首页 > 文献资料
-
DHM对3-NP诱导的PC12细胞损伤的保护作用
目的 研究二氢杨梅素(DHM)对3-硝基丙酸(3-nitropropionic acid,3-NP)诱导的PC12细胞损伤的保护作用及可能机制.方法 MTT法测定细胞存活率,TBA(硫代巴比妥酸)法检测丙二醛(MDA)含量,WST-1(水溶性四唑盐)法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性,实验数据采用SPSS17.0软件统计分析.结果 ①MTT结果显示3-NP处理能显著降低PC12细胞的存活率,而DHM预处理对此变化有抑制作用;②MDA测定结果显示3-NP处理能显著增加PC12细胞的MDA含量(P＜0.05),而与3-NP处理组相比,3-NP+DHM组PC12细胞的MDA含量显著降低(P＜0.05),接近对照组水平(P＞0.05);③SOD测定结果显示,与对照组比较,3-NP处理显著降低了PC12细胞SOD的活性(P＜0.05),而3-NP+DHM组PC12细胞SOD的活性较3-NP组有显著提高(P＜0.05),接近对照组水平(P＞0.05).结论 ②DHM预处理能拮抗3-NP诱导的PC12细胞的损伤,其机制可能与降低细胞内脂质过氧化水平,提高抗氧化酶的活性有关.
-
二氢杨梅素联合顺铂显著诱导PC3细胞中Noxa和Bim过表达
目的:探讨二氢杨梅素对前列腺癌顺铂化疗的辅助作用并研究其机制.方法:MTT法检测前列腺癌细胞系LNCaP和PC3在不同浓度二氢杨梅素和顺铂处理下的细胞活力.Western blot实验检测顺铂和二氢杨梅素联用对PC3细胞FOXO1、Noxa和Bim表达水平、细胞色素C从线粒体中的释放及caspase-9和caspase-3活化水平的影响.免疫共沉淀实验检测PC3细胞中凋亡蛋白酶激活因子1(Apaf-1)和caspase-9的相互作用.流式细胞术检测PC3细胞的凋亡率.结果:二氢杨梅素辅助治疗可明显提高顺铂对前列腺癌的体外抗肿瘤活性(P<0.05).二氢杨梅素处理能显著促进PC3细胞FOXO1的表达,转染FOXO1小干扰RNA(siRNA)后,二氢杨梅素对顺铂的辅助治疗效果受到明显抑制.二氢杨梅素联合顺铂能显著诱导PC3细胞中Noxa和Bim的过表达,细胞色素C的释放,Apaf-1和caspase-9的相互作用,caspase-9和caspase-3的活化及凋亡的发生.转染FOXO1 siRNA后,二氢杨梅素联合顺铂对PC3细胞的凋亡诱导途径受到显著抑制.结论:二氢杨梅素可能通过FOXO1-Bim/Noxa途径增强顺铂对前列腺癌细胞的体外杀伤活性.
-
二氢杨梅素联合丝裂霉素对胃癌细胞的生长抑制作用
目的:探讨二氢杨梅素(AMP)联合细胞化疗药物丝裂霉素(MMC)对胃癌细胞SGC-7901的抑制作用.方法:体外培养人胃癌细胞株SGC-7901,分别设空白对照组、AMP组、MMC组以及AMP+MMC组.用MTT法观察细胞生长;流式细胞术分析细胞凋亡率;Western blotting检测细胞Bcl-2及survivin的表达情况.结果:在AMP组中,当浓度在2.2 mg/L-14.84 mg/L时,AMP对胃癌细胞生长均有抑制作用,以14.84 mg/L抑制作用明显(60.85%±1.13%,P<0.05).MMC随着浓度由1×10-3g/L增加至1×10g/L,其抑制率也由17.40%±0.30%增加至72.23%±1.36%,呈递增趋势.AMP联合MMC的抑制作用随着MMC浓度由1×10-3 g/L增加至5×10-3g/L,抑制率也由21.83%±2.50%增加至46.70%±1.45%.联合治疗组优于单独给药组.AMP、MMC及AMP+MMC均可以下调Bcl-2及survivin的表达,其中AMP+MMC组下调作用明显.结论:AMP联合MMC可以增强对胃癌细胞的抑制作用,联合应用可以减低MMC的剂量;其抑制肿瘤作用可能与下调Bcl-2及survivin蛋白的表达有关.
关键词： 二氢杨梅素 丝裂霉素 胃肿瘤 SGC-7901细胞 细胞凋亡 -
二氢杨梅素对小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用
目的：观察二氢杨梅素（dihydromyricetin，DMY）对小鼠局灶性脑缺血再灌注（ischemia/reperfusion，I/R）损伤的保护作用。方法雄性昆明种小鼠随机分为4组，即假手术组，I/R模型组，DMY 高（500 mg·kg-1）、低剂量（250 mg·kg-1）组。改良线栓法制备小鼠大脑中动脉阻塞/再灌注（middle cerebral artery occlusion/reperfusion， MCAO/R）模型，缺血3 h再灌注24 h；术前10 d开始灌胃给药，每天1次，并在缺血前1 h及再灌注后12 h各给药1次。再灌注24h后观察小鼠神经功能缺损评分，取脑测定脑梗死比（%）及脑含水量（%），HE染色观察脑组织病理学改变并计数皮层半暗带区神经元数目，同时测定脑组织MDA含量及SOD、GSH-Px活性。结果与模型组比较，DMY 500 mg·kg-1可减轻脑I/R损伤后神经功能缺损评分，降低脑梗死比和脑含水量，改善脑组织病理学变化及增加皮层半暗带区神经元数量（P<0.05，P<0.01）；DMY 500 mg·kg-1还能明显降低脑组织MDA含量及提高SOD、GSH-Px活性（与模型组比较，P<0.05， P<0.01）。DMY 250 mg·kg-1可降低脑I/R损伤后脑梗死比（与模型组比较，P<0.05）。结论 DMY对局灶性脑I/R损伤有一定的保护作用，保护机制与其抗氧化作用有关。
-
藤茶总黄酮及黄酮醇类化合物的抗血栓作用研究
目的 研究藤茶提取物藤茶总黄酮(TF)、二氢杨梅素(DMY)及杨梅素(Myr)的抗凝血及溶栓作用.方法采用毛细玻璃管法观察对小鼠凝血时间的影响；采用下腔静脉结扎大鼠血栓模型,观察受试药物的抗血栓作用.结果 与正常对照组比较,高剂量(2 mg· kg-1)的TF、DMY及Myr均能明显延长小鼠凝血时间(P＜ 0.05,P＜0.01)；低剂量(0.5 mg·kg-1)的TF、DMY及Myr虽有延长小鼠凝血时间的趋势,但差异无统计学意义.下腔静脉结扎血栓模型结果显示,阳性药川芎嗪、Myr及DMY各组的血栓干重均明显低于正常对照组(P＜0.01,P＜0.05)；Myr高剂量组的血栓湿重明显低于正常对照组(P＜0.01),TF高、低剂量组的血栓湿重、干重与正常对照组比较,差异均无统计学意义.各实验组对血栓的抑制率大小依次为:Myr高剂量组＞川芎嗪组＞ DMY低剂量组＞Myr低剂量组＞DMY高剂量组＞TF高剂量组＞TF低剂量组.结论 Myr和DMY可能是藤茶抗血栓作用的主要有效成分,且Myr的抗血栓作用稍强于DMY.
-
响应曲面法优化藤茶中二氢杨梅素的提取条件
目的 利用响应曲面法优化溶剂辅助提取藤茶中二氢杨梅素的工艺.方法 根据单因素试验结果,选择对二氢杨梅素提取率有影响的因素及水平,采用响应曲面分析法进行设计,选出3因素佳水平作为中心点,对提取时间、提取温度、液料比3因素3水平共17个试验点(5个中心点)的响应曲面分析试验,运用Design-Expert 8.0.5软件对17个试验点的响应值进行回归分析.结果 采用乙酸乙酯作为提取溶剂,响应曲面法优化出的佳提取工艺为:提取时间50.29 min,提取温度47.57℃、液料比25.16∶1(mL:g),提取率为15.580 6％.结论 优选出来的佳提取工艺稳定、可行,提取效率高.
-
二氢杨梅素对不同密度A549细胞抗肿瘤的作用
目的 探索二氢杨梅素对不同密度A549细胞抗肿瘤作用,为肺癌治疗提供新思路.方法 采用MTT法检测5 000个/孔接种密度时不同浓度(0、20、40、60、80、140、200μg/mL)二氢杨梅素对A549细胞作用48 h的抗肿瘤作用;克隆形成实验检测极低密度接种时不同浓度(0、6、7、8、9、10、12、15 μg/mL)二氢杨梅素对细胞存活分数的影响;倒置显微镜观察相同浓度二氢杨梅素对于不同接种密度(1×103、5×103、10×103、50×103、100×103、500×103个/6孔板每孔)的A549细胞形态的影响.其中0 μg/mL即为对照组.结果 MTT法和克隆形成实验结果都显示相同细胞接种密度时,随着药物浓度的增加与对照组相比抗肿瘤作用明显增加(P<0.05);MTT法显示当细胞贴壁密度30%~40%时给药,二氢杨梅素作用A549细胞48 h的IC50为64.45 μg/mL;克隆形成实验显示极低密度接种(400个/6孔板每孔)时二氢杨梅素作用于A549细胞48 h的IC50为8.46 μg/mL;相差显微镜显示同一给药浓度时,细胞密度越低二氢杨梅素引起的细胞固缩和抗增殖作用越明显.结论 二氢杨梅素对A549细胞体外存在抗肿瘤作用,并且抗肿瘤的作用与药物浓度和细胞密度有关.
-
二氢杨梅素对糖耐量异常大鼠肾脏氧化损伤的保护作用
目的 研究二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY)对糖耐量异常大鼠肾脏氧化损伤的保护作用.方法 以D-半乳糖为诱导剂,采用剂量递增全程腹腔注射法建立糖耐量异常动物模型,用DMY作为受试物,实验8周后,测定各实验组大鼠空腹及餐后2 h血糖、血清胰岛素含量;肾脏超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、丙二醛(MDA)含量和肾脏细胞DNA拖尾率;尿微量白蛋白(mAlb)和血清尿素氮(BUN)含量.结果 与糖耐量异常模型组相比,DMY餐后2 h血糖和胰岛素水平及抗性显著降低(P＜0.05);肾脏SOD活性明显增高(P＜0.05),但GSH-Px活性增高不明显(P＞0.05);MDA含量、尿微量白蛋白(mAlb)水平、肾脏细胞DNA拖尾率均明显降低(P＜0.05).结论 DMY可明显改善大鼠糖耐量异常状态,对肾脏早期损伤具有一定保护作用,其作用机制主要与DMY增强大鼠肾脏组织抗氧化能力有关.
-
二氢杨梅素诱导肝癌细胞株HepG2凋亡途径的探讨
目的：探讨二氢杨梅素对人类肝癌细胞株HepG2的抑制生长和诱导凋亡作用及其机制。方法：采用四甲基噻唑蓝比色法测试二氢杨梅素对细胞死亡率和细胞增殖活力的影响，并计算半抑制浓度IC50；通过HE荧光染色法和Annexin V-PI 流式细胞术分别观察和分析二氢杨梅素对肝癌细胞HepG2各个细胞周期的影响，后利用Western 印迹法对与细胞周期和凋亡相关的蛋白群p34cdc-2、CyclinB1、Bcl-2和PARP 在二氢杨梅素作用前后的表达量进行研究。结果：肝癌细胞HepG2的细胞死亡率随着二氢杨梅素溶液浓度的升高而升高，IC50值为（35．22±1．56）μmol / L，且呈现良好量效关系；二氢杨梅素对肝癌细胞HepG2各个细胞周期均有显著影响，其中G2/ M 期细胞比率剧增、S 期细胞比率大幅降低，而G0/ G1期细胞比率则呈指数级减少，与阴性对照组比较，差异具统计学意义（P ＜0．05）；p34cdc-2蛋白的表达量未见变化，CyclinB1蛋白的表达量剧增，Bcl-2蛋白的表达量大幅下降，而PARP 蛋白则因发生水解而表达量有所减少。结论：二氢杨梅素对人类肝癌细胞株HepG2具显著的抑制生长和诱导凋亡的药理作用，其作用机制是通过线粒体信号转导途径，激活含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶Caspase-3，进而参与细胞凋亡。
-
二氢杨梅素对小鼠急性脑缺血缺氧的保护作用
目的:研究二氢杨梅素(DMY)对小鼠急性脑缺血缺氧的保护作用.方法:将雄性昆明小鼠随机分为空白对照组(或假手术组)、DMY高剂量组、DMY低剂量组和金纳多组,必要时设模型组,每组30只.DMY高、低剂量组分别灌胃DMY500 mg/kg、250mg/kg,1次/d,共10d.末次给药1h后,采用小鼠断头实验,观察DMY对断头后小鼠喘气时间和喘气次数的影响;小鼠常压耐缺氧实验,观察DMY对小鼠存活时间、耗氧量和耗氧率的影响;小鼠结扎双侧颈总动脉实验,观察DMY对小鼠存活时间的影响.结果:与空白对照组或模型组比较,DMY高、低剂量可明显延长小鼠断头后喘气时间和喘气次数,降低常压缺氧小鼠耗氧率并延长双侧颈总动脉结扎小鼠的存活时间(P＜0.05或P＜0.01);此外,DMY高剂量还可延长常压缺氧小鼠存活时间(P＜0.05).结论:DMY对小鼠急性脑缺血缺氧具有一定的保护作用.
-
薄层色谱法在二氢杨梅素螯合锰合成工艺中的应用
目的:初步探索合成C<,15>5H<,12>O<,8>Mn螯合物的条件;方法:用二氢杨梅素(DMY)和Mn(CH<,3>COO)<,2>·4H<,2>O为原料反应合成C<,15>H<,12>O<,8>Mn,采用薄层色谱法(TLC)监测反应进程,初步探索其合成反应条件,并对螯合物结构进行了表征;结果:在反应液温度70℃,反应液pH为7.5,反应时闸为60 min时,合成得到C<,15>H<,12>O<,8>Mn螯合物;结论:薄层色谱法在金属配合物的制备和分离中的应用广泛.
-
二氢杨梅素对乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡的影响
目的 研究二氢杨梅素(DMY)对乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡的影响.方法 2014年3月至2015年2月,该院采用99%纯度的DMY为抑制剂,以乳腺癌MCF-7细胞为研究对象,采用MTT法、流式细胞术法和免疫细胞化学来分析乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡的情况.结果 当使用浓度大于20 μg/mL的DMY处理细胞时,出现了抑制效果,但效果不佳;当用40与80 μg/mL的DMY时,明显地抑制了乳腺癌细胞MCF-6的增殖,且有不同程度的敏感性.当DMY为80 μg/mL时,其IC50为226.9 μg/mL.抑制率和IC50分别与0 μg/mL DMY比较,差异有统计学意义(P<0.05).40与80 μg/mL的DMY处理乳腺癌细胞MCF-6可以诱导其周期阻滞在G2/M期(P<0.01),并表现出明显的细胞凋亡现象,同时,G0/G1期也受到阻滞,S期细胞比例降低明显,差异有统计学意义(P<0.05);当使用浓度大于20 μg/mL的DMY时,PCNA阳性率有所下降,当浓度为40 μg/mL的DMY时,乳腺癌细胞MCF-6的PCNA阳性率明显下降(P<0.01),尤其浓度为80 μg/mL的DMY时,阳性率为10.00%.与0 μg/mL DMY比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 对乳腺癌患者采用DMY可以有效抑制癌细胞快速增殖,加速器凋亡,减缓患者病情,疗效突出.
关键词： 二氢杨梅素 乳腺癌细胞MCF-7 增殖 凋亡 -
二氢杨梅素对高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖及纤维连接蛋白堆积的影响
目的:研究二氢杨梅素(DMY)对高糖(HG)诱导的肾小球系膜细胞(MCs)的增殖及纤维连接蛋白(FN)堆积的影响,探讨其对糖尿病肾病肾小球硬化的作用机制.方法:将细胞分为正常组(5.5 mmol/L葡萄糖)、HG组(30 mmol/L葡萄糖)和DMY低、中、高浓度组(30 mmol/L葡萄糖+22.5、45、90μmol/L DMY),培养48 h后采用MTT法检测细胞的增殖活性[以光密度(OD)值反映];采用分子对接法对DMY与Smad2的结合状态进行模拟分析;将细胞分为正常组(5.5 mmol/L葡萄糖)、HG组(30 mmol/L葡萄糖)、DMY组(30 mmol/L葡萄糖+45μmol/L DMY)和DMY对照组(5.5 mmol/L葡萄糖+45μmol/L DMY),培养5 h后采用West-ern blot法检测细胞中磷酸化Smad2(p-Smad2)及细胞外基质蛋白FN的表达水平.结果:MTT检测结果显示,与正常组比较,HG组细胞的OD值显著升高(P<0.05);与HG组比较,DMY各浓度组细胞的OD值均显著降低(P<0.05).DMY与Smad2蛋白分子结合的吉布斯自由能(ΔG)为-5.64 kJ/mol,抑制常数Ki为73.53μmol/L,在第465、464、461、458这4个氨基酸残基位点有氢键供体与受体的结合.Western blot结果显示,与正常组比较,HG组细胞中p-Smad2及细胞外基质蛋白FN表达水平均显著升高(P<0.05);与HG组比较,DMY组细胞中p-Smad2及细胞外基质蛋白FN表达水平显著降低(P<0.05).结论:DMY可抑制HG诱导的MCs增殖,并通过与Smad2结合,抑制Smad2的磷酸化,继而降低细胞外基质蛋白FN的表达,从而改善糖尿病肾病肾小球硬化.
-
UPLC法测定藤茶中二氢杨梅素与杨梅素的含量及其热稳定性
目的:建立测定藤茶中二氢杨梅素(DMY)与杨梅素(MY)含量的方法,并考察藤茶中DMY与MY的热稳定性.方法:采用超高效液相色谱法.色谱柱为Dionex Acclaim(R)RSLC PA2 (30 mm× 2.1 mm,2.2 μm),流动相为0.1％磷酸-乙腈(78:22,V/V),流速为0.4 mL·min-1,柱温为30℃,检测波长为290 nm(测定DMY,0～2 min)和373 nm(测定MY,2～4 min).采用加热回流方式,考察DMY与MY的含量变化.结果:DMY、MY的进样量分别在200.0～1 600.0 ng(r=0.999 8)、5.0～56.2 ng(r=0.999 7)范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系；二者平均加样回收率分别为98.74％和99.78％,RSD分别为1.90％和1.37％(n均为9).藤茶中DMY、MY的含量范围分别为0.53％～35.01％、0～0.62％,二者总含量为0.53％～35.30％.DMY热稳定性较差,在含量测定过程中不宜采用加热方式提取.结论:本方法快速、准确,可为藤茶的质量标准研究提供依据.
-
杞椇颗粒的质量标准研究
目的:建立杞椇颗粒的质量标准.方法:采用薄层色谱(TLC)法对杞椇颗粒中枸杞子和菟丝子进行定性鉴别；采用高效液相色谱法测定二氢杨梅素含量.结果:TLC斑点清晰,分离度好,阴性对照无干扰；二氢杨梅素检测浓度在2～80 μg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.9998),平均回收率为100.6％,RSD=1.51％(n=9).结论:所建标准可用于杞棋颗粒的质量控制.
-
羟丙基-β-环糊精对二氢杨梅素增溶作用的研究
目的:研究羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)对二氢杨梅素(DMY)的增溶作用.方法:采用摩尔比率法和相溶解度法测定HP-β-CD与DMY在水溶液中的包合比及包合过程中热力学参数的变化.结果:DMY的溶解度随HP-β-CD浓度的增加而呈线性增加趋势,相溶解度图显示,二者可形成包合比为1∶1的包合物;热力学参数显示,该包合反应可自发进行,且为放热反应,升温对包合不利,包合后体系更加有序.结论:HP-β-CD可增加DMY的溶解度,适当的温度和pH对包合反应至关重要.
-
HPLC-DAD法同时测定蒙药森登-4汤散中7种抗风湿活性成分的含量
目的:建立同时测定蒙药森登-4汤散中7种抗风湿活性成分儿茶素、栀子苷、二氢杨梅素、花旗松素、芦丁、杨梅素和槲皮素含量的方法.方法:采用高效液相色谱-二极管阵列检测法(HPLC-DAD).色谱柱为Sil Green C18,流动相为乙腈-0.1％磷酸溶液(梯度洗脱),流速为1 mL/min,检测波长为238 nm,柱温为30℃,进样量为10μL.结果:儿茶素、栀子苷、二氢杨梅素、花旗松素、芦丁、杨梅素和槲皮素检测质量浓度的线性范围分别为8.590～2290、10.56～3901、13.00～3958、8.815～564.2、4.030～257.8、8.130～750.5、7.075～454.2μg/mL(r≥0.9991);检测限分别为0.4295、0.2640、0.3250、0.2204、0.2015、0.2032、0.1769μg/mL,定量限分别为1.030、1.321、1.302、1.397、1.637、0.8130、0.7075μg/mL;精密度、稳定性(48 h)、重复性试验的RSD均小于2.0％(n=6);平均加样回收率分别为96.24％～99.28％,RSD分别为1.03％～1.63％(n=6).结论:该方法简便、准确、重复性良好,可用于同时测定蒙药森登-4汤散中儿茶素、栀子苷、二氢杨梅素、花旗松素、芦丁、杨梅素和槲皮素的含量.
-
藤茶提取物改善2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的作用
目的 观察藤茶提取物对2型糖尿病(T2DM)大鼠胰岛素抵抗的改善作用及可能的分子机制.方法 雄性SD大鼠高脂喂养联合小剂量链脲佐菌素腹腔注射(STZ,30 mg/kg)建立T2DM大鼠模型.建模成功后将T2DM大鼠系统抽样随机分为糖尿病模型对照组(DIA)、二甲双胍干预组(MET,125 mg/kg)、二氢杨梅素干预组(DHM,100 mg/kg)、藤茶提取物低剂量干预组(R50,50 mg/kg)、中剂量干预组(R100,100 mg/kg)及高剂量干预组(R200,200 mg/kg)6组.每组大鼠分别灌胃给药干预4周后,放射免疫分析法测定大鼠血清中胰岛素、胰岛素C肽;Western blot法检测肝脏组织中p-Akt、FGF21、p-AMPK蛋白表达;qRT-PCR法检测肝脏组织中FGF21 mRNA的表达.结果 与DIA组相比,二甲双胍、DHM和藤茶提取物干预组大鼠血糖、血清胰岛素水平、HOMA-IR指数显著降低(P＜0.05),而胰岛素C肽水平显著升高(P＜0.05);同时肝脏组织中p-Akt、FGF21、p-AMPK蛋白及FGF21 mRNA的表达升高(P＜0.05).结论 藤茶提取物可通过上调p-Akt、FGF21、p-AMPK的表达从而改善2型糖尿病大鼠的胰岛素抵抗.
-
二氢杨梅素通过抑制甲基转移酶诱导人乳腺癌MCF-7细胞PTEN基因去甲基化
目的 观察二氢杨梅素对人乳腺癌MCF-7细胞中第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)甲基化及其表达的影响,并探讨相关作用机制.方法 以CCK-8法检测细胞活力,qRT-PCR检测PTEN和DNA甲基转移酶(DNA methyhransferase,DNMT)DNMT1、DNMT3a、DNMT3b的mRNA表达,Western blot法检测PTEN的蛋白表达,荧光法检测细胞DNA甲基转移酶总活性,甲基化特异性PCR法(methylation-specific PCR,MSP)检测PTEN基因甲基化水平.结果 细胞活力检测结果表明,二氢杨梅素可剂量依赖性降低乳腺癌MCF-7细胞活力(P＜ 0.05);qRT-PCR和Western blot检测结果表明,二氢杨梅素可显著上调PTEN的表达(P＜0.05),并呈现剂量-效应关系;MSP检测结果显示,二氢杨梅素可显著诱导MCF-7细胞PTEN基因去甲基化;qRT-PCR和荧光法检测结果显示,二氢杨梅素可显著降低MCF-7细胞DNMT1表达和DNMT活性(P＜0.05).结论 二氢杨梅素显著诱导乳腺癌细胞PTEN基因去甲基化,促进其表达,其机制可能主要涉及对DNMT1表达和活性的抑制.
-
二氢杨梅素通过TGF-β1/Smad信号通路抑制肝星状细胞活化的作用研究
目的 观察二氢杨梅素(dihydromyricetin,DHM)对肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)活化的影响,并探讨TGF-β1/Smad信号通路在其中的作用及机制.方法 以大鼠肝星状细胞株HSC-T6为研究对象,TGF-β1(5 ng/mL)处理2h后,再以不同浓度的DHM处理24h.CCK-8法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期,ELISA法检测细胞分泌MMP-1、TIMP-1和COL-Ⅰ的水平,免疫荧光细胞化学法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,qRT-PCR法检测MMP-1、TIMP-1和COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、Smad2、Smad3、Smad4、Smad7的mRNA表达,Western blot检测Smad2/3、p-Smad2/3、Smad7、AMPK、p-AMPK蛋白表达.结果 CCK-8法检测结果显示,40 μmol/L以上DHM单独处理能明显抑制HSC-T6细胞增殖活力,并能显著抑制活化的HSC-T6细胞增殖活力的增加,流式细胞仪检测结果表明,DHM能够明显促进活化的HSC-T6细胞凋亡,TGF-β1能够促进HSC-T6细胞G0/G1期的比例降低、S期和G2/M期的比例增加(P＜0.05),而DHM能够抑制TGF-β1对细胞周期的影响,ELISA检测结果表明,DHM能够显著抑制活化的HSC-T6细胞上清液中TIMP-1和COL-Ⅰ水平增高及MMP-1水平下降(P＜0.05),免疫荧光细胞化学法检测显示,HSC-T6细胞表达HSC活化特定抗原α-SMA,TGF-β1处理后表达增加,而DHM能够抑制α-SMA表达,qRT-PCR结果显示,DHM能够显著影响活化的HSC-T6细胞的细胞外基质相关基因MMP-1、TIMP-1和COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、Smad2、Smad3、Smad4、Smad7等的mRNA表达,Western blot检测结果提示,DHM抑制活化的HSC-T6细胞AMPK磷酸化下降、Smad2/3的磷酸化水平升高及Smad7的蛋白表达下降,而AMPK抑制剂Compound C处理后,DHM的作用被显著抑制.结论 DHM能够显著抑制HSC-T6细胞的活化,该作用可能通过促进AMPK的磷酸化并抑制TGF-β1/Smad信号通路介导的细胞外基质产生而实现.
