化氢酶的表达上调胞内活性氧水平，并通过PTEN／PI3K途径调节ENaC活性，该作用可被H2 S逆转，并且AGEs上调ENaC活性具有代谢记忆现象。
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一个中国人Liddle综合征家系的SCNN1G基因新突变及其临床特征
目的 分析2个Liddle综合征家系上皮细胞钠通道编码基因SCNN1B及SCNN1G的基因突变.方法 收集2个临床诊断为Liddle综合征的家系,抽取先证者及其家系成员外周血基因组DNA,PCR扩增上皮细胞钠通道β亚单位编码基因SCNN1B和γ亚单位编码基因SCNN1G第13外显子,产物直接DNA测序进行基因突变检测.结果 例1 SCNN1B基因第13外显子的扩增片段经双向测序显示第564密码子存在CGA-TGA(R-X)杂合无义突变,其家系成员均未发现这一基因突变;例2 SCNN1G基因第567密码子存在CAG-TAG(Q-X)杂合无义突变,2个家系成员携带此突变基因,这一突变位点尚未在国内外报道过,50名无关正常人中未发现此突变基因.结论 对临床诊断的Liddle综合征患者及其亲属,进行基因突变检测有助于确定诊断及早期筛查出家系中的其他患者.编码人类肾小管上皮细胞钠通道γ亚单位基因SCNN1G第13外显子第567密码子CAG-TAG(Q-X)杂合无义突变可能会导致Liddle综合征.
