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超高效液相色谱-串联质谱法测定中毒样品中3-硝基丙酸
目的 建立超高效液相色谱-串联质谱法测定甘蔗、甘蔗渣、呕吐物、血清和尿液中3-硝基丙酸(3-NPA)含量的方法.方法 样品加入乙腈和氯化钠超声振荡提取并离心,上清液经PSA固相萃取柱净化后用10％氨水-甲醇溶液(10∶90,V/V)洗脱,洗脱液用氮气吹至近干,用0.4％甲酸水溶解,0.22 μm微孔滤膜过滤.选用Waters acquity BEH C18色谱柱(2.1 mm×150mm×1.7 μm)、乙腈-水为流动相、梯度洗脱分离、ESI源、负离子模式、多反应监测方式,基质匹配外标法定量测定3-NPA的含量.结果 在1.0～50 μg/kg的浓度范围内,3-NPA在甘蔗和血清等基质中有良好的线性关系,相关系数分别为0.9993和0.9998,方法检出限为0.06 ～0.30μg/kg,定量限为0.20～1.0 μg/kg;在加标水平为1.0、10.0和100.0 μg/kg时3-NPA的加标回收率在86.9％～ 102.0％之间,相对标准偏差在1.80％～4.19％之间.结论 超高效液相色谱-串联质谱法可准确、快速测定各种中毒样品中的3-NPA,可用于因误食霉变甘蔗引起中毒的应急事件处理.
关键词： 3-硝基丙酸 超高效液相色谱-串联质谱法 食物中毒 甘蔗 -
固相萃取-超高效液相色谱串联质谱法检测甘蔗中3-硝基丙酸的方法研究
目的 建立甘蔗中3-硝基丙酸的固相萃取-超高效液相色谱串联质谱检测方法.方法 样品经乙腈萃取,Sep-pak氨基固相萃取柱净化,超高效液相色谱串联质谱法测定甘蔗中3-硝基丙酸含量.色谱柱为Waters ACQUITY BEH C18柱(1.7 μm,50 mm×2.1 mm),柱温40℃,样品温度10℃,进样体积5μl,流动相A为水,流动相B为乙腈,梯度洗脱.结果 方法的线性范围为4.0～40.0 μg/kg,基质加标工作曲线线性相关系数为0.998.方法的定性检出限为1.0 μg/ kg,定量检出限为4.0 μg/kg.高、中、低3个浓度水平的加标回收率为92.5％～93.6％,相对标准偏差小于10％.结论 本方法灵敏、快速、准确,可用于甘蔗中3-硝基丙酸的测定.
关键词： 甘蔗 3-硝基丙酸 固相萃取 超高效液相色谱-串联质谱 -
3-硝基丙酸预处理对大鼠局灶性脑缺血神经元凋亡的抑制作用
目的探讨小剂量线粒体毒素3-硝基丙酸(3-nitropropionic aci d,3-NPA)对大鼠局灶性脑缺血神经细胞凋亡和bcl-2/bax表达的影响.方法大鼠腹腔注射3-NPA 20 mg*kg-1或生理盐水后3 d制作大脑中动脉闭塞模型,分别采用TTC染色、流式细胞术、免疫组织化学方法,观察3-N PA预处理对脑缺血2 h再灌注24 h脑梗死体积、神经细胞凋亡率、bcl-2和bax表达的影响.结果 3-NPA预处理组较对照组脑梗死体积减小,神经细胞凋亡减少,bcl-2表达增强,bax表达降低. 结论 3-NPA预处理可以诱导脑缺血耐受,增强bcl-2的表达,降低bax的表达,从而抑制神经细胞凋亡可能是其机制之一.
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中药复方参乌胶囊对亨廷顿病大鼠模型运动功能及脑内单胺类神经递质含量的影响
目的探讨线粒体缺陷在亨廷顿病(HD)中的作用并观察中药复方参乌胶囊的干预作用.方法雄性SD大鼠分为6组,每组10只.模型组:线粒体呼吸链复合体Ⅱ/Ⅲ抑制剂3-硝基丙酸(3-NPA)20mg/kg隔日腹腔注射1次,共20天;参乌胶囊用药组根据剂量分为小剂量组、中剂量组、大剂量组:从造模前5天开始给予参乌胶囊0.45g/kg、0.9g/kg、1.8g/kg,每日1次,共25天;氟哌啶醇组:造模的同时给予氟哌啶醇,起始剂量为10μg/100g体重,以后隔日递增10μg/100g体重,至100μg/100g体重;正常对照组(9只),隔日腹腔注射与模型组等剂量的生理盐水,蒸馏水灌胃.旷场分析实验检测各组大鼠模型的中枢兴奋状态及空间认知能力,攀网实验检测动物肌力变化,高效液相色谱-电化学检测法分别测定各组动物纹状体中多巴胺(DA)、其代谢产物二羟基苯乙酸(DOPAC)及5-羟色胺(5-HT)的含量.结果旷场分析实验中模型组大鼠较正常对照组理毛次数﹑站立次数﹑跨格次数分别减少74.69%,64.46%,53.06%,具有非常显著性差异( P<0.01), 参乌胶囊用药组较模型组理毛次数增加了68%( P<0.01);攀网实验中,各组动物攀附时间无差异;模型组大鼠较正常对照组DA﹑DOPAC和5-HT的含量明显降低( P<0.01),而参乌胶囊用药组、氟哌啶醇组动物纹状体中上述递质及其代谢产物的含量都较模型组明显升高( P<0.01).结论腹腔注射3-NPA可以造成大鼠运动功能及脑纹状体内单胺类神经递质的改变,而中药复方参乌胶囊对3-NPA动物模型的行为学及脑纹状体中单胺类神经递质含量具有明显的改善和提升作用.
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3-硝基丙酸预处理对肢体缺血再灌注损伤的保护作用
目的:探讨3-硝基丙酸(3--nitropropionic acid,3-NPA)预处理对肢体缺血再灌注损伤的影响.方法:采用大鼠右后肢缺血再灌注模型,将30只实验大鼠随机分为假手术组、对照组、3-NPA组.测定各组血清磷酸激酶(CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)变化,观察腓肠肌组织学及超微结构变化.结果:对照组和3-NPA组血清CPK、LDH、MDA与假手术组相比明显升高(p<0.05);3-NPA组各指标与对照组相比显著降低(p<0.05).结论:3-硝基丙酸预处理对肢体骨骼肌缺血再灌注损伤具有保护作用.
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3-硝基丙酸预处理对黑质多巴胺神经元能量代谢的影响
目的观察3-硝基丙酸(3-nitropropionic acid,3-NP)预处理对黑质腺苷酸及腺苷含量的影响,探讨能量代谢及腺苷含量改变在3-NP预处理保护多巴胺(dopamine,DA)神经元中的作用.方法 64只雄性SD大鼠随机分为对照组、3-NP组、PD组及3-NP预处理组.3-NP预处理组于6-羟基多巴胺(6-OHDA)损毁前24 h经腹腔注射3-NP (按体重20 mg/kg),采用高效液相色谱法(HPLC)测定术后2 h和1、3、5 d时间点损毁侧黑质腺苷酸及腺苷含量.结果 3-NP组2 h,帕金森病(PD)组3、5 d及3-NP预处理组各时间点较对照组ATP含量明显降低,腺苷酸ADP、AMP等增高(P＜0.05或P＜0.01),3-NP预处理组3、5 d较PD组同时间点相比ATP水平增高(P＜0.05);3-NP预处理组各时间点腺苷持续在较高水平,与PD组同时间点相比显著增高(P＜0.01).结论 3-NP轻度抑制氧化磷酸化使能量代谢水平降低,有利于细胞能量储备和增强对后续抑制的耐受能力.腺苷水平增高在3-NP预处理保护神经元过程中可能具有重要作用.
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参乌胶囊对拟亨廷顿病大鼠行为及脑内神经营养因子的影响
目的观察拟亨廷顿病模型大鼠学习记忆改变情况,脑黑质、海马部位脑源性神经营养因子(BDNF)和胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的改变情况及参乌胶囊对其的干预作用.方法用线粒体呼吸链复合体Ⅱ/Ⅲ抑制剂--3-硝基丙酸(3-nitropropionic acid,3-NPA)20 mg/kg对SD大鼠隔日腹腔注射连续造模20 d,建立HD大鼠模型.造模的同时,用药组大鼠给予参乌胶囊连续灌胃25 d.阳性对照药组自造模当日起给予氟哌啶醇.应用Morris水迷宫及避暗实验检测大鼠学习记忆能力.应用免疫组织化学染色法检测大鼠海马CA1及CA4区BDNF、GDNF的细胞数量及细胞面积.结果 Morris水迷宫实验中,模型大鼠的游出时间及游出距离较对照组明显延长,参乌胶囊用药组可以显著缩短大鼠的游出时间及距离.避暗实验中,参乌胶囊用药组大鼠较模型大鼠进入暗箱的潜伏期分别显著性延长56.69 s和54.24 s.在海马CA1及CA4区,模型组动物BDNF、GDNF阳性细胞的表达明显较正常对照组细胞数减少,阳性细胞总面积减少.而962中剂量组对于此区BDNF、GDNF阳性细胞的表达明显具增强作用(P<0.01).结论参乌胶囊可以明显增强动物学习记忆能力,增强3-NPA模型大鼠海马处BDNF及GDNF的表达.
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三硝基丙酸动物模型和亨廷顿氏病
亨廷顿氏病(Huntington's disease,HD)是一类神经系统退行性疾病,主要病理改变累及基底节神经元以及纹状体的固有神经元,患者主要临床特征为进行性恶化的运动、认知及精神障碍三联征.3-硝基丙酸(3-NP)是线粒体毒性药物,主要作用于氧化呼吸链并抑制机体的三羧酸循环.本文将就HD的发病机制及病理学特征以及3-NP介导的动物模型的优缺点做一综述.
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苏木蓝化学成分的研究
目的研究山豆根代用品的主要来源植物之一--豆科木蓝属植物苏木蓝Indigofera carlesii的化学成分,寻找其活性成分和/或毒性成分.方法运用溶剂萃取、硅胶柱色谱、重结晶分离纯化,根据化合物的光谱数据鉴定其结构.结果从苏木蓝的根中分离得到9个化合物,分别鉴定为3-硝基丙酸(Ⅰ),eoronarian(Ⅱ),corollin(Ⅲ),羽扇豆醇(Ⅳ),白桦脂酸(Ⅴ),β-谷甾醇(Ⅵ),胡萝卜苷(Ⅶ)、豆甾醇-3-O-葡萄糖苷(Ⅷ),琥珀酸(Ⅸ).结论 化合物Ⅰ～Ⅲ和Ⅵ为首次从苏木蓝分离得到,化合物Ⅳ、Ⅴ和Ⅶ～Ⅸ为首次从木蓝属植物中分离得到;化合物Ⅰ～Ⅲ可能为引起木蓝山豆根毒性的主要成分.
关键词： 苏木蓝 3-硝基丙酸 3-硝基丙酰基葡萄糖 三萜类化合物 -
化学预处理对大鼠海马脑片缺氧耐受性的影响及其与线粒体ATP敏感性钾通道的关系
目的:探讨3-硝基丙酸(3-NPA)预处理对海马脑片缺氧损伤的保护作用及线粒体内膜ATP敏感性钾(Mi-toKATP)通道在预处理脑保护机制中的作用.方法:采用Nissl染色和透射电镜观察缺氧后大鼠海马CA1区神经元密度、锥体细胞和亚细胞结构在预处理前后的变化,以及MitoKATP拮抗剂5-羟基癸酸盐(5-HD)孵育海马脑片对预处理效果的影响.结果:3-NPA组大鼠缺氧后海马CA1区神经元密度(86.69±4.87)高于对照组(53.85±3.13,P＜0.05),锥体细胞超微结构受损程度较对照组明显减轻.预处理大鼠海马脑片经100μmol/L 5-HD孵育后CA1区神经元密度(57.31±7.89)较未孵育脑片降低(P＜0.05),超微结构受损加重.结论:3-NPA预处理可提高海马脑片缺氧耐受能力,这种保护作用可能与MitoKATP通道开放有关.
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3-硝基丙酸预处理对多巴胺能神经元保护作用的研究
目的:研究3-硝基丙酸(3-NPA)预处理对MPP+(1-甲基-4苯基-吡啶离子)损害的多巴胺能神经元是否具有保护作用.方法:将MPP+加入到培养的多巴胺能神经元SH-SY5Y细胞中制作帕金森病的细胞模型,在加入MPP+(0.25mmol/L)前,分别单次或多次加入3-NPA(0.2mmol/L)形成预处理,应用四氮唑盐(MTT)检测细胞生存率,[3H]DA摄取率测定多巴胺能细胞突触前功能,观察3-NPA预处理对它们的影响.结果:3-NPA预处理后,预处理组细胞生存率分别为71.8%(单次),85.2%(多次),较MPP+组(54.3%)明显提高;[3H]DA摄取率分别为65.8%(单次)80.3%(多次),较MPP+组(50.1%)明显提高,且多次预处理较单次预处理效果更好.单加3-NPA对细胞无影响.结论:3-NPA预处理对多巴胺能神经元有明显的保护作用,多次预处理的保护作用更加显著.
关键词： 3-硝基丙酸 预处理 SH-SY5Y细胞 1-甲基-4苯基-吡啶离子 -
3-硝基丙酸预处理对大鼠缺血-再灌注脑损伤保护作用的研究
目的 研究3-硝基丙酸(3-NPA)预处理对大鼠局灶性脑缺血脑梗死体积,脑缺血半暗带神经细胞凋亡的影响,探讨3-NPA预处理诱导脑缺血耐受的机制.方法 大鼠腹腔注射3-NPA,分别在24h和72h后制作大脑中动脉缺血-再灌注模型,采用TTC染色和TUNEL法,观察3-NPA预处理对缺血2h再灌注24h脑梗死体积、神经细胞凋亡的影响.结果 缺血2h再灌注24h,3-NPA预处理组脑梗死体变小,神经细胞凋亡减少,与对照组及假手术组比较有显著性差异.结论 3-NPA预处理可以诱导脑缺血耐受,抑制神经细胞凋亡可能是其机制之一.
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3-硝基丙酸致未成熟鼠脑室周围脑白质软化的神经行为学及磁共振成像变化
目的 通过脑内定位注射3-硝基丙酸(3-NPA)建立新生鼠脑室周围白质软化(PVL)模型,探讨远期神经行为学和磁共振成像(MRI)变化.方法 新生5 d(P5)SD大鼠随机分成实验组(NPA组)与假手术组(PBS组),脑立体定位仪定位于左侧脑室上方胼胝体,分别注入等量3-NPA和PBS,造模后1、2、3、9 d灌注固定取脑,石蜡切片作HE染色;术后不同时间点观察体重、睁眼时间等生长发育情况;P29-30进行神经行为学检测,观察两组大鼠肢体肌力、随意运动、情感行为能力和学习记忆能力;P30行MRI检查.结果 NPA组大鼠术后睁眼时间延迟,体重增加高于PBS组,差异有统计学意义(P<0.05);HE染色显示NPA组大鼠P6、p7、P8 NPA组注射3-NPA侧皮质下及脑室周围白质出现不同程度疏松及液化灶,P14时出现同侧脑室明显扩大,PBS组无明显变化;神经行为学检测实验组鼠肢体肌力、随意运动、情感行为能力和学习能力较假手术组减退,评分差异有统计学意义(P<0.05);P30 MRI检查显示NPA组脑内注射侧脑室周围局部有脑组织软化信号改变.结论 P5大鼠脑内注射3-NPA制作的脑室周围白质软化模型.能真实地模拟在体病理改变,经神经行为学检测与临床症状相符,MRI检查可显示脑白质损伤的解剖形态学变化,作为诊断PVL的方法具有可行性.
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3-硝基丙酸预处理对大鼠局灶性脑缺血神经元凋亡的影响
目的:探讨小剂量线粒体毒素3-硝基丙酸(3-nitoppropionic acid,3-NPA)预处理对大鼠局灶性脑缺血脑梗死体积,脑缺血半暗带神经元凋亡的影响,阐明3-NPA预处理诱导脑缺血耐受的机制.方法:大鼠腹腔注射3-NPA 3 d后制作大脑中动脉闭塞模型,采用TTC染色、TUNEL法和流式细胞术,观察3-NPA预处理对缺血2 h再灌注24h脑梗死体积、神经元凋亡的影响.结果:缺血2 h再灌注24h,3-NPA预处理组脑梗死体积变小,神经元凋亡减少,与对照组比有显著性差异.结论:3-NPA预处理可以诱导脑缺血耐受,抑制神经元凋亡可能是其机制之一.
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3-硝基丙酸多次化学预处理对多巴胺能神经元的保护作用
目的探讨3-硝基丙酸(3-NP)多次化学预处理对多巴胺能神经元的保护作用及可能机制.方法应用MPTP(30 mg/kg)在C57BL小鼠上复制帕金森病模型,以3-NP(20 mg/kg)行预处理,检测小鼠中脑黑质凋亡率和转录因子c-Jun的阳性细胞数量及c-Jun的蛋白水平;应用MPP+(0.25 mmol/L)在SH-SY5Y细胞制作帕金森病模型,以3-NP(0.2 mmol/L)进行预处理,并将携带显性突变体c-JuncDNA片段的真核表达载体质粒pcDNA3(HA)-Jun-dn转染SH-SY5Y细胞,检测各组细胞的c-Jun表达水平及凋亡率.结果小鼠中脑黑质凋亡率:MPTP组较对照组明显升高(P＜0.01),3-NP单次、多次预处理后均明显降低(P＜0.05,P＜0.01);c-Jun阳性细胞数:MPTP组较对照组明显增加(P＜0.05),3-NP单次预处理组与MPTP组比较无明显差异,3-NP多次预处理后明显降低(P＜0.05);c-Jun蛋白水平:与其阳性细胞数变化一致;细胞凋亡率:MPP+组较对照组明显升高,3-NP单次、多次预处理组细胞凋亡率明显降低(P＜0.05,P＜0.01);c-Jun蛋白水平变化与中脑黑质一致;经pcDNA3(HA)-Jun-dn转染的细胞,其c-Jun的表达较未转染细胞明显降低(P＜0.01),其凋亡率也下降(P＜0.01).结论3-NP单次、多次预处理对多巴胺能神经元确有保护作用,多次预处理保护效果更强,其机制与抑制转录因子c-Jun的表达,降低其蛋白水平有关.
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3-硝基丙酸预处理对大鼠局灶性脑缺血后促红细胞生成素蛋白和mRNA表达的影响
目的观察小剂量线粒体毒素3-硝基丙酸(3-nitroppropionic acid,3-NPA)预处理对大鼠局灶性脑缺血后促红细胞生成素(erythropoietin,Epo)蛋白和mRNA表达的影响,揭示3-NPA预处理诱导脑缺血耐受的机制.方法大鼠腹腔注射3-NPA 3 d后制作大鼠局灶性缺血再灌注模型,采用TTC染色、免疫组织化学方法、逆转录聚合酶链式反应技术,观察3-NPA预处理对缺血2h再灌注24 h脑梗死体积和Epo蛋白及mRNA表达的影响.结果脑缺血再灌注后Epo蛋白表达广泛,主要分布于缺血侧基底节区、海马和部分大脑皮质.3-NPA预处理使脑梗死体积减小,Epo蛋白和mRNA的表达增多,与对照组比较有显著性差异.结论小剂量3-NPA预处理可以诱导脑缺血耐受,脑源性Epo表达增强可能是其形成的机制之一.
关键词： 脑缺血 3-硝基丙酸 促红细胞生成素 免疫组织化学 逆转录多聚酶链式反应 -
地昔帕明对3-硝基丙酸所致小鼠运动功能障碍的治疗作用
目的 探讨抗抑郁药地昔帕明对神经毒剂3-硝基丙酸所致小鼠运动功能损伤的治疗作用.方法 选用8周龄雄性昆明小鼠36只,随机分为4组:生理盐水对照组、地昔帕明对照组、3-硝基丙酸模型组、3-硝基丙酸模型+地昔帕明治疗组.小鼠神经损伤模型腹腔注射总剂量为320 mg/kg的3-硝基丙酸复制;地昔帕明治疗采用10 mg/kg,连续12d.采用转棒实验和爬杆实验检验小鼠的运动功能.结果 3-硝基丙酸能够导致昆明小鼠运动功能障碍,模型小鼠在转棒上停留的时间与生理盐水对照组相比明显缩短,爬杆实验转头时间和总时间明显延长.地昔帕明能够明显延长3-硝基丙酸毒性损伤小鼠在转棒上停留的时间,降低爬杆实验的转头时间和总时间.结论 地昔帕明对3-硝基丙酸所致的小鼠运动功能损伤具有一定的治疗作用,为研究抗抑郁药治疗与纹状体神经元损害有关的神经精神疾病提供了动物实验依据.
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3-硝基丙酸预处理及其神经保护机制
近年来的研究发现,小剂量线粒体毒素3-硝基丙酸预处理可以诱导脑对缺血缺氧产生耐受性.文章就3-硝基丙酸预处理的特点及其神经保护机制的研究进展进行了综述.
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化学预处理的研究进展
化学预处理是继缺血预处理之后,近几年来出现的有关组织保护研究领域的新兴课题.文章简要介绍了化学预处理的概念和发展过程,重点论述了化学预处理机制的研究进展.
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3-硝基丙酸预处理对大鼠局灶性脑缺血Bcl-2和Bax mRNA表达的影响
目的 探讨3-硝基丙酸(3-NPA)预处理对大鼠局灶性脑缺血半暗带Bcl-2和Bax mRNA表达的影响.方法 将大鼠腹腔注射3-NPA 20 mg/kg,3 d后制作局灶性脑缺血再灌注模型;采用逆转录聚合酶链反应,观察3-NPA预处理对脑缺血再灌注1 h、6 h、12 h、24 h及48 h额顶部皮质Bcl-2和Bax mRNA表达的影响,并与假手术组和缺血再灌注组比较.结果 与假手术组比较,缺血再灌注组和3-NPA预处理组各时间点Bcl-2和Bax mRNA表达极显著增强(均P＜0.01);与缺血再灌注组比较,3-NPA预处理组各时间点Bcl-2 mRNA表达显著增强(均P＜0.05),再灌注12～48 h Bax mRNA的表达显著降低(均P＜0.05).结论 增强Bcl-2的表达、抑制Bax的表达,可能是3-NPA预处理抑制细胞凋亡、诱导脑缺血耐受的机制之一.
