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免疫组化技术(二)
2 免疫组化理论2.1 免疫组织化学免疫组织化学是一项用抗原-抗体相互作用鉴别细胞或组织成分(抗原)的技术,抗体连接的位点可通过抗体直接标记或使用二级标记法鉴别.
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胃癌细胞凋亡与巨噬细胞浸润的关系及其意义
有研究表明细胞凋亡与肿瘤发生、发展及治疗有关,有资料证实多种基因参与了细胞凋亡调控[1,2].我们应用原位DNA末端转移酶标记法(TUNEL)和免疫组织化学技术,就细胞凋亡与巨噬细胞浸润的关系进行研究,为胃癌治疗和预后预测提供帮助.
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抗体鸡尾酒法在免疫组织化学标记中的应用
肿瘤组织常含有多种抗原成分,要在一张切片上同时显示多种组织抗原,往往需要采用双标记或三标记方法.然而,反复在一张切片上进行操作容易引起脱片,从方法学角度看也颇为费时费力.为此,作者设计了抗体鸡尾酒标记法,用p53/CD34标记了325例肺、食管、胃肠、膀胱及子宫等部位的上皮性肿瘤,同步显示p53表达水平、微血管密度及脉管受累情况;用p63/α-平滑肌肌动蛋白(SMA)标记了15例乳腺病变组织,显示肌上皮细胞的基本结构.
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BrdU单克隆抗体的制备及鉴定
DNA的5-溴,2'-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记法近年来作为一种新的、简便、敏感特异的检测方法,在肿瘤生物学、遗传学、分子生物学特别是细胞增殖动力学等领域得到广泛应用,在一定程度推动了相关学科的发展.为了满足广泛开展BrdU标记DNA检测对BrdU特异性单抗的需要,我们制备了一株产生BrdU单抗的杂交瘤细胞株.本文对此细胞株制备过程及单抗鉴定情况作了简单叙述.
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三种标记法对脐血CD34+造血干细胞绝对计数的比较分析
CD34抗原的相对分子质量为105 000~120 000,选择性地表达于早期造血干/祖细胞、小血管内皮细胞和胚胎纤维母细胞表面,该抗原在原始造血中表达强,随着细胞分化,其表达水平逐渐减弱直至消失,因此一直作为干/祖细胞表面的一种特征性标志而广泛应用于造血干细胞基础研究和临床[1].脐带血中含有丰富的造血干/祖细胞,被认为是极具潜力的继骨髓和外周血后的第3种造血干细胞来源.
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胃癌患者血清TNF-α的水平及意义
目的:探讨检测肿瘤坏死因子(TNF-α)血清水平对于判断胃癌临床分期的价值和意义.方法:应用酶联免疫标记法(ELISA)检测胃镜活检病理、手术切除证实的胃癌患者以及晚期姑息治疗的胃癌患者103例血清TNF-α水平,并与26例确诊为浅表性胃炎患者比较.结果:早期、中期、晚期和终末期胃癌患者血清TNF-α水平(135.46±27.5,238.9±55.8,252.04±34.7和202.86±53.3 pg/mL)显著高于胃炎患者(60.41±11.4 pg/mL,P<0.01),而中晚期患者也显著高于早期患者(P<0.01).结论:早期检测TNF-α有助于胃癌的临床分期、观察治疗效果和判断预后与复发,可作为辅助诊断指标.
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GnRH类似物诱导肝癌细胞凋亡的体外研究
目的:研究GnRH类似物阿拉瑞林诱导体外培养的人肝癌细胞株SMMC-7721发生凋亡的作用,为GnRH类似物用于肝癌的内分泌治疗提供实验资料.方法:采用MTT法、形态学透射电镜观察和末端脱氧核苷酸标记法观察被阿拉瑞林处理后的SMMC-7721细胞的形态学和生化等指标的变化.结果:MTT法研究结果表明阿拉瑞林在10-9 mol/L浓度时即可诱导7721细胞凋亡,并呈量-效效应.透射电镜下可观察到早期凋亡细胞和晚期凋亡细胞以及核染色质浓缩并见凋亡小体.末端脱氧核苷酸转移标记法进一步证实阿拉瑞林可以诱导肝癌细胞凋亡并可见凋亡小体;与对照组相比,阿拉瑞林处理后TUNEL凋亡指数显著增加(0.29±0.06vs0.11±0.03,P<0.05).结论:GnRH类似物可诱导体外培养的肝癌细胞株SMMC-7721发生凋亡,从而提示GnRH类似物对人肝细胞性肝癌具有潜在的治疗作用.
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骨肉瘤大剂量化疗致死一例及文献复习
患者,女,15岁.主因右膝部疼痛、不适1个月干2007年4月17日入院,于2007年6月16日治疗无效死亡,共住院治疗62d.患者于1个月前无明显诱因出现右膝内侧疼痛,走路时症状加重,休息后减轻,无发热,无夜间痛.X线片示:右股骨内髁可见高密度影,侵及骨骺,病变边界不清.MRI示:在T1T2均显示股骨内髁低信号影,软组织肿胀,考虑为骨肉瘤收入我科.入院后查体:患者轻度跛行,无静脉曲张,右股骨远端软组织肿胀,皮温高,局部压痛,叩击痛,无放射性疼痛,膝关节伸曲活动度0-5-130(中立位标记法),腹股沟淋巴结无肿大,余未见异常.入院诊断:右股骨内髁骨肉瘤.
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HIV抗体快速诊断试剂的研究及应用进展
1 概况艾滋病病毒(HIV)抗体快速诊断方法是目前常用的HIV抗体检测方法之一.有免疫斑点、免疫层析及凝集试验,主要包括硒标记法、金标记法和凝集(明胶颗粒凝集、乳胶凝集和自身红细胞凝集)法.
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细胞核标记物5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷的研究及应用进展
细胞移植疗法是现代医学发展为迅速的领域之一,采用干细胞治疗技术修复退变的椎间盘,是治疗早中期椎间盘退变的理想方法[1]。为了解细胞移植后在体内的存活、迁徙、分布和转归等情况,需要依赖合适的示踪技术将细胞加以标记,以进行识别和监测。细胞核标记法是常用的示踪方法之一,5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(5-Ethynyl-2'-deoxyuridine, EdU)是新一代细胞核标记物,近年来广泛应用于检测DNA复制、细胞增殖以及细胞标记。与传统的免疫荧光染色检测方法相比,EdU检测方法更为简单、快速、准确,且对细胞生长分化影响小[2,3],具有良好的应用前景和发展空间。
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冠心病患者血小板活化因子(CD62p、CD63)表达的临床意义
血小板功能和活性的改变是冠心病(CHD)血栓形成的主要环节[1].血小板活性增强不仅促进动脉粥样硬化的发生,更是导致冠状动脉血栓和急性心肌梗死的重要原因.我们应用美国Becman Culter公司的流式细胞仪(FCM)及单克隆抗体标记法技术检测血小板活化因子CD62p、CD63,旨在探讨CHD患者血小板活化因子表达的临床意义.
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各种标记法在微量泵中的应用
临床上一些急危重病人由于病情需要,需应用微量泵同时泵入几种药物,这样我们交接班时需一个一个查看有没有特殊药物,很浪费时间且有时容易出错,我科利用不同颜色标签在微量泵中应用,收效甚佳,现报道如下.1方法除常规泵上药物在注射器上贴上写有床号、姓名、药品、浓度、配药者姓名及配药时间外,在接上微量泵后,将不同颜色标签贴在微量泵管道前后端上,便于交接班查看,避免静注药物时接错管道.通常血管活性类药物如多巴胺、硝酸甘油用黄色标签,镇静类如咪唑安定用绿色标签,氯化钾用黑色标签,气滴液用红色标签,普通药物如潘托拉唑钠用白色标签,这样哪一泵即将泵完,一目了然,可报告医师提前开出医嘱并配好药物,防止血管活性类药物中断使用,导致病人病情发生变化现象发生.
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染色及单克隆标记法检测尿沉渣的临床应用研究
为了评估无创伤性检查结果对不同肾脏疾病的实验诊断价值,用阿利新蓝-中性红染色法和标记抗体(直接、间接)法对尿沉渣进行了对比观察,现报道如下.
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两种放射性药物标记法在单光子发射计算机断层显像脑血流灌注显像的应用探讨
核素脑血流灌注显像是核医学影像技术在神经系统疾病基础研究和临床诊断常用的方法,广泛应用于各种脑部疾病和精神活动障碍疾病的诊断,可以分析某区域脑组织的脑血流灌注和功能.癫痫病灶的定位早已得到国内外学者的肯定,定位率明显优于CT和磁共振成像(MRI)[1].实践中放射性药物的标记率直接影响图像质量,为此,我们对已往的放射性药物标记进行改进,现报告如下.
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苯酚与脱氧核糖核酸的相互作用
苯在人体内可代谢为苯酚、氢醌、苯醌等多种代谢产物.研究毒物代谢产物与DNA相互作用的方法有体内同位素前标记法[1]、体外加合物的研究[2]、体内加合物的研究[3]等,这些方法多在生物体内或在体外细胞组织中进行,由于生物代谢的复杂性,单种毒物与DNA的相互作用的实验结果不明确,不能考察单种毒物对DNA损伤机制.因此,从分子水平讨论DNA与毒物的相互作用,可以更加准确地阐明DNA损伤机制,为认识致癌机制,有效治疗癌症提供依据.本文通过循环伏安法和荧光光谱法、紫外光谱法、量子化学方法研究苯酚与DNA的相互作用方式.现将结果报告如下.
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32P-后标记法检测DNA加合物进展
DNA加合物是化学毒物经生物转化后的亲电活性产物与DNA分子形成的共价结合物,是一种分子水平暴露标志物。DNA加合物在分子流行病学、分子毒理学及环境科学的研究中具有十分重要的意义,主要表现在以下几个方面:(1)通过对致癌物-DNA加合物的生物监测,可以更为确切的评估人类接触环境中化学毒物的剂量。DNA加合物提供的是个体“内接触”量或“有效接触”量,而且DNA加合物的形成与暴露量及暴露时间之间有明显的剂量-反应关系和时间-反应关系。(2)形成DNA加合物导致DNA分子的损伤,这种DNA损伤一旦不能被修复或被错误修复,就可能导致基因突变,进而导致肿瘤的发生。(3)检测DNA加合物能够提供化学毒物的代谢活化信息,研究DNA受损机理及个体对DNA损伤的修复能力。目前DNA加合物的检测方法除了各种色谱法外主要有:免疫法、荧光法和32p-后标记法等,其中32P-后标记法由于具有极高的灵敏度(1个加合物/108-10正常核酸),从而成为近年测定DNA加合物的主要方法之一,本文对32P-后标记法近年来的发展变化,存在的问题及发展方向作一简要综述。
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标记法在儿科预防非计划性拔管护理中的应用
目的 在儿科导管护理中,采取在留置导管外露段做标记的方法,使导管护理观察有据可依,从而提高导管护理质量,降低儿科患者非计划拔管的发生率,并了解其在临床应用的效果.方法 将168例患儿随机分为观察组和对照组各84例,对照组使用常规导管观察护理方法,观察组在对照组基础上在导管外露段做长度标记,比较两组临床应用效果.结果 观察组患儿非计划性拔管率为2.38%(2/84),低于对照组10.71%(9/84),差异有统计学意义(P<0.05).结论 长度标记法进行导管护理观察的方法,易于操作,利于观察,有据可依.能及时准确的观察导管的留置长度,固定效果及早期导管滑脱迹象等情况,有效的预防了非计划性拔管的发生.
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两种方法标记99mTc抗CEA单抗及其鼠放免显像的比较研究
目的评价两种方法99mTc标记抗CEA单抗与结肠癌肿瘤细胞表现相关抗原的亲和性.方法分别采用2巯基乙醇法(2-ME)和亚氨基噻吩盐酸盐(2-IT)法,以新鲜99mTc淋洗液标记抗CEA单抗,并对荷人结肠癌裸鼠进行SPECT显像,比较两种标记方法的显像效果.结果2-ME法标记单抗在实验所得佳标记条件免疫活性(B/T%)69.1%,标记率为88.7%,胶体含量8.1%.2-IT法标记的单抗免疫活性可达73.2%,标记率为93.7%,胶体含量4.8%.稳定性以2-IT方法为佳标记后1、2、6、12小时放化纯皆在90%以上,标记操作时间和标记方法二者各有优缺点.二者在荷瘤裸鼠的瘤体内显像清晰,2-IT法标记抗体的瘤本比值(T/NT)为5.33±1.11,2ME法为4.11±1.53,血池和肝肾的放射性以2-ME法为高.结论表明以2-IT法和2-MT法预处理抗CEA单抗皆具有达到外接巯基的目的,可有效进行99mTc标记,较少损伤蛋白活性,标记方法简单,放射性核素标记的抗CEA单抗对瘤体具有较高的亲和力,适用于SPECT显像.其中以2-IT法标记率高,胶体含量少,稳定性强,T/NT值大等优点,更适用于放射免疫显像
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慢性荨麻疹患者过敏原特异性IgE抗体检测
慢性荨麻疹(chronic urticaria,CU)是人们常见的一种皮肤病,引起的原因很多;由于不慎食入或接触过过敏原而引起的慢性荨麻疹占有较大比率.我们采用免疫标记法检测70例慢性荨麻疹患者的血清,了解其过敏状况以指导临床预防及治疗,现报道如下.
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99mTC-RBC体内标记法在诊断下消化道活动性出血中的应用
临床上对不明原因的消化道活动性出血在诊治上存在着一定困难,而99mTC-RBC体内标记法对活动性消化道出血有较好的临床使用价值,为进一步诊治提供依据.我院自1985年10月~1995年9月共收治32例不明原因的下消化道出血病员,对其进行了99mTC-RBC体内标记法显像,现将结果报告如下.