一个简捷的甾体5α-还原酶抑制剂体外筛选模型

通过模拟睾丸酮经甾体5α-还原酶催化,从NADPH(辅酶)中获得H+还原成双氢睾丸酮(DHT)这一反应,参照文献资料以酶动力学原理,分别测定反应底物NADPH和产物[3H]-DHT含量变化的初始速率以代表酶活性,建立了"分光光度计法"和"同位素法"体外筛药模型,通过这两种模型对比,以非那甾胺为阳性对照药物,对爱普列特进行了体外模型验证研究.两种筛选模型结果一致,确定非那甾胺和爱普列特的抑制常数:用测定OD340 nm值的"分光光度计法"求得爱普列特抑制常数Ki=24.9±1.3 nmol/L,半数抑制浓度IC50=39.0 nmol/L;非那甾胺Ki=15.3±2.3 nmol/L,IC50=58.6 nmol/L.用测定[3H]-DHT dpm值的"同位素法"求得爱普列特Ki=67.4±13.2 nmol/L,IC50=49.6 nmol/L;非那甾胺Ki=25.0±1.9 nmol/L,IC50=5.1 nmol/L.该结果与国外文献中报道的爱普列特Ki=5～23 nmol/L,非那甾胺Ki=23.6 nmol/L相接近.

一种定时快速取血方法简介

在动物实验中使用及时、正确和适宜的取血方法是能否预期取得实验数据,关系实验成败的重要环节,常规的取血方法有多种[1,2],但是长期毒性试验以及血药浓度测定中,需要一种能反复定时、定量取出血样的方法.经过反复试验,作者认为腹主动脉取血方法切实可行,简捷稳定,现报道如下.

抗纤灵冲剂对肾脏急性缺血再灌注大鼠血流动力学的影响

为探讨抗纤灵冲剂对大鼠肾脏急性缺血再灌注(I-R)后血流动力学的干预作用,观察各组SD雄性大鼠在I-R血BUN、Scr,ET、TXB2和6-Keto-PGF1α,血NO、NOS及组织NO的变化情况.结果:抗纤灵冲剂明显降低I-R大鼠的血BUN、Scr(P<0.05),可调节TXA2和PGI2的合成比例,稳定血NO、NOS及组织NO.结论:抗纤灵冲剂对改善I-R后血流动力学的紊乱,保护肾功能有效.

乙酰唑胺与潘生丁对家兔腹主动脉扩张作用的比较

为比较乙酰唑胺和潘生丁对家兔主动脉的扩张作用,并研究其扩张血管的机制,将6只家兔以戊巴比妥钠静脉麻醉后,截取腹主动脉环约5 mm,放入40 ml以氧气饱和的Kreb's液中,中心穿线,一根将血管环固定,另一根线连接张力换能器,张力信号被传输到电脑中.给予略大于1.96×10-2牛顿的张力,稳定10 min,再将张力调至1.96×10-2牛顿,观察张力稳定后记录血管张力变化.以重酒石酸去甲肾上腺素1 mg收缩血管环,观察血管收缩后张力是否稳定.张力稳定后,分别加入乙酰唑胺 15 mg、潘生丁0.5 mg,观察是否有扩血管作用.在观察到乙酰唑胺或潘生丁有扩血管作用的情况下,再于加入重酒石酸去甲肾上腺素1 mg后15 min时加入碘化钠0.045 g,记录张力变化;并分别于加入重酒石酸去甲肾上腺素之前加入L-NAME、格列苯脲、吲哚美辛及消炎痛,观察以上几种药物对重酒石酸去甲肾上腺素的收缩血管作用及对乙酰唑胺和潘生丁的扩血管作用有无影响.结果:给予重酒石酸去甲肾上腺素1 mg后,家兔主动脉环的张力上升(9.90±2.45)×10-3牛顿(P<0.05).血管张力上升后在30 min内保持稳定.乙酰唑胺能够明显对家兔主动脉环产生扩张作用,碘化钠对家兔主动脉环不能产生明显扩张作用,潘生丁对家兔腹主动脉环张力没有直接影响.克霉唑对乙酰唑胺所产生的血管扩张作用能够明显抑制,而硝基左旋精氨酸甲酯、优降糖、吲哚美辛对于乙酰唑胺的扩血管作用无影响.结论:乙酰唑胺能够明显扩张家兔主动脉,潘生丁对家兔腹主动脉没有直接的扩张作用.

成年牛晶状体上皮细胞培养、冻存与复苏

应用组织块静置培养法建立成年水牛晶状体上皮细胞的离体培养方法,通过细胞计数法、MTT法和透射电镜法观察,对晶状体上皮细胞的离体培养和冻存复苏的可行性进行研究,结果显示离体培养和冻存复苏后的晶状体上皮细胞生长良好且二者无显著差异(P>0.05),并保持了原有上皮细胞的特性及细胞结构.提示组织块静置培养法是适宜的晶状体上皮细胞培养方法,液氮冷冻可有效地保存晶状体上皮细胞.

绿脓杆菌外毒素A单链抗体基因的制备及其克隆的研究

为制备中和活性较高的单抗细胞2F6的单链抗体(ScFv)基因,以绿脓杆菌外毒素A(PEA)类毒素为免疫原,用单克隆抗体技术制备可分泌具有中和活力单克隆抗体的杂交瘤细胞,再应用RT-PCR从其中一株杂交瘤细胞中扩增出抗体VH和VL基因,用Linker(G4S)3将VH和VL基因连接成ScFv基因,并将其克隆至pGEM-T载体中.经核酸序列分析证实,VH、VL和Linker基因连接正确,基因全长729bp.经计算机分析VH、VL基因符合功能性重排的鼠抗体可变区基因的特征.VH和VL基因分别属于鼠免疫球蛋白重链Ⅱ(A)和轻链κⅥ家簇.

大鼠胃肠吻合单层间断缝合与连续缝合实验

为探讨胃肠吻合术中,单层间断缝合与连续缝合两种方法对伤口愈合的影响,对20只SD大鼠用这两种方法行胃肠吻合,并于术后2、4、7、10、14 d作大体标本肉眼观察、拉力测试、水压试验以及病理学切片等方面的比较.结果表明,连续缝合方法炎症反应相对较轻,抗内压和抗拉力较强,早期愈合方面较间断缝合优越.

大鼠栓线法MCAO模型中栓线插入深度的研究

为提高造模成功率提供参考,对大鼠大脑中动脉(MCA)距颈内动脉(ICA)起始部的距离进行了测定,并观察插线深度与MCA起始部距离及造模成功率的关系. 栓线法制作大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)模型,插线深度组,进行动脉灌注显色铸型,测量MCA起始部距ICA起始部的距离;脑梗塞体积组,计算机图像分析脑梗塞区面积,计算脑梗塞体积.结果发现,MCA起始部到ICA起始部的距离在1.55～1.65 cm之间,栓线插入深度小于等于1.60 cm的造模成功率为28.57%, 插入深度大于1.60 cm的造模成功率为83.33%.二者比较有显著差异(P<0.05).提示栓线法制作大鼠MCAO模型的插线深度起码应达到1.65 cm.

肝缺血模型大鼠热休克蛋白70与γδ-TCR阳性细胞群的变化

通过建立大鼠肝缺血再灌注模型,应用抗热休克蛋白70(HSP70)抗体,采用Western blotting方法观察缺血-灌注前后HSP70变化;同时用抗γδ-TCR阳性细胞单克隆抗体,应用流式分析γδ-TCR阳性细胞群的变化.结果发现:①在缺血-灌注实验组、假手术模型组、阳性对照组和阴性对照四组中均观察到HSP70蛋白的存在;②肝脏缺血5～15min再灌注2h后,Western blotting检测有HSP70蛋白存在;肝缺血45min再灌注2h后,HSP70蛋白明显增多,而γδ-TCR阳性性细胞在肝缺血45min再灌注2h后明显高于其它各组别.结果提示,肝缺血-灌注可诱导HSP70蛋白合成,并随缺血时间的延长而增多.

凝血因子IX基因剔除小鼠的生长繁育和主要血液学指标观测

为研究凝血因子IX基因剔除小鼠的生长繁育和血液学指标等生物学特性,对种群中38窝母鼠所生仔鼠进行生长发育指标的测定,测其5、10、15、21、30、40、50、60日龄的体重、体长和尾长;测定交配种鼠的繁殖性能及发病时间和临床症状;部分小鼠的血液生理、生化值.结果表明,5、21日龄平均体重分别为♂3.70 g,♀3.44 g和♂11.12 g,♀10.35 g;初配至生产平均30.24 d,产仔数5.39只,平均离乳率81.09%.小鼠发病时间30～90日龄不等,有出血症状;凝血因子IX基因剔除小鼠的血液成分指标与正常小鼠基本一致.

低钙饮食对大鼠胫骨组织形态的影响

为观察低钙饮食对雌雄大鼠所致骨骼的变化,将36只SD大鼠(雌雄各半),按性别各随机分成正常年龄对照组(control)、极低钙组(VLCD)(Ca 0.01%)和低钙组LCD(Ca 0.3%).三月后取左侧胫骨近心端,行骨组织形态计量学分析.结果为①与对照组相比,VLCD和LCD雄性大鼠骨量减少,骨小粱面积百分率(%Tb.Ar)分别减少57%(P<0.01%)和40%(P<0.05%),骨小粱数量(Tb.N)、骨小粱分离度(Tb.Sp)均显著增加,骨结构变差.而雌性大鼠仅VLCD组大鼠骨量减少,%Tb.Ar减少36%(P<0.01%),骨结构同样变差,其程度较雄性大鼠有所减轻;②在VLCD组,雌雄大鼠其骨形成指标荧光周长百分数(L.Pm%)、矿化沉积率(MAR)、骨形成率(BFR/BV)均有增加的趋势,而骨吸收参数骨小粱周长破骨细胞数量(N.OC/Tb.Pm)在雌雄大鼠分别增加56%和66%(P<0.05%),呈现骨高转化的改变.LCD组骨形成变化在雌雄大鼠均不明显,骨吸收增加,但没有显著意义.结论:低钙饮食使大鼠骨量减少并伴随着骨转换的增加,其影响的程度随缺钙的程度增加而增加.雄性大鼠对低钙饮食更为敏感.

电脑在热原测试中的应用

作者对WINDOWS环境下的测温程序,进行了应用实验,结果表明:采用电脑控制热原检测,可减少人为干扰因素,提高测试结果的精确性和重现性,并比较不同探头在测试中使用情况.

自发性高血压大鼠学习记忆功能的观察

选用雄性自发性高血压大鼠(SHR)10只,在6、14、22周龄时测量血压并进行记忆功能的比较.结果表明:SHR随年龄的增长、血压的升高,其学习记忆障碍越明显;6周龄SHR学习记忆能力明显优于14周龄SHR,14周龄SHR明显优于22周龄.

细菌感染与小鼠巨噬细胞凋亡

细菌可通过其毒力物质如内毒素、外毒素、侵袭素等诱导小鼠巨噬细胞凋亡,是细菌逃避宿主第一道免疫防御的途径;凋亡的巨噬细胞发生形态、生化和细胞膜生物物理性状的改变,并可通过分泌炎症细胞因子诱发炎症反应,是导致感染严格局限性的重要因素.研究细菌与巨噬细胞凋亡的关系对感染性疾病的治疗和预防具有重要意义.本文就细菌感染诱导小鼠巨噬细胞凋亡的机制及检测方法作一综述.

肝硬化动物模型研究进展

肝硬化动物模型是研究人类肝硬化门静脉高压和肝癌的基础,其制作方法大体分为单因素造模和多因素造模两类.前者可制作特定病因的模型,后者可提高成功率,缩短造模时间及降低死亡率.目前问题是:缺乏与人类病因完全一致的肝炎性肝硬化模型,大型动物成功的报道少,致肝硬化所选用的药物鲜有对实验者无损害者,在提高造模成功率、降低死亡率方面尚有待改进.

中国法学界应当关注的话题:动物福利法