武汉大学学报（医学版）杂志
Medical Journal of Wuhan University 무한대학학보（의학판）
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负压封闭引流技术治疗兔坐骨神经损伤
目的:初步探讨负压封闭引流技术(VSD)治疗兔坐骨神经损伤的效果及机制.方法:随机将24只大白兔分2组.手术切除大白兔坐骨神经1 cm并原位缝合.实验组用负压封闭引流技术治疗,对照组仅缝合伤口.术后比较两组大体观及神经电传导速度、小腿三头肌湿重恢复率、甲苯胺蓝染色、脑源性神经营养因子免疫组化及电镜观察.结果:术后1-2周两组均出现手术侧足部红肿、溃疡;术后4周及8周时,手术侧坐骨神经电传导速度检测显示实验组较对照组快,P＜0.05;手术侧小腿三头肌与健侧小腿三头肌比值,实验组较对照组高,P＜0.05;实验组免疫组化染色强度较对照组高,P＜0.05;甲苯胺蓝染色及电镜观察示实验组较对照组明显生长.结论:VSD对周围神经损伤的修复有促进作用.
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双气囊电子小肠镜在青少年小肠疾病诊断中的应用
目的:研究双气囊电子小肠镜在青少年小肠疾病诊断中应用及安全性.方法:回顾性分析2007年9月-2015年3月就诊我院并行双气囊电子小肠镜检查的青少年患者共计59例,按年龄划分为少年组和青年组.结果:青少年小肠疾病多以黑便、便血、腹痛、呕吐等症状而就诊,症状均不具有特异性(P＞0.05).青少年小肠疾病以小肠克罗恩病、小肠畸形等疾病多见.双气囊电子小肠镜对青少年小肠疾病有较高确诊率,少年组、青年组、总确诊率分别为94.44％、82.93％、86.44％(均P＜0.05),其对青少年各类小肠疾病诊断准确率无统计学差异(P＞0.05).检查中所有患者均未发生明显不良反应.结论:双气囊电子小肠镜是诊断青少年小肠疾病有效的检查手段,其诊断率高,安全性好.
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一体式软硬质输尿管镜钬激光碎石取石术治疗输尿管上段结石的临床观察
目的:探讨一体式软硬质输尿管镜钬激光碎石取石术治疗输尿管上段结石的有效性和安全性.方法:单侧输尿管上段结石患者37例,结石大径(1.43士0.37)cm,均采用一体式软硬质输尿管镜钬激光碎石取石术治疗.结果:随访4周,均无输尿管黏膜撕脱、尿源性脓毒血症、输尿管穿孑等重大并发症,术后发热2例,输尿管狭窄1例.残石2例,残石大径分别为4.9 mm和6.3 mm,一期清石率为94.6％(35/37).结论:一体式软硬质输尿管镜钬激光碎石取石术治疗输尿管上段结石安全、有效,可作为推荐治疗方案之一.
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臭氧治疗对混合痔术后患者局部分泌物中TNF-α、IFN-γ和IL-10的影响
目的:观察医用臭氧治疗对混合痔术后患者局部分泌物中TNF-α、IFN-γ和IL-10水平变化的影响,并探讨其对伤口愈合的可能作用机制.方法:混合痔手术病人108例,随机分为治疗组(n=54)和对照组(n=54).治疗组在术后每天换药前,先进行臭氧水冲洗和臭氧雾熏蒸,再行换药处理,对照组术后清洗后直接换药,观察创面愈合时间,同时在治疗前和治疗后第3、7、10天分别取创面分泌物,采用酶联免疫吸附方法检测局部分泌物中TNF-α、IFN-γ和IL-10含量.结果:治疗组创面愈合时间较对照组明显缩短(P＜0.05).两组治疗后局部分泌物中TNF-α、IFN-γ水平均明显低于治疗前,两组治疗后IL-10水平均明显高于治疗前(P＜0.05);治疗组局部分泌物中TNF-α、IFN-γ水平均明显低于对照组,IL-10水平均明显高于对照组(P＜0.05).结论:TNF-α、IFN-γ和IL-10参与混合痔术后创面愈合过程,医用臭氧治疗可以下调局部组织中TNF-α、IFN-γ表达,同时上调IL-10表达,促进混合痔术后伤口愈合.
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前列腺特异性抗原异常而首次穿刺阴性患者204例的临床分析
目的:探讨前列腺特异性抗原(PSA)异常且首次经直肠前列腺穿刺活检阴性患者的临床特点与转归,评价系统13点穿刺法的临床价值.方法:回顾性分析2010年12月至2013年12月收治的PSA异常且首次经直肠前列腺13点穿刺活检阴性患者204例的临床资料.观察其PSA变化并随访诊疗过程.结果:随访26-42个月,终确诊前列腺癌(Pca)20例.根据初次活检病理结果分组比较,前列腺上皮内瘤(PIN)组与非PIN组、PIN伴慢性前列腺炎(CP)组与PIN组的Pca确诊率有统计学差异(P＜0.05).以终是否确诊为Pca分组比较,三种影像技术(TRUS,CT及MRI)的诊断异常率、直肠指检(DRE)异常率及总PSA(TPSA)、PSA密度(PSAD)有统计学差异(P＜0.05),95％的Pca患者集中于游离/总PSA(F/T)＜0.25范围内.系统13点穿刺法首次检出率为31％,重复穿刺阳性率为18.6％,首次穿刺假阴性率约为7％.结论:对于PSA异常而首次穿刺诊断为阴性的患者,需谨慎排除引起PSA升高的非癌因素.应重视PIN及CP作为独立危险因素对Pca发病的影响,同时需结合影像学表现及PSAD、F/T值判断是否行重复穿刺.系统1 3点穿刺法假阳性率较低,检出率理想,适于初次活检.
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二维斑点追踪显像技术评价不同右冠状动脉狭窄程度对右室功能的影响
目的:应用二维斑点追踪成像技术(2D-STI)评价不同右冠状动脉狭窄程度的冠心病患者的右心室收缩功能,评价其临床价值.方法:对81例疑诊冠心病患者在冠脉造影术前24 h行超声心动图检查.根据冠脉造影结果将其分为3组:重度狭窄组(右冠状动脉狭窄≥75％且左冠脉狭窄50％-75％)、中度狭窄组(左右冠状动脉狭窄均为50％-75％)和对照组(所有冠脉无狭窄).测量常规超声参数,计算右室面积变化率(RVFAC)、右室长轴缩短率(RVLFS);测量三尖瓣环位移(TAPSE)并用TDI计算右室Tei指数(RV-Tei);用二维应变软件获取右室各节段的应变及应变率.结果:3组常规超声参数无显著性差异,而RV-Tei从对照组至重度狭窄组显著增大(P＜0.01),右室游离壁心尖段及中间段应变则显著减小(P＜0.01).右室游离壁心尖段应变与Tei指数相关性好.ROC曲线表明以0.35和-21.285为截断值用RV-Tei及右室游离壁中间段应变诊断右冠状动脉重度狭窄的敏感性分别为76.9％、92.3％,特异性分别为92.7％、81.8％.结论:右室收缩功能受损程度随右冠脉狭窄程度加重而加重,二维斑点追踪技术可准确评估右心室收缩功能,以右室游离壁中间段应变较敏感,具有一定的临床价值.
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定量DCE-MRI在肺部良恶性病变诊断中的初步应用
目的:探讨及评价定量动态对比增强磁共振成像(qDCE-MRI)的药物代谢动力学参数在肺部良恶性病变诊断中的价值.方法:回顾性分析40例经病理学证实肺部占位性病变,行1.5T DCE-MRI检查,行血管参照模型和参考区域模型对比分析恶性、良性病变非参检验的定量参数.结果:在血管参照模型:良性病变组与恶性病变组间Ktrans、Kep、Ve、Vp参数间无统计学差异,P＞0.05.参考区域模型良性病变组与恶性病变组间RRKtrans、KepRR、KepTOI参数差异具有统计学意义(P＜0.05);恶性病变组RRKtrans、KepRR、KepTOI高于良性病变组;TTP值在良性病变组中略高于恶性病变组,无显著性差异(P=0.94).肺腺癌与肺鳞癌定量参数比较,鳞癌RRKtrans、KepRR、KepTOI较腺癌高,但无显著性差异.以病理结果为金标准绘制RRKtrans、KepRR、KepTOI三者ROC得到曲线下面积分别为0.946、0.827、0.855;三者大约登指数为0.86、0.83、0.67;RRKtrans、kepRR、kepTOI判断肺部良恶性病变敏感度为96％、90％,73％,特异度为80％,76％、90％.定量参数与免疫组化相关性分析得出RRKtrans、KepRR、KepTOI值与MVD呈正相关性(P＜0.01,r=0.872,0.838,0.714);与MVD表达亦呈正相关性(P＜0.01,r=0.821,0.752,0.711).结论:参考区域模型对肺部占位性病变良恶性作出鉴别诊断具有潜在的临床意义,DCE-MRI定量参数可以预测标本MVD、VEGF水平.
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康柏西普联合激光治疗视网膜分支静脉阻塞合并的黄斑囊性水肿的临床疗效
目的:观察玻璃体腔注射康柏西普联合视网膜激光光凝治疗视网膜分支静脉阻塞合并的黄斑水肿的疗效.方法:将我院临床确诊的视网膜分支静脉阻塞合并黄斑水肿患者28例28眼纳入研究,随机分为康柏西普+激光组(CL组)15例15眼和激光组(L组)13例13眼.CL组玻璃体腔注射康柏西普,2周后行视网膜激光光凝,L组行单纯视网膜激光光凝.结果:两组间比较,1d,1周、1月及3月CL组佳矫正视力(BCVA)提高及稳定眼数明显多于L组,差异有统计学意义(x2—9.536,11.424,14.623,10.325,P＜0.01).CL组治疗前及治疗后1d、1周、1月及3月平均黄斑中央视网膜厚度(CMT)相比均有显著性差异(t=5.662,5.481,5.816,5.231,P＜0.05),L组治疗后1周及1个月平均CMT较治疗前明显降低(t=2.311,3.245 P＜0.05),治疗后1d及3个月平均CMT与治疗前相比,差异无统计学意义.两组间治疗后1d、1周、1月及3月平均CMT比较,差异有统计学意义(F=9.251,4.009,4.857,8.66).结论:玻璃体腔注射康柏西普联合视网膜激光光凝疗效优于单纯激光光凝.
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2178例胃息肉的临床病理特征
目的:分析胃息肉临床、胃镜和病理特点,为胃息肉临床诊断和治疗提供指导.方法:对2012年01月至2014年12月武汉大学中南医院消化内镜中心检出的胃息肉患者的临床、胃镜、病理资料进行回顾性分析.结果:共检出胃息肉患者2 178例,检出率7.5％,男性833例(38.2％),女性1 345例(61.8％),年龄在14-95岁之间,高发年龄段为40-70岁(76.3％,1 662/2 178),单发息肉1 372例(63.0％),多发息肉806例(37.0％);息肉主要位于胃体和胃底(71.5％),直径多≤0.5 cm,共为1 761例(79.9％,1 741/2 178);病理分型中炎性增生性息肉1 231例(56.5％)、胃底腺息肉903例(41.5％);山田Ⅰ、Ⅱ型共1 973例(90.6％).结论:胃息肉的检出率逐年升高,病理谱正发生改变,炎性增生性息肉比例在下降,胃底腺息肉比例在升高;贲门息肉易漏诊,癌变率较高,因此应加强对贲门部病变的观察和随访.
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肱骨近端锁定接骨板治疗肱骨近端骨折的临床疗效
目的:对肱骨近端锁定接骨板用于肱骨近端骨折的手术治疗的手术技巧、生物力学优势及术后功能恢复进行回顾性研究.方法:回顾性分析我科采用肱骨近端锁定接骨板治疗的65例肱骨近端骨折,按Neer分型为Ⅱ型32例、Ⅲ型26例、Ⅳ型7例;末次随访时,采集患者肩关节Neer评分,并通过肩关节正位X线测定肱骨头高度丢失值,综合术后达到骨性愈合时间,来综合评定肩关节的功能恢复.结果:术后随访6-20月(平均11.8月),平均骨折骨性愈合时间(14.0±2.7)周;末次随访肩关节Neer评分优良率为93.9％,肩关节X线示肱骨头高度丢失值为(1.4±1.0) mm,内固定物在位,无松动断裂.结论:采用肱骨近端锁定接骨板治疗肱骨近端骨折,并通过囊外复位保护周围肩袖组织、内下支撑螺钉重建内侧支撑柱、缝合修复损伤肩袖及早期合理康复锻炼,可获得肩关节功能恢复的预期疗效.
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右美托咪定联合持续气道正压通气对老年开胸手术患者肺组织氧化应激及炎症反应影响
目的:探讨右美托咪定联合持续气道正压通气对老年开胸手术患者肺组织氧化应激及炎症反应影响.方法:126例全麻下开胸手术的老年患者随机分为右美托咪定组、正压通气组和联合组,3组患者均行单肺通气的同时给予不同处理.记录不同时点3组患者氧化应激及炎症反应指标变化.结果:与右美托咪定组或正压通气组相比,联合组T23时刻血清丙二醛、皮质醇、C-反应蛋白、IL-6和TNF-α浓度均降低(P＜0.05);术后1d,联合组患者肺部并发症发生率低于右美托咪定组和正压通气组(P＜0.05).结论:右美托咪定联合持续气道正压通气可减轻老年开胸手术单肺通气时肺组织氧化应激和炎症反应,减少术后并发症发生.
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髓过氧化物酶介导2型糖尿病患者低密度脂蛋白氨甲酰化修饰
目的:观测2型糖尿病(T2DM)患者血浆氨甲酰化低密度脂蛋白(cLDL)水平以及髓过氧化物酶(MPO)的参与作用.方法:随机入选健康体检者165名(NC),新诊断的T2DM患者190例,选取其中80例T2DM患者给予噻唑烷二酮类(吡格列酮+二甲双胍)或磺脲类(格列美脲+二甲双胍)药物治疗药物治疗6个月,采用ELISA检测各组受试者血浆cLDL及MPO水平,用于观测MPO水平变化对LDL氨甲酰化的影响.结果:T2DM组血浆cLDL(P＜0.05)及MPO(P＜0.01)均高于NC组,且T2DM组cLDL与MPO显著相关(r=0.45,P＜0.05),MPO为cLDL独立影响因素(P＜0.01).吡格列酮可显著降低患者血浆MPO(P＜0.05)及cLDL(P＜0.01),且cLDL的降低(11.5％)与血浆MPO的下降(13.4％)呈正相关(r=0.43,P＜0.01),而格列美脲对血浆cLDL及MPO均无明显作用.结论:MPO介导无肾功能不全T2DM患者LDL非尿素依赖性的氨甲酰化修饰.
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单、双侧脑灌注技术在主动脉外科手术中脑保护效果的比较
目的:比较单、双侧顺行脑灌注技术在Stanford A型主动脉夹层手术中的效果和安全性.方法:120例急性复杂型Stanford A型主动脉夹层,其中51例采用单侧脑灌注技术、69例采用双侧脑灌注技术,统计病人死亡率及并发症率.结果:单侧脑灌注组与双侧脑灌注组总的院内死亡率分别为5.88％、4.35％,差异无统计学意义;中枢神经系统总并发症率分别为37.25％、17.39％,差异有统计学意义.结论:双侧脑灌注技术用于急性StanfordA型主动脉夹层优于单侧脑灌注,安全、简单.
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地塞米松联合罗哌卡因局部浸润用于小儿扁桃体切除术后镇痛的效果
目的:观察地塞米松联合罗哌卡因局部浸润用于小儿扁桃体等离子切除术后镇痛的效果.方法:择期全麻下行扁桃体切除术的患儿90例,采取随机数字法分为3组,于全麻气管插管后扁桃体周围局部注射罗哌卡因(A组,n=30),或地塞米松和罗哌卡因混合液(B组,n=30),对照组采用生理盐水(C组,n=30).记录术后30min,1h,2h,4h,8h,12h,24 h时东安大略儿童医院改良疼痛评分(mCHEOPS),评分高于5时静脉给予芬太尼1 μg/kg.记录术后各组需补救镇痛药的患儿例数,观察不良反应,包括恶心呕吐、呼吸抑制、创面出血.结果:A组、B组在术后各观察时点mCHEOPS疼痛评分均低于对照组(P＜0.05).A组与B组比较,疼痛评分在术后30min、1h、2h时无显著性差异(P＞0.05),但在4-24 h各观察时点,B组较A组疼痛评分低(P＜0.05).A组、B组需补救镇痛药的患儿明显少于对照组,与A组比较,B组需要补救镇痛药的患儿显著减少(P＜0.05).A组、B组较对照组恶心呕吐的发生率低(P＜0.05),两组之间无显著性差异(P＞0.05).3组均未发现呼吸抑制及创面出血.结论:地塞米松联合罗哌卡因扁桃体周围局部浸润用于小儿扁桃体等离子切除可有效减轻术后24 h疼痛,且不增加不良反应.
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武汉市2013年城乡居民脑血管疾病死亡及减寿分析
目的:了解武汉市城乡居民脑血管疾病死亡分布及寿命损失情况,为制定相应防控策略提供依据.方法:对武汉市2013年脑血管疾病死亡登记资料进行分析,通过计算粗死亡率、标化死亡率、潜在减寿年数(PYLL)、减寿率(PYLLR)、标化减寿率(SPYLLR)、平均减寿年数(AYLL)等指标评价武汉市脑血管疾病死亡及寿命损失情况.结果:武汉市居民脑血管疾病总体死亡率为171.90/10万,因脑血管疾病死亡的PYLL,PYLLR,SPYLLR和AYLL分别为34 473人年,5.13‰,1.64‰和11.73人年.减寿率农村(3.12‰)高于城市(2.39‰),男性(3.65‰)高于女性(1.65‰).减寿率顺位前三位依次为:出血性脑卒中,脑血管后遗症和缺血性脑卒中.结论:武汉市居民脑血管疾病死亡率高,主要危及60岁及以上老年人和男性居民,是武汉市城乡居民的重要疾病负担.
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支气管哮喘患者血清IgG1表达及临床意义
目的:观察IgG1在不同严重程度支气管哮喘患者外周血清中的表达水平,并探讨其与B细胞分化水平及肺功能之间的相关性.方法:观察健康志愿者、哮喘患者及其治疗后外周血清中IgG1水平变化;比较不同严重程度哮喘患者血清中IgG1水平;统计学分析IgG1与B细胞分化及肺功能指标(FEV1/FVC、FEV1/Pre)之间的相关性.结果:哮喘患血清中IgG1水平显著高于正常对照组(P＜0.01),治疗后哮喘患者IgG1水平显著下降(P＜0.05);轻度、中度及重度哮喘患者IgG1水平有显著差异;IgG1水平与外周血淋巴细胞中B细胞分化水平存在正相关,与肺功能指标FEV1/FVC、FEV1/Pre均存在负相关.结论:IgG1在哮喘中分泌增加,治疗后下降,可能参与了哮喘B细胞的细胞免疫功能,并可能反映患者气流受限程度及疾病严重程度.
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正常新生儿脑磁敏感加权成像相位位移值的分布规律评估
目的:基于3.0T磁共振磁敏感加权成像(SWI)分析正常新生儿大脑相位位移解剖学规律及其与周龄间相关性,评价SWI在新生儿脑发育评估中的应用价值.方法:根据纳入标准收集80例3.0T MRI脑部SWI扫描正常新生儿,测量双侧深部灰质区、中央皮质区、额叶皮质区及顶叶皮质区相位位移值(PS);计算深部灰质区与大脑皮质区相位位移值平均值的比得到相位位移比率.SPSS 19.0版软件方差分析组间PS值差异;Spearsman相关性分析正常新生儿相位位移比率(PSR)与MRI检查时周龄相关性.结果:①正常新生儿脑深部灰质区PS均值为0.052±0.010;额叶大脑皮质区PS均值为0.059±0.010、中央大脑皮质区PS均值为0.045±0.009、顶叶大脑皮质区PS均值为0.039±0.009;额叶、中央区及顶叶大脑皮质相位位移值均值为0.048±0.009;深部灰质区PS高于大脑皮质平均PS(P＜0.01);在大脑皮质中额叶区PS显著高于中央区和枕叶区(P＜0.01).②正常新生儿深部灰质区与大脑皮质区的PSR范围在0.139-2.746.PSR与MRI检查时周龄成负相关(r=-0.35,P=0.04).结论:正常新生儿大脑PS存在解剖学差异,深部灰质区PS高于皮质区,皮质区PS从高到低为额叶皮质区、中央区和顶叶区;且深部灰质区和大脑皮质区相位位移比率随着妊娠并出生后周龄增长而不同程度降低;SWI的PS测量方法可无创性定量评估新生儿脑发育.
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新型种植手术器械在非翻瓣上颌窦内提升术的应用
目的:观察和评估几类实用新型种植手术器械的临床疗效,旨在提高上颌窦内提升术的安全性和精准性.方法:对20例患者行上颌窦内提升术,共植入种植体25枚,术中应用牙龈刻度探针、有刻度标识的环切刀和先锋钻,测量种植区黏骨膜组织厚度,以利于非翻瓣盲视条件下更准确地确定上颌窦底位置.结果:全部病例无1例发生上颌窦底穿通,上颌窦提升厚度为2-4 mm,术后创口无需缝合和拆线,无肿胀疼痛和创口感染.结论:几种改良式种植手术工具发挥出良好的微创效果,既能减少上颌窦底穿通的风险、提高了手术安全性,又能有效减轻术后反应,值得临床推广应用.
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地塞米松对内毒素诱导的肾小管上皮-间质转化的抑制作用
目的:探讨地塞米松(dex)抑制内毒素诱导的大鼠正常肾小管上皮细胞(NRK-52E)上皮-间质转化的作用和机制.方法:按照不同的处理方式分为:对照组(Control),内毒素组(LPS 5 mg/L),地塞米松小剂量组(LPS 5mg/L+dex 0.5 mg/L),地塞米松中剂量组(LPS 5 mg/L+dex 5 mg/L)和地塞米松大剂量组(LPS 5 mg/L+dex50 mg/L).处理24 h后,取各组培养基200μl,1 500 g、15 min离心后去沉淀,分析IL-1和TNF-α的分泌量.通过细胞免疫荧光检测上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维黏连蛋白(Fibronectin).Western blotting检测核转录因子(NF-κB-p65),磷酸化Smad3(p-Smad3),核因子转录抑制蛋白α(IκB-α)的表达.结果:ELISA结果显示,内毒素组IL-1,TNF-α分泌较对照组明显增多,加入地塞米松后分泌逐渐减少,大剂量效果尤为显著.细胞免疫荧光结果显示,内毒素组较对照组E-cadherin的表达减少,α-SMA和Fibronectin表达增多,加入地塞米松后能够阻止这种改变,并呈剂量依赖.Western blotting结果显示地塞米松能上调IκB-a表达,并减少NF-κB-p65,p-Smad3的表达.结论:地塞米松可能通过NF-κB/Smad信号通路抑制内毒素诱导的肾小管上皮-间质转化.
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Ⅰ型NKT细胞在哮喘小鼠气道炎症形成中的作用
目的:观察Ⅰ型NKT细胞在哮喘小鼠气道炎症形成中作用.方法:24只BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组和过继转移组,每组8只;随机选取8只CD1d-/-BALB/c小鼠为CD1d-/-组.对照组和哮喘组、CD1d /组分别采用PBS和卵清白蛋白(OVA)致敏和激发,过继转移组采用OVA致敏,在第1次激发前24 h给予Ⅰ型NKT细胞尾静脉注射.分别采用HE和PAS染色检测肺组织学和气道杯状细胞;姬姆萨染色检测支气管肺泡灌洗液(BALF)各细胞分类计数;ELISA法检测血清OVA特异性IgE和IgG1及BALF中IL-4、IL-5和IL-13水平;流式细胞仪检测肺Ⅰ型NKT细胞、IL-4+和IFN-γ+Ⅰ型NKT细胞的数量.结果:哮喘组小鼠肺Ⅰ型NKT细胞、IL-4+和IFN-γ+Ⅰ型NKT细胞的数量明显高于对照组(均P＜0.05);过继转移组小鼠肺组织炎性细胞和气道基底膜杯状细胞增多,过继转移组小鼠BALF中嗜酸细胞数量、血清OVA特异性IgE和IgG1及BALF中IL4、IL-5和IL-13水平明显高于哮喘组(均P＜0.05);CD1d+组小鼠肺组织炎性细胞和气道基底膜杯状细胞增多,CD1d-/-组小鼠BALF中嗜酸细胞数量、血清OVA特异性IgE和IgG1及BALF中IL4、IL 5和IL-13水平明显低于哮喘组,但明显高于对照组(均P＜0.05).结论:Ⅰ型NKT细胞可以增强哮喘小鼠气道炎症,但并不是哮喘小鼠气道炎症形成的必需因素.
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丁苯酞对癫痫大鼠认知功能的影响
目的:观察丁苯酞对癫痫持续状态模型大鼠学习记忆功能,及皮质、海马NR1和NR2B表达的影响,探讨丁苯酞影响癫痫大鼠认知功能的可能机制.方法:40只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、致痫组、丁苯酞低剂量组、丁苯酞高剂量组,每组各10只;造模后第12天起,用药组大鼠腹腔注射丁苯酞,假手术组注射等量的生理盐水,采用Morris水迷宫对大鼠进行行为学检测;采用免疫组织化学染色法测定皮质NR2B,海马NR1和NR2B蛋白的表达.结果:水迷宫实验显示,致痫组找到平台的时间明显长于对照组(P＜0.01);而与致痫组大鼠相比,丁苯酞低剂量组和高剂量组找到平台的时间明显减少(P＜0.05;P＜0.01);与致痫组相比,丁苯酞低剂量组和高剂量干预组大鼠皮质NR2B,海马NR1和NR2B的积分光密度值均明显升高(P＜0.05,P＜0.01).结论:①丁苯酞可以改善癫痫模型大鼠学习和空间记忆能力.②丁苯酞可以促进癫痫大鼠皮质NR2B,海马NR1和NR2B蛋白的表达,从而改善癫痫大鼠认知功能障碍.
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P2Y6受体在慢性癫痫发作大鼠海马组织中的表达及对Ca2+的影响
目的:建立慢性癫痫发作SD大鼠模型并检测海马组织P2Y6受体表达改变,研究P2Y6受体-Ca2+信号通路改变.方法:采用氯化锂和匹罗卡品腹腔注射建立SD大鼠慢性癫痫发作模型(EPI组)并检测其脑电图,以腹腔注射生理盐水SD大鼠为对照(CON组).采用免疫组织化学、RT-PCR和Western blot检测EPI组和CON组SD大鼠海马组织P2Y6受体mRNA和蛋白质表达并比较其差异.采用Fura-2/AM检测EPI组和CON组SD大鼠新鲜海马组织细胞内Ca2+浓度并对比其差异.结果:CON组正常SD大鼠脑电图波形主要以α波为主,并伴有低幅度的β波及少量的δ波,几乎未捕捉到棘波发放;EPI组SD大鼠的脑电图出现较为规律的棘波发放,其频率多集中于28 Hz,波幅不高于200μV.EPI组慢性癫痫发作SD大鼠海马组织P2Y6受体表达、mRNA、蛋白质和细胞内Ca2+显著高于CON组正常SD大鼠(均P＜0.05).结论:P2Y6受体在慢性癫痫发作大鼠海马组织表达显著升高,激活下游信号传导通路导致细胞内Ca2+水平升高,可能在慢性癫痫发作的发病机制中具有重要作用.
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电针刺激足三里穴对失血性休克犬的保护作用
目的:观察电针“足三里”穴对失血性休克犬血流动力学、TNF-α及乳酸值的影响,探讨其对失血性休克犬的潜在保护作用及其可能机制.方法:30只健康杂种犬随机分为假休克组、休克组、足三里组、非经非穴组、迷切后电针组5组,每组6只.采用股动脉快速放血法复制失血性休克模型,于制模成功即刻(0 min),以10-15 V、30Hz强度持续电针刺激双侧“足三里”穴或非经非穴30 min.刺激开始前经右颈外静脉置入5F Swan-Ganz漂浮导管连续监测MAP、CO、PAWP和CVP,0 min、120 min和180 min时分别取股动脉血检测TNF-α,在休克前、0 min和180 min时分别取股动脉血检测乳酸值.结果:制模后休克组、非经非穴组和迷切后电针组MAP、CO、PAWP和CVP持续较低,血浆TNF-α含量和乳酸值逐渐上升(P＜0.05);与休克组、非经非穴组和迷切后电针组比较,足三里组制模成功120 min及180 min时MAP、CO、PAWP和CVP均显著提高(P＜0.01),180 min时血浆TNF-α含量和乳酸值显著下降(P＜0.01).结论:电针“足三里”穴对失血性休克犬具有潜在的保护作用,其机制可能与激活胆碱能抗炎通路有关.
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cAMP直接激活的交换蛋白在哮喘小鼠气道重塑中的作用
目的:观察抑制环磷酸腺苷(cAMP)直接激活的交换蛋白(Epac)对慢性哮喘小鼠模型气道重塑的影响.方法:18只雌性BALB/c小鼠随机分为正常对照组(PBS组)、哮喘组(OVA组)、Epac抑制剂组(ESI-09组),每组6只.3组小鼠均给予卵清蛋白(OVA)致敏,PBS组给予PBS激发,OVA组和ESI-09组给予OVA激发,其中ESI-09组于每次激发前30 min给予腹腔注射ESI-09(溶于DMSO)处理,PBS组和OVA组对应给予等浓度DMSO处理.末次激发24 h后,取小鼠肺组织固定、切片行PAS、Masson三色染色及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫组织化学检测,以便分别对气道杯状细胞增生、胶原沉积及平滑肌细胞增生肥大等情况进行评估,结果以杯状细胞(PAS+)、胶原(Masson+)及平滑肌细胞(α-SMA+)着色面积/支气管基底膜周长(μm2/μm)表示.结果:OVA组和ESI-09组杯状细胞的增生均显著高于PBS组[3.05±0.12、11.45±1.28比0.00±0.00(PBS组未见PAS+区域),均P＜0.01],且ESI-09组显著高于OVA组(P＜0.05);Masson染色显示,胶原的沉积OVA组和ESI-09组均显著高于PBS组(3.40±0.35、5.28±0.58比1.10±0.11,均P＜0.01),且ESI-09组显著高于OVA组(P＜0.01);α-SMA免疫组化可见OVA组α-SMA的表达显著高于PBS组(3.90±0.23比2.48±0.39,P＜0.05),且ESI-09组(5.55±0.59)又显著高于OVA组(P＜o.05).结论:抑制Epac明显加重了慢性哮喘小鼠模型气道重塑,因此cAMP-Epac信号通路可能对慢性哮喘小鼠气道重塑起保护作用.
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电针刺激足三里穴对脓毒症大鼠心脏损害的保护作用
目的:探讨电针刺激足三里对脓毒症大鼠心脏功能的影响以及可能的机制.方法:40只SD成年大鼠随机分为手术对照组(SHAM),脓毒症模型组(CLP),脓毒症+电针足三里组(CLP+EA),脓毒症+电针非经非穴组(CLP+SEA),共4组(n=10).采用盲肠结扎穿孔术(CLP)法制备大鼠脓毒症模型.CLP+ EA组电针刺双侧足三里穴;CLP+ SEA组采用相同频率和强度刺激非经非穴;24 h后,摘除心脏并固定于Langendorff灌流装置,置入左心导管,测定各组大鼠的左室舒张末压(LVEDP)、左心室收缩末期压力(LVSP),左室压大上升速率(dp/dtmax)、心脏输出量(CO)和心率(HR).后取心脏组织用比色法测定各组大鼠心肌组织中髓过氧化物酶(MPO)活性、心肌组织中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量,同时采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠心肌组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素6(IL6)的含量.结果:①模型组各组大鼠术后24 h均出现明显感染中毒症状,血培养结果和腹腔分泌物培养结果均为阳性.②CLP组和CLP+SEA组大鼠LVEDP,dp/dt max、CO和HR,均较SHAM组明显降低(P＜0.01),CLP+ EA组较之CLP组和CLP+ SEA组可见明显改善(P＜0.01).③与SHAM组相比,各组MDA、MPO的含量显著增高,以CLP组和CLP+ SEA升高更为显著(P＜0.01),CLP++ EA组SOD含量更高(P＜0.01).各组大鼠心肌组织中的TNF-α和IL-6的浓度在CLP组、CLP+ SEA组和CLP+ EA组较SHAM组明显升高(P＜0.05),其中CLP组和CLP+ SEA组升高更为显著(P＜0.05).结论:电针刺足三里可减轻脓毒症大鼠心肌受损程度,改善血流动力学指标,起到心脏保护作用,其机制可能与抑制炎性因子TNF-d和IL-6释放,减轻过氧化损伤有关.
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缺血后处理对小鼠肠缺血再灌注时肺脏PI3K及Akt表达的影响
目的:评价缺血后处理对小鼠肠缺血再灌注时肺脏磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(Akt)表达的影响.方法:健康雄性C57BL/6J小鼠30只随机分为3组:假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)、缺血后处理+缺血再灌注组(IPO组).采用无创动脉夹夹闭肠系膜上动脉根部45 min恢复灌注2h的方法制备小鼠肠缺血再灌注损伤模型,IPO组于缺血45 min时给予3个循环的灌注30 s、缺血30 s的处理后恢复灌注.灌注2h采集血样后处死小鼠,留取肺组织,观察肺组织病理学改变并行Smith病理学评分、检测肺组织湿干重比;测定血清MDA含量和SOD活性;检测肺组织PI3K、Akt、p-Akt蛋白的表达情况.结果:与S组比较,IR组MDA含量显著增高,SOD活性显著降低,组织Smith病理学评分和湿干重比显著增高,PI3K及p-Akt蛋白表达上调(P＜o.05);与IR组相比,IPO组MDA含量显著下降,SOD活性显著增高,PI3K及p-Akt蛋白表达进一步升高,组织Smith病理学评分和湿干重比降低(P＜0.05).结论:缺血后处理减轻小鼠肠缺血再灌注引起的肺损伤,其机制可能与激活PI3K/Akt信号通路有关.
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孕期尼古丁暴露所致成年雄性子代大鼠肝脏CYP同工酶及抗氧化酶变化
目的:探讨孕期尼古丁暴露(PNE)所致雄性子代大鼠肝脏细胞色素P450(CYP)同工酶及抗氧化酶表达和功能变化.方法:建立孕中、晚期尼古丁[2 mg/(kg·d)]暴露大鼠模型,检测出生后3月和7月龄雄性大鼠肝脏CYP同工酶和抗氧化酶的表达和活性变化.结果:PNE的3月龄雄性大鼠肝脏CYP1A2、CYP2C11和CYP3A1的mRNA表达显著增加,其他亚型(CYP2A2、CYP2B1、CYP2D2和CYP2E1)为增加趋势,而CYP2E1活性显著降低,其他亚型(CYP2C6、CYP2D2/3和CYP3A1)有降低趋势;7月龄雄性大鼠肝脏CYP2A2和CYP2E1的mRNA表达增加,其他亚型(CYP1A2、CYP2C11、CYP2D2和CYP3A1)为增加趋势,而酶活性无明显变化.3月和7月龄雄性大鼠肝脏抗氧化酶谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性无明显改变.结论:PNE可导致雄性3月龄子代大鼠肝脏CYP同工酶的mRNA表达增加,但酶活性降低,7月龄雄性大鼠肝脏CYP同工酶功能趋于正常.提示PNE可改变雄性子代大鼠药物代谢功能但不影响抗氧化酶功能.
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孤儿核受体NR2E1与新诊断2型糖尿病患者亚临床炎症状态的相关性
目的:探讨孤儿核受体NR2E1与新诊断2型糖尿病的关系.方法:研究对象分为糖尿病组(29名新诊断2型糖尿病患者)和对照组(48名健康志愿者).测定研究对象身高、体重,抽取空腹静脉血测定血浆游离脂肪酸(FFAs)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-c)、空腹血浆胰岛素(FIN)、空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbAlc)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)等临床指标,采用稳态模型评估胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),分离外周血单个核细胞(PBMCs)实时荧光定量RT-PCR检测NR2E1 mRNA水平,Western blotting检测NR2E1蛋白水平,ELISA检测肿瘤坏死因子α(TNF α)、白介素6(IL-6)表达水平;健康志愿者外周血PBMCs分别给予0、16.7mmol/L葡萄糖、250 μmol,/l棕榈酸刺激后培养24 h,Western blotting检测NR2E1蛋白水平,ELISA检测上清中TNF-α、IL-6表达水平.分析糖尿病患者NR2E1表达水平和其他变量的相关性.结果:糖尿病组HDL-c较对照组明显降低(P＜0.0l),FIN、FBG、HbAlc、H()MA-IR、TG、FFAs、hs-CRP、TNF-α、IL-6表达较对照组明显升高(均P＜0.01);糖尿病组NR2E1表达较对照组明显增加(P＜0.01),且糖尿病组NR2E1 mRNA与HbAlc(r=0.772,P＜0.01),HOMA-IR(r=0.811,P＜0.01)以及FFAs(r=0.752,P＜0.01),hs-CRP(r=0.492,P＜0.05)、TNF-α(r=0.625,P＜0.01),IL-6(r=0.630,P＜0.01)呈明显正相关.体外培养PBMCs经16.7 mmol/L葡萄糖、250 μmol/L棕榈酸刺激后NR2E1、TNF-α、1L-6表达较空白对照组明显升高(P＜0.01).结论:在新诊断2型糖尿病中,NR2E1的升高可能与糖脂毒性及2型糖尿病患者体内炎症状态有关.
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N-乙酰半胱氨酸对异烟肼和利福平联合应用所致小鼠肝损伤保护作用
目的:探讨N-乙酰半胱氨酸对异烟肼和利福平联用所致小鼠肝损伤的保护作用及其可能机制.方法:32只昆明鼠随机分为4组(每组8只)后给予如下治疗:腹腔注射异烟肼和利福平(肝损伤组)、腹腔注射N-乙酰半胱氨酸(NAC)30 min后再腹腔注射异烟肼和利福平(NAC保护组)、腹腔注射NAC(NAC对照组)和腹腔注射生理盐水(对照组).治疗14 d后处死小鼠,取眼球血,测量血清谷氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性;取小鼠肝组织并测量肝指数(肝指数=肝重/体重),部分肝组织常规石蜡包埋切片,光镜观察肝组织形态结构特征;部分肝组织均浆,检测其中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性.结果:肝损伤组小鼠肝细胞呈不同程度的水变性和脂肪变性及局灶性坏死溶解,NAC保护组小鼠肝细胞呈轻度水变性和脂肪变性,未见肝细胞坏死.肝损伤组及NAC保护组小鼠肝指数(64.38±0.63及60.54土0.57)、血清ALT(82.81±4.75及68.70±5.81) U/L及AST活性(173.56±6.30及119.92±4.58)U/L显著高于对照组[57.48土0.53,(33.58±5.68) U/L、(85.84±5.20) U/L](P＜0.01);NAC保护组小鼠肝指数、血清ALT及AST活性明显低于肝损伤组(P＜0.01);与对照组(0.83±0.12、125.56±5.36)比较,肝损伤组小鼠MDA含量[(3.22±0.17) nmol/mgprot]显著升高,SOD活性[(88.44±5.52) U/mgprot]显著降低(P＜0.01);与肝损伤组比较,NAC保护组MDA含量[(1.78±0.27) nmol/mgprot]明显降低,SOD活性[(106.85±3.66) U/mgprot]明显升高(P＜0.o1).结论:异烟肼与利福平联合应用能引起小鼠较严重的肝损伤,N-乙酰半胱氨酸能够减轻这种损伤作用,其保护机制可能与增加机体谷胱甘肽(GSH)含量,从而减轻脂质过氧化反应有关.
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抑制酪氨酸激酶Src对血管紧张素Ⅱ诱导足细胞损伤的保护作用
目的:通过调控足细胞Src激酶的表达,观察足细胞表型的改变;并探讨Src激酶在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的足细胞损伤中的作用.方法:体外培养条件永生化小鼠足细胞(MPCs),并分组如下:A:正常对照组;B:Src激酶干扰RNA (siRNA)组;C:PP2(Src激酶抑制剂)组;D:AngⅡ组;E:AngⅡ+Src激酶siRNA组;F:AngⅡ+ PP2组.采用免疫印迹法检测Src激酶及其磷酸化水平;Annexin V-FITC/PI双染及Hoechst染色法检测细胞凋亡;荧光显微镜观察FITC-鬼笔环肽染色的细胞骨架;划痕实验进行细胞运动性分析.结果:①免疫印迹法示:应用Src激酶siRNA或PP2干预MPCs后,Src激酶表达较A组下降(P＜0.05);AngⅡ处理后,MPCs内Src激酶生成与A组相比明显增多(P＜0.05);Src激酶siRNA或PP2干预MPCs可减少AngⅡ上调的Src激酶表达(P＜0.05).②AngⅡ诱导MPCs内Src激酶及其磷酸化形式表达的升高,在一定范围内呈时间及浓度依赖性.③Annexin V-FITC/PI双染法及Hoechst染色法两种方法显示:A组、B组与C组MPCs凋亡无明显差异(P＞0.05);AngⅡ干预后,MPCs凋亡较A组增加(P＜0.05);Src激酶siRNA或PP2可减轻AngⅡ诱导的MPCs凋亡(P＜0.05).④荧光显微镜观察FITC-鬼笔环肽染色的细胞骨架:A组、B组与C组MPCs的F-actin呈微丝样结构,聚集成束,沿细胞长轴分布,形成应力纤维;D组F-actin发生重组,微丝样结构消失,排列紊乱,F-actin沿胞体外周分布,形成F-actin环;E组及F组较D组骨架重组有所减轻.⑤B组及C组与A组相比,MPCs运动性降低(P＜0.05);D组MPCs运动性较A组增加(P＜0.05);E组及F组较D组MPCs运动性降低(P＜0.05).结论:AngⅡ刺激MPCs胞内Src激酶和p-Src (Tyr 416)激酶表达增加,并在一定范围内呈时间及浓度依赖性.AngⅡ诱导MPCs凋亡增加、骨架改变、运动性增强;该过程与AngⅡ引起Src激酶和p-Src (Tyr 416)激酶生成增加有关.降低细胞内Src激酶浓度,可减轻AngⅡ诱导的MPCs损伤.降低对照组MPCs胞内Src激酶浓度,MPCs运动性降低,但未观察到细胞凋亡、细胞骨架改变.
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孕激素受体阴性子宫内膜样腺癌CD146的表达及临床意义
目的:检测孕激素受体(PR)阴性的子宫内膜样腺癌组织中CD146的表达及其临床意义.方法:用免疫组化技术检测110例子宫内膜样腺癌、48例子宫内膜不典型增生、40例子宫内膜息肉及30例子宫内膜增生期改变标本的CD146以及子宫内膜样腺癌组PR表达情况,使用SPSS 17.0对实验数据及临床资料进行统计分析.结果:子宫内膜样腺癌组中CD146表达明显高于子宫内膜增生性改变组、子宫内膜息肉组;CD146及PR表达与宫内膜样腺癌组织学分级、肿瘤浸润深度呈正相关;子宫内膜样腺癌中CD146表达与PR表达无显著相关.结论:CD146的表达与子宫内膜样腺癌浸润、转移密切相关;但CD146表达异常与PR缺失无明显关联.
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脂肪间充质干细胞培养上清对脑胶质瘤细胞凋亡、侵袭的影响
目的:了解脂肪间充质干细胞(ASC)的培养上清的抗胶质瘤特性.方法:使用ASC培养上清培养胶质瘤细胞U251、U87,采用CCK-8检测ASC的培养上清抑制胶质瘤细胞U251、U87的增殖能力.利用流式细胞仪检测Annexin-V的表达分析U251、U87在ASC上清诱导培养后的凋亡程度.划痕试验、Matrigel侵袭试验检测ASC的培养上清降低U251、U87侵袭的能力.结果:脂肪间充质干细胞能抑制胶质瘤U251、U87细胞的增殖,An-nxin-V和PI的凋亡检测表明ASC-CM能诱导U251、U87细胞凋亡.划痕实验和Metrigel实验显示U251、U87细胞的迁移性降低和侵袭能力减弱.结论:脂肪间充质干细胞培养上清均能有效诱导胶质瘤U251、U87细胞的凋亡,并且均能降低胶质瘤细胞迁移及侵袭能力.我们的发现提示ASC培养上清有良好的抗肿瘤的特性,并可能用于未来的胶质瘤的治疗.
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硼替佐米抑制神经胶质瘤细胞增殖及促进其凋亡的机制
目的:研究硼替佐米对神经胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响,并对其机制进行探讨,为临床应用硼替佐米治疗神经胶质瘤提供理论依据.方法:MTT法检测硼替佐米作用于神经胶质瘤后细胞增殖情况;DAPI染色和流式细胞技术检测硼替佐米作用于神经胶质瘤后细胞凋亡情况;Western blot技术检测RAF/MEK/ERK通路中相关蛋白及凋亡相关蛋白的表达水平.结果:硼替佐米作用于神经胶质瘤细胞后,可以明显抑制胶质瘤细胞的增殖并促进其凋亡(P＜0.05);在硼替佐米的作用下,胶质瘤细胞RAF/MEK/ERK通路中MEK和ERK磷酸化水平明显降低,并且凋亡抑制因子Bcl-xL和Mcl-1的表达也明显降低(P＜0.05).结论:硼替佐米对神经胶质瘤细胞可以产生抑制生长和促进凋亡的作用,提示硼替佐米作为神经胶质瘤临床化学治疗药物具有可行性.
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甲状腺癌分子诊断技术的研究进展
近年来,甲状腺癌发病率呈上升趋势,尤其在女性中,是常见的内分泌恶性肿瘤之一.大量关于甲状腺癌的分子生物学变异被发现和定义,许多分子标记物能为甲状腺癌的风险评估提供依据,并具有优化手术治疗的潜能,为甲状腺癌患者提供更好的预后管理.如甲状腺癌相关基因BRAF突变的研究为广泛,另外许多研究也对RAS,RET/PTC,和PAX8/PPARγ等基因的诊断价值进行了充分的评估.数据显示,这些标记物具有重要的诊断价值,有利于肿瘤的诊断以及作为潜在的治疗靶标.这篇综述讨论了甲状腺癌中常见的分子遗传学变异及其临床意义,并评估了其诊断和预后的应用价值.
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生物型全髋关节置换术后完全负重与部分负重效果的Meta分析
目的:比较生物型全髋关节置换术(THA)后完全负重与部分负重的临床效果.方法:计算机检索Pubmed、Embase、Cochrane Library、CNKI、CBM、万方数据库中关于生物型THA术后完全负重与部分负重对比的临床研究.对文献进行筛选、质量评价、数据提取,采用Review Manager5.3软件进行Meta分析.结果:共纳入9项研究,包括430例患者(461侧髋关节).结果显示:完全负重组与部分负重组术后1年及术后2年术侧髋关节Harris评分无统计学差异WMD(95 ％CI)分别为1.61(-0.61,3.84)、0.08(-1.19,1.34)].完全负重组术后3月内股骨柄下沉量较部分负重组大(WMD =-0.12,95％CI:[-0.22,-0.01]),术后2年及≥2年时股骨柄下沉量无统计学差异[WMD(95％CI)分别为-0.03(-0.31,0.25)、-0.02(-0.37,0.33)].末次随访时骨长入例数、出现点接合及假体周围透亮线例数均无统计学差异(P＞0.05).结论:基于现有研究,生物型THA术后早期完全负重有利于早期关节功能恢复,且不增加假体松动率.
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体质量指数与乳腺癌内分泌耐药相关性的研究进展
目前乳腺癌已成为全世界女性常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率在女性恶性肿瘤中位居第二.大量流行病学资料和临床研究表明体质量指数(BMI)与乳腺癌内分泌耐药关系密切.无论是绝经前或者绝经后的乳腺癌患者,升高的BMI均可导致无病生存期(DFS)和总生存期(OS)受损.体质量指数在乳腺癌内分泌治疗耐药机制中的作用有待进一步研究.个体化治疗可能是预防乳腺癌内分泌耐药的积极措施.本文回顾分析了BMI对绝经前和绝经后乳腺癌患者内分泌耐药的影响及可能的机制,希望对临床工作有所帮助.
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BC022687融合蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化、抗体制备及特异性鉴定
目的:构建BC022687的原核表达载体,诱导该质粒在大肠杆菌中表达并纯化其表达的融合蛋白,制备抗体并进行特异性鉴定.方法:采用RT-PCR法从18 20 g体重雄性小鼠睾丸组织中扩增BC022687 cDNA,经TA克隆及亚克隆方法后定向连入原核表达质粒pET 28a,将重组表达质粒转化至大肠杆菌BL-21(DL3)上,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析,用考马斯亮蓝染色及Western blot分析鉴定后,利用镍亲和层析法纯化表达融合蛋白,免疫新西兰兔,制备多克隆抗体,以诱导表达的融合蛋白为样本,Western blot实验检测抗体的特异性.结果:测序结果证实成功扩增出目的基因BC022687;酶切和测序结果证实pET-28a-BC022687原核表达载体构建成功;SDS-PAGE电泳显示表达出18.0 kU的外源蛋白.Western blot检测结果显示,表达出的蛋白为6×His tag的融合蛋白,而且Ni-NTA亲和层析法纯化该重组蛋白成功;将纯化的融合蛋白免疫新西兰兔,制备获得了抗BC022687蛋白的多克隆抗体,鉴定实验显示抗体特异性好.结论:已成功构建、表达、纯化了BC022687融合蛋白,以及成功制备了其特异性抗体,为研究BC022687蛋白在精子发生中的作用奠定了基础.
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lefty1基因真核表达载体构建鉴定及转染
目的:构建lefty1基因与pcDNA3.1(+)相融合的真核表达载体,并在lefty1基因的下游加上Flag标签,转染人肾小管上皮细胞株验证重组质粒活性.方法:设计并合成lefty1基因上下游引物,同时加上Flag标签序列,PCR扩增基因,并将其连接到真核表达载体pcDNA3.1(+)上,双酶切图谱分析和扩增产物测序鉴定所构建的真核表达载体.脂质体转染法将重组质粒pcDNA3.1(+)-lefty1-Flag和pcDNA3.1(+)分别转染至人肾小管上皮细胞株HK-2,qPCR和Western blot检测lefty1在mRNA和蛋白水平的表达.结果:以lefty1基因质粒模板扩增得到的片段约1 150 bp,双酶切得到目的基因片段,测序的结果显示与lefty1基因序列相同.转染肾小管上皮细胞后,pcDNA3.1(+)-lefty1-Flag能表达lefty1蛋白.结论:成功构建lefty1基因真核表达载体,为一步研究lefty1基因功能奠定了基础.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 |
| 2002 | 01 02 03 04 |
| 2001 | 01 02 03 04 |
| 2000 | 01 02 03 04 |
| 1999 | 01 02 03 04 |
