探讨HBcAg在免疫组化染色过程中的热修复敏感性

近年来,随着免疫组化技术的发展和各种特异性抗体的出现,使许多疑难肿瘤病例得到了明确诊断.在常规肿瘤病理诊断中,5％ ～ 10％的病例仅靠HE染色难以做出明确的形态学诊断,这就要依靠免疫组化检测来帮助鉴别,尤其在低分化或未分化肿瘤的鉴别诊断中准确率可达50％ ～ 75％[1].

乙型肝炎病毒核心蛋白在长期培养淋巴细胞中的表达

目的构建表达乙型肝炎病毒核心蛋白(HBcAg)的真核表达载体,并在外源性人端粒酶逆转录酶基因转导的正常人外周血淋巴细胞中进行稳定表达.方法用PCR法获得编码乙型肝炎病毒核心蛋白的基因,利用基因重组技术构建表达该蛋白的真核表达载体,用质粒转染表达外源性人端粒酶逆转录酶的外周血淋巴细胞,间接免疫荧光及Western blot检测HBcAg在细胞内的表达.结果表达外源性人端粒酶逆转录酶的外周血淋巴细胞能够在体外长期生存,增殖旺盛.间接免疫荧光及Western blot均能够检测到HBcAg在细胞内的表达.结论乙型肝炎病毒核心蛋白基因在长期培养淋巴细胞中表达,建立了一种较理想的乙型肝炎病毒核心蛋白细胞模型.

HBsAg、HBcAg及actin蛋白在乙肝病毒携带者肝穿组织中的表达及意义

目的 观察乙肝病毒携带者肝组织中乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)及肌动蛋白(actin蛋白)的表达,以探讨其表达规律和意义.方法 采用免疫组织化学技术,对24例乙型肝炎病毒携带者行B超引导下肝脏组织穿刺,以期对肝组织中HBsAg、HBcAg及actin蛋白的表达情况进行分析,并以10例正常肝组织作为对照.结果 在24例乙肝病毒携带者中HBsAg、HBcAg及actin蛋白阳性表达率中分别为100%、50%和90%.在10例正常肝组织中的表达率分别为10%、0和10%,其差别有显著性意义(P<0.05).结论 在肝炎的发生和发展过程中伴随着包括HBsAg、HBcAg及actin蛋白的表达变化,常规行肝脏病理检查及了解HBsAg、HBcAg及actin蛋白表达情况,筛检出需要抗病毒治疗的病例,可为探索治疗乙肝病毒携带者的临床用药提供新的思路.

纤维化淤胆性肝炎肝组织HBV-DNA的原位检测及HBV抗原表达

目的 观察纤维化淤胆性肝炎(fibrosing eholestatic hepatitis,FCH)肝组织HBV-DNA及HBV抗原表达特点.方法 肾移植术后乙型肝病毒(HBV)相关性FCH肝组织标本9例,对其肝组织分别进行HBV-DNA原位杂交及HBcAg、HBsAg免疫组织化学检测,并观察其血清HBV-DNA水平.结果 9例患者肝组织HBV-DNA、HBcAg、HBsAg表达强度的平均吸光度值分别为:5.02、17.09、10.92.血清HBV-DNA平均水平为2.29×107copies/ml.结论 肾移植术后HBV相关性FCH的发病机制与肝组织存在HBV-DNA的活跃复制及HBcAg、HBsAg抗原的强表达相关.

乙型肝炎病毒前S1抗原与抗体的研究进展及临床应用

1965年Blumberg发现了"澳大利亚抗原",随后确定是HBV标志物.1970年英国的Dane等人在电镜下鉴定了HBV颗粒,并阐明了颗粒的表面成分HBsAg、核壳成分HBcAg和HBeAg,从此检测HBV感染的方法学迅速建立.

刺参糖胺聚糖对HBV转基因小鼠肝组织HBV相关抗原表达的影响

目的:研究刺参糖胺聚糖在动物活体内的抗HBV作用.方法:开放性动物实验.HBV转基因小鼠30只,按性别随机分为生理盐水对照组(每天给予等容积的生理盐水)、刺参糖胺聚糖低(30mg/kg)、中(40 mg/kg)、高(50 mg/kg)三个剂量组及干扰素(45 U/kg)对照组,每组雌雄各半,分笼饲养.给药方式为腹腔注射,每日1次,连续用药30 d.给药结束后处死小鼠,剥离其肝脏组织.免疫组织化学染色法及综合评分法观察并半定量分析小鼠肝脏组织HBsAg,HBcAg的表达.结果:与生理盐水对照组比较,刺参糖胺聚糖低、中、高剂量对小鼠肝脏HBsAg,HBcAg的表达均有抑制作用(4.93±1.43,3.57±1.02,3.27±0.64 VS 6.97±0.75;5.73±1.62,4.27±1.03,4.27±1.03 VS 7.23±0.53,P<0.01或0.05),但其抑制作用低于干扰素对照组(P<0.01或0.05),并呈现一定的量效反应关系.结论:刺参糖胺聚糖具有一定的体内抗HBV作用.

酵母双杂交技术对人胰腺cDNA文库中HBcAg结合蛋白基因的筛选

目的: 应用酵母双杂交技术,筛选人胰腺cDNA文库中与HBV核心抗原结合的蛋白的基因.方法:扩增人胰腺cDNA文库并纯化鉴定,将其转化至酵母菌Y187;诱饵质粒pGBKT7-HbcAg转化酵母菌AH109并筛选鉴定.应用酵母双杂交系统3进行配合,在SD/-Trp/Leu-His/-Ade培养基和含X-gal的SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade培养基上进行双重筛选,提取阳性酵母菌落的质粒转化大肠埃希菌DH5α,提取质粒并测序,对测序结果进行生物信息学分析.结果:人胰腺cDNA文库的构建以及pGBKT7-HBcAg质粒转化AH109酵母菌株均获成功,并从人胰腺cDNA文库中筛选出9个与HBcAg蛋白相结合的蛋白基因.分别与以下已知的9种编码蛋白基因序列同源:人胰脂肪酶(PNLIP)、人胆盐刺激酯酶(CEL)、人胰凝乳蛋白C(CTRC)、人胰蛋白酶原、人羧肽酶B1(CPB1)、人线粒体全基因组、人胰弹性酶2A、人辅脂肪酶(CLPS)和人核糖体蛋白(RPL10A).结论:筛选出的与HBcAg蛋白相结合的蛋白基因主要与胰腺外分泌功能相关,HBV感染可能通过与胰腺所分泌的糖、脂类代谢相关的酶类结合,而引发代谢性疾病.

乙型肝炎治疗性疫苗研究进展

成人罹患急性乙型肝炎康复后多表现出针对HBV核衣壳(HBcAg)、多聚酶和包膜蛋白(HBsAg)的多克隆抗体和特异性辅助性T细胞(CD4+T细胞)及细胞毒性T细胞(CTL)应答.

乙型肝炎核心抗原检测及临床意义的探讨

目的探讨HBcAg检测的临床意义. 方法对临床常规乙型肝炎两对半的ELISA方法检测结果与HBcAg,HBV DNA的检测进行比较. 结果共检测113例标本,HBsAg、HBeAg、HBcAb均为阳性时,HBcAg的阳性率为88.7%, HBsAg、HBeAg为阳性时,HBcAg的阳性率为100%, HBV DNA阳性标本中,HBcAg的阳性率为88.0%, HBeAg的阳性率为100%. 结论开展HBcAg的检测可以更全面准确地反映HBV的感染程度及复制情况;用ELISA方法检测HBcAg, HBeAg基本上可以代替PCR HBV DNA的检测来反映HBV的复制情况.

EGFR/HER2联合多肽表位疫苗的构建及体液免疫学分析

构建以乙肝病毒核心抗原(HBcAg)为载体的带有1个EGFR和2个HER2的模拟B细胞表位多肽的融合表达质粒pET28a/HBcAg-△n,表达出融合蛋白并纯化,通过免疫BALB/c小鼠获得抗目的蛋白的抗体.采用PCR法将3个模拟表位插入HBc序列的第78～79位,再将该序列克隆入pET28a载体中,构建重组表达质粒,用大肠杆菌BL21 (DE3)作宿主菌表达出融合蛋白HBHE,纯化后免疫BALB/c小鼠,检测小鼠的体液免疫应答.测序结果表明,重组质粒构建成功,SDS-PAGE电泳显示融合蛋白表达正确,ELISA检测到高滴度抗体.以HBcAg为载体的B表位被成功表达和纯化,获得高滴度的与3个B表位结合的抗体,为进一步研究HER家族成员联合多肽表位疫苗的广谱抗肿瘤作用奠定了基础.

Objective.To study the therapeutic T cell vaccine for the treatment of chronic hepatitis B by improving the cellular immunization of HBsAg vaccine with the coexpression of the preS1 (1- 42) and the Core (1- 144) antigen of HBV in E.coli.Methods.The genes of HBcAg (1- 144) and preS1 (1- 42) were amplified and fused by PCR.This fused gene was inserted in the prokaryotic expression vector pET 11d and expressed in E.coli.Results.It was showed by SDS PAGE that the protein molecular weight of the coexpression product was about 20 kD,20% of all bacteria protein.The monoclonal antibodies against core and preS1 antibody could react with this fused protein by Western blot technique respectively.The fused gene was verified by sequencing.Under the immune electron microscopy,this fused protein is typical particles of HBcAg but in an aggregated form.Conclusion.The results might aid for studying T cell immunotherapeutic vaccine for chronic hepatitis B.

慢性乙型肝炎血清、唾液HBV-DNA与肝组织HBcAg间关系的分析

目的 探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者血清、唾液HBV-DNA水平与肝组织HBcAg间关系及其临床意义.方法 前瞻性分析200例慢性乙型肝炎患者采用荧光聚合酶链反应(FQ-PCR)精确定量配对检测血清、唾液中HBV-DNA含量;同时进行肝活体组织检查,采用免疫组化技术分析肝组织HBsAg,HBcAg.按血清log HBV-DNA水平将CHB患者分为5组.结果 各组血清HBV-DNA与肝组织免疫组化检测HBsAg、HBcAg阳性者之间分析具有显著差异(P＜0.01)并呈正相关(分别为r=0.55,0.80;P＜0.001);分组唾液HBV-DNA水平与肝组织免疫组化HBsAg阳性者之间差异无显著性(P=0.07),而唾液HBV-DNA与HBcAg之间则有明显差异(P＜0.001),并呈显著正相关(r=0.41,P＜0.001).血清、唾液HBV-DNA水平间呈正相关(r=0.73,P＜0.01).结论 慢性乙型肝炎患者唾液HBV-DNA水平与肝组织HBcAg阳性者之间差异具有显著性及正相关,提示检测唾液HBV-DNA与肝细胞内HBcAg具有明确的一致性.首次同时检测唾液HBV-DNA及HBcAg可能对慢性乙型肝炎诊断及疗效观察具有重要影响.

微生物感染的血清学检测

1 乙型肝炎三种抗原、抗体系统检测 乙型病毒性肝炎简称乙型肝炎,由乙型肝炎病毒感染引起的,是威胁人类健康重要的传染病之一.现能分别测定血清中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙型肝炎核心抗原(HBcAg)及抗-HBs、抗-HBe和抗-HBc抗体.

乙型肝炎三种抗原、抗体系统的临床检测

乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒引起的、严重威胁人类健康的疾病,是重要的传染病之一.现能分别测定血清中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙型肝炎核心抗原(HBcAg)及抗-HBs、抗-HBe和抗-HBc抗体.实验室检查对乙型肝炎的诊断及病情判断,具有重要价值.

陵水黎族自治县2009年高中毕业生乙肝表抗携带者调查分析

1965年Blumberg发现"澳大利亚抗原",随后确定为乙肝病毒表面抗原(HBsAg).1970年英国的Dane等人在电镜下鉴定了直径为42nm完整的乙肝病毒颗粒,又称Dane颗粒,并阐明了颗粒的HBsAg、HBcAg、HBeAg等成分.据近年流行病学数据显示,全球HBV感染者达3.5亿,中国更是乙肝发病大国.我国乙肝病毒表面抗原(HBsAg)阳性者占总人口的10-15%左右.趁高考体检的机会,对陵水黎族自治县2009年高中毕业生1287人检测乙肝表抗原(HBsAg)、谷-丙酶(ALT)等情况进行调查.现分析如下.

探讨HBV携带者血清HBcAg与HBV-DNA检测的临床意义

HBV-DNA的核心抗原的编码区位于1901～2450 nt之间,编码的核心抗原蛋白由183个氨基酸残基组成.有免疫缺陷的HBV携带者肝脏的肝细胞内含HBcAg较多.HBV-DNA的C编码区的前C区第1818核苷酸处有1个缺口,该区为HBV-DNA整合宿主细胞DNA的部位.因此,HBV-DNA整合宿主细胞DNA时,常常只表达HBsAg,不表达HBcAg.而HBcAg存在于Dane颗粒和乙肝患者的肝细胞内,所以我们采用裂解的方式打开病毒颗粒,使之游离出来,而HBV-DNA在肝细胞中有游离的和整合的两种状态,同时检测HBV-DNA与HBcAg,观测其相关及临床意义.

乙肝病毒基因产物和HSP70在肝炎相关性肝癌发生中的作用

目的:探讨乙肝病毒基因产物(HBsAg,HBcAg,HBxAg)和热休克蛋白70(hot shock protein 70,HSP70)在乙型肝炎相关性肝癌中的表达及其在肝细胞癌变中的作用.方法:采用组织芯片技术和免疫组织化学染色方法对152例乙型肝炎相关肝细胞肝癌组织、78例乙型肝炎后肝硬化组织中HSP70、HBsAg、HBcAg和HBxAg的表达情况进行检测.结果:与乙型肝炎后肝硬化相比,在乙型肝炎相关性肝癌组织中HBsAg表达显著降低(P=0.000),HBcAg表达显著增高(P=0.000),HBxAg显著增高(P=0.005),HSP70呈现高表达(P=0.000);相关分析结果显示,HSP70的表达和HBcAg的表达呈显著正相关(P=0.009),而和HBxAg的表达未显示相关性(P=0.673).结论:乙肝病毒抗原成分HBcAg、HBxAg以及HSP70参与在乙型肝炎相关性肝癌的发生过程,HBcAg可能通过增加HSP70的表达而参与肝癌的发生.

乙肝病毒基因产物参与肝炎相关性肝癌的发生

目的:探讨乙肝病毒基因产物HBsAg,HBcAg,HBxAg在乙型肝炎相关性肝癌中的表达及其在肝细胞癌变中的作用.方法:采用组织芯片技术和免疫组织化学染色方法对152例乙型肝炎相关肝细胞肝癌组织、78例乙型肝炎后肝硬化组织中HBsAg,HBcAg,HBxAg的表达进行检测.结果:和乙型肝炎后肝硬化相比,在乙型肝炎相关性肝癌组织中HBsAg表达显著降低(P=0.000);HBcAg表达显著增高(P=0.000);HBxAg显著增高(P=0.005).结论:乙肝病毒抗原成分HBcAg,HBxAg参与乙型肝炎相关性肝癌的发生.

乙肝病毒标志阴性慢性病毒性肝炎患者HBV-DNA及肝组织中HBsAg、HBcAg检测的临床意义

目的:探讨HDVM阴性慢性肝炎患者血清HBV-DNA及组织中HBsAg、HBcAg检测的临床意义.方法:对24例原因不明的慢性肝炎患者应用酶联免疫,吸附试验(ELISA法)检测血清HBV-M(HBsAG、抗HBS、HBcAg、抗HBc、抗HBc),抗HAV-IGM, 抗HCV-IgM、IgG,抗HDV-IgM、IGG,抗HEV-IGM、IGG,抗EBV-IGM,抗CMV-IgM,抗TTV-IgM:应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术对患者进行血清中乙型肝炎病毒基因(HBVDNA)定量检测;应用免疫组化法,通过肝组织活检测定患者肝组织中HBsAg、HBcAg的表达情况.结果:24例HBVM阴性肝病患者中,6例可检测到HBV-DNA,其中5例肝组织中HBsAG、HBcAg同时阳性,1例HBsAg(+)、HBcAg(-);18例血清HBV-DNA阴性患者中用肝组织活检者3例,其中1例肝组织中HBsAg、HBcAg同时阳性. 结论:HBVM阴性不能排除乙型肝炎病毒感染,应结合血清HBV-DNA测定及肝组织中HBcAg、HBcAg的检测,以防漏诊、误诊.

死胎脐带组织中HBcAg表达的临床和病理研究

目的:观察乙型肝炎病毒是否通过产妇传播在胎儿脐带组织表达.方法:采集40例乙型肝炎产妇产下的死胎,常规尸检,取脐带组织,SP法检测HBcAg,回访婴母产前静脉血HBV的检测结果,取百分率行u检验.结果:HBcAg阳性颗粒在死胎的脐带血管内皮细胞浆、血管中呈点、灶状分布,脐带血管内皮细胞核不着色.静脉血HBV小三阳与HBV单项阳性和大三阳的产妇分娩的死胎脐带组织中HBcAg阳性率比较,差异显著(P＜0.05);静脉血HBV单项阳性与大三阳的产妇分娩的死胎脐带组织中HBcAg阳性率比较,差异不显著(P＞0.05).结论:乙型肝炎病毒可以通过胎儿脐带组织血液流动来实现母婴垂直传播,乙型肝炎产妇的脐血HBV感染与孕妇静脉中HBV标志有关.