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CD3抗体诱导的新生儿脐带血淋巴细胞信号传导的研究
目的从TCR/CD3复合物信号传导的角度,研究CD3抗体、PMA和ionomycin对新生儿脐带血淋巴细胞增殖及胞内钙离子浓度的影响,以及与磷脂酶Cγ1(PLCγ1)表达的关系. 方法利用3H-TdR掺入法检测淋巴细胞的DNA合成;利用荧光分光光度法检测淋巴细胞内钙离子浓度;利用蛋白印迹法检测PLCγ1的表达. 结果应用CD3抗体或PMA+ionomycin协同处理新生儿脐带血和成人外周血淋巴细胞,其DNA合成和胞内钙离子浓度均明显增高,并且新生儿脐带血淋巴细胞的DNA合成和胞内钙离子浓度明显低于成人外周血水平.但是,与CD3抗体相比,PMA+ionomycin协同所诱导的新生儿脐带血淋巴细胞的增殖接近成人外周血水平.用CD3抗体处理前后的新生儿脐带血淋巴细胞PLCγ1的表达均明显低于成人外周血水平. 结论新生儿脐带血淋巴细胞信号传导发育的不完善可能主要存在于细胞活化的早期阶段,并且这种不完善的原因可能与PLCγ1表达降低以及不能有效地被激活有关.
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IFN-γ激活的脐血树突状细胞对肿瘤细胞的杀伤作用及其机制研究
树突状细胞(dendritic cell, DC)不仅具有抗原提呈功能,本身也具有一定程度的肿瘤杀伤活性.目前,有关DC直接抗肿瘤活性的研究主要集中于外周血及骨髓来源的DC,而脐带血DC尚未见相关报道.因此,本文以脐血单核细胞诱导的DC为研究对象,检测其在成熟刺激因子γ-干扰素(interferon-γ, IFN-γ)激活后对恶性血液病细胞株的杀伤活性,并通过细胞膜及细胞内TNF家族配体的改变初步探讨其杀伤机制.
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彩超诊断胎儿脐带绕颈的临床意义
脐带因素一直是导致分娩期急性胎儿宫内窘迫的常见而又难以防范的高危因素之一.正确预测脐带异常并准确评估其对分娩的潜在风险,是目前产科急待解决的难点之一.任何影响脐带血运通畅的因素均可导致胎儿窘迫,多种因素中以脐带缠绕引起胎儿窘迫为常见.其发生率20%~25%左右,又以胎儿脐带绕颈多见.如能早期诊断,恰当处理,可降低围产儿死亡率.我院于2001年12月用彩色多普勒超声诊断胎儿脐带绕颈,测定脐动脉S/D比值与分娩情况Apgar评分进行了对比分析,现报告如下.
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维生素D对冬季母乳喂养婴儿血清25-羟维生素D水平的影响
目的 了解常规口服鱼肝油对纯母乳喂养婴儿冬季血清25-羟维生素D[25(OH) D]水平的影响.方法 采用自身对照方法,于2009年12月至2010年2月,以首都儿科研究所附属儿童医院各项检查正常孕妇分娩的新生儿为对象,取脐带血2 ml,分离血清.新生儿自出生后第15天开始补充鱼肝油,随访至4个月,采集纯母乳喂养婴儿的空腹静脉血2 ml,分离血清,与脐带血清同时检测25(OH)D.结果 共43例纯母乳喂养婴儿,其中男26例,女17例.脐带血清25(OH)D为(20.9±5.1) nmol/L (12.5 ~32.1 nmol/L),维生素D缺乏率为100%.第4个月婴儿静脉血清25(OH)D为(106.3±42.4) nmol/L (30.2~208.5 nmol/L),其中4例<50 nmol/L(维生素D缺乏率9.3%),7例50 ~ 75 nmol/L,25例75~150 nmol/L,7例>150 nmol/L.血清25 (OH)D水平与口服鱼肝油量呈正相关(r=0.530,P=0.001).鱼肝油漏服率(漏服时间/应服时间)平均为36.1%(39/108),血清25(OH)D与漏服时间呈负相关(r=-0.634,P=0.001).结论 北方冬季新生儿普遍存在维生素D缺乏,母乳喂养婴儿每日口服鱼肝油可显著提高血清25(OH)D水平,但漏服不能确保婴儿免于维生素D缺乏.
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采集脐带血的手术配合
目的:探讨脐带血采集的手术配合,以指导临床实践,提高脐血的质量和数量,提高合格率.方法:采用密闭式采集法,胎儿娩出后,在无菌操作下5分钟内完成采集.结果:2009~2010年分别成功采集脐带血样56份(2009)和70份(2010),各个血样脐血无凝集,脐血量足够,脐血无污染.结论:高效的采集技术和无菌观念、合适的供应者,是保证脐带血质量和数量的有效方法,是治疗疾病成功的保证.
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内皮祖细胞在慢性肾脏疾病患者心血管疾病发生中的新进展
以往研究认为内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)仅存在于胚胎发育阶段,之后的研究发现EPCs也存在于成体.目前的研究结果发现,EPCs主要来源于胚胎的中胚层和出生后的骨髓,是一群被发现的同时存在于胎肝、脐带血和成人外周血中、能够分化为内皮细胞的多潜能细胞,这群细胞具有修复损伤内皮细胞以及增强组织缺血后血管发生(vasculogenesis)和血管新生(angiogenesis)的作用.
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脐血采集中的伦理法律问题及护理对策
现代医学证明,脐血在生命科学研究和临床医学方面具有越来越广阔的应用前景,世界各国都相继建立了脐血库[1].脐血采集是脐血研究和脐血库供源的重要一环,采集工作主要由助产士或护士操作.如何采集才能取得高质量的脐血?怎样的护理对策才能避免采供之间的矛盾纠纷?现还在探索之中.1992年以来,我院为科研和脐血库采集脐血万余例,曾遇各种矛盾纠纷问题,直接影响了采集工作的进行.为使脐血采集工作更好的服务于临床,总结分析问题发生的原因,对脐带血采集中所涉及的伦理法律问题及护理对策进行讨论.
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脐血源干细胞的特性及临床应用
一、脐血干细胞的概念及其主要成分的生物学和免疫学特征
(一)脐血干细胞的概念及其主要成分
脐血是指足月胎儿娩出后,经结扎脐带后引流收集到的残存在胎盘和脐带中的血液。脐血干细胞是脐带血中富含的一类具有自我更新和多向分化潜能的原始祖细胞。在一定条件诱导下可分化为所需的目的细胞或组织。目前发现脐血干细胞中主要是脐血源造血干细胞(CB-HSCs)和脐血源间充质干细胞( CB-MSCs ),另外还有极少量的脐血源无限制成体细胞(USSC)、脐血源内皮祖细胞(CB-EPCs)等具有增殖分化能力的早期干/祖细胞[1]。 -
间充质干细胞的免疫学特性与系统性红斑狼疮的治疗
系统性红斑狼疮(SLE)是一种以多器官或多系统病变和血清中出现多种自身抗体为特征的自身免疫性疾病.SLE传统的治疗方案,如糖皮质激素联合免疫抑制剂治疗,虽能有效提高SLE患者的长期存活率,但部分患者仍然复发,部分患者治疗无效,这类SLE被称为难治性SLE,而糖皮质激素及免疫抑制药物不良反应大,骨髓抑制和感染的发生率高.SLE目前尚无特效的治疗方法,近10年来大量实验与临床证据显示干细胞包括间充质干细胞(MSC)、[脐带血MSC(UC-MSC)或其他来源的MSC]具有显著的组织与细胞修复、抗纤维化、免疫抑制与免疫调节功能.MSC在治疗SLE上取得了一定的疗效,而理论上MSC的生物学作用可用于治疗SLE.
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流式细胞仪与免疫磁珠分选法纯化脐血嗜碱粒细胞的比较
近年来研究结果显示,嗜碱粒细胞在过敏反应炎症中担当重要角色,是炎症的发起者和传播者~[1].嗜碱粒细胞占外周血白细胞的小部分(<1%),提纯一定数量的嗜碱粒细胞就需要较多的血,这限制了对它的深入研究.产妇脐带血血量较多,可得到50-150 ml的量,而且脐带血尚未直接受到外界抗原刺激,是研究过敏性疾病发病机制的理想标本.本研究比较流式细胞仪分选和免疫磁珠分选两种方法提纯产妇脐带血中嗜碱粒细胞的分选效率.
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脐带血造血干细胞研究与应用展望
自1988年Gluckman报道用人白细胞抗原(HLA)匹配同胞脐带血移植治疗范可尼(Fanconi)贫血获得成功以来,脐带血作为一种重要的造血干细胞来源日益受到重视,并在脐带血干细胞生物学、脐带血干细胞库和脐带血干细胞移植临床应用方面取得了长足的进展.
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人造血细胞不同分化与发育阶段的免疫表型研究现状
所有血细胞均来源于一个共同的祖先,即造血干细胞(HSC),它是由胚胎干细胞发育而来的,主要存在于骨髓、新生儿脐带血、动员的外周血和其他造血组织中.造血干细胞在自我更新的同时,也在不断地分化和成熟为某一特定类型的血细胞.
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三种标记法对脐血CD34+造血干细胞绝对计数的比较分析
CD34抗原的相对分子质量为105 000~120 000,选择性地表达于早期造血干/祖细胞、小血管内皮细胞和胚胎纤维母细胞表面,该抗原在原始造血中表达强,随着细胞分化,其表达水平逐渐减弱直至消失,因此一直作为干/祖细胞表面的一种特征性标志而广泛应用于造血干细胞基础研究和临床[1].脐带血中含有丰富的造血干/祖细胞,被认为是极具潜力的继骨髓和外周血后的第3种造血干细胞来源.
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"脐带血输注"治疗白血病与骨髓移植是否相同?
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脐带血暴利令人咋舌
造血干细胞治疗血液病等已非常成熟.除了这项技术,其他干细胞技术现在尚处于临床试验阶段.但不少医疗机构打着“研究”的名号,将干细胞治疗吹得“神乎其神”,向患者推广,谋取利润.随着利益链的延长,干细胞的重要来源——脐带血的采集和存储也形成了非法渠道.
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脐带血干细胞治疗肝硬化失代偿期疗效观察
目的 观察脐带血干细胞治疗肝硬化失代偿期患者的临床疗效.方法 肝硬化失代偿期患者16 例,Child-Pugh分级均为B或C级.无菌采集正常分娩或剖宫产胎儿脐带血,分离干细胞,经肝动脉介入将干细胞悬液定植入肝脏.分别观察干细胞治疗前及治疗后2、4、12周患者临床症状、腹水、血液生化指标、凝血相关因素、甲胎蛋白等变化,测量肝脏体积改变并完成12周随访.结果 经脐带血干细胞治疗后12周,患者乏力、纳差、腹胀等症状明显改善,14例患者腹水消失(87.5% ),所有患者下肢浮肿消失.术后12周白蛋白合成明显增加,白蛋白水平由术前29.8 g/L升至36.2 g/L,增幅达6.4g/L(P < 0.01 );前白蛋白(PA )水平由72.46 mg/L升至107.11 mg/L,增幅达34.65 mg/L(P <0.01 );凝血酶原活动度(PTA )由46.4%升至53.26%(P < 0.01 ).所有患者均未发现与治疗相关的严重不良反应及并发症.有11例患者治疗12周后,肝脏体积有所增加(69.0% ),平均增加幅度为9.7%.结论 脐带血干细胞治疗晚期肝硬化失代偿期,可明显改善临床症状,促进腹水消退,提高肝脏合成白蛋白和前白蛋白能力,显著改善凝血功能.
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体外诱导人脐血间充质干细胞未能向心肌细胞转分化
目的 选择从人脐带血中分离出的间充质干细胞(UCB1-MSCs),通过5-氮胞苷(5-aza)进行诱导,对其体外向心肌细胞转分化的能力做初步探讨. 方法培养第11代hMSCs,加入6、9、12 μmol/L的5-aza分别作用24 h和48 h,相差显微镜观察细胞形态直到3周后实验结束.以未经处理的细胞为对照组.采用RT-PCR检测心肌转录因子MEF2C、GATA4、Nkx2.5和心肌特异性基因MLC-2v、MLC-2a、Connexin 43及α-actinin的表达;免疫荧光染色检测Connexin 43和α-actinin的表达,以共聚焦显微镜成像. 结果经5-aza诱导后观察3周未见细胞的自发搏动.诱导前后的hMSC均可不同程度的表达MEF2C、Connexin 43及α-actinin.在12 μmol/L水平诱导24 h和6、9、12 μmol/L水平诱导48 h共4个组中可见MLC-2 a的表达.GATA4 、Nkx 2.5和MLC-2 v在诱导前后均未见表达.免疫荧光染色显示诱导前后hMSCs的胞浆内存在散在排列无序的α-actinin和Connexin 43荧光,而始终未见肌小节结构. 结论经5-aza诱导UCB 来源hMSCs在基因水平可以表达部分心肌特异性基因,但是在诱导后的一个月时间内未见相应的心肌特异性结构出现,此类细胞向心肌细胞转分化的能力需再证实.
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脐带血干细胞在非血液系统疾病中的应用
胚胎干细胞由于能够发育成为身体的任何组织,因而成为再生医学应用的佳干细胞来源.可是现在的胚胎干细胞应用受到伦理、政治、生物学和调控障碍的许多限制.在脐带血中能够获得大量的多能、非胚胎干细胞,脐带血干细胞能够在体内、外产生造血、上皮、内皮和神经组织.因此脐带血干细胞能够治疗包括心血管、眼、整形外科、神经学和内分泌障碍在内的多种不同的疾病.近脐带血在好几种再生医学临床研究中的使用已经证实它的多向性特性.在此,我们对脐带血在再生医学中应用的新进展进行综述.
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IL-4,IL-6和TNF-α对脐带血来源的间充质干细胞成骨分化的作用
目的 探讨细胞因子IL-4,IL-6和TNF-α对脐带血来源的间充质干细胞成骨分化的作用.方法 取脐带血,以Percoll分离液离心分离细胞后进行培养,通过流式细胞仪检测间充质干细胞标志物CD29和CD44及造血干细胞标志物CD34;干细胞进行基础成骨分化培养后,以10 ng/mL细胞因子IL-4、IL-6和TNF-α进一步诱导,检测ALP活力,以茜素红对细胞进行钙结节染色比较.结果 分离的细胞高表达CD29和CD44,基本不表达造血干细胞标志物CD34,为较纯的间充质干细胞;IL-4,IL-6诱导成骨9d后,ALP活力相比阴性对照组显著增加(P<0.01);IL-4、IL-6和TNF-α作用细胞18 d时,钙结节的形成个数为(6.4±1.78)、(11.2±1.75)、(4.5±1.90),较阴性对照组(0.6±0.84)显著增加(P<0.01),其中IL-6作用后ALP活力增幅大,钙结节形成的数目多.结论 IL-4、IL-6作用9d,可刺激间充质干细胞成骨分化,其中IL-6作用为明显.
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分娩前母血、脐血、新生儿血骨代谢相关激素水平及其意义
目的测定新生儿血清骨代谢激素水平及探讨其临床意义.方法采用放射免疫与免疫放射分析法测定89例新生儿脐带血清,22例出生3天婴儿血清骨钙素(BGP)、降钙素(h-CT)和甲状旁腺素(iPTH)水平.结果新生儿脐带血BGP、h-CT和iPTH水平分别为19.3±16.8μg/L、78.9±51.5 ng/L和0.22±0.16 pmol/L((x)±s),与分娩前母血比较,差异非常显著,P值分别为P<0.01、P<0.01和P<0.01;出生3天婴儿血清BGP、h-CT和iPTH水平分别为7.4±2.3μg/L、57.8±13.8 ng/L和5.6±1.69 pmol/L((x)±s),与新生儿脐带血比较差异非常显著,P值分别为P<0.01、P<0.01和P<0.01.结论本研究结果表明新生儿骨代谢激素的放射免疫测定是研究新生儿骨代谢变化的重要检测手段.