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慢病毒介导的shRNA干扰人HepG2.2.15细胞Akt2基因表达的研究
目的：针对Akt2基因构建shRNA慢病毒干扰载体并评价慢病毒介导的RNA干扰在人HepG2.2.15中的基因沉默效应。方法设计Akt2的RNAi寡聚核苷酸序列，利用慢病毒载体构建Akt2的shRNA载体，转染入大肠埃希菌并观察重组表达状况，利用293T细胞包装得到重组腺病毒，以绿色荧光蛋白（GFP）作为标记，逐孔稀释法确定转染效率及滴度，以实时荧光定量法比较各组对Akt2 mRNA的干扰效果。结果筛选了所构建的3个Akt2靶向序列，包装shRNA慢病毒后转染HepG2.2.15细胞，慢病毒转染后的沉默效率可达85%，比较得出沉默效率高的靶序列和工作条件。结论本研究成功构建并筛选了针对Akt2的shRNA慢病毒载体，有效抑制HepG2.2.15细胞中Akt2 mRNA的表达。
关键词： Akt2 shRNA 慢病毒 HepG2.2.15 -
慢病毒载体介导人非小细胞肺癌A549细胞Akt2基因靶向抑制
目的 通过构建慢病毒shRNA表达载体,靶向抑制Akt2基因的表达,获得稳定干扰Akt2基因的细胞克隆,为进一步探讨Akt2的功能奠定基础.方法 设计并合成针对Akt2靶基因的双链寡核苷酸序列,经退火、酶切、连接反应,将干扰序列插入pGCsil-GFP质粒,经感受态细胞转化、阳性克隆测序鉴定所插入的片段,经转染及慢病毒包装,收集浓缩病毒进行滴度测定,感染至人肺腺癌细胞A549,通过无菌流式细胞分选GFP强阳性细胞,并应用荧光定量PCR及Western-blot验证干扰效果.结果 重组pGCsil-shAkt2-GFP质粒载体经阳性克隆测序鉴定显示插入序列与shAkt2干扰序列完全符合,测定重组慢病毒vshAkt2滴度为3E+9TU/ml.重组慢病毒shAkt2感染A549细胞,经流式细胞术分选90.1% GFP为强阳性细胞群.通过qRT-PCR与western blot检测Akt2 mRNA及蛋白表达水平,提示与正常对照组比较,shAkt2组细胞中Akt2 mRNA水平下降63.39%,蛋白水平减少91.56%.结论 本研究所构建的慢病毒shAkt2表达载体,能够在A549细胞内稳定、有效的抑制靶基因Akt2的表达,为深入研究Akt2在非小细胞肺癌(NSCLC)中的作用奠定了基础.
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肿瘤基因AKT2在肝癌中的表达及其临床意义
目的 研究AKT2蛋白产物在原发性肝癌发生、发展过程中的表达特点.方法 应用免疫组化SP法和RT-PCR法检测32例原发性肝癌中AKT2的表达,并以同期4例良性肝脏疾病作为对照.结果 原发性肝癌的AKT2基因蛋白产物阳性表达率(62.5％,28/32)显著高于良性对照组(0,0/4).AKT2在低分化、有淋巴结或远处转移组的表达率明显高于高中分化、无转移组.AKT2术后随访显示阳性肝癌患者的中位生存时间显著低于AKT2阴性患者(76 d比463 d).结论 在原发性肝癌中AKT2表达上调.AKT2在肝癌的发生、发展、转移中起重要作用.检测AKT2在原发性肝癌中的表达有助于反映原发性肝癌的生物学特性,为预后判断提供参考指标,并为干预性基因治疗提供实验依据.
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短发卡状RNA抑制AKT2对肝癌细胞增殖及侵袭的影响
目的 探讨短发卡状RNA(siRNA)抑制AKT2对肝癌细胞增殖、凋亡和侵袭转移的影响.方法 设计并合成特异性靶向AKT2的siRNA片段并构建SMMC7721AKT2 siRNA表达质粒,将其转染SMMC7721细胞,通过G418筛选出稳定株.MTT法检测肝癌SMMC7721细胞的生存率变化；流式细胞术检测细胞周期；Western- blot检测P27、CyclinD1；Transwell实验和划痕实验分析细胞侵袭、转移能力的改变.结果 MTT检测显示AKT2干扰可抑制SMMC7721细胞的生长,与其他组比较差异有统计学意义(P＜0.05).流式细胞术显示AKT2干扰组细胞周期阻滞于G1期,G1期细胞比例上升,S期细胞比例下降.Western- blot检测显示CyclinD1表达下降,P27的表达上升.Transwell试验和划痕试验显示AKT2干扰组的侵袭和转移能力受到抑制.结论 AKT2基因沉默可明显抑制肝癌SMMC7721细胞的生长并阻滞细胞周期.AKT2基因沉默可抑制肝癌SMMC7721细胞的侵袭和转移能力.
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大鼠腓肠肌内蛋白激酶B各亚型表达的年龄差异
目的 研究大鼠腓肠肌内蛋白激酶B(Akt/PKB)各亚型伴随年龄变化的表达差异. 方法 用反转录PCR(RT-PCR)、免疫印迹(western blotting)检测老年组(30月龄)和青年组(6月龄)大鼠腓肠肌内Akt各亚型mRNA和蛋白表达,并统计分析比较. 结果 (1)30月龄组大鼠腓肠肌内Akt1与Akt2的mRNA水平均高于6月龄组(t=7.124,P=0.000;t=2.598,P=0.021),Akt3差异无显著性(t=0.460,P=0.653).(2)两组间Akt1蛋白表达水平无显著变化(t=0.469,P=0 646),30月龄组Akt1的Thr308磷酸化水平低于6月龄组的表达,有显著差异(t=-9.861,P=0.000);30月龄组Akt2的蛋白水平高于6月龄组的表达,有显著差异(t=7.522,P=0.000);Akt3蛋白表达在两组间无差异(t=0.058,P=0.955). 结论 大鼠腓肠肌中Akt三种亚型伴随年龄改变表达存在差异,推测Akt各亚型在此过程中可能发挥不同功效.
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β-catenin/Tcf-4转录调控AKT2基因表达促进人脑胶质瘤细胞恶性转化的研究
目的 探究胶质瘤中β- catenin/Tcf -4转录调控AKT2基因以促进其恶性表型转化的机制.方法 CHIP - PCR及荧光素酶实验确立AKT2启动子区的Tcf -4结合位点及活性.阿司匹林( ASA)阻断β- catenin/Tcf -4转录复合物活性及恢复AKT2基因的表达后,流式细胞术检测细胞周期,Annexin V检测凋亡及Transwell实验检测侵袭能力.结果 CHIP - PCR表明,AKT2基因启动子区存在两个Tcf -4结合位点- 349/- 343 bp(位点1)和- 3491/- 3497 bp(位点2).荧光素酶实验结果显示位点2的活性比位点1的强.抑制β - catenin/Tcf -4转录活性后,细胞周期阻滞于G0/G1期,侵袭能力下降；恢复AKT2的表达后,细胞S期比例增加,侵袭能力增强.结论 β- catenin/Tcf -4可以直接转录调控AKT2来促进胶质瘤细胞的增殖和侵袭.
关键词： Akt2 β-catenin/Tcf-4 神经胶质瘤 转录调控 -
不同AKT1与AKT2表达状态的胶质瘤的生存分析
目的 探讨AKT1与AKT2在脑胶质瘤中的表达及与患者生存期的相关性.方法 免疫荧光法检测手术切除的50例胶质瘤组织标本中AKT1及AKT2的表达水平,确定两者表达的相关性并与生存期进行相关性分析.结果 Log - rank单因素检验,年龄≥50岁、KPS评分＜ 80分和WHO Ⅲ～Ⅳ级患者的生存期显著缩短.胶质瘤组织中AKT1及AKT2在WHOⅢ～Ⅳ级的表达率显著高于WHO Ⅰ～Ⅱ级,两者表达存在正相关,且与患者的生存期呈负相关.结论 AKT1与AKT2的表达状态对预测患者的生存期具有一定的临床价值.
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反义AKT2 cDNA治疗C6胶质瘤的体内外实验研究
目的研究反义AKT2(antisense AKT2,AS-AKT2)cDNA对鼠脑胶质瘤细胞系C6的生长抑制作用.方法将AS-AKT2 cDNA构建体转染鼠脑胶质瘤细胞系C6,原位杂交和蛋白印迹鉴定后,应用PCNA阳性率和MTT法检测细胞增殖能力,TUNEL法计算凋亡指数.应用立体定向技术将C6细胞和转染反义AKT2 cDNA的C6细胞种植到SD大鼠的右侧尾状核作为对照组和转染组;并对颅内已经形成C6胶质瘤的大鼠进行脂质体包裹的AS-AKT2 cDNA和空载体治疗;MRI动态监测大鼠颅内肿瘤生长情况,并检测标本AKT2和PCNA表达以及细胞的凋亡情况.结果转染AS-AKT2cDNA后C6细胞AKT2表达显著抑制,增殖减慢,凋亡指数增加.反义治疗组和转染组大鼠生存时间明显延长;转染组和治疗组肿瘤标本AKT2表达下降或消失,PCNA阳性率降低,可见大量凋亡细胞,而对照组和空载组标本几乎没有凋亡细胞.结论体内外实验证明AS-AKT2 cDNA可以抑制肿瘤细胞增殖、诱导凋亡,AKT2可作为基因治疗胶质瘤的重要优选靶的.
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AKT2和PTEN在胃癌中的表达及意义
目的 探讨胃癌中AKT2和PTEN的表达及意义.方法 采用免疫组化法检测胃癌组织及癌旁组织80例中AKT2和PTEN的表达及意义.结果 AKT2在胃癌组织中的表达显著高于癌旁组织(P＜0.05＝;PTEN在胃癌组织中的表达显著低于癌旁组织(P＜0.05＝;AKT2在胃癌中的表达与患者的年龄、性别、肿瘤的大小无相关性(P>0.05),与组织分化程度、有无淋巴转移及临床分期相关(P＜0.05＝;PTEN在胃癌中的表达与患者的年龄、性别无相关性(P>0.05),与肿瘤的大小、组织分化程度、有无淋巴转移及临床分期相关(P＜0.05＝;AKT2和PTEN蛋白表达强度呈负相关(P＜0.05＝.结论 胃癌组织中AKT2和PTEN蛋白表达呈负相关,联合检测PTEN和AKT2蛋白表达可作为判定胃癌生物学行为的辅助指标.
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卵巢胰岛素抵抗对卵巢糖代谢及功能影响的实验研究
目的 探讨卵巢内胰岛素信号分子缺失对卵巢自身功能影响,为阐明卵巢局部胰岛素抵抗对生殖功能作用提供理论支撑.方法 (1)分别选择蛋白激酶B2(AKT2)基因缺失的(AKT2-)和其同窝出生的有完整AKT2基因(AKT2+)的雌性小鼠评估卵巢糖摄取情况,并进行卵巢交互移植,构建AKT2基因型组合个体分别为A组(躯体+,卵巢+)12只,B组(躯体+,卵巢-)15只,C组(躯体-,卵巢+)8只.(2)监测动情周期,随机分组,对刺激组小鼠采用卵泡刺激素(0.75 IU/g)进行干预后取材.评估各组小鼠卵巢组织形态与生殖激素指标,并且采用RT-PCR检测卵巢内ERK-1胰岛素信号分子和甾体激素合成酶的表达.结果 (1)AKT2-卵巢的葡萄糖摄取能力显著下降.(2)B组动情周期显著延长,卵巢内黄体数量明显减少,而卵泡的数量明显增多,同时17-OH和T的水平显著升高.(3)基础状态下,B组卵巢内ERK-1和CYP17的表达明显增强.刺激状态下,B组卵巢内ERK-1、CYP17、CYP19和GSK3β均显著升高.结论 (1)AKT2-小鼠卵巢存在胰岛素抵抗,出现动情周期延长,卵巢多囊性改变和雄激素及其合成酶水平增高,类似PCOS表现.(2)卵巢局部胰岛素抵抗使卵巢自身糖代谢异常,细胞分裂增殖功能亢进,卵巢对促性腺激素反应性增高,卵巢功能放大,可能是PCOS发病的关键因素.
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癌基因AKT2在肺鳞癌和腺癌中的表达及与细胞增殖转移的关系
目的:探讨癌基因AKT2在肺鳞癌和腺癌中的表达及其与肿瘤细胞增殖与转移的关系.方法:应用免疫组化方法,检测肺鳞癌和腺癌组织80例、非肿瘤性肺组织标本35例中AKT2蛋白、PCNA的表达,并与临床病理因素进行相关性分析.结果:AKT2蛋白在肺鳞癌和腺癌组织中总阳性表达率为91.3%(73/80),显著高于在非肿瘤性肺组织中的表达5.7%(2/35)(P＜0.05);AKT2蛋白在淋巴结转移组和无淋巴结转移组阳性表达率分别为100%、80.6%,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05);AKT2的表达与患者年龄、性别、组织学类型、组织分化及TNM分期均无关(P＞0.05).在肺癌(鳞癌+腺癌)和非肿瘤性肺组织中,PCNA标记指数分别为(52.45±26.14)%和(9.57±2.20)%,两组之间差别有显著性意义(P＜0.01).在肺鳞癌和腺癌中,AKT2蛋白的总表达与PCNA高增殖指数呈正相关关系(P＜0.01).结论:AKT2的高表达与肺鳞癌和腺癌的高增殖活性及恶性行为有关,在肺癌的发生、发展中可能具有重要作用.
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AKT2 S100A4及MMP-9在鼻咽癌组织中的表达
目的:探讨AKT2、S100A4及MMP-9在鼻咽癌组织中的表达、相互关系及临床意义.方法:应用免疫组化EliVision二步法检测50例鼻咽癌组织、25例慢性鼻咽炎组织标本中AKT2、S100A4及MMP-9蛋白的表达,并分析三者与鼻咽癌患者临床特征的关系及三者表达的相关性.结果:鼻咽癌组织中AKT2、S100A4及MMP-9的阳性表达率分别为48.0%(24,50)、52.O%(26/50)、74.O%(37/50),显著高于慢性鼻咽炎组织的8.0%(2,25)、0(0/25)、36.0%(9/25),P均<0.01;AKT2和S100A4的表达均与鼻咽癌颈淋巴结转移及临床分期相关(P均<0.05),MMP-9的表达与鼻咽癌颈淋巴结转移相关(P<0.05),而三者的表达与患者性别、年龄及T分期无关(P均>0.05);鼻咽癌组织中AKT2和S100A4与MMP-9的表达呈正相关(P均<0.01),AKT2与S100A4的表达无关(P>0.05).结论:AKT2、S100A4及MMP-9的高表达在鼻咽癌的发生、发展及转移方面可具有重要作用,AKT2和S100A4可能通过上调MMP-9的表达而促进鼻咽癌的发展及转移,联合检测三者的表达情况对判断鼻咽癌生物学行为和预测肿瘤转移有一定的临床价值.
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TCF7L2、AKT2、FOXO1基因多态性与2型糖尿病的相关性研究
目的:探讨天津地区汉族人群TCF7L2、AKT2、FOXO1基因多态性与2型糖尿病(T2DM)发生的关系.方法:选取352例T2DM患者(T2DM组)及176例健康体检者(对照组),提取基因组DNA,PCR扩增目的片段后,应用变性高效液相色谱技术检测3种基因的基因型频率,并选取不同峰型进行DNA测序.分析不同基因型频率的组间差异,并对联合基因型进行分析,Logistic回归分析影响T2DM发病的相关因素.结果:2组TCF7L2基因rs12255372、FOXOl基因rs2701891基因型及等位基因频率差异有统计学意义,2组AKT2基因rs11669332基因型及等位基因频率差异无统计学意义.TCF7L2 T+/FOXO1 T+、TCF7L2 G+/FOXO1 C+与TCF7L2 G+/FOXO1 T+在2组间的分布差异有统计学意义.Logistic回归分析结果示糖化血红蛋白及尿素氮升高、TCF7L2 T+/FOXO1C+为T2DM的危险因素,高密度脂蛋白胆固醇水平升高为保护因素.结论:携带TCF7L2基因rs12255372位点G/T基因型与FOXOl基因rs2701891位点C/C、C/T基因型者发生T2DM的危险性增大,可能与天津地区汉族人群T2DM的发病有关,且两基因间存在一定协同作用.
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HER2/neu和Akt2在胃癌中的表达及意义
目的检测HER2/neu和Akt2蛋白在胃癌及正常胃组织中的表达,分析二者与胃癌临床病理指标间的关系.方法 应用免疫组化方法检测HER2/neu和Akt2蛋白在80例胃癌及40例正常胃组织中的表达.结果 HER2/neu和Akt2蛋白阳性表达率胃癌中分别为17.50％和67.50％,正常胃组织中分别为0和5.00％,胃癌组织与正常胃组织比较HER2/neu和Akt2蛋白阳性表达率的差异均有统计学意义(P＜0.05)；胃癌中,HER2/neu的表达与胃癌Lauren分型、组织学分化程度有关(P＜0.05),与临床分期、淋巴结转移及浆膜浸润无关(P＞0.05)；而Akt2的表达与胃癌Lauren分型、组织学分化程度、临床分期及淋巴结转移有关(P＜0.05),与浆膜浸润无关(P＞0.05).HER2/neu及Akt2在胃癌中的表达有一定的一致性(x2=4.97,P＜ 0.05).结论HER2/neu和Akt2蛋白在胃癌中有表达,二者的表达可能与胃癌的不良预后有密切关系,HER2/neu及Akt2在胃癌中的表达具有一定的一致性.
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糖尿病大鼠肾组织中AKT的表达及意义
目的 观察Akt1和Akt2在糖尿病大鼠肾组织中的表达并探讨其是否参与糖尿病肾病(DN)发病过程.方法 链脲佐菌素(STZ)诱发大鼠糖尿病(DM),分为2、4、8、12、16w和24w组,每一时点均设相应的正常对照组.测定各组血糖、24h尿蛋白、血肌酐(Scr)、肾脏指数.HE和PAS染色光镜观察肾脏病理改变.免疫组化方法检测肾皮质Akt1、Akt2、TGF-β1、α-SMA和FN的表达,Western印迹和RT-PCR法检测Akt1、Akt2蛋白及mRNA表达水平.结果 DM各组大鼠的血糖、24h尿蛋白、血肌酐、肾脏指数均较正常对照组明显升高(P＜0.05,P＜0.01),免疫组化显示DM各组TGF-β1、α-SMA和FN阳性染色较正常组明显增多(P＜0.01),以12 w增多为明显,分别为19.67±2.73、9.50±3.45、22.17±2.79,免疫组化、Western印迹及RT-PCR显示DM各组Akt1及Akt2蛋白和mRNA表达较正常组明显增多(P＜0.01).免疫组化显示Akt1与TGF-β1、FN蛋白表达水平呈显著正相关(r＝0.694,r =0.532,P＜0.01),Akt2与rGF-β1、FN蛋白表达水平呈显著正相关(r=0.789,r=0.743,P＜0.01).结论 Akt1、Akt2蛋白在DM大鼠肾组织过度表达,提示PI3 K/Akt信号通路可能参与了DN的发病机制.
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AKT2、PTEN在胃癌组织中的表达及临床意义
目的：探讨癌基因AKT2、磷酸酶基因（ PTEN）在胃癌组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组化法检测胃癌组织、癌旁正常组织以及萎缩性胃炎组织中AKT2和PTEN的表达。结果胃癌组织与萎缩性胃炎组织中AKT-2阳性率高于癌旁正常组织（ P＜0.01）；胃癌组织中AKT-2阳性率明显高于萎缩性胃炎组织（P＜0.05）。胃癌组织与萎缩性胃炎组织中PTEN阳性率低于癌旁正常组织（P＜0.01）；胃癌组织中PTEN阳性率亦低于萎缩性胃炎组织（P＜0.01）。 AKT2、PTEN的表达与肿瘤分化程度、有无淋巴转移及临床分期具有相关性（P＜0.05）；胃癌组织中PTEN和AKT2蛋白表达强度呈明显负相关（r＝－0.349，P＜0.05）。结论联合检测AKT2和PTEN蛋白的表达可作为判断胃癌生物学行为的辅助指标。
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老年胃癌组织HER2和AKT2的表达及其与临床病理特征的关系
目的：检测老年胃癌患者胃癌组织、癌旁组织及正常胃组织中的人表皮生长因子受体2（HER2）和丝/苏氨酸激酶2（AKT2）表达，分析二者与临床病理特征的关系。方法选用胃癌术后石蜡标本135例，其中胃癌组织102例作为胃癌组，癌旁组织33例作为癌旁组，另外选用50例正常胃组织作为对照组。采用免疫组化法检测三组的 HER2和 AKT2的表达，分析其与临床病理特征的关系。结果胃癌组、癌旁组及对照组HER2表达分别为17.65％、0.00％和0.00％，胃癌组与癌旁组、对照组相比差异显著（χ2＝9.835、6.871，均 P＜0.05）；三组的 AKT2表达分别为74.51％、12.12％和12.00％，胃癌组与癌旁组、对照组相比差异亦（χ2＝12.647、8.734，均 P＜0.05）。癌旁组的HER2、AKT2表达与对照组比较均无统计学意义（χ2＝1.237、0.952，均P＞0.05）。在老年胃癌组织中，HER2、AKT2的表达与 Lauren 分型、组织分化程度、浆膜浸润深度、淋巴结转移、TNM分型均相关（P＜0.05），且AKT2的表达与肿瘤直径相关（P＜0.05）。 HER2和AKT2的表达正相关（r＝0.762，P＜0.05）。结论 HER2和 AKT2在胃癌的发生、发展及淋巴结转移过程中有重要作用，二者联合检测与胃癌的靶向治疗和预后均有指导意义。
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AKT2在大肠腺瘤及其癌变组织中的表达及意义
目的:本研究旨在探讨丝/苏氨酸蛋白激酶AKT2在正常大肠组织、大肠腺瘤组织及大肠腺瘤癌变组织中的表达及临床意义.方法:用免疫组化法检测AKT2在正常大肠黏膜、大肠腺瘤及大肠腺瘤癌变组织中的表达情况.结果:大肠腺瘤癌变组、大肠腺瘤组AKT2的表达率均明显高于正常组(42.5％,73.3％ vs10.0％,P＜0.05),AKT2的表达率在大肠腺瘤癌变组与腺瘤组间比较差别具有显著性(P＜0.05).AKT2表达水平同大肠腺瘤的组织学类型无关,与大肠腺瘤的危险性分级呈正相关.结论:AKT2在大肠腺瘤癌变过程中可能起重要作用,AKT2的检测有助于大肠癌的早期诊断.
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RNAi抑制Akt2基因表达对卵巢癌细胞系A2780放射敏感性的影响
背景与目的:许多研究已经表明蛋白激酶B(P13K/Akt)在肿瘤细胞恶性增殖及肿瘤对放化疗的拮抗中起着重要作用,Akt2是Akt家族成员之一.本研究应用RNAi(RNA interference,RNAi)技术抑制Akt2基因的表达,观察其对肿瘤细胞生长和放射敏感性的影响.方法:构建Akt2基因的短发卡状RNA质粒转染人卵巢癌细胞A2780,同时以转染空载体和未转染组作为对照,3组细胞命名为pAkt2-shRNA/A2780,pEGFP/A2780和A2780)运用RT-PCR、蛋白质免疫印迹方法比较转染前后Akt2表达的差异;四甲基偶氮唑蓝实验绘制细胞生长曲线;克隆形成实验观察细胞的放射敏感性变化,以克隆形成率表示;6 MV X线10 Gy照射后48 h收集细胞,流式细胞仪(FACS)分析细胞凋亡情况.结果:与对照相比,shRNA可抑制Akt2 mRNA转录和蛋白的表达,差异显著(P＜0.05);pAkt2-shRNA/A2780细胞生长明显慢于pEGFP/A2780和A2780细胞;pAkt2-shRNA/A2780细胞克隆形成率明显低于pEGFP/A2780细胞和A2780细胞(P＜0.05);pAkt2-shRNA/A2780,pEGFP/A2780和A2780细胞凋亡率分别为(78.3±2.2)%、(41.2±1.8)%和(40.4±2.0)%,差异有显著性(P＜0.05).结论:转染针对Akt2基因shRNA真核表达载体,抑制卵巢癌细胞中Akt2基因表达,能抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,增强其对放射治疗的敏感性.
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两位点短发卡状RNA诱导AKT2基因沉默在卵巢癌细胞紫杉醇敏感性中的应用研究
目的:探讨AKT2基因在肿瘤细胞对紫杉醇敏感性中的作用.方法:分别构建2个针对同一AKT2基因不同位点的短发卡状RNA(shRNA)载体,转染人卵巢癌细胞A2780、SKOV3,荧光显微镜观察细胞内荧光蛋白的表达及转染效率,运用RT-PCR、蛋白质免疫印迹(western blotting)方法比较单独转染的抑制瘤和共转染对AKT2表达的沉默效率;抑制AKT2表达后,流式细胞仪(FACS)检测肿瘤细胞对紫杉醇的敏感性.结果:构建的2种shRNA表达载体均可抑制AKT2mRNA和蛋白的表达,共转染的抑制率明显高于分别单独转染的抑制率(P＜0.05);FACS结果显示,共转染沉默AKT2基因后,细胞凋亡率明显增加(P＜0.05).结论:共转染针对AKT2基因不同位点的2个shRNA真核表达载体,对AKT2基因的抑制效率高于单独转染1个载体;抑制卵巢癌细胞中AKT2基因表达,能增强其对紫杉醇的敏感性.
