武汉大学学报(医学版)杂志
Medical Journal of Wuhan University 무한대학학보(의학판)
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冠心病患者经皮冠状动脉介入治疗后再次冠状动脉血运重建的影响因素分析
目的:探讨冠心病患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)后再次冠状动脉血运重建的影响因素.方法:回顾性分析冠心病PCI术后患者239例,根据是否进行再次血运重建将其分成再次血运重建组及单次血运重建组,比较两组病史、症状和冠状动脉造影资料,COX回归模型对有差异的因素进行分析.结果:与单次血运重建组比较,再次血运重建组患者吸烟、高血压、糖尿病比例明显升高(P<0.05).再次血运重建组复发胸痛比例、脂蛋白a[Lp(a)]水平与单次血运重建组相比明显升高(P<0.01).再次血运重建组的多支病变比例数和未完全血运重建比例数显著高于单次血运重建组(P<0.01).COX回归分析显示,吸烟(OR=2.139,95%CI:1.157-3.955)、复发胸痛(OR=2.458,95%CI:1.357-4.452)和Lp(a)(OR=1.001,95%CI:1.000-1.002)与PCI术后再次冠状动脉血运重建相关.结论:冠心病患者PCI术后3年随访提示,吸烟、复发胸痛症状和Lp(a)浓度升高是PCI术后再次冠状动脉血运重建的独立危险因素.
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腹腔镜选择性术中胆道造影的临床应用价值
目的:探讨腹腔镜选择性术中胆道造影(IOC)在治疗胆石症患者中的临床应用价值.方法:对2009年9月-2012年9月3年间用腹腔镜治疗的196例胆石症患者中92例行术中胆道造影进行回顾性分析.结果:发现胆总管结石13例,胰胆管汇合部畸形4例,胆囊管结石3例,胆囊管开口异常5例,胆道损伤1例,术中给予相应手术处理,术后患者均治愈出院.结论:腹腔镜术中胆道造影能清楚显示胆道树的解剖结构,降低胆道的阴性探查率,及时发现胆道损伤,降低术后胆道残石率,增加手术医生信心,值得临床推广.
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凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1与男性阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征的相关性
目的:研究凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(sLOX-1)在男性阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者(OSAHS)中的水平.方法:选取2011年9月-2012年6月于武汉大学人民医院鼾症中心住院的102例男性患者行多导睡眠监测,进一步分为轻度组(n=24),中度组(n=14)和重度组(n=64).ELISA法监测患者血清sLOX-1水平,并在1月后随访.结果:对正常对照组、轻度和中度OSAHS患者相比,重度OSAHS患者血清sLOX1水平升高,血清sLOX1水平与夜间平均血压、总甘油三酯(TG)、呼吸暂停低通气指数(AHI)、低血氧饱和度(LSaO2)水平呈正相关.1个月后随访,重度OSAHS患者血清sLOX1水平明显降低(P<0.001).结论:血清sLOX-1与重度OSAHS密切相关,男性阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者sLOX-1水平升高.
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乙酰左旋肉碱对人精子冷冻过程中氧化损伤的作用
目的:比较添加乙酰左旋肉碱的冷冻保护剂对人精子的冻存效果.方法:将30例患者的精液标本(15例正常精子与15例弱精子)液化,并PureSperm梯度离心处理后分为8组,分别为对照组(A1/A2组,仅冷冻保护剂),B1/B2组(2.5 mmol/L乙酰左旋肉碱),C1/C2组(7.5 mmol/L乙酰左旋肉碱),D1/D2组(15 mmol/L乙酰左旋肉碱),液氮中冷冻2周,比较冻融前后各组精子存活率、活力、DNA完整性和活性氧(ROS)水平.结果:无论是正常精子组或弱精子组,精子解冻后的活力、存活率、DNA完整性较冷冻前下降,ROS水平升高.A1/A2组与B1/B2组精子解冻后的活力、存活率、DNA完整性和ROS水平比较无差异.C1/C2组和D1/D2组精子解冻后的活力、存活率、DNA完整性和ROS水平较A组明显升高,但C1/C2组和D1/D2组各项指标相比无差异.结论:玻璃化冻存对精子存在损伤,含7.5 mmol/L乙酰左旋肉碱的冷冻保护剂可以提高人类精液的冻存效果.
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多次采卵手术对卵巢储备功能的影响
目的:分析体外受精(IVF)或单精子卵胞浆内注射(ICSI)中多次取卵后对卵巢功能的影响.方法:回顾性分析2010年1月至2013年1月在武汉大学人民医院生殖医学中心以长方案促排卵后接受过1次、2次及2次以上采卵手术患者资料,比较接受不同次数采卵手术后患者的基础雌激素(E2)、卵泡刺激素(FSH)、基础卵刺激素/黄体生成素(LH)值、窦卵泡数(AFC)以及降调后的E2、FSH、降调后FSH/LH值及获卵数.结果:接受过1次采卵手术的患者有433例,接受过2次及2次以上采卵手术105例.将患者未接受采卵手术前与接受了1次采卵手术后的卵巢储备功能进行比较发现,接受了1次采卵手术后患者的基础FSH值、基础FSH/LH值及降调后FSH值均增高(P<0.05);接受了1次采卵手术后患者的基础E2及降调后E2是呈下降趋势的(P<0.05);窦卵泡数及降调后FSH/LH值比较差异不具有统计学意义(P>0.05);患者在接受了1次和接受了2次及2次后的卵巢储备功能进行比较,统计分析发现接受了2次及2次以上采卵手术后患者的基础E2、基础FSH值、基础FSH/LH值及降调后E2值、降调后FSH值均增高(P<0.05);窦卵泡数也随着患者接受采卵手术次数的增加而不断减少(P<0.05);降调后FSH/LH值比较仍不具有统计学意义(P>0.05).结论:接受采卵手术的次数和患者卵巢的储备功能之间存在负相关,患者的卵巢储备功能随着接受采卵手术的次数的增加而不断下降,但是其中无法完全排除年龄因素的影响.
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卡泊三醇联合窄谱紫外线治疗掌跖脓疱病疗效观察
目的:研究卡泊三醇联合窄谱紫外线治疗掌跖脓疱病的效果.方法:以2011年3月-2012年8月我院收治的41例掌跖脓疱病为研究对象.所有患者随机分为2组:观察组共23人,给予卡泊三醇软膏外用联合窄谱紫外线治疗;对照组19人,单纯给予卡泊三醇软膏外用.疗程4周.治疗期间及治疗后定期观察,记录两组患者不良反应,并比较疗效.结果:治疗4周,观察组和对照组总有效率分别为91.3%和78.9%,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05).在治疗过程中两组均有不良事件发生,但是症状轻微,不影响继续治疗.结论:卡泊三醇联合窄谱紫外线治疗掌跖脓疱病安全有效,值得在临床应用推广.
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早产儿宫外发育迟缓167例临床分析
目的:探讨影响早产儿出院时宫外发育迟缓(EUGR)发生率的相关因素,为制定预防早产儿发生EU-GR的策略提供临床依据.方法:以本院2012年2月至2013年2月出生的早产儿为研究对象.对不同胎龄及出生体重的早产儿进行比较,并分析发生EUGR的相关因素.结果:体重≤1 500 g的早产儿组EUGR发生率为66.2%,体重>1 500 g的早产儿组EUGR发生率37.8%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);胎龄<34周的早产儿组EUGR发生率为71.3%,胎龄≥34周的早产儿组EUGR发生率为44.8%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05).宫内发育迟缓(IUGR)、感染、生后体重下降时间是发生EUGR的危险因素.结论:胎龄及出生体重越小,发生EUGR的可能性越大.导致EUGR的因素是多重的,其中IUGR及感染、生后体重下降时间对EUGR影响大,应积极预防及治疗并发症,重视早产儿早期营养,缩短患儿的体重下降时间是避免EUGR的关键.
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前葡萄膜炎引起抑郁及焦虑的临床分析
目的:探讨前葡萄膜炎是否导致抑郁及焦虑的产生.方法:共纳入80位参与者,35例前葡萄膜炎患者和45例正常对照者.分别用BECK抑郁自评问卷(BDI)及Zerssen心境量表(ZMS),焦虑自评量表(SAS)分析比较两组抑郁及焦虑程度.结果:实验组明显比对照组呈现较多的抑郁情绪,BDI指数分别为54%及9%(P<0.001),ZMS结果显示实验组加重抑郁情绪的人数是对照组的2.7倍.SAS结果显示实验组出现焦虑情绪明显多于对照组,比例分别为89%及29% (P<0.01).结论:急性前葡萄膜炎患者表现出有精神病理学意义上的抑郁及焦虑.该结果指出对患者提供心理支持的重要性,为急性前葡萄膜炎患者制定跨学科的治疗方案提供临床指导.
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婴幼儿重症肺炎治疗前后潮气呼吸肺功能的改变及意义
目的:探讨婴幼儿重症肺炎治疗前后潮气呼吸肺功能的变化及意义.方法:选择年龄在1个月-3岁湖北省妇幼保健院儿科重症监护室(PICU) 2012年6月-2013年6月重症肺炎婴幼儿40例,测定治疗前,临床治愈出院时,及出院后3个月患儿的潮气呼吸肺功能;另选38例无呼吸系统疾病健康婴幼儿潮气呼吸肺功能做正常对照组.主要测定参数:潮气量(VT/kg),呼吸频率(RR),吸气时间(TI),呼气时间(TE),吸呼比(TI/TE),达峰时间(TPTEF),达峰时间比(TPTEF/TE),达峰容积比(VPTEF/VE).结果:治疗前重症肺炎患儿RR显著增高,VT/kg,TI,TE,TI/TE,TPTEF,TPTEF/TE,VPTEF/VE均显著下降,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);临床治愈时重症肺炎患儿RR较治疗前显著下降,差异有统计学意义(P<0.05),与对照组相当(P>0.05),VT/kg,TI,TE较治疗前增高,差异有统计学意义(P<0.05),与对照组水平相当,差异无统计学意义(P>0.05),TPTEF,TPTEF/TE,VPTEF/VE与治疗前比较增高,差异有统计学意义(P<0.05),但仍显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);出院后3月VT/kg,TI,TE,TI/TE,TPTEF,TPTEF/TE,VPTEF/VE逐渐恢复与治疗前比较差异均有统计学意义(P<0.05),VT/kg,TI,TE,TI/TE与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),而TPTEF,TPTEF/TE,VPTEF/VE仍显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论:婴幼儿重症肺炎患儿潮气呼吸肺功能明显受损,临床症状缓解后其肺功能损害可持续存在,潮气呼吸测定能反映婴幼儿重症肺炎气道病变的程度、临床治疗的效果以及预后情况.
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外伤性癫痫患者的危险因素分析
目的:探讨外伤性癫痫(PTE)的危险因素,提高临床对PTE危险因素的认识,为临床早期干预、进行合理治疗、改善预后提供依据.方法:回顾性分析我院神经外科收治的325例颅脑外伤患者的临床资料.从性别、年龄、损伤部位、脑损伤类型、颅脑损伤严重程度及损伤性质等各方面分析这些因素与PTE发生的关系,并对各观测指标的相关数据进行单因素分析和多因素Logistic回归分析.结果:单因素分析显示年龄、颅脑损伤严重程度、脑皮层挫裂伤、凹陷性颅骨骨折、硬脑膜破裂、颅内血肿均与颅脑外伤后癫痫发生密切相关.多因素Logistic回归分析显示脑损伤严重程度,凹陷性颅骨骨折,硬脑膜破裂三个因素为PTE的危险因素.结论:年轻、病情重、脑皮层挫裂伤、硬膜破裂、凹陷性颅骨骨折及颅内血肿是PTE发生的危险因素,对具有这些危险因素的颅脑损伤患者应采取积极的防治手段,降低PTE的发生率.
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5-HTTLPR多态性与环境因素对产后抑郁症的影响
目的:探讨5-HTT基因连锁多态区(5-HTTLPR)多态性以及环境因素对发生产后抑郁的影响.方法:从武汉大学中南医院随机收集240例产妇(201 2年4月至2013年4月),通过爱丁堡产后抑郁量表(EPDS)评分,诊断出39例产后抑郁患者作为观察组,再按照随机抽样的方法从剩下的产妇中抽取39例作为对照组,运用聚合酶链反应技术(PCR)检测两组5-HTTLPR多态性的基因(S和L)和基因型(SS、SL、L)的分布频率;再对两者之间环境因素进行比较.结果:观察组5-HTTLPR短重复序列/短重复序列(short/short,S/S)基因型和短重复序列(short,S)频率分别为71.8%、83.3%,明显的高于对照组(43.5%、57.5%),两组之间的差异具有统计学意义(P<0.05);环境因素中丈夫的体贴程度、期待胎儿性别、婆媳关系、夫妻关系因素在两者之间的差异具有统计学意义.结论:5-HTTLPR的SS基因型可能是产后抑郁症的易感基因之一,而环境因素是产后抑郁症发病的重要因素.
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假性肥大型进行性肌营养不良家系的缺陷基因检测
目的:对临床诊断为假性肥大型进行性肌营养不良(DMD/BMD)家系进行基因分析,以帮助寻找致病基因的分子缺陷,明确其疾病诊断,并对后续妊娠进行产前指导.方法:采用touch-down聚合酶链反应对可疑缺失的外显子进行扩增和测序,对患者及其母亲的抗肌萎缩蛋白(dystrophin)基因缺失热点区域的18个外显子进行分析;并采用短串联重复序列-聚合酶联反应(STR-PCR)对患者及其母亲进行X染色体上的多个(CA)n多态性位点的基因分型.结果:该家系中,患者dystrophin基因的18个外显子区域未检出点突变和缺失,在内含子区域患儿检出2个多态性位点,确定了先证者的致病X染色体的STR分型.结论:本研究针对突变热点区域并未检测到致病的dystrophin基因的缺失或突变,但发现了2个dystrophin基因内含子的遗传标志物,并通过STR分型确定了致病的X染色体的STR基因型,可以用于后续的分子诊断和产前诊断.
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老年缺血性脑血管病患者阿司匹林抵抗的影响因素
目的:探讨老年缺血性脑血管病患者中阿司匹林抵抗(AR)的影响因素.方法:21 7例老年急性缺血性脑血管病患者,口服阿司匹林100 mg/d共2周,检测花生四烯酸及二磷酸腺苷诱导的血小板聚集率等指标.根据对阿司匹林的反应分为阿司匹林抵抗、阿司匹林半抵抗(ASR)和阿司匹林敏感(AS).观察与阿司匹林抵抗相关的临床因素和实验室指标,并着重分析目前较有争议的体重指数对阿司匹林抵抗的影响.通过随访观察患者的预后.结果:Logistic回归分析发现AR与体重指数(BMI)、纤维蛋白原水平和糖尿病显著相关(P<0.05).进一步按BMI大小进行分组分析发现,AR患者在肥胖组所占比率显著高于普通体重组(18.5%比4.6%,P<0.05).AR+ ASR组中再发缺血性卒中者所占的比率显著高于AS组(P<0.05).结论:肥胖患者中阿司匹林抵抗的发生率升高.BMI、纤维蛋白原水平和糖尿病与阿司匹林抵抗显著相关.阿司匹林抵抗患者再发缺血性卒中风险增高.
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高龄老年肺部感染应用胸腺肽α1的免疫调节疗效
目的:探讨胸腺肽α1 (Tα1)免疫调节辅助治疗高龄老年肺部感染的临床作用,观察评估细胞免疫功能T淋巴细胞亚群(CD3+、CD3+ CD4+、CD3+ CD8+、CD4+/CD8+)指标动态变化与临床疗效.方法:入选≥80岁高龄老年肺炎患者70例,随机分为治疗组(Tα1组)和对照组,每组各35例.Tα1组使用基础治疗(抗感染、祛痰、平喘、对症治疗)+ Tα1注射液1 mg,皮下注射,1次/d,2周为一个疗程.对照组35例仅使用基础治疗.两组治疗前后对比观察外周血T淋巴细胞亚群(CD3+、CD3+ CD4+、CD3+ CD8+、CD4+/CD8+)免疫指标及临床疗效.结果:疗程结束后结果显示,Tα1组各项免疫指标明显改善提高,优于对照组(P<0.05).临床疗效观察总有效率Tα1组94.3%;高于对照组82.6%,两组比较有统计学差异(P<0.05).结论:Tα1辅助治疗高龄老年肺部感染可有效调节增强细胞免疫功能,促进肺部炎症吸收,改善预后.
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香菇多糖对Ⅲ期卵巢癌术后TP方案辅助化疗疗效的影响
目的:研究香菇多糖对Ⅲ期卵巢癌术后紫杉醇联合顺铂(TP方案)辅助化疗疗效的影响.方法:将Ⅲ期卵巢癌术后行辅助化疗的患者根据治疗方法分TP方案治疗组(CON组)和香菇多糖联合TP方案治疗组(LTP组),比较两组患者复发率、不良反应、免疫功能和生存质量的差异.结果:LTP组患者复发率与CON组无明显差异(P=0.310),而胃肠道反应、骨髓抑制、肾功能损害和其他的Ⅲ-Ⅳ级和ⅠⅣ级不良反应发生率显著低于CON组(P<0.05).CON组和LTP组卵巢癌患者化疗前的白细胞(WBC)、淋巴细胞(Lym)、CD3+、CD4+、CD8+和NK细胞均无明显差异(均P>0.05).LTP组患者化疗3周期和化疗6周期后的WBC、Lym、CD3+、CD4+、CD8+和NK细胞均显著高于CON组(均P<0.05).CON组和LTP组患者化疗前的生存质量评分无明显差异(均P>0.05),LTP组患者化疗后的生存质量评分显著高于对照组(P<0.05).结论:香菇多糖可显著改卵巢癌患者免疫功能,降低Ⅲ期卵巢癌术后TP方案的毒副反应,同时可改善患者生存质量.
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血管内皮生长因子对失神经皮瓣白细胞功能的影响
目的:观察血管内皮生长因子(VEGF)在失神经皮瓣中对白细胞功能的影响,探讨VEGF在皮瓣抗感染中的作用机理.方法:选用60只Wister大鼠,制作右下腹2 cm×2 cm岛状皮瓣的动物模型,随机分为3组.所有皮瓣接种金黄色葡萄球菌悬液(5×107/ml)2 ml,动物观察96 h后处死.测定白细胞计数,白细胞活力,中性粒细胞化学发光,中性粒细胞趋化性等指标.结果:术后96 h对照组、慢性失神经组和VEGF治疗组3组渗出液中白细胞计数差别无统计学意义(P>0.05);而在白细胞活力、中性粒细胞化学发光、中性粒细胞趋化性等指标测定中,慢性失神经组较对照组差别非常显著(P<0.01);VEGF治疗组较慢性失神经组差别非常显著(P<0.01).结论:软组织失去神经支配后,降低了白细胞的功能.而血管内皮生长因子能改善皮瓣微循环,并有增强白细胞功能的作用.
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骨髓病变、关节积液和滑膜炎与膝骨关节炎疼痛的相关性
目的:探讨磁共振成像(MRI)显示的软骨下骨髓病(BML)、关节积液和滑膜炎与膝骨关节炎(OA)患者疼痛的相关性.方法:80例膝OA患者行MRI检查.用波士顿利兹骨关节炎评分(BLOKS)评定的大BML、关节积液和滑膜炎作为预测因子,用西安大略和麦克马斯特大学骨关节炎量表(WOMAC)评定的负重和非负重膝疼痛作为结果,采用单变量和多变量Logistic回归分析,研究MRI表现与膝关节症状的关系.结果:在负重情况下,按大BML评分,膝疼痛校正相对危险度(RR)分别为1.0,1.3,1.9和2.0(P=0.005).按积液评分,校正RR分别为1.0,1.8,2.1和2.7(P=0.000 3).按滑膜炎评分,校正RR分别为1.0,1.7,1.9和2.0(P=0.021);在非负重情况下,按大BML评分,膝疼痛校正RR分别为1.0,1.1,1.6和1.8(P=0.04).按积液评分,校正RR分别为1.0,1.4,1.6和2.1(P=0.03).按滑膜炎评分,校正RR分别为1.0,0.7,0.8和0.5(P=0.45).结论:MRI显示的大骨髓病变、关节积液和滑膜炎与膝负重疼痛独立相关,而与非负重疼痛相关性较小.这些MRI特征可能为膝OA提供新的治疗靶点.
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Ⅱ-Ⅲ期结肠癌行根治手术辅助化疗结合免疫细胞治疗的疗效分析
目的:探讨树突状细胞(DC)+细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)治疗结合根治性手术及辅助性化疗对Ⅱ-Ⅲ期结肠癌患者生存期及化疗期间生存质量的影响.方法:60例Ⅱ-Ⅲ期结肠癌患者采取随机对照原则分为2组:对照组31例采用根治手术及辅助化疗,治疗组29例采用根治手术辅助化疗结合DC+CIK细胞免疫治疗.以手术后无病生存期(DFS)、2年生存率作为疗效评价指标了解对患者生存期的影响,采用QLQ-30(V3.0)问卷调查及焦虑自评量表(SAS),抑郁自评量表(SDS)在化疗前1天(B1)、化疗第2天(T2)、化疗间歇期第7天(I7)和第14天(I14)进行评定,对比分析两组患者化疗期间生存质量情况.结果:对照组2年生存率为77.42%,治疗组2年生存率为82.76%,两者无统计学意义,但治疗组无病生存期优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).化疗期间生存质量,两组患者生活质量T2降至低,后呈缓慢上升趋势,SAS、SDS则呈反向变化.治疗组在I7和I14点躯体(PF)、角色(RF)和社会(SF)维度和总体健康状况(QL)分值高于对照组(P<0.05),而疲乏、疼痛、失眠等症状及SAS、SDS分值显著性低于对照组(P<0.05).结论:在根治手术辅助化疗基础上结合DC+CIK细胞免疫治疗,能提高患者无病生存期,同时可提高患者化疗期间的生存质量,改善焦虑、抑郁负性情绪.
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葡萄糖定量法检测两种粘接剂粘固纤维桩后的微渗漏情况
目的:用葡萄糖定量法检测2种纤维桩粘接材料与纤维桩粘接后的微渗漏情况.方法:将32颗下颌第一双尖牙截冠后用随机对照分组法分为2个实验组(每组15颗)和2个对照组(阳性对照和阴性对照各1例),分别用RelyXTM Unicem和Dulink粘接后,每个样本放置在万能测试仪上,顺牙长轴方向,100 N,加载24万次后,置于微渗漏检测模型中,分别在第3,4,10,17,24,31,38,73天检测从冠方向根方渗漏的葡萄糖浓度.结果:实验组所有样本均在第17天检测出微渗漏,第38天开始微渗漏明显放缓,两组间无显著性差异.结论:RelyXTM Unicem与Dulink粘接纤维桩后微渗漏无差异.
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DNA甲基化介导Id4在宫颈癌中的表观遗传沉默
目的:探讨宫颈癌中DNA结合抑制因子4(Id4)表达的启动子甲基化调控.方法:采用焦磷酸测序技术对17例散发性宫颈鳞状细胞癌及15例正常的宫颈组织标本进行Id4基因甲基化水平检测.实时荧光定量PCR检测组织和细胞中Id4表达水平.单独使用DNA甲基转移酶抑制剂(5Aza-dC)去甲基化处理宫颈癌细胞SiHa以及联合使用5Aza-dC和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)去甲基化处理SiHa后,检测Id4表达.结果:Id4甲基化水平在宫颈癌组织中显著高于正常宫颈组织[(65.0±24.7)%比(21.8±10.2)%,P<0.01].在宫颈鳞状细胞癌组织和正常宫颈组织中,Id4的mRNA表达水平与其启动子甲基化水平呈负相关(Pearson test,r=-0.011,P<0.01).单独使用5Aza-dC能使SiHa细胞中Id4的甲基化水平由98.23%降至50%左右,同时伴随Id4 mRNA水平的显著提高(25倍),而单用TSA组甲基化水平及mRNA表达改变不明显.联合使用5Aza-dC和TSA时Id4甲基化水平的进一步下降(降至29.54%),及其mRNA表达水平的进一步升高(约35倍).结论:Id4基因在宫颈癌中呈高甲基化状态,并介导Id4的表达沉默.组蛋白去乙酰化与DNA甲基化在Id4表观遗传沉默机制中起协同作用.Id4或可作为表观遗传治疗的作用靶点.
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宫颈腺癌与鳞状细胞癌治疗反应性及预后的回顾性对比分析
目的:比较宫颈腺癌(AC)与鳞状细胞癌(SCC)在治疗反应性及预后方面的差异.方法:回顾分析1998-2006年间武汉大学中南医院收治的Ⅰ A2ⅡA2期并行根治性手术的宫颈癌患者292例,比较AC与SCC患者的临床病理特点、治疗反应性及预后.结果:AC较SCC患者确诊时分期晚且更易发生浸润转移(P<0.05).与SCC相比AC患者的复发率高、生存时间短(P<0.05),且独立预后因素各异.AC对术前、术后辅助治疗的反应性均较SCC差(均P<0.05).与术后辅助单纯放疗(RT)相比,同步放化疗(CRRT)可显著延长高危AC患者的无瘤生存时间(P=0.002).结论:AC在生物学行为上与SCC不同,在治疗反应性及预后上较后者差,应针对其特点制定新的治疗策略,而术后CRRT可能有助于改善高危AC的预后.
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原发性颅内B细胞淋巴瘤磁共振弥散加权成像与1H-MRS表现的相关性
目的:探讨免疫功能正常人原发性颅内B细胞淋巴瘤磁共振(MR)弥散加权成像(DWI)及多体素质子磁共振波谱成像(1 H-MRS)表现及二者的相关性.方法:回顾性分析15例经病理证实的原发性颅内B细胞淋巴瘤的MRI表现,其中10例患者均行DWI和1 H-MRS检查,分别测量肿瘤实质表观弥散系数(ADC)、胆碱/N-乙酰天门冬氨酸(Cho/NAA)、脂质/肌酸(Lip/Cr)比值,并探讨ADC与Cho/NAA、Lip /Cr的相关性.结果:15例患者共检出23个病灶,病灶T1WI呈稍低信号,T2WI呈等或稍高信号,增强后病灶多明显均匀强化,“尖角征”和“缺口征”的出现具有特异性.10例均行DWI和三维多体素1 H-MRS检查,共检11个病灶,肿瘤实质区ADC值较对侧正常脑实质明显降低,分别为(0.000 773±0.000 096) mm2/s,(0.000 900±0.000 165) mm2/s,二者的差异有统计学意义(t=2.611,P=0.017).肿瘤实质区Cho峰升高,NAA降低,并出现高耸的Lip峰,测量肿瘤实质区Cho/NAA均值1.99±0.25,对侧正常脑区Cho/NAA均值0.82±0.09,二者的差异有统计学意义(t=14.743,P=0.00);肿瘤实质区出现高耸的Lip峰.ADC值与Cho/NAA比值呈负相关(r=-0.687,P=0.02).结论:原发性颅内B细胞淋巴瘤ADC值降低,Cho/NAA升高,ADC值与Cho/NAA比值呈负相关性,MRI表现具有一定的特征,多序列联合应用可提高MRI对肿瘤的诊断水平.
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左布比卡因复合不同浓度舒芬太尼用于剖宫产术后患者硬膜外自控镇痛对母儿的影响
目的:探讨左布比卡因复合不同浓度舒芬太尼用于剖宫产术后病人硬膜外自控镇痛(PCEA)的效果及对母儿的影响.方法:择期行剖宫产手术的足月、单胎产妇90例,年龄22-35岁,体重60-85kg,视觉模拟评分(VAS评分)法分级Ⅰ或Ⅱ级,采用随机数字表法,将其分为3组(n=30):0.125%左布比卡因复合0.4、0.6和0.8μg%ml舒芬太尼组(Ⅰ组-Ⅲ组).术后分别行PCEA 48 h,负荷剂量5 ml,持续输注剂量2 ml/h,单次给药剂量2ml,锁定时间15 min.采用ASA评价术后4,8,12,24,48 h的疼痛程度,记录宫缩痛评分,采用改良Bromage评分法评价下肢运动阻滞程度变化,采用放射免疫分析法测定血清泌乳素浓度,进行新生儿神经和适应能力评分(NACS),记录初乳时间及不良反应的发生情况.结果:与Ⅰ组比较,Ⅱ组和Ⅲ组各时点切口痛VAS评分及宫缩痛评分降低、初乳时间提前、术后24、48 h时血清泌乳素浓度升高,Ⅲ组恶心呕吐及心动过缓等不良反应的发生率升高(P<0.05);与Ⅱ组比较,Ⅲ组各时点切口痛VAS评分及宫缩痛评分、初乳时间、术后24和48 h时血清泌乳素浓度差异无统计学意义(P>0.05),恶心呕吐及心动过缓等不良反应发生率升高(P<0.05);3组改良Bromage评分、新生儿NACS评分比较差异无统计学意义(P>0.05).结论:0.125%左布比卡因复合舒芬太尼0.6μg/ml用于剖宫产术后患者PCEA镇痛效果好,对母儿不良反应少.
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男性原发性纵隔绒毛膜癌的诊治
目的:探讨男性原发性纵隔绒毛膜癌(绒癌)的诊治方法.方法:通过1例典型男性原发性纵隔绒癌的诊治过程分析,综合文献复习,阐明男性原发性纵隔绒癌的诊断、鉴别诊断、治疗和转归.结果:病史、症状、影像学、尤其病理学和血清绒毛膜促性腺激素检测是诊断男性原发性纵隔绒癌的重要手段,手术、化疗及放疗是治疗本病的主要方法,本例患者通过综合治疗已获满意疗效.结论:男性原发性纵隔绒癌一旦诊断明确,应该采取以手术为主的综合治疗.
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系统性红斑狼疮患者外周血单核细胞MⅠCs分子异常表达及其机制
目的:了解系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单核细胞主要组织相容性复合体(MHC)Ⅰ类链相关分子(MⅠCs)、IL-15表达水平变化及其潜在机制.方法:收集20例SLE患者及20例健康志愿者外周血,分离单核细胞及血清,采用流式细胞术检测单核细胞表面MⅠCs及mIL-15的表达,EILIS法检测血清中干扰素-γ(INF-γ)、干扰素-a(INF-α)浓度,并对单核细胞表面MⅠCs表达水平与血清INF γ浓度作相关性分析.进一步以SLE患者血清与健康志愿者单核细胞体外孵育,在有或无抗INF-γR存在的情况下,检测单核细胞表面MⅠCs分子的表达情况.结果:SLE患者血清IFN γ浓度与健康对照组相比有显著性差异,其中IFN-γ在SLE患者为(429.7±145.0)pg/ml[健康对照为(73.8±18.9) pg/ml],二者有显著性差异(P<0.01);单核细胞MⅠCs及mIL-15的阳性率分别为(37.0±18.1)%和(36.0±7.3)%,而健康志愿者单核细胞MⅠCs及mIL-15的阳性率为(7.2±2.4)%和(7.6±2.5)%.SLE患者MⅠCs及mIL-15阳性率显著高于健康志愿者(P<0.01);SLE患者单核细胞MⅠCs分子表达水平与血清INF γ浓度呈正相关;SLE患者血清中高浓度的IFN-γ可以刺激正常人单核细胞表达高水平的MⅠCs及mIL-15.结论:SLE患者血清INFγ浓度异常升高,导致外周血单核细胞表面MⅠCs及IL-15异常高表达.
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携抗细胞间黏附分子-1微泡对心肌梗死受损内皮靶向识别的实验研究
目的:探讨携抗细胞间黏附分子-1(ICAM-1)靶向微泡对兔心肌梗死后受损内皮的靶向识别能力.方法:分别制备携抗ICAM-1的阳离子靶向微泡及携抗ICAM-1的Sono Vue靶向微泡,以不带ICAM-1的单纯阳离子微泡和Sono Vue微泡作为对照;显微镜下观察4种微泡与白细胞介素-1β刺激后的人脐静脉内皮细胞HUVEC的结合情况;用FITC荧光分别标记各组微泡;制备兔心肌梗死模型,于造模后3d经耳缘静脉分别注射各组微泡,经胸超声检测4组兔心肌造影情况,之后处死兔获取心脏标本,冰冻切片检测靶组织中荧光情况.结果:显微镜检测显示HUVEC周围可见较多携抗ICAM-1阳离子或Sono Vue微泡聚集黏附,而单纯阳离子微泡和单纯Sono Vue微泡无明显黏附现象;兔心肌造影显示抗ICAM-1阳离子靶向微泡组和携抗ICAM-1的Sono Vue微泡组显影持续时间高于单纯阳离子微泡组和Sono Vue微泡组;冰冻切片荧光显微镜结果显示携抗ICAM-1阳离子微泡组和携抗ICAM-1的Sono Vue微泡组梗死区中受损血管内膜面可见明亮的绿色荧光,而单纯阳离子组和Sono Vue微泡组血管内膜面仅见少量暗淡的绿色荧光.结论:携抗ICAM-1的靶向微泡可特异识别受损的血管内皮,有助于目的基因的靶向释放.
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靶向Skp2基因siRNA对人大肠癌裸鼠移植瘤细胞增殖和凋亡的影响
目的:应用RNA干扰(RNAi)技术沉默Skp2(Skp2)基因,研究其对人大肠癌裸鼠移植瘤细胞增殖和凋亡的影响.方法:建立裸鼠大肠癌皮下移植瘤模型,随机分为3组:PBS组,阴性对照序列组(Skp2 NC组),RNA干扰组(Skp2-siRNA组).分别于瘤体内局部注射PBS、腺病毒Ad-Skp2-NC、腺病毒Ad-Skp2 siRNA,每3d注射1次,共3次.4周后分离瘤体,观察肿瘤抑瘤率并绘制生长曲线.采用蛋白印迹技术检测瘤体中Skp2、p27蛋白表达;免疫组化法检测肿瘤内增殖细胞核抗原(PCNA)表达量变化;原位末端标记(TUNEL)法检测肿瘤细胞凋亡.结果:Skp2 siRNA组抑瘤率为32.40%,与PBS组和Skp2 NC组比较差异有统计学意义(P<0.05);Skp2-siRNA组Skp2蛋白表达下调,p27蛋白表达增多;PCNA表达量显著低于PBS组和Skp2-NC组;Skp2 siRNA组凋亡细胞相对光密度值为(255.73±1.77)%,与PBS组(100.00±0.47)%和Skp2-NC组(93.07±1.17)%相比,明显增高.结论:Skp2-siRNA能有效抑制裸鼠体内人大肠癌SW480细胞株增殖并促进其凋亡,具有显著的抑瘤效果.
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Baicalein对人脐静脉血管内皮细胞12-脂氧化酶、血管内皮生长因子表达的影响
目的:观察baicalein作用于人脐静脉血管内皮细胞系ECV-304细胞后12-脂氧化酶(12-LOX)、血管内皮生长因子(VEGF)表达的情况.方法:Baicalein处理培养的第2代血管内皮细胞,实验组分别用1,10,100μmol/L baicalein处理48 h和30 μmol/L的baicalein处理1,2,4,6d.设立空白对照组.RT-PCR检测各组12LOX、VEGF的mRNA表达;Western blot免疫印记法检测各组12 LOX的表达水平.结果:RT-PCR扩增得到单一的产物,与预期的扩增序列大小完全一致,并且Western blot免疫印记法检测得出12-LOX的表达与baicalein的作用时间和作用浓度成反比.结论:血管内皮细胞自身能产生12 LOX、VEGF,它们均是促进新生血管的形成的因素,而baicalein抑制了12-LOX、VGEF的表达,从某一途径抑制新生血管的形成.
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氨氯吡咪抑制血管内皮细胞生长因子mRNA表达对K562细胞凋亡的影响
目的:探讨氨氯吡咪(Amiloride)通过抑制血管内皮细胞生长因子mRNA(VEGF mRNA)表达,观察VEGF mRNA与K562细胞凋亡是否有关.方法:将不同浓度Amiloride与K562细胞共同孵育,采用Annexin VFITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡.同时采用RT PCR技术观察Amiloride对K562细胞VEGF mRNA表达的影响,免疫组化方法观察Amiloride对K562细胞VEGF蛋白表达的影响.应用MTT法观测Amiloride对K562细胞增殖的影响.结果:不同浓度Amiloride作用K562细胞24h后,K562细胞的增殖受到抑制,VEGF mRNA表达强度的相对系数及VEGF蛋白呈浓度依赖性下降,并且可以观察到随着VEGF mRNA表达强度的相对系数的降低,K562细胞凋亡率增加,二者之间显著负相关(P<0.05).结论:氨氯吡咪可能通过抑制VEGF mRNA表达促进K562细胞凋亡.
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哮喘小鼠肺间质巨噬细胞的表型特征分析
目的:观察哮喘小鼠肺间质巨噬细胞的表型特征.方法:12只BALB/c小鼠随机分为哮喘组和正常组,每组6只.哮喘组和正常组分别采用卵清白蛋白和PBS致敏和激发.流式细胞仪检测肺间质巨噬细胞和M2型肺间质巨噬细胞的数量;RT-PCR检测肺间质巨噬细胞精氨酸酶1(Argl)、转谷氨酰胺酶2(TG2)、白细胞介素(IL)-10和诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA表达水平;ELISA法检测肺间质巨噬细胞体外培养上清液IL-10和IL-12水平.结果:哮喘组小鼠肺间质巨噬细胞占肺单个核细胞的百分数和M2型肺间质巨噬细胞占肺间质巨噬细胞的百分数明显高于正常组(均P<0.01).哮喘组小鼠肺间质巨噬细胞Arg1和TG2 mRNA表达水平明显高于正常组(均P<0.01),IL-10 mRNA表达水平明显低于正常组(P<0.01),iNOS mRNA表达水平与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05).哮喘组小鼠肺间质巨噬细胞体外培养上清液IL 10水平明显低于正常组(P<0.01),IL-12水平与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论:哮喘肺间质巨噬细胞表现为替代活化巨噬细胞的表型特征,并高表达TG2.
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间充质干细胞移植对阿霉素肾病大鼠肾脏中基质细胞衍生因子-1表达的影响
目的:观察基质细胞衍生因子-1(SDF-1)在阿霉素慢性肾病大鼠肾脏内的表达变化以及移植异体骨髓间充质干细胞后对SDF-1表达的影响.方法:体外培养SD大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),缺氧培养,采用流式细胞术检测其表面CXCR4表达,用绿色荧光蛋白(GFP)标记MSCs.SD大鼠左侧肾切除后以2.5 mg/kg剂量给大鼠尾静脉注射阿霉素,1次/周,连续2次,慢性肾病模型成功后,将成模大鼠随机分为2组:阿霉素慢性肾病模型组(n=8)和MSCs移植组(n=8),另选8只正常大鼠行假手术做正常对照组.于MSCs移植后不同时间点(1,7,14,30 d)处死动物,采用Real-time PCR、Western blotting检测大鼠肾脏组织中SDF-1 mRNA和蛋白表达的改变情况,并观察MSCs在大鼠肾脏的分布情况以及大鼠肾脏病理改变.结果:阿霉素慢性肾病SD大鼠肾组织内SDF-1表达较对照组明显增加(P<0.05),并随着时间推移而逐渐增加;GFP标记的MSCs移植后1d发现分布在肾小管,之后逐渐增加,14d时明显;经缺氧培养的异体骨髓MSCs移植后,SDF-1表达较阿霉素慢性肾病模型组降低,在14d有统计学意义(P<0.05).结论:在阿霉素慢性肾病大鼠肾组织内,SDF 1表达增加可能与骨髓间充质干细胞迁移增加有一定关系.
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中药咽炎饮抗大鼠急性咽炎的实验研究
目的:评价中药咽炎饮对急性咽炎的药效作用,并对其机制进行初步探讨.方法:采用15%浓氨水向咽部喷雾制备大鼠急性咽炎模型,以双黄连口服液作为药物对照,分为双黄连组给予双黄连口服液8 ml/(kg· d);咽炎饮高、低两个剂量组分别给予7.2,3.6 g/(kg·d)的咽炎饮,正常组、模型组,分别给予等量生理盐水,灌胃,每天2次,连续7d.实验处理完成后,取血检测白细胞计数及白细胞分类计数.取咽部组织观察病理改变.离心取上清用酶联免疫法(ELISA)检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β).结果:咽炎饮可抑制急性咽炎大鼠血中白细胞异常升高,减轻咽部组织的炎细胞浸润,减少TNF-α、IL-1β分泌.结论:咽炎饮可有效治疗大鼠急性咽炎,其机制可能与抑制TNF-α、IL-1β分泌有关.
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黄芪、地黄混合提取物促新生血管形成的作用及其机制
目的:观察黄芪和地黄共同促人脐静脉内皮细胞血管新生的作用,并初步探讨其作用机制.方法:分别考察黄芪和地黄的混合提取物浓度为18.75,37.5,75 mg/L,采用MTT法检测内皮细胞的增殖状况,通过划痕实验和Transwell实验考察内皮细胞的迁移能力,小管形成实验观察新生血管的形成,免疫印迹测定VEGFR2、Akt、p38、FAK的总蛋白及其磷酸化的表达.结果:药物浓度18.75 mg/L不能提高体外成血管能力;37.5 mg/L能促进内皮细胞增殖及成血管,并能显著提高p-FAK和p VEGFR-2的表达,但不能促进内皮细胞迁移;75 mg/L能促进内皮细胞增殖、迁移及成血管,并能显著提高p-Akt、p-FAK和p-VEGFR-2的表达.结论:黄芪和地黄诱导内皮细胞增殖、迁移和血管形成,促进血管新生,其机制可能与VEGF-VEGFR-2通路有关.
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IL-27在小鼠实验性肠炎模型中的表达
目的:通过检测IL-27在小鼠实验性肠炎模型中的表达,探讨其在肠炎发病机制中的作用.方法:建立三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的急性小鼠实验性肠炎模型,采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)及Western blot分别检测IL-27基因mRNA和蛋白在炎症肠黏膜中的表达.结果:TNBS成功诱导急性小鼠实验性肠炎,与对照组相比,TNBS处理的小鼠炎症评分明显增高,炎症肠黏膜中IL-27 mRNA和蛋白表达亦明显增高,差异具有统计学意义.结论:IL-27在TNBS诱导的小鼠炎症肠黏膜中表达明显增高,提示IL-27可能参与小鼠肠道炎症的形成过程.
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99m Tc-HYNIC-Tat49-57-DEVD的制备及其在健康BALB/c小鼠体内的生物学分布
目的:制备新型凋亡显像剂99mTc-HYNIC-Tat49-57-DEVD,研究其在健康小鼠体内的生物学分布,为其进一步应用于核素凋亡显像奠定实验基础.方法:设计合成Caspase-3特异性底物多肽,经化学修饰后与穿膜肽HIV Tat49-57连接,采用间接标记法,在螯合剂联肼尼克酰胺(HYNIC)和协同配体三羟甲基甘氨酸及乙二胺二乙酸的作用下,将连接有穿膜肽的Caspase-3底物Tat49-57-DEVD予Na99mTcO4标记,检测标记物的放化纯及稳定性,并研究其在健康BALB/c小鼠体内不同时间点(0.5,1,2和6 h)的生物学分布.结果:合成的底物多肽经高效液相色谱及质谱分析鉴定为纯度≥99%的HYNIC-Tat49-57-DEVD干粉,标记产物99mTc-HYNIC-Tat49-57-DEVD的放化纯度为92.0%±1.6%,放置4h后其放化纯仍可达90.6%±1.4%.标记物在健康小鼠体内生物学分布实验显示其肾脏摄取值高(0.5h其%ID/g值达5.93±0.08),肝脏次之,其余组织摄取较低.结论:显像剂99mTc-HYNICTat49-57-DEVD的制备方法可行,标记物稳定,在血液中的清除速度快,主要通过肝脏和肾脏排泄,为其进一步应用于体内凋亡显像奠定了基础.
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气相色谱法在血清邻苯二甲酸酯类化合物检测中的应用
目的:建立一种有效的检测血清邻苯二甲酸二丁酯(DBP)、邻苯二甲酸酯(DEHP)的气相色谱法,并分析人体受其污染的现状.方法:选择健康志愿者及性早熟女童为研究对象,采用液-液萃取法对其血清中DBP、DE-HP进行分离、纯化,气相色谱法进行检测.结果:DBP、DEHP含量在0.10-10.0 mg/L范围内呈良好的线性关系,相关系数分别为r=0.999 6和r=0.999 3,检出限为0.10 mg/L和0.08 mg/L.平均加标回收率分别为96.76%-104.99%和94.78%-99.91%.日内与日间精密度的相对标准偏差范围,DBP为3.05%-4.81%和3.23%-6.50%,DEHP为2.40% 3.63%和2.93%-8.67%.血清DBP、DEHP检出率,健康成人志愿者分别为70.61%、67.91%,女性和男性无显著性差异(P>0.05),性早熟女童显著高于正常对照女童(DBP为95%比72.50%,P<0.05;DEHP为96.25%比73.75%,P<0.05);健康成人志愿者血清DBP水平,女性高于男性[(0.598±0.124)比(0.246±0.043) mg/L,P<0.05],性早熟女童血清DBP [(1.801±0.052)比[(1.376±0.135) DEHP(0.253±0.044)比(0.488±0.236) mg/L],P<0.05]水平显著高于同龄健康对照女童.结论:本方法灵敏度高、重现性好,可用于血清邻苯二甲酸酯类化合物的检测;人体受邻苯二甲酸酯类化合物的污染严重,DBP和DE-HP可能是导致女童性早熟的重要致病因素之一.
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基于BP神经网络模型的临床瓷粉配色方法
目的:探讨基于BP神经网络预测瓷粉配方的配色网络模型的可行性.方法:按照不同质量配比的混合松风Halo瓷粉制作32个瓷片样本,随机分为两组:训练组和测试组.用Matlab软件构建BP神经网络模型,用训练组瓷片训练并优化网络,形成颜色L*a*b*参数与瓷粉配方质量配比之间的非线性映射关系.用测试组试样检验构建的神经网络的精度.结果:测试组预测出的混合瓷粉质量配比与真实质量配比之间的准确率为80%(配比绝对误差±0.05).按照测试组的预测和真实瓷粉质量配比制作的瓷片之间的平均色差为1.68(远小于临床可容忍阈值2.7).结论:基于BP神经网络模型的瓷粉配色方法,直接给出了瓷粉配方,缩减了操作程序,减小色差,为当前口腔临床修复技术提供了一种新的比色途径.
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大鼠血管平滑肌细胞的培养和鉴定
目的:建立一种方便快捷的培养大量大鼠血管平滑肌细胞的方法,为心血管疾病的体外实验研究提供实验材料.方法:采用改良的组织块贴壁法进行原代培养,差异贴壁法纯化细胞,常规胰酶消化法传代,使用倒置相差显微镜进行形态学观察,通过检测平滑肌肌动蛋白对细胞进行免疫组化鉴定.结果:培养4代的平滑肌细胞纯度达96%以上.镜下可见培养细胞呈典型的“峰-谷”样生长,免疫组化染色显示胞质内平滑肌肌动蛋白阳性表达.结论:本研究所介绍的组织贴块培养法较为成熟,可为心血管疾病病因、机制的研究和防治提供一个理想的实验材料.
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一种潜在的新肿瘤分子标志物RASSF4的研究进展
RAS相关结构域家族(RASSFs)由10个成员组成,这些家族成员已被确认为抑癌基因,可以通过多种途径调控细胞增殖、促进细胞凋亡和衰老,维持微管的稳定性、调节细胞的黏附和运动性.研究发现RASSF4在正常组织中广泛表达,而在人类肿瘤细胞中由于启动子甲基化表达下调,RASSF4还可诱导细胞凋亡,其关于信号转导途径的研究也有了一定发展.本文就其研究进展进行综述.
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MicroRNA-29与肝纤维化
微小RNA(microRNA,miRNAs,miR)是一类在转录后水平进行基因调控的非编码小RNA分子.miRNAs分子参与细胞生长、增殖、信号通路调控以及细胞凋亡等多个环节,与多种癌症发生发展有关.目前许多研究表明miR-29可调控多种靶基因的表达,参与多种纤维化疾病的发生、发展过程,miR-29有望成为肝纤维化基因治疗的新靶点,为阐述肝纤维化的发病机制和临床诊治提供了新思路.本文就miR-29与肝纤维化关系的研究进展做一综述.
年 | 期数 |
2019 | 01 02 |
2018 | 01 02 03 04 05 06 |
2017 | 01 02 03 04 05 06 |
2016 | 01 02 03 04 05 06 |
2015 | 01 02 03 04 05 06 |
2014 | 01 02 03 04 05 06 |
2013 | 01 02 03 04 05 06 |
2012 | 01 02 03 04 05 06 |
2011 | 01 02 03 04 05 06 |
2010 | 01 02 03 04 05 06 |
2009 | 01 02 03 04 05 06 |
2008 | 01 02 03 04 05 06 |
2007 | 01 02 03 04 05 06 |
2006 | 01 02 03 04 05 06 |
2005 | 01 02 03 04 05 06 |
2004 | 01 02 03 04 05 06 |
2003 | 01 02 03 04 |
2002 | 01 02 03 04 |
2001 | 01 02 03 04 |
2000 | 01 02 03 04 |
1999 | 01 02 03 04 |