首页 > 文献资料
-
益气化瘀补肾方及拆方影响椎间盘细胞外基质胶原和代谢酶mRNA表达的研究
目的 探讨益气化瘀补肾方及拆方影向退变模型大鼠颈椎间盘细胞外基质中Ⅰ型、Ⅲ型、Ⅹ型胶原和相关代谢酶MMPs/TIMP mRNA的表达.方法 采用RT-PCR法检测胶原和MMPs/TIMP mRNA表达,凝胶成像系统扫描仪对各条带进行扫描,计算机自动计算出光密度.结果 与假手术组比较,模型组Ⅰ型、Ⅲ型、Ⅹ型胶原和MMP-13 mRNA表达明显升高(P＜0.01);TIMP-1 mRNA表达无明显统计学差异(P＞0.05).益气化瘀补肾方及其拆方可明显降低Ⅰ型、Ⅲ型、Ⅹ型胶原和MMP-13 mRNA的过度表达(P＜0.01或P＜0.05).结论 退变椎间盘的Ⅰ型、Ⅲ型、Ⅹ型胶原mRNA表达增高,MMP-13 mRNA的高表达和TIMP-1 mRNA的低表达,MMPs/TIMP的比例失调,反映了退变椎间盘ECM合成和降解的失调.益气化瘀补肾方及拆方可能通过影响颈椎间盘组织胶原及相关代谢酶mRNA表达而延缓椎间盘的退变.
-
AFP-mRNA作为血中肝癌细胞的标志缺乏特异性
目的评价甲胎蛋白信使RNA(AFP-mRNA)作为外周血中肝癌细胞的标志是否具有特异性.方法抽取64份分别来自肝癌、肝炎肝硬化、健康人的外周血标本,提取血中有核细胞成分的总RNA,以AFP特异性引物进行巢式逆转录-多聚酶链式反应(nested RT-PCR)扩增,检测血中有核细胞中AFP-mRNA的表达情况.结果肝癌、肝炎肝硬化、健康人3组外周血中AFP-mRNA表达率分别为60%(18/30)、50%(10/20)、50%(7/14).表达率3组间无显著差异.结论AFP-mR-NA不是血液中肝癌细胞的特异性标志.
关键词： 癌 肝细胞 甲胎蛋白 逆转录多聚酶链式反应 信使RNA -
喉鳞状细胞癌中肝细胞生长因子受体的表达及意义
目的 研究肝细胞生长因子受体(c-Met)在喉鳞状细胞癌患者组织及血浆中的表达,探讨c-Met在喉鳞状细胞癌发生、发展所起的作用.方法 喉鳞状细胞癌及喉乳头状瘤患者进行调查,并且设立正常对照组,应用酶联免疫吸附法检测各组血浆c-Met水平;应用半定量RT-PCR法和免疫组织化学法分别检测各组组织中c-Met mRNA及c-Met蛋白的表达.结果 喉鳞状细胞癌患者血浆中的c-Met水平明显高于喉乳头状瘤患者和正常人群(均P＜0.05).喉鳞状细胞癌组织中的c-Met水平明显高于喉乳头状瘤组织和正常组织(均P＜0.05).结论 c-Met在喉鳞状细胞癌组织及血浆中呈高表达,可能与喉鳞状细胞癌的发生、发展有关.
-
白血病抑制因子基因在急性白血病患者中的表达及意义
目的 研究急性白血病(acute leukemia,AL)患者外周血白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)mRNA的表达水平及其与AL病情、疗效和预后的关系.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)检测37例不同类型以及同一类型不同阶段AL患者[初治患者16例(初治亚组)、完全缓解患者12例(完全缓解亚组)、复发患者9例(复发亚组)]LIF的mRNA的表达水平,并与20例健康者(对照组)比较.结果 初治亚组LIF基因mRNA阳性表达率低于对照组和完全缓解亚组(P<0.05);复发亚组LIF基因mRNA阳性表达率低于完全缓解组(P<0.05);复发亚组与初治亚组比较及完全缓解亚组与对照组比较,LIF基因mRNA阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05);LIF基因表达率在急性髓系白血病(AML)和急性淋巴细胞白血病(ALL)患者间无显著性差异(P>0.05).结论 LIF基因表达水平与AL患者病情变化密切相关.检测AL患者LIF基因表达情况,为AL患者检测病情、疗效评价、指导临床用药和预后判断,提供了一定的理论依据.
关键词： 白血病 急性 白血病抑制因子 逆转录多聚酶链式反应 -
SARS病例尸解标本和咽嗽液中病原体检测
目的确定严重急性呼吸系统综合征(SARS)病例尸解肺组织和咽嗽液中病原体种类.方法用超薄切片电镜技术观察广东省传染性非典型肺炎流行早期3例死亡病例尸解肺组织标本,用RT-PCR法扩增尸解肺组织和SARS病人咽嗽液中SARS冠状病毒特异核酸片段,并进行序列测定.结果在死亡病人肺组织中观察到衣原体的网状体、中间体以及原体颗粒,并见衣原体包涵体样结构;用RT-PCR法在2例尸解肺组织扩增出预期大小的DNA片段,测序后经相似性(BLAST)比较,其与SARS冠状病毒相应基因片段高度同源;用巢式RT-PCR技术在SARS病人咽漱液中扩增出SARS冠状病毒特异基因片段.结论在SARS尸解肺组织中发现衣原体样颗粒,在尸解肺组织和咽漱液中扩增出SARS冠状病毒核酸片段,说明SARS患者可合并衣原体等微生物混合感染.
关键词： 传染性非典型肺炎 衣原体 SARS冠状病毒 电镜 逆转录多聚酶链式反应 -
小鼠烫伤创面区域巨噬细胞集落刺激因子表达的变化
目的通过应用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)及巢式多聚酶链式反应(Nest-PCR)技术,研究创面区域巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)mRNA的表达情况,探求创面区域M-CSF水平升高的来源.方法清洁级无特异病原体C57BL/6小鼠18只,随机分为烫伤组(n=9)及假烫组(n=9),烫伤组造成20%TBSAⅢ度烫伤.分别于烫伤后第1、10天取创面区域组织及相应背部皮肤,抽提组织总RNA.RT-PCR及Nest-PCR产物经2%琼脂糖电泳,溴化乙锭染色、紫外灯下照相,密度分析软件分析密度.结果在烫伤后第1天创面组织中几乎检测不到M-CSF mRNA的表达,而在烫伤后第10天创面组织中的M-CSF mRNA明显高于假烫组.结论结合组织学检查结果,我们推测创面区域M-CSF表达的升高可能与创面局部的成纤维细胞、内皮细胞有关.
关键词： 烫伤 巨噬细胞集落刺激因子 逆转录多聚酶链式反应 巢式多聚酶链式反应 -
缺氧缺血性脑损伤新生大鼠褪黑素受体的变化
目的 观察外源性褪黑素(melatonin,MT)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic braindamage,HIBD)干预后不同时间点肾上腺组织中褪黑索受体1(melatonin receptor 1,MR1)mRNA和血浆皮质酮(corticosterone,CS)浓度的变化.方法 新生7 日龄的SD大鼠随机分为治疗组(T)、模型组(K)、假手术组(H)和生理组(S),在不同时间点采用逆转录多聚酶链式反应法(RT-PCR)半定量测定各组肾上腺组织中MR1 mRNA的表达,放射免疫分析法检测血浆CS的浓度.结果 HIBD后2 h肾上腺组织中MRI的表达显著下调,而此时血浆CS水平显善升高,4 h达高峰(P<0.05),与应激程度相符;MT干预后CS浓度以及MRI变化均不明显(P0.05).结论 外源性MT可能通过自身受体调控应激激素,抑制HIBD后的过度应激损伤.
关键词： 缺氧缺血性脑损伤 褪黑素 褪黑素受体1 皮质酮 逆转录多聚酶链式反应 -
HIF-1α和HIF-2α在肾透明细胞癌中的表达及意义
背景与目的:低氧诱导因子是广泛存在于多种细胞的转录因子,在低氧时肿瘤细胞相关基因的表达发挥着重要的调控作用.本研究探讨了低氧诱导因子HIF-1α mRNA和HIF-2α mRNA在肾透明细胞癌中的转录及其临床意义.方法:采用逆转录多聚酶链式反应 (RT-PCR)方法检测56例肾透明细胞癌组织、对照组43例远离肿瘤的癌周肾脏组织及9例良性疾病肾脏组织中HIF-1α mRNA和HIF-2α mRNA的阳性率.结果:HIF-1α mRNA 在肾透明细胞癌组织中的阳性率为87.5%,较对照组织13.5%高,差异具有显著性(P＜0.001);HIF-2α mRNA 在肾透明细胞癌标本组织中的表达率为94.6%,较对照组织7.7%高,差异有显著性(P＜0.001).结论:HIF-1α mRNA和HIF-2α mRNA的转录可能对肾透明细胞癌的发生和发展有重要作用.
-
3-硝基丙酸预处理对大鼠局灶性脑缺血后促红细胞生成素蛋白和mRNA表达的影响
目的观察小剂量线粒体毒素3-硝基丙酸(3-nitroppropionic acid,3-NPA)预处理对大鼠局灶性脑缺血后促红细胞生成素(erythropoietin,Epo)蛋白和mRNA表达的影响,揭示3-NPA预处理诱导脑缺血耐受的机制.方法大鼠腹腔注射3-NPA 3 d后制作大鼠局灶性缺血再灌注模型,采用TTC染色、免疫组织化学方法、逆转录聚合酶链式反应技术,观察3-NPA预处理对缺血2h再灌注24 h脑梗死体积和Epo蛋白及mRNA表达的影响.结果脑缺血再灌注后Epo蛋白表达广泛,主要分布于缺血侧基底节区、海马和部分大脑皮质.3-NPA预处理使脑梗死体积减小,Epo蛋白和mRNA的表达增多,与对照组比较有显著性差异.结论小剂量3-NPA预处理可以诱导脑缺血耐受,脑源性Epo表达增强可能是其形成的机制之一.
关键词： 脑缺血 3-硝基丙酸 促红细胞生成素 免疫组织化学 逆转录多聚酶链式反应 -
人牙胚釉原蛋白成熟肽基因的克隆
目的:克隆人釉原蛋白成熟肽编码区基因片断,并构建含有该基因的重组表达质粒.方法:从引产胎儿牙胚组织中抽提总RNA,以Oligo(dt)为引物,逆转录合成牙胚cDNA利用PCR,从cDNA中扩增出人釉原蛋白成熟肽编码序列(约540bp),所得目的基因片断插入表达载体质粒PQE30,转化到大肠杆菌DH5α后挑选阳性克隆,抽提重组质粒DNA,通过PCR、酶切和核苷酸序列分析,鉴定阳性克隆.结果:样品质粒测序证实,质粒PQE30中插入的基因片段与人釉原蛋白成熟肽基因序列完全相同.结论:从人胚胎的牙胚组织中克隆到釉原蛋白成熟肽编码序列,成功构建含有人釉原蛋白成熟肽基因的重组表达质粒.
关键词： 釉原蛋白 逆转录多聚酶链式反应 重组质粒 PCR -
口腔鳞癌中Maspin和VEGF基因的表达及意义
目的:研究乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂基因(marray serine proteinase inhibitor,Maspin)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在口腔鳞癌中的表达及其相关性.方法:应用RT-PCR方法,分别对18例口腔鳞癌的癌组织、癌旁组织及相应正常组织标本行Maspin和VEGF mRNA含量的半定量测定,应用随机区组设计的F检验和Person直线相关分析进行统计分析.结果:Maspin mRNA在口腔鳞癌的癌组织、癌旁组织和正常组织中表达逐渐增加(P＜0.01),且三者之间表达差异均有显著性(P＜0.05);VEGF mRNA在癌组织、癌旁组织、正常组织中的表达依次降低(P＜0.01),且癌组织和正常组织、癌组织和癌旁组织之间表达差异有显著性(P＜0.05);口腔鳞癌中,Maspin和VEGF mRNA表达呈负相关(P＜0.01);Maspin和VEGF基因mRNA表达与肿瘤淋巴结转移相关(P＜0.05),与肿瘤的临床分期和病理分级无关.结论:Maspin基因在口腔鳞癌的发生发展过程中可能起着重要抑癌作用;Maspin可能通过下调VEGF来发挥抑癌作用.
-
HIF-1α和HIF-2αmRNA在肾透明细胞癌中的表达及临床意义
目的研究低氧诱导因子(HIF)-1α和-2α rmRNA在肾透明细胞癌中的表达及其临床意义.方法采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)方法检测26例肾透明细胞癌组织、15例远离肿瘤的癌周肾脏组织及5例良性疾病肾脏组织中HIF-1α和HIF-2α mRNA的表达情况.结果HIF-1α mRNA在肾透明细胞癌标本组织中的表达较在对照组织中增高,但这种差异没有统计学意义(P=0.053);所有肾透明细胞癌标本和部分对照肾脏组织中均有HIF-2αmRNA的表达,肾透明细胞癌中的表达较对照组织明显增高并具有显著统计学意义(P=0.0016).结论HIF-2α mRNA的表达可能对肾透明细胞癌的发生和发展有重要作用.
-
三磷酸肌醇受体在大鼠血管平滑肌细胞的表达
目的:研究三磷酸肌醇受体(IP3R)在大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)的表达 .方法:用异硫氰酸胍酸酚一步法提取大鼠VSMC总核糖核酸(RNA ).用AMV逆转录酶反转录,以IP3R各亚型的引物进行反转录PCR(RT PCR),并对扩增产物进行克隆及测序.用间接免疫荧光标记技术检测I型IP3R在VSMC的分布. 结果:3个亚型IP3R mRNA在VSMC中均有表达,扩增片断分别为405、183和169 bp .VSMC中表达缺失型I型IP3R.免疫荧光染色显示,Ⅰ型IP3R在细胞质内围绕核膜周边分布.结论:大鼠血管平滑肌细胞内表达3种亚型的IP3R, 提示单一细胞内存在复杂多样的信号转导途径.
-
肝癌中肝细胞生长因子受体的表达及意义
目的:研究肝细胞生长因子受体(c-Met)在肝癌患者组织及血浆中的表达,探讨c-Met在肝癌发生、发展所起的作用.方法:对肝癌及慢性肝炎患者进行调查,并且设立正常对照组,应用酶联免疫吸附法检测各组血浆c-Met水平;应用半定量RT-PCR法和免疫组织化学法分别检测各组肝组织中的c-Met mRNA及c-Met蛋白的表达.结果:肝癌患者血浆中的c-Met水平明显高于慢性肝炎患者和正常人群(均P<0.05).肝癌组织中的c-Met水平明显高于慢性肝炎组织和正常肝组织(均P<0.05).结论:c-Met在肝癌组织及血浆中呈高表达,可能与肝癌的发生、发展有关.
关键词： 肝癌 肝细胞生长因子受体 酶联免疫吸附法 逆转录多聚酶链式反应 免疫组织化学 -
肝癌中肝细胞生长因子的表达及意义
目的:研究肝细胞生长因子(HGF)在肝癌患者组织及血浆中的表达,探讨HGF在肝癌发生、发展中所起的作用.方法:对肝癌及慢性乙型肝炎患者进行调查,并且设立正常对照组,应用酶联免疫吸附法检测各组血浆HGF水平;应用半定量RT-PCR法和免疫组织化学法分别检测各组肝组织中的HGF mRNA及HGF蛋白的表达.结果:(1)PCR产物行半定量分析,各组数据两两比较差异均有统计学意义(P＜0.01),肝炎组和肝癌组中HGF mRNA的表达均显著高于正常肝组织,且在肝癌组中的表达显著高于肝炎组.(2)免疫组化法检测肝癌组织中HGF阳性染色位于细胞胞浆,HGF的表达阳性率97.1%.肝炎组织中HGF的表达阳性率51.4%,正常肝组织阳性率0%.且肝癌组织中HGF的表达高于肝炎组织,差异有统计学意义(P＜0.01).(3)ELISA检测肝癌HGF与其它两组间比较差异有统计学意义(P＜0.01),其中肝癌组血浆中HGF高于肝炎组,而对照组低.结论:HGF在肝癌组织及血浆中呈高表达,可能与肝癌的发生、发展有关.
关键词： 肝癌 肝细胞生长因子 酶联免疫吸附试验 逆转录多聚酶链式反应 免疫组织化学法 -
Wnt2B基因在胃癌组织及相应癌旁组织中的表达
目的:探讨Wnt2B基因在胃癌组织及相应癌旁组织中的表达及其意义.方法:采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术检测胃癌组织及相应癌旁组织中Wnt2B基因mRNA的表达水平.结果:Wnt2B基因在37例人类胃癌组织及相应癌旁组织中均有表达,阳性率达100%;Wnt2B基因在胃癌组织中的表达水平明显高于相应癌旁组织,差异具有统计学意义(P＜0.001).结论:Wnt2B基因可能参与了胃癌的发生发展过程,在胃癌组织中表达上调可能有助于胃癌的早期诊断.
关键词： Wnt2B基因 胃癌 逆转录多聚酶链式反应 -
宜春市2015年麻疹病毒野病毒感染病例的快速鉴别
目的 引进并运用逆转录多聚酶链式反应-限制性片段长度多态性分析方法(RT-PCR-RFLP方法)快速鉴别2015年宜春市麻疹野病毒感染病例与疫苗株病毒引起的相关麻疹病例.方法 运用realtime RT-PCR对宜春市400例疑似麻疹病例咽拭子标本进行麻疹病毒核酸检测,引进RT-PCR-RFLP方法对麻疹病毒核酸检测阳性咽拭子标本进行检测是否含有AflⅡ酶切位点(疫苗株病毒有,野病毒没有)鉴别疫苗相关麻疹病例.结果 麻疹病毒核酸检测阳性标本为9例,阳性率为2.25%;9例麻疹病毒核酸检测阳性标本RT-PCR-RFLP方法检测的结果为均未能被AflⅡ酶切开,为麻疹野病毒感染.结论成功引进和建立宜春市麻疹野病毒感染病例与疫苗株病毒引起的相关麻疹病例的RT-PCR-RFLP快速鉴别方法,并鉴别了2015年宜春市9例麻疹病例均由麻疹病毒野病毒感染引起.
-
2015年江西省麻疹疫苗株病毒的快速鉴别
目的 运用逆转录多聚酶链式反应-限制性片段长度多态性分析方法(Reverse Transcription-Polymerase Chain Re-action-Restriction Fragment Length Polymorphism,RT-PCR-RFLP)快速鉴别2015年麻疹疫苗株病毒.方法 用RT-PCR-RFLP方法检测两例疑似疫苗相关麻疹病例咽拭子标本是否含有AflⅡ酶切位点鉴别麻疹疫苗株病毒,同时对标本进行N基因羧基末端450个核苷酸进行序列测定分析,在基因层面进一步证实,以验证RT-PCR-RFLP方法.结果 RT-PCR-RFLP方法鉴定的结果为两例疑似疫苗相关麻疹病例咽拭子标本均能被AflⅡ酶切开,N基因序列测定结果为两例疑似疫苗相关麻疹病例咽拭子标本为麻疹疫苗株病毒A基因型.结论 首次为江西省麻疹疫苗株病毒提供实验室证据.
-
STAT3在喉癌中的表达特征及其与Survivin表达的关系
目的 探讨信号传导与转录激活因子3(STAT3)在喉癌中的表达特征及其与Survivin表达的关系.方法 采用免疫组织化学方法检测40例喉鳞状细胞癌组织和12例喉正常黏膜组织中STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白和Survivin蛋白的表达;运用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测上述组织中STAT3 mRNA和Survivin mRNA的表达.结合病例资料进行统计学处理,采用χ2、t检验.结果 喉癌组织中STAT3、p-STAT3和Survivin蛋白及STAT3 mRNA和Survivin mRNA的阳性表达率均明显高于正常喉黏膜(P＜0.01); STAT3、p-STAT3蛋白和STAT3 mRNA在喉癌中的表达均与喉癌的临床分期相关(分别为P＜0.05、P＜0.01、P＜0.01);Survivin蛋白和 Survivin mRNA在喉癌中的表达与临床分期及淋巴结转移相关(P＜0.01,P＜0.01)STAT3和Survivin的表达呈正相关.结论 STAT3的过量表达可能在喉癌的发生、发展中起重要作用,它的异常激活也可能通过上调Survivin基因的表达,延长喉癌细胞生存时间.
关键词： 喉肿瘤 信号传导与转录激活因子3 生存素 逆转录多聚酶链式反应 免疫组织化学 -
人端粒酶催化亚基(hTERT)实时荧光定量PCR标准品的构建
目的:构建用于检测人端粒酶催化亚基(hTERT)实时荧光定量PCR标准品.方法:通过逆转录PCR扩增得到目的片段后连接至pMD18-T载体,转化DH5α感受态细胞.分别经PCR和测序验证重组质粒的正确性.分光光度计测量重组质粒的吸光值,换算成拷贝数浓度后作梯度稀释制得质粒标准品.10倍梯度稀释质粒标准品后进行实时荧光定量PCR分析.结果:人端粒酶催化亚基(hTERT)基因片段成功克隆至pMD18-T载体之中,重组质粒序列完全正确.实时荧光定量PCR分析10倍梯度稀释的质粒标准品所得标准曲线良好.结论:成功构建了人端粒酶催化亚基(hTERT)实时荧光定量PCR标准品.
关键词： 端粒酶逆转录酶 逆转录多聚酶链式反应 多聚酶链式反应
