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HPLC测定显齿蛇葡萄茎中3种黄酮类成分的含量
目的 建立显齿蛇葡萄茎中黄酮类成分的含量测定方法,分析广西不同地区显齿蛇葡萄茎中二氢杨梅素、芦丁及杨梅素的含量.方法 采用色谱柱为PoroshellEC-C18(4.6 mm×250 mm,4.0 μm),以乙腈-0.1％磷酸为流动相,梯度洗脱,流速1mL.min-1,柱温25℃,检测波长0～23 min,330 nm;23～50 min,375 nm.结果 显齿蛇葡萄茎中二氢杨梅素、芦丁及杨梅素进样量分别在0.800 5～9.606 μg(r=0.999 9)、0.201 6～2.419μg(r=0.999 8)和0.100～1.202tg(r=0.999 7)内呈良好的线性关系;平均加样回收率分别为98.1％,101％和99.9％,RSD＜3％,方法的稳定性、重复性和精密度均良好(RSD＜3％).桂林灵川的显齿蛇葡萄茎中二氢杨梅素、芦丁和杨梅素的含量均较高,武鸣双江和金秀互助村的显齿蛇葡萄茎中二氢杨梅素和杨梅素含量均较低,而武鸣双江的芦丁含量较高,柳州泗顶镇的芦丁含量较低.结论 不同地区显齿蛇葡萄茎中二氢杨梅素、芦丁和杨梅素的含量相差较大.该方法结果准确、重复性好,可使目标成分与试样中其他共存组分达到较好地分离.
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二氢杨梅素通过SIRT1/JNK途径提高耐药恶性黑素瘤细胞对卡铂的敏感性
目的 探讨二氢杨梅素对卡铂耐药恶性黑素瘤细胞的增敏作用并研究其机制.方法 MTT法检测卡铂耐药A375细胞(A375-R)在卡铂和二氢杨梅素处理下的细胞活力.Western blot法检测卡铂和二氢杨梅素对A375-R细胞SIRT1表达水平,caspase-9、caspase-3活化水平及JNK蛋白磷酸化水平的影响.流式细胞术检测A375-R细胞在卡铂和二氢杨梅素联合处理下的细胞凋亡率.结果 MTT实验结果显示,卡铂对A375-R细胞的半数抑制浓度(IC50)显著高于A375细胞,二氢杨梅素辅助治疗能明显降低卡铂对A375-R的IC50.Western blot实验结果显示A375-R中SIRT1的表达水平显著高于A375细胞,二氢杨梅素处理能显著抑制A375-R细胞SIRT1的表达.二氢杨梅素能明显促进卡铂对A375-R细胞JNK的磷酸化,转染SIRT1质粒或用JNK特异性抑制剂(SP600125)处理后,二氢杨梅素联合卡铂对A375-R细胞的杀伤活性、凋亡诱导活性和JNK、caspase-9及caspase-3的活化均受到明显抑制.结论 二氢杨梅素通过SIRT1/JNK途径提高耐药恶性黑素瘤细胞对卡铂的敏感性.
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藤茶不同部位制茶后功能性成分的含量比较
目的 比较藤茶不同部位制茶后的功能性成分总黄酮、二氢杨梅素、总糖、多糖的含量.方法 以70％的乙醇溶液提取藤茶中的总黄酮,以二氢杨梅素为对照品在紫外分光光度仪292 nm测定藤茶不同部位总黄酮含量;采用HypersilBDS C18柱,流动相为甲醇-水-磷酸(35∶65∶0.1),流速为1.0 mL·min-1,HPLC 292 nm处测定藤茶不同部位二氢杨梅素含量;以蒸馏水为溶剂提取藤茶中的总糖,用80％乙醇醇沉得到多糖,采用硫酸-苯酚法显色,以葡萄糖为对照品在紫外分光光度仪490 nm测定藤茶不同部位总糖和多糖含量.结果 藤茶不同部位制茶后总黄酮、二氢杨梅素、总糖、多糖含量差别比较明显,其中藤茶芽尖粉末的总黄酮和二氢杨梅素含量高,分别为53.64％,50.24％;藤茶老叶中的总糖含量高为13.12％;藤茶嫩叶中的多糖含量高为2.03％,而茶梗中总黄酮、二氢杨梅素、总糖、多糖含量均为低.结论 实验所建立的测定藤茶不同部位制茶后的功能性成分含量的分析方法可行,结果 可靠,能明确藤茶不同部位制茶后的功能性成分含量,为藤茶资源的利用提供相应的依据.
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藤茶提取物中二氢杨梅素对大鼠急性痛风性关节炎模型的影响
目的 研究藤茶提取物中二氢杨梅素对大鼠急性痛风性关节炎模型中血清IL-1β、IL-8、TNF-α的影响,初步探讨其治疗急性痛风性关节炎的作用机制.方法 采用踝关节腔内注射尿酸钠建立急性痛风性关节炎大鼠模型,以秋水仙碱为对照,观察藤茶提取物中二氢杨梅素对各组大鼠的踝关节肿胀度及血清TNF-α、IL-1β及IL-8水平的调节作用.结果 模型组关节肿胀度、IL-1β、IL-8和TNF-α的水平明显高于空白对照组(P＜0.05或P＜0.01);中高剂量的二氢杨梅素能明显抑制急性痛风性关节炎大鼠的踝关节肿胀度,降低血清TNF-α、IL-1B及IL-8的水平.结论 藤茶提取物中二氢杨梅素对急性痛风性关节炎具有良好的治疗作用,其作用机制与抑制血清IL-1β、IL-8和TNF-a的产生有关.
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二氢杨梅素胃内漂浮片处方研究
目的 为了延长二氢杨梅素在胃内停留的时间,延缓药物的释放,将其制备成胃内漂浮片.方法 采用粉末直接压片法制片,运用单因素的平行实验和L9(34)正交设计,以起漂时间、漂浮持续时间及释放度为指标选择佳处方.结果 佳处方:片剂重量为300 mg,其他各成分的含量分别为:HPMC K4M 75 mg,PVP K30 40 mg,NaHCO3 40 mg,主药80 mg,乳糖65 mg,该制剂在37℃的人工胃液中立即起漂,12h释放＞90％,持漂时间＞10h.结论 制备的胃漂浮片具有优良的漂浮能力和释药行为,可增加二氢杨梅素在胃部的滞留时间,提高药物的稳定性,增强保肝作用.
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薄层扫描法测定藤茶中二氢杨梅素的含量
目的:建立藤茶质量控制的方法. 方法:采用薄层扫描法测定藤茶中二氢杨梅素的含量.结果:藤茶中二氢杨梅素的含量为38.17%～38.54%,回收率为98.5%,RSD为1.6%. 结论:该法快速、简单、稳定,测定结果准确、可靠.
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二氢杨梅素对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤的影响
目的:研究二氢杨梅素(DMY)对过氧化氢(H2O2)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的影响并探讨其作用机制.方法:用不同浓度DMY (5 μg·mL-1,20 μg.mL-1,80 μg·mL-1)预处理保护HUVECs12 h,再用0.5 mmol·L-1 H2O2干预12 h,用MTT法检测细胞活力;用Hoechst33258进行细胞核染色;并取上清液检测超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量;用流式细胞仪分别测活性氧(ROS)和细胞内钙离子含量.结果:DMY能明显提高H2O2(0.5 mmol·L-1)损伤后HUVECs存活率(P＜ 0.05),增加上清液SOD活性,降低MDA含量,减少细胞内ROS表达,下调细胞内钙离子浓度,其中DMY 5μg· mL-1时效果明显.结论:DMY对H2O2诱导内皮细胞损伤具有保护作用,其机制与清除细胞内ROS,抑制细胞内钙离子介导的细胞凋亡相关,浓度以DMY 5μg·mL-1时效果明显.
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枳椇子解酒方护肝活性成分提取工艺优化及药效学研究
目的:建立枳椇子解酒方护肝活性成分佳提取工艺,考察佳提取工艺下该方低、中、高剂量的护肝药效.方法:以乙醇浓度、料液比、粉碎度、提取时间为考察因素,以二氢杨梅素、齐墩果酸、浸膏得率为指标,采用正交试验设计,确定枳椇子解酒方护肝活性成分佳提取工艺.建立急性酒精性肝损伤小鼠模型,考察佳提取工艺下该方低、中、高剂量对血清ALT、AST、总胆固醇(CHO)活性及肝脏系数的影响.结果:枳椇子解酒方佳提取工艺为10目药材,50％乙醇,浸泡1h,提取次数为2次,料液比为1∶10、1∶8,提取时间2.5、2.0h.与模型组比较,阳性对照组、解酒方低、中剂量组肝脏系数、血清AST含量均显著降低(P＜0.05,P＜0.01);各用药组血清CHO、ALT含量显著降低(P＜0.01).结论:确定了枳椇子解酒方的佳药物配比,提取工艺合理、可行,枳椇子解酒方有良好的护肝疗效,为进一步的研究提供基础.
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二氢杨梅素对APAP诱导小鼠急性肝损伤的保护作用
目的 观察二氢杨梅素(dihydromyricetin,DHM)预防性干预对对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)诱导的小鼠急性肝损伤的影响及其可能的作用机制.方法 采用对乙酰氨基酚诱导的小鼠急性肝损伤模型,预防性给予DHM 1周后,HE染色和生化检测评价小鼠肝脏损伤情况,并检测肝组织谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活力;活性氧(ROS)荧光探针-DHE染色检测肝组织ROS产生状况;实时定量PCR法检测TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA变化;Western blot法检测小鼠肝脏JNK磷酸化水平及Bax蛋白表达水平.结果 DHM能够明显减轻由APAP诱导的小鼠急性肝损伤,升高肝组织GSH水平和SOD活力.实时定量PCR检测发现,DHM预处理明显降低APAP模型小鼠肝组织炎症相关因子mRNA水平;Western blot检测发现,DHM明显降低JNK磷酸化水平及Bax蛋白表达水平.结论 DHM可以通过抗炎和抗氧化应激作用,进而抑制JNK信号通路的激活,并抑制肝细胞凋亡来保护APAP损伤的小鼠肝脏.
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二氢杨梅素对高脂喂养ApoE-/-小鼠体内胆固醇逆向转运的影响
目的 探讨二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY)对高脂喂养ApoE-/-小鼠体内胆固醇逆向转运的影响.方法 6周龄♂ ApoE-/-小鼠分为模型组、DMY(250、500 mg·kg-1)组,野生型(WT) C57BL/6J小鼠为阴性对照组.各组高脂饮食8周后,腹腔巨噬细胞油红O染色,测定细胞内胆固醇含量,肝脏称重,肝脏组织油红O染色,检测肝脏胆固醇和甘油三酯含量,检测巨噬细胞、肝脏和小肠中胆固醇逆向转运相关蛋白的表达.结果 与模型组相比,DMY明显减少腹腔巨噬细胞脂质的沉积和胆固醇含量,增强巨噬细胞胆固醇逆向转运蛋白ABCA1和ABCG1的表达.与模型组相比,DMY明显减轻肝脏脂肪变性,即减轻肝脏脂质蓄积、胆固醇和甘油三酯含量.与模型组相比,DMY明显增加肝脏AB-CG5、ABCG8、CYP7A1的mRNA和蛋白表达,DMY明显增加小肠ABCG5和ABCG8的蛋白表达.结论 DMY能促进高脂喂养ApoE-/-小鼠体内胆固醇逆向转运.
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二氢杨梅素对胰岛素抵抗3 T3-L1脂肪细胞的改善作用及其机制研究
目的：研究二氢杨梅素( dihydromyricetin, DMY )对3 T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的改善作用及其机制。方法采用地塞米松诱导3 T3-L1脂肪细胞形成胰岛素抵抗细胞,以1×10-6 mol·L-1罗格列酮为阳性对照,DMY(1×10-5~1×10-8 mol·L-1)与胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞共培养72 h,用葡萄糖氧化酶法测定细胞培养基中的葡萄糖含量,计算葡萄糖消耗量；采用 RT-PCR 检测脂肪细胞的GLUT4、Akt 2和脂联素基因的表达量。 DMY (1×10-5~1×10-8 mol·L-1)加入正常3T3-L1脂肪细胞中培养48 h,检测细胞的葡萄糖消耗量。结果 DMY(5×10-7~1×10-8 mol· L-1)明显增加地塞米松诱导胰岛素抵抗3 T3-L1脂肪细胞的葡萄糖消耗量,并呈现一定的浓度依赖性,和罗格列酮相比,差异无统计学意义。1×10-5~1×10-8 mol·L-1 DMY处理正常3T3-L1脂肪细胞48 h后,葡萄糖消耗量与正常组相比差异无统计学意义。 RT-PCR结果显示,DMY作用于胰岛素抵抗的脂肪细胞72 h后,脂肪细胞的GLUT4、Akt2和脂联素基因的表达量明显增加,与地塞米松模型组相比,差异有统计学意义。结论 DMY能改善3T3-L1脂肪细胞的胰岛素抵抗状态,其机制可能与其上调GLUT4、Akt2和脂联素基因的表达量有关。
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二氢杨梅素诱导人肺腺癌细胞系AGZY-83-a凋亡的实验研究
目的 研究二氢杨梅素(dihydromyricetin)对人肺腺癌细胞系AGZY-83-a凋亡的影响及其相关机制.方法 采用MTT法检测二氢杨梅素对人肺腺癌细胞AGZY-83-a存活率的影响,应用TUNEL法和Caspase-3活性检测观察二氢杨梅素对AGZY-83-a凋亡的作用,并通过共聚焦显微镜观察二氢杨梅素对肺腺癌细胞内钙的影响.结果 MTT结果 显示,二氢杨梅素50 μmol·L-1对AGZY-83-a的增殖有明显抑制作用,并呈剂量和时间依赖关系;TUNEL实验结果 显示二氢杨梅素可以引起AGZY-83-a发生凋亡,且具有剂量依赖性;Caspase-3活性检测结果 显示二氢杨梅素可增加肺腺癌细胞Caspase-3活性,说明二氢杨梅素可以诱导AGZY-83-a凋亡;二氢杨梅素可升高肺腺癌细胞内钙,平均荧光强度FI可增加20多倍.结论 二氢杨梅素可通过增加细胞内钙诱导AGZY-83-a细胞凋亡,从而发挥抗肿瘤作用.
关键词： 二氢杨梅素 凋亡 AGZY-83-a细胞 Ca2+ -
二氢杨梅素通过增加细胞内钙而收缩离体犬颈动脉环
目的 观察二氢杨梅素(Dihydromyricetin)对离体犬颈动脉环的作用以及相关机制.方法 应用等张收缩法记录犬离体颈动脉环张力,应用激光共聚焦显微镜测定急性分离犬颈动脉平滑肌细胞胞质内游离Ca2+浓度([Ca2+]).结果 在内皮完整和去内皮血管上,二氢杨梅素均引起浓度(1～300 μmol·L-1)依赖性的血管张力增加;无钙液中,二氢杨梅素引起的张力增加作用明显降低,同有钙液相比,统计学上差异有显著性(P＜0.05);电压依赖性钙通道阻断剂维拉帕米不能阻断其收缩作用.激光共聚焦检测细胞内钙的结果表明,二氢杨梅素浓度依赖性(100、300 μmol·L-1)增加了静息状态平滑肌细胞胞质内钙浓度.结论 二氢杨梅素对血管平滑肌具有剂量依赖性的收缩作用,这一作用为非内皮依赖性,与外钙内流致胞质内钙升高有关.
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荧光猝灭法研究二氢槲皮素和二氢杨梅素与牛血清白蛋白的相互作用
目的 研究二氢槲皮素和二氢杨梅素与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用.方法 运用荧光光谱法结合Stern-Volmer方程和Line Weaver-Burk双倒数函数计算出BSA与二氢槲皮素和二氢杨梅素相互作用的猝灭常数和结合常数,通过反应前后热力学参数如焓变ΔH和熵变ΔS的大小对作用力类别进行判断.结果 测得二氢槲皮素与BSA在不同温度下的结合常数293 K为2. 27×104L·mol-1,298 K为2. 06×104L·mol-1,303 K为1. 89×104L·mol-1,二氢杨梅素与BSA在不同温度下的结合常数293 K为2. 43×104L·mol-1,298 K为2. 39×104L·mol-1,303 K为2. 13×104L·mol-1.确定其使牛血清白蛋白荧光猝灭的过程为静态猝灭过程,通过热力学参数确定其结合力主要为疏水作用.结论 应用荧光猝灭法了解二氢槲皮素和二氢杨梅素与牛血清白蛋白之间有较强的结合反应,结合力以疏水作用力为主.
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闽产藤茶总黄酮提取物中三种主成分的含量测定
目的 建立同时测定藤茶总黄酮提取物中二氢杨梅素、杨梅苷、杨梅素的HPLC含量分析法. 方法 采用TOP ODS-AQ column(4.6×250 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-0.1％磷酸溶液为流动相梯度洗脱,流速1.0mL·min-1,检测波长252 nm,柱温30℃. 结果 二氢杨梅素、杨梅苷、杨梅素的线性范围分别在31.63～632.69(r=0.9999)、1.61～32.13 (r=0.9998)、4.62～92.41 (r=0.9998)μg·mL-1;平均加样回收率分别为97.58％、103.04％、102.69％,RSD分别为1.42％、0.85％、1.35％. 结论 该法操作简便、快速、结果准确,可适用于藤茶总黄酮提取物的质量控制.
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HPLC法测定田参正脉含片中二氢杨梅素的含量
目的 建立人参含片中二氩杨梅素的含量测定方法.方法 采用高效液相色谱法,色谱柱为Lichrospher C18(4.6×250mm,5μm),ODS预柱,流动相为甲醇0.1%磷酸(25:75);检洲波长290nm;流速为1.0mL·min-1.结果 本法精密度高,稳定性好,二氢杨梅素溶液在0.00532～0.1064mg·mL-1的浓度范围内具有良好的线性关系(r=0.9997),平均加样回收率为101.62%,RSD为1.55%(n=6).结论 本方法简便,准确,重现性好,可作为该制剂的含量测定方法.
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高效液相色谱法测定健目胶囊中二氢杨梅素的含量
目的 建立高效液相色谱法测定健目胶囊中二氢杨梅素的含量.方法 选用Lichrospher-C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),以甲醇-0.2%磷酸溶液(25:75)为流动相,检测波长为290nm,柱湿为30℃,流速为1.0mL·min-1.结果 二氢杨梅素在0.05824～0.29120mg·mL-1.范围内线性关系良好,r=0.9999.平均回收率为101.2%,RSD为1.36%.结论 试方法准确可靠、精密度高、重现性好,可用于健目胶囊中二氢杨梅素的含量测定.
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高效液相色谱法测定藤茶素片中二氢杨梅素的含量
目的建立藤茶素片中二氢杨梅素的含量测定方法.方法采用高效液相色谱法,色谱柱为Allsphere ODS柱(4.6×250mm,5μm),ODS预柱;流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液(15:85);检测波长为290nm;流速为1.0ml·min-1,柱温为30℃.结果本法精密度高,稳定性好,二氢杨梅素溶液在0.0744～0.3720mg·mL-1的浓度范围内具有良好的线性关系(r=0.997),平均加样回收率为99.66%,RSD=0.98%(n=9).结论本方法简便,准确,重现性好,可作为该制剂的含量测定方法.
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正交优化枳椇子中二氢杨梅素的提取工艺
目的 优化枳椇子中二氢杨梅素的佳提取工艺.方法 用二氢杨梅素标准品作为对照,以HPLC作为检测手段,用二氢杨梅素的含量作为检测指标,采用甲醇回流提取法对枳椇子中二氢杨梅素进行提取,通过L9(34)正交设计实验来优化提取工艺.结果 10倍量的甲醇,提取3次,每次2h.结论优选得到的提取工艺科学合理,操作可行,专属性强.
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蛇葡萄素结构修饰及剂型开发的研究现况
蛇葡萄素为葡萄科蛇葡萄属植物藤荼(Ampelopsis grossedentata(Hand-Mazz) W.T.Wang)的主要活性成分.具有抗肿瘤、抗菌、降血脂,保肝等多方面的药理活性,并且资源丰富、来源广泛,具有很高的开发利用价值.但蛇葡萄素的结构使其溶解性不佳、稳定性和生物利用度很低,影响其临床前研究以及今后的临床应用.本文就目前蛇葡萄素结构修饰的方法及不同剂型的开发情况作一综合评述,希望能为今后更好的开发利用蛇葡萄素提供一定参考.
