氯化钆保护细菌脂多糖引发肝脏损伤及其可能机制研究

目的 探讨氯化钆(Gadolinium chloride,GdCl3)在细菌脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)引起肝脏损伤的影响及其机制.方法 将MT基因敲除小鼠(MT-/-)及与之对应的野生型小鼠(MT+/+)各分为4组:生理盐水对照组、LPS染毒组、GdCl3组和GdCl3预处理+LPS染毒组.动物腹腔注射LPS(10 mg/kg,腹腔注射)或生理盐水(NS,腹腔注射),此前24 h给予GdCl3(10 mg/kg,尾静肪注射)或NS预处理.注射LPS后24 h测定血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)活力以及一氧化氮(NO)含量,镉饱和法测定肝脏金属硫蛋白(MT)含量,进行肝组织病理学检查,判定不同处理对MT-/-小鼠及MT+/+小鼠肝脏影响的差异.结果 注射LPS后,MT-/-小鼠及MT+/+小鼠血ALT、AST活力,血NO含量均较对照组升高,两种小鼠肝组织均出现大量炎性细胞浸润、肝细胞浊肿、空泡变性、灶性液化坏死、星状细胞增生.组织病理学检查结果显示MT-/-小鼠肝组织损伤程度较MT+/+小鼠更为严重.氯化钆、LPS均可以诱导MT+/+小鼠肝脏MT生成.GdCl3预处理可以同时降低LPS对MT-/-小鼠及MT+/+小鼠血ALT,AST活力,血NO含量的影响,可以减轻LPS对两种小鼠肝组织病理学损伤.结论 GdCl3预处理可以有效减轻由LPS引起的肝脏损伤,MT通过其对Kuffer细胞的抑制作用保护LPS引起的肝脏损伤.

来氟米特对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化模型的影响/利用蛋白质组学技术研究Z24对大鼠给药肝脏蛋白质表达的改变/氯化钆保护细菌脂多糖引发肝脏损伤及其可能机制

Kupffer细胞抑制剂氯化钆的研究现状

氯化钆通过抑制Kupffer细胞,可缓解肝脏疾病的发生发展.这种作用表现在多个方面:氯化钆作用于Kupffer细胞,抑制吞噬和抗原提呈,进而抑制大鼠肝移植的急性排斥反应;缺血再灌注时,保护受伤的肝脏,促进肝细胞的再生;减轻对内毒素的敏感性及内毒素所致的感染作用;有效预防和减轻酒精性肝损伤等.该文对目前氯化钆抑制Kupffer细胞,进而减轻肝脏疾病的机制的研究现状综述如下.

氯化钆对急性坏死性胰腺炎肺源性炎症介质的影响

实验研究表明急性坏死性胰腺炎(acute necrotizing pancreatitis,ANP)肺泡巨噬细胞(alveolar macrophage,AM)可活化并引起肺损伤[1],如果能抑制其活化,可能减少其分泌炎症介质,阻止炎症的发生、发展,从而减轻肺损伤.钆是一种稀有金属,可抑制AM介导的免疫和炎症反应[2].本实验采用氯化钆(GdCl3)处理ANP大鼠模型,通过研究AM分泌炎症介质的变化,以明确氯化钆能否减轻ANP所致肺损伤.

氯化钆对人脐静脉内皮细胞体外血管形成能力的影响

钆离子的配合物作为核磁共振造影增强剂在临床诊断中得到广泛应用.晚期肾病患者多次大剂量使用钆造影剂后,可能发生肾源性系统纤维化,目前其确切机理还不清楚.我们考察了不同浓度的氯化钆对人脐静脉内皮细胞的迁移和成管能力的影响；在鸡胚尿囊膜模型中,10 μM氯化钆诱导生成更多的新生血管.这些实验结果表明氯化钆具有促进人脐静脉内皮细胞体外血管形成能力,这种作用涉及细胞内活性氧物种和钙离子水平的变化,以及PKCα/β2和MAPKs信号通路的激活.该研究为探索钆造影剂和肾源性系统纤维化之间的关系提供了新线索.

氯化钆对PKC的激活可促进成纤维细胞NIH3T3的存活及细胞周期的推进

本研究以氯化钆为代表性含稀土元素的化合物,对其在小鼠胚胎成纤维细胞NIH3T3中对蛋白激酶C家族蛋白的激活进行了研究.利用活细胞成像和共聚焦激光扫描技术可以观察到,在血清饥饿的条件下,50 μM的氯化钆可以通过增强细胞粘附和细胞骨架重组促进细胞存活.使用蛋白质印迹技术发现蛋白激酶C家族蛋白在氯化钆作用不同时间后可以发生磷酸化,表明蛋白激酶C被激活.此外,双吲哚马来酰亚胺(bisindolylmaleimide,一种PKCpan的抑制剂)可以有效降低PKCpan磷酸化的水平(βIISer660),同时也可以降低氯化钆引起的ERK的激活.以上结果表明,氯化钆激活的蛋白激酶C可以通过介导MAPK/ERK信号通路的激活,继而推动细胞周期和细胞存活.

氯化钆诱导大鼠腹腔巨噬细胞内质网应激和凋亡的研究

目的 探讨氯化钆对大鼠腹腔巨噬细胞内质网应激和凋亡的作用.方法 分离和培养大鼠腹腔巨噬细胞(PMΦ),分别经氯化钆(Gd)和衣霉素(Tunicamycin)处理后,采用细胞免疫组化S-P法检测ARMET的表达,免疫荧光双标染色检测ARMET和CHOP的表达,PI染色观察对细胞凋亡的影响.结果 氯化钆处理组细胞数目减少,胞体变小变圆;ARMET在氯化钆组(5×10-6 mol/L)的阳性细胞百分数为(42.1±6.6)%,在正常对照组的阳性率为(6.1±1.6)%,差异有统计学意义(P<0.05);而其在阳性对照Tunicamycin组的阳性率为(43.4±5.9)%,两者差异无统计学意义(P>0.05);免疫荧光双标染色提示氯化钆组ARMET和CHOP均高表达;PI染色可见氯化钆组细胞被深染、胞核断裂等凋亡特征.结论 氯化钆可诱导大鼠腹腔巨噬细胞内质网应激和凋亡,其作用机制可能与胞内钙超载引起的非折叠蛋白反应有关.

氯化钆对脓毒症大鼠肺组织IL-10、MIP-2表达的影响

目的 研究氯化钆(GdCl3)在脓毒症诱导大鼠ALI中对肺组织IL-10、巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2)表达的影响,探讨GdCl3对肺损伤的保护机制.方法 36只Wistar雄性大鼠随机平均分为3组:假手术组、脓毒症组和GdCl3治疗组.脓毒症组和GdCl3治疗组行盲肠结扎穿孔术构建脓毒症ALI模型.假手术组只翻动盲肠不结扎穿孔,GdCl3治疗组术后即刻经尾静脉注射2％ GdCl3溶液(10 mg/kg).术后6h处死动物取样,ELISA法测定血清中IL-10、MIP-2水平,Western blot法测定肺组织IL-10、MIP-2的表达水平,观察肺组织病理结构变化,用SPSS 19.0统计软件统计结果.结果 与假手术组相比,脓毒症组、GdCl3治疗组肺组织内MIP-2表达水平明显升高(P＜0.05);与脓毒症组相比,GdCl3治疗组肺组织内MIP-2表达水平降低(P＜0.05);与脓毒症组相比,假手术组肺内IL-10表达差异无统计学意义(P＞0.05),GdCl3治疗组IL-10表达升高(P＜0.05);肺组织病理结果提示脓毒症组和GdCl3治疗组肺内大量炎性细胞浸润、肺间质水肿、肺内出血,但GdCl3治疗组症状较脓毒症组明显减轻.结论 脓毒症ALI时,肺组织MIP-2表达明显升高,大量炎性细胞浸润.GdCl3通过调控肺泡巨噬细胞使其促炎细胞因子MIP-2表达减少和抗炎细胞因子IL-10表达增加,减少中性粒细胞浸润,起到肺保护作用.

氯化钆对阿霉素诱导大鼠肝脏亚铁血红素氧化酶-1表达的影响

目的研究枯否氏细胞抑制剂氯化钆(GC)对阿霉素(DOX)诱导亚铁血红素氧化酶-1(HO-1)表达的影响.方法7～8周龄Wistar雄性大鼠,分为3组,每组6只,分别为正常组(N):不做任何处理;对照组(DOX):尾静脉注入阿霉素(10 mg·kg-1);实验组(GC+DOX):在注射阿霉素前1、2天腹腔分别注射0.2%的氯化钆溶液(8mg·kg-1).注射阿霉素后24 h,3组大鼠主动脉采血检测ET-1和TNF-α含量,切取部分肝脏用蛋白电泳的方法检测HO-l蛋白表达.结果正常组肝脏组织HO-1表达量很小,对照组HO-1表达是正常组的34倍,实验组HO-1比对照组下降了42%.实验组和对照组血清ET-1和TNF-α显著高于正常组(P＜0.01),实验组血清ET-1和TNF-α比对照组略高(P＞0.05).结论枯否氏细胞功能抑制剂氯化钆可以抑制阿霉素诱导的HO-1表达,枯否氏细胞是肝细胞表达HO-1不可缺少的细胞成分.

氯化钆抑制肿瘤细胞迁移侵袭的作用研究

目的 探讨氯化钆对肺腺癌细胞株(A549)迁移侵袭能力的影响,以期能够为肿瘤治疗寻找新的线索.方法 用氯化钆联合转化生长因子 β(transforming growth factor-β,TGF-β)处理的A549细胞,Transwell小室实验检测A549迁移侵袭能力;实时定量PCR检测相关蛋白的mRNA的转录水平.结果 Transwell小室迁移实验结果显示GdCl3能够降低A549细胞的迁移能力(P<0.05);Transwell小室侵袭实验显示氯化钆处理后,A549细胞侵袭能力减弱(P<0.05);实时定量PCR结果显示N-钙粘蛋白,波形蛋白mRNA减少;E-钙粘蛋白mRNA增加(P值均<0.05).结论 氯化钆可起到抑制肿瘤细胞迁移侵袭的作用.通过对氯化钆药理作用的深入研究,可为肿瘤提供新的治疗途径.

小鼠脾脏对肝癌细胞作用的实验研究

目的研究脾脏对肝癌细胞的抑制作用.方法小鼠用二乙基亚硝胺(DENA)灌胃诱发肝癌,同时分组给予静脉注射氯化钆(GC)、切脾等不同处理,制作动物模型.试验第12周处死模型小鼠并取材,对标本进行病理学检查和腹腔内巨噬细胞的活性测定.结果 A组、 B组和C组腹腔内巨噬细胞活性检测、小鼠肝表面大癌结节平均直径均有显著差异(P<0.05).结论不仅肝脏本身的Kupffer细胞对肝细胞的癌变过程具有抑制作用,而且脾脏也起着不可忽视的影响,在氯化钆阻断枯否细胞(Kupffer细胞)的活性的前提下,脾脏对肝癌细胞有明显的抑制作用.

抑制Kupffer Cell对大鼠肝脏切除微循环障碍的影响

目的 探讨应用Kupffer cell封闭剂对肝脏微循环障碍的影响.方法 切除大鼠左肝叶建立肝脏切除模型60只健康SPF雄性级大鼠随机分为4组:假手术组(A),缺血再灌注组(B),缺血再灌注+肝叶切除+生理盐水组(C)和缺血再灌注+肝叶切除+三氯化钆组(D).术前1d和2d,向D组注射氯化钆(浓度为0.25％,10 ml/kg),C组注射同等浓度的生理盐水.各组分别于术后1天处死.检测血中丙胺酸氨基转移酶(ALT),天冬氨酸氨基转移酶(AST),内皮素-1(ET-1)及一氧化氮(NO)的水平；病理学检查各组术后肝组织的病理改变.提取肝组织中RNA,应用RT-PCR法检测ET-1,eNOs,iNOs及HO-1mRNA的表达.结果 A组肝细胞无明显异常,C组肝细胞炎症和坏死的程度明显高于B组和D组.B,C,D组大鼠血清中ALT,AST.ET-1的水平明显高于A组(P＜0.05),NO的水平明显低于A组(P＜0.05)；肝组织中织ET-1、eNOS、iNOS及HO-1 mRNA表达水平较A组显著升高(P＜0.05)；C组大鼠血清中ALT,AST.ET-1的水平明显高于B组和D组(* *P＜0.05,Δ*P＜0.05),NO的水平明显低于其他两组(* *P＜0.05,Δ*P＜0.05)且肝组织中织ET-1、eNOS、iNOS及HO-1 mRNA表达水平较其B组显著升高(* *P＜0.05),其中iNOS及HO-1 mRNA表达水平较D组显著升高(Δ*P＜0.05).结论 术前注射氯化钆能够显著改善肝叶切除术后微循环障碍,减轻肝脏损伤.

氯化钆对胃癌 MGC-803细胞增殖及凋亡的影响

目的：观察氯化钆（ Gdcl3）对胃癌细胞株MGC-803增殖及凋亡的影响。方法实验设对照组、10μmol· L－1 Gdcl3处理组及100μmol· L－1 Gdcl3处理组。不同浓度的Gdcl3对MGC-803处理24 h后，用MTT比色法观察Gdcl3对细胞活性的影响；用流式细胞术检测细胞凋亡率；用Caspase活性检测试剂盒来检测细胞Caspase3，8，9活性检测。结果与空白对照组相比，Gdcl3抑制MGC-803增殖，具有统计学意义差异（P＜0．05）；Gdcl3促进MGC-803凋亡（P＜0．05）；Gdcl3可增强MGC-803细胞Caspase-3，9的活性（P＜0．05），对Caspase-8影响不明显。结论 Gdcl3抑制MGC-803增殖，促进癌细胞凋亡，可能主要通过线粒体途径来促凋亡。

氯化钆对血吸虫肉芽肿期肝脏调节性T细胞的抑制作用

目的 探讨氯化钆封闭Kupffer细胞功能对日本血吸虫病肉芽肿期CD4~+CD25~+T细胞的影响.方法 6～8w龄雌性C57BL/6小鼠分为3组,即对照组、感染组与感染/氯化钆组,其中氯化钆为15 mg/kg,尾静脉注射,每w 2次;感染第8w流式细胞仪检测CD4~+CD25~+T细胞的数量;免疫组织化学染色检测Foxp3的分布;酶联免疫吸附试验检测血细胞因子IL-4、IL-5、IL-10、TGF-β1与 IFN-γ的表达水平.结果 感染小鼠CD4~+CD25~+T细胞数量为13.8%,感染/氯化钆组为9.3%(p<0.05),对照组为6.4%;IL-10在感染组为41.4 pg/mL,感染/氯化钆组22.6 pg/mL;此外,氯化钆还能下调Foxp3的分布以及减轻血吸虫肉芽肿周围的炎症反应.结论 氯化钆封闭Kupffer细胞的功能后可减少日本血吸虫感染肉芽肿期CD4~+CD25~+T细胞的产生以及减轻肉芽肿周围的炎症反应.

氯化钆在肝脏缺血再灌注损伤中的保护作用

目的:探讨在肝脏缺血再灌注损伤过程中,氯化钆对巨噬细胞的作用以及与细胞凋亡之间的相互关系.方法:将100只雄性Wistar大鼠(7～8周龄,180～ 220g)随机分为实验组(Gd组)和对照组(IR组),Gd组第1、2天经鼠尾静脉注射0.2％氯化钆溶液(10mg/kg),IR组给予等量生理盐水,第3天建立左半肝缺血再灌注模型,缺血均为60 min,按再灌注后0.5、1、6、12和24 h时相点采集标本,测定血清ALT、AST、TNF-a水平,测定肝细胞线粒体内MDA含量,TUNEL法测定肝细胞凋亡发生率,免疫组织化学法测定Caspase-3表达,电子显微镜观察细胞凋亡的相关形态学改变.结果:与IR组相比,Gd组再灌注0.5、1、6和12h的ALT水平,6和12h的AST水平均较低(P＜0.05)；Gd组各时相点TNF-α水平均低于IR组(P＜0.05)；6、12、24h MDA含量低于IR组(P＜0.05);Gd组Caspase-3染色0.5、1、6和12h的IOD值低于IR组(P＜0.05)；Gd组TUNEL染色0.5、1、6和12h的IOD值低于IR组(P＜0.05)；电子显微镜下Gd组细胞凋亡率少于IR组.结论:肝脏缺血再灌注过程中,氯化钆的保护作用可能是通过抑制巨噬细胞和肝细胞凋亡而实现的.

氯化钆对重症急性坏死性胰腺炎大鼠肺损伤的防护作用及机制

目的 通过观察FasL在肺泡巨噬细胞(AM)中的表达,探讨氯化钆(GdCl3)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠所致肺损伤的防护机制.方法 将48只成年SD大鼠随机分为三组各16只.对照组不予任何处理.模型组和治疗组逆行性胰胆管注射5%牛磺酸钠建立SAP大鼠模型,治疗组造模后即刻由阴茎背静脉注入2%GdCl3 15 mg/kg.6 h后处死大鼠,经支气管肺泡灌洗液(BALF)获取肺泡AM,检测BALF中TNFα、IL-1β水平及肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性,肺、胰腺组织行HE染色检查,透射电镜观察和流式细胞仪检测肺泡AM凋亡情况,同时行免疫组化法检测肺泡AM的FasL表达.结果 与对照组、模型组比较,治疗组透射电镜可见肺泡AM典型凋亡形态学特征,肺组织中MPO活性、BALF中TNFα和IL-1β水平均较模型组降低,肺泡AM凋亡率明显增高,FasL阳性表达率亦明显增高(P均<0.05).结论 GdCl3对SAP所致肺损伤具有防护作用,其机制可能通过激活FasL通路诱导SAP大鼠肺泡AM发生凋亡发挥作用.

氯化钆药理作用研究进展

钆为一种稀有金属,现被广泛用于实验研究.近年来通过对动物实验研究发现:氯化钆具有抑制肿瘤侵袭转移、减轻缺血再灌注损伤、抑制免疫炎症反应等保护作用.本文总结国内外氯化钆对治疗疾病及其药理作用的研究进展,以期能够对该领域有一个较为全面的认识,为治疗某些疾病寻找新的线索和突破口.

NF-kB活化在氯化钆诱导ANP肺泡巨噬细胞凋亡中的作用

目的 观察氯化钆(GdCl3)诱导急性坏死性胰腺炎(ANP)肺泡巨噬细胞(AM)凋亡时核因子-kB(NF-kB)表达情况,探讨NF-kB在其中的作用及机制.方法 36只SD大鼠随机分为正常对照组,ANP组,GdCl3治疗组.逆行性胰胆管注射5%牛磺胆酸钠建立ANP大鼠模型,正常对照组大鼠以同法注入生理盐水,GdCl3,治疗组制模后即刻自阴茎背静脉注射GdCl3.各组大鼠于成模后6 h经支气管肺泡灌洗获取AM,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α和IL-1β含量及肺组织髓过氧化物酶(MPO)水平.用琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪检测AM的凋亡情况;Western-blot检测AM中NF-kB活性.同时对肺组织行病理学检查.结果 ANP组TNF-α和IL-1β含量高于对照组(P<0.05),而治疗组显著低于ANP组(P<0.05).仅治疗组DNA电泳见典型的细胞凋亡的梯状条带.对照组,ANP组,治疗组AM凋亡率分别为(10.81±0.86)%,(6.47±1.52)%,(17.41±3.36)%,3组间差异均有统计学意义(P<0.05);Western-blot检测3组AM中NF-kB表达的相对灰度值分别为(0.80±0.05),(1.96±0.15),(1.42±0.10),3组间差异亦有统计学意义(p<0.05).AM的凋亡率与NF-kB活性呈负相关(r=-0.554,P<0.01).结论 GdCl3可能通过抑制NF-kB的活化诱导大鼠ANP肺泡巨噬细胞凋亡,从而减轻肺损伤.

氯化钆诱导急性坏死性胰腺炎肺泡巨噬细胞凋亡机制的研究

目的 探讨氯化钆(GdCl3)诱导急性坏死性胰腺炎(SAP)肺泡巨噬细胞(AM)凋亡的可能机制.方法 48只成年SD大鼠随机分为正常对照组、SAP组、GdCl3治疗组,每组16只.逆行性胰胆管注射5%牛磺胆酸钠建立AP大鼠模型.经支气管肺泡灌洗获取AM.检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)含量.肺脏/胰腺组织HE染色检查,透射电镜观察和流式细胞仪Annexin V/FITC及碘化丙啶(PI)双染色法检测AM凋亡情况,并行AM爬片的FasL免疫组化检查.结果 GdCl3治疗组电镜下可见典型凋亡形态学特征,BALF中TNF-α和IL-1β含量[(7.84±0.75)pg/mL,(8.57±5.64)pg/mL]较SAP组明显减低,差异均有显著性(P＜0.05),而AM凋亡率明显增高(22.48±1.44)%,与正常对照组、SAP组相比差异也有显著性(P＜0.05);GdCl3治疗组免疫组化FasL阳性表达较正常组和AP组明显增多(41.67±11.69)%,差异均有显著性(P＜0.05).AM凋亡率与AM中FasL阳性表达率呈明显的线性正相关(r=0.835,P＜0.001).结论 GdCl3可能通过激活FasL诱导SAP大鼠AM发生凋亡进而减轻肺损伤.

氯化钆对急性坏死性胰腺炎肺泡巨噬细胞分泌炎症介质的影响

目的 探讨氯化钆(Gdcl3)对急性坏死性胰腺炎(ANP)肺泡巨噬细胞(AM)分泌炎症介质的影响.方法 90只成年SD大鼠随机分为正常对照组(C组)、ANP组、Gdcl3处理正常对照组(C+Gdcl3组)、ANP Gdcl3预处理组、ANP Gdcl3治疗组.每组18只.各组大鼠均经支气管肺泡灌洗获取肺泡巨噬细胞,行支气管肺泡灌洗液(BALF)中蛋白含量、肺组织髓过氧化物酶(MPO)水平、AM分泌肿瘤坏死因子α(TNF-a)和一氧化氮(NO)水平分析;行血气分析,检测肺湿/干重比值,并行肺组织病理学检查.结果 C+Gdcl3组各指标与正常对照组相比差异无显著性(P＞0.05).ANP Gdcl3预处理组和ANP Gdcl3治疗组除动脉血氧分压外各项指标显著高于正常对照组,差异有显著性(P＜0.05),但与ANP组相比有降低,差异有显著性(P＜0.05).结论 氯化钆可抑制ANP大鼠AM分泌炎症介质,并减轻ANP所致的肺损伤.