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精液上游分离法对精子正常形态和核完整性的作用
精子分离制备技术的应用由来已久,上游分离法具有操作简便、成本低廉、副反应少等优点仍被一些辅助生殖技术实验室采用.该方法主要有助于富集前向运动精子及减少标本中的非精子细胞成分.
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上游法处理逆行射精患者尿液中精子行人工授精的临床分析
逆行射精是指在性交射精时,有射精动作及快感、高潮,但精液未射出,而是逆向流入膀胱,可以引起男性不育.应首先用立位性交技术、药物或手术治疗以恢复顺行射精,如上述治疗失败,为了解决生育问题则可回收射精后尿液中精子行辅助生殖.从逆行射精患者尿液中回收精子用于人工授精前,一般采用某种营养液多次洗涤,降低了精子回收率.本文采用射精后直接排尿于HTF-HEPES液(带HEPES缓冲液的人输卵管液)中,立即离心,不洗涤,直接用上游法回收有活力(a级+b级)精子,行宫腔内授精(IUI)获得成功,现报告如下.
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宫腔内人工授精助孕患者精子制备方法的选择策略
目的 为丈夫精液正常行自然周期宫腔内人工授精(IUI)第一周期患者选择佳的精子制备方法.方法 采用区组随机分组的方法将研究对象分为4组(标准上游组,直接上游组,密度梯度离心组和密度梯度离心和直接上游组).精子计数应用Makler计数板,形态学分析采用伊红-苏木精染色法,妊娠结果 的判定为IUI28d后行超声监测到胎囊及胎心.结果 四组患者的妊娠率、活产率及流产率无差异.密度梯度离心组的精子处理时间少(13.5分).密度梯度离组的a+b级精子回收率(42.5±15.7)%及a+b级精子总回收数高(55.3±25.7)百万.密度梯度离心组(26.5±11.6)%和密度梯度离心加上游组的回收精子畸型率低(24.7±12.8)%.结论 丈夫精液正常行第一周期IUI自然周期助孕的患者,精子制备方法首选直接上游法.
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一种新的上游法处理异常精液行宫腔内人工授精的应用评价
随着辅助生殖技术的发展,不育夫妇有越来越多的选择,但官腔内人工授精(IUI)仍不失为一种经济、损害小而又有效的方法.我院通过对传统的上游法进行改良,找到一种简便而高效的精液处理方法.
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PC3 prostasomes对精细胞上游筛选后活力的影响
目的 探讨从PC3前列腺癌细胞株中分离出的pr ostasome样颗粒(PC3 prostasome)对上游筛选后精细胞活力的影响。 方法 将新鲜或冻融精细胞置入含PC3 prostasome (0.10 mg/ml或0.25 mg/ml)及人 血白蛋白(HSA，10 mg/ml)的EBSS液中上游筛选后，测试比较活力的差别。 结 果 新鲜标本不同孵育时间和孵育1 h不同参数间比较，PC3 prostasome 0.10 mg/ml组促 精细胞活力作用强于HSA组(P<0.01)，且此作用可持续6 h。冻融复温标本PC3 prostaso me组恢复活力的细胞比HSA组增加63% (P<0.001)。 结论 PC3 prostasome具有与精浆prostasome相同的刺激精细胞活力作用，且此作用强于HSA。
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精子优选方法对人工授精治疗结局的影响
目的:回顾分析不同精子优选方法对人工授精治疗结局是否有影响.方法:选择2010年1月～ 2011年12月在本中心行AIH治疗的504对夫妇共732个周期为研究对象,按精子优选处理方法进行分组:上游法314个周期,密度梯度离心法418个周期,比较两种精子优选方法行人工授精在临床妊振率、流产率和子代性别的差异.结果:上游法和密度梯度离心法的周期妊娠率分别为8.6％、6.7％,流产率分别为25.9％、17.9％,差异无统计学意义(P＞0.05)；两种方法处理后行人工授精的婴儿性别比例比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:上游法和密度梯度离心法应用在夫精人工授精中临床妊娠率、流产率无差异,精子优选方法对子代性别无预测意义.
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3类洗涤法处理不同质量精液标本的效果比较及在IUI中的应用选择
目的:通过比较密度梯度离心法(density-gradient centrifugation,DGC)、上游法(swim-up,SU)和简单洗涤法(simple washing,SW)处理不同质量精液标本的效果,优选出合适的宫腔内人工授精(Intrauterine insemination,IUI)精液洗涤方法.方法:选取男科实验室行精液常规检查的患者中收集精液量≥3 mL的精液标本90份,其中精子浓度<15×106/mL的少精症患者精液标本23份,浓度与活力正常(浓度≥15×106/mL,PR≥32%且PR+NP≥40%)的精液标本67份,每份精液标本各取3个1 mL分别用密度梯度离心法、上游法和简单洗涤法处理.通过不同方法的洗涤处理,比较各组精子洗涤前后的浓度、活力(PR)及回收率.结果:3种处理方法洗涤后的PR较洗涤前均有显著提高(P<0.05);在处理后的精子浓度方面,简单洗涤法处理要显著高于其余两类方法(P<0.05);在处理后的PR和活率(PR+NP)方面,密度梯度离心法和上游法又要高于简单洗涤法(P<0.05);在回收率方面,密度梯度离心法和简单洗涤法则显著高于上游法组(P<0.05).结论:在处理少精症患者精液标本时,上游法因其较低的回收率不适宜被采用;当精子浓度<15×106/mL且精子总数小于正常值(39×106个)时,为保证处理后终前向精子总数>10×106个,精子标本不适合过多次数的洗涤处理,宜采用简单洗涤法;而只有当精液体积较大时,在保证IUI精子终浓度的同时,密度梯度离心法较简单洗涤法能更好地去除白细胞和不成熟生殖细胞等杂质,而更适宜被采用;在处理浓度活力正常精液标本时,密度梯度离心法和上游法较之简单洗涤法能获得更高的精子活力(P<0.05)而更适宜被采用;同时,密度梯度离心法因较之上游法具有更高的回收率(P<0.05),且具备操作易标准化和操作时间短等特点而更具实用价值.
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梯度离心在体外处理精子结合抗体中的应用
目的:比较单纯PureSperm方法和PureSperm联合上游法处理精子结合抗体阳性精子的效果.方法:采用单纯梯度PureSperm及PureSperm联合上游法处理精子结合抗体阳性的精子,比较2种处理方法处理后精子结合抗体消退情况.结果:2种方法处理后,精子结合抗体滴度较处理前降低(P＜0.01)；梯度PureSperm联合上游法处理后,精子结合抗体滴度的下降较单纯PureSperm方法更显著(P＜0.05).结论:采用梯度PureSperm离心或梯度PureSperm离心联合上游法处理精液,可以提高精子质量,再行宫腔内人工授精可能提高免疫性不育的治疗效果.
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宫腔内人工授精中应用上游法和密度梯度离心法的系统评价
背景:精子体外优选方法很多,常见的是上游法和密度梯度离心法.采用何种方法来减少体外处理过程对精子的不良刺激,优选出具有良好受精潜能的精子,目前尚无定论.目的:系统评价上游法和密度梯度离心法在宫腔内人工授精中的应用,比较两种精子优选法的优劣.方法:计算机检索PubMed、Cochrane Library、EMBASE等数据库,手工检索专业相关期刊,检索时间为1966-01/2009-02.纳入关于两种精液优选法在宫腔内人工授精中应用的随机对照试验或半随机对照试验,评价纳入研究的方法学质量,并提取有效数据用RevMan 5.0.软件进行Meta分析.结果与结论:纳入6个研究,包括4个随机对照试验和2个半随机对照试验,共486例患者,1099个周期(优选精子的次数).Meta分析结果显示,上游法与梯度离心法相比,周期妊娠率[OR=1.11,95%CI(0.8,1.55)]、流产率[OR=0.31,95%CI(0.09,1.04)]、精子密度[WMD=-0.89,95%CI(14.17,12.38)]、精子活力[WMD=2.31,95%CI-7.27,2.65)],4项测指标差异均无显著性意义.尽管与其他精子优选法相比,上游法与梯度离心法的周期妊娠率较高,但是该系统评价结果还不能提示这两种方法在宫腔内人工授精应用中何者临床效果更好.建议今后进行更多高质量的随机双盲对照试验为临床提供佳证据,并且增加处理前后精子的质量对比,包括精子活力、精子密度以及精子功能等指标测量,以全面考察两种方法的优劣.
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三种精子处理方法对精子存活时间的影响
目的:探讨浓度梯度离心法、上游法和未经处理精子三种不同精子处理方法对精子存活时间的影响.方法:随机研究男科实验室患者15例,手淫取精后精液标本分为三组6份,未经处理的精子组为A组；浓度梯度离心法处理精子为B组；上游法处理精子为C组.每组又分为室温(25℃)和体温(37℃)组.每天(间隔24h)光学显微镜观察精子的活率、前向运动,EY(伊红)染色评估精子死亡情况,直到精子全部死亡后2天.结果:三组在25℃室温与37℃体温下比较,显著延长精子存活时间,差异有统计学意义(P＜0.05)；B、C组与A组比较,体温及室温均(B组:11.6和28天；C组:9.5和26.7天；A组3.1和18.9天)显著延长精子存活时间,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:精子处理后显著延长其存活时间,包括活率和前向运动；精子在25℃室温较37℃体温下显著延长精子存活时间.
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梯度密度离心法与上游法在冷冻精液供精体外受精-胚胎移植术中应用比较
目的:观察在使用冷冻精液的供精体外受精-胚胎移植术中采用梯度密度离心法与上游法处理精液后的妊娠率,比较两种精液处理方法对体外受精-胚胎移植术成功率的影响.方法:回顾本院常规体外受精-胚胎移植术中使用冷冻供精71个周期,其中上游法35周期,梯度密度离心法36周期的资料,观察经上游法和梯度密度离心法处理后精子密度、精子总活动率、前向运动精子活动率等精液情况和受精率、卵裂率、临床妊娠率.结果:梯度密度离心组在精子密度、精子总活动率、前向运动精子活动率3项指标均高于上游组,而受精率、卵裂率、临床妊娠率也是梯度密度离心组较上游组高(P＜0.01).结论:在使用冷冻精液的供精体外受精-胚胎移植术中,采用梯度密度离心法处理精液优越于上游法,能获得更高的受精率和妊娠率.
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改良上游法治疗精液不液化少精弱精症78例临床观察
目的为研究精液不液化、少、弱精症的治疗.方法采用改良上游法优选精子,将取出的精液液化后加入等量上游液混匀后离心去除精浆成分再进行上游处理,将优选好的精子用气囊导管加压进行宫腔内人工授精.结果78例患者配偶共进行243周期治疗,怀孕32例,平均每周期怀孕率为13.4%,比报道为高.
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三种精液处理方法所得精子的体外观察分析
精液处理是人工授精和试管婴儿过程中重要的一环,优化处理精液是为了提高精子的密度和活力,并去除精浆内的前列腺素、抗精子抗体、炎症细胞等不良成分.
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不同精液优化处理方式前后精子质量参数的变化及对IVF-ET结局的影响
目的 比较不同精液优化处理方式前后精子质量参数的变化及处理后精子形态率、精子DNA碎片化指数(DFU对体外受精胚胎移植技术(IVF-ET)结局的影响.方法 选择2014年1月至2015年12月接受IVF-EF技术助孕的患者夫妇130对,精液优化处理采用Isolate密度梯度离心法(A组,n=45)、直接上游法(B组,n=30)、先Isolate密度梯度离心后上游法(C组,n=55);根据处理后精子正常形态率分为形态率≥4％组(n=95)、形态率＜4％组(n=35);根据处理后精子DFI分为DFI＜ 15％组(n=33)、30％≥DFI≥15％组(n=77)、DFI＞ 30％组(n=20).对不同精液优化处理方式前后精子质量参数变化,处理后不同精子形态率和不同精子DFI对IVF-ET受精率、卵裂率、优质胚胎率、妊娠率的影响进行分析.结果 处理前,精子活力、正常形态率、精子DFI三组间相当(P＞0.05).处理后,各组精子活力、正常形态率不同程度升高,精子DFI不同程度下降;且C组精子正常形态率稍高于A组,但无统计学差异(P＞0.05);精子DFI在C组明显低于A组(P＜0.05);在B组与C组差异无统计学意义(P＞0.05).与形态率＜4％组比较,形态率≥4％组的优质胚胎率、生化妊娠率和临床妊娠率均增高(P＜0.05,P＜0.01).不同精子DFI组间在优质胚胎率、生化和临床妊娠率方面均有统计学差异(P＜0.01,P＜0.05),以DFI＞30％组为低.结论 Isolate密度梯度离心结合上游法可显著降低精子DFI,一定程度提高精子正常形态率和精子活力.此外,精子DFI及形态率可影响IVF-ET结局.
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微流控芯片精子分选法对精子常规参数及DNA完整性的影响
目的:研究微流控芯片精子优选技术对精子常规参数及DNA完整性的影响.方法:自行设计制作微流控芯片,利用芯片处理技术和上游法对40例精液标本进行精子优选,通过计算机辅助精液分析系统及染色质扩散试验从精子常规参数及DNA完整性两个方面评价精液体外处理对精子的影响.结果:精液经微流控芯片法和上游法处理后,精子活力、精子正常形态率以及精子尾部肿胀率均有显著提高(P<0.01),精子的DNA损伤率明显降低(P<0.01).微流控芯片法与上游法相比,优选后前者精子DNA损伤率明显低于后者[(8.4±5.8)%vs(16.4±9.2)%,P<0.01],而其他参数差异无显著性.结论:微流控芯片技术在精子优选中能获得精子DNA损伤程度小的高质量精子.
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不孕症患者宫腔内人工授精精子优选方法分析
目的:比较分析精子不同优选方法与官腔内人工授精(IUI)成功率的相关性,以提高IUI妊娠率.方法:回顾性分析本院生殖中心门诊不孕症患者452例671个IUI周期,按精子优选方法分为3组:含5%人血清白蛋白(HSA)的Earle's液上游法、SpermRinse上游法、SupraSperm密度梯度离心法.比较各组患者的处理前后精子密度与活动率及临床妊娠结局.结果:3种精子优选方法处理后精子活动率及a+b级精子百分率显著增加(P＜0.01).含5%HSA的Earle's液上游法221个IUI周期,妊娠21个周期,周期临床妊娠率9.5%;SpermRinse上游法215个IUI周期,妊娠34个周期,周期临床妊娠率15.8%,与含5%HSA的Earle's液上游法比较有显著性差异(P＜0.05);SupraSperm密度梯度离心法235个IUI周期,妊娠34个周期,周期临床妊娠率14.5%,与含5%HSA的Earle's液上游法比较无统计学差异(P＞0.05).结论:SpermRinse上游法的IUI临床妊娠率明显高于含5%HSA的Earleg液上游法,适用于各类不孕症患者.SupraSperm密度梯度离心法也具有较高的周期临床妊娠率,洗涤效果好,操作便捷高效,尤其适用于含炎症细胞、死精子和畸形精子等不良成分较多的精液.
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Isolate液处理异常精液行宫腔内人工授精的应用评价
为寻求简便、高效的精液处理方法,2002年7月～2003年12月,我院通过对不同程度少弱精子症患者精液采用Earle液上游法和双层Isolate液梯度离心法进行对比研究,现报道如下.
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治疗不孕症精子体外处理上游法和Percoll梯度离心法比较
精子经洗涤、上游、离心等体外处理是治疗因少精、精子活力低下、精子液化不良和精浆中存在自身抗体引起的男性不育症常用而有效的方法[1].精子体外处理方法很多,如上游法,下游法,白蛋白梯度法,玻璃纤维过滤法,Percoll梯度离心法等.但经过多年临床实践,上游法和Percoll梯度离心法操作简便,为大多数实验室所选择.我们对两种方法进行了一些比较,现将结果报告如下.
关键词： 不孕症 精子体外处理 上游法 Percoll梯度离心法 -
夫精人工授精精子洗涤上游技术的应用
为了提高不孕症人工授精成功率,自2000年1月至2001年12月,我们对20对不孕夫妇采用了精子上游法行宫腔内授精助孕.
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改良上游法在宫腔内人工授精的临床观察
目的:研究人工授精时对精子损伤小的优化技术.方法:把精子密度≥20×106/mL,活率≥50%的精液随机分为两组,一组采用常规上游法,精液孵育30 min,取上游液离心后收集精子;另一组采用改良上游法,精子孵育3～7 min,静置60～80 min,收集试管底部精子,两组收集的精子均用于作人工授精.结果:常规上游法收集精子的密度显著高于改良上游法收集精子的密度,但改良上游法的妊娠率高于常规上游法.结论:改良上游法的优点是减少共同孵育时间,减少精浆中畸形精子、活力弱的精子上游的比例等,使精子的受精能力提高.
