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熟地、鳖甲对大鼠成骨细胞增殖、碱性磷酸酶蛋白和核心结合因子α1 mRNA表达的影响
目的 观察熟地、鳖甲含药血清对大鼠成骨细胞增殖和功能的影响.方法 雄性SD大鼠随机分为3组后,分别灌服高浓度熟地、鳖甲煎剂( 3.25 g/kg)、低浓度熟地、鳖甲煎剂(1.625 g/kg)及等量容积的蒸馏水,连续灌胃3d,制得大鼠高、低剂量熟地、鳖甲含药血清及空白对照血清.原代培养并传至第3代经碱性磷酸酶鉴定取得的大鼠成骨细胞,消化计数铺板并分为3组,以上述血清处理72 h,MTT法检测成骨细胞的增殖率,ELISA法检测碱性磷酸酶(ALP)分泌量并以相应OD值进行纠正,并且运用实时荧光定量PCR检测各组成骨细胞核心结合因子α1(Cbfα1)mRNA表达情况.结果 低剂量含药血清组成骨细胞增殖率、ALP浓度及Cbfα1 mRNA表达量明显高于其他2组.结论 熟地、鳖甲可能是通过提高成骨细胞的增殖潜能而起骨保护作用的.
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淫羊藿黄酮苷及其代谢产物调控骨代谢的体外实验研究
为探讨淫羊藿黄酮苷及其代谢产物对骨形成和骨吸收的调控作用,利用酶水解法和酸水解法分别制备了淫羊藿黄酮苷的2种代谢产物.采用鼠颅盖骨机械法分离和体外培养获得成骨细胞, 采用新生兔长干骨机械分离法获得破骨细胞,采用VD3诱导鼠骨髓的造血干细胞分化成破骨样的多核巨细胞.实验组培养液为10%胎牛血清+α MEM培养液+不同浓度淫羊藿黄酮苷及代谢产物,对照组不加药.分别用四甲基偶氮唑盐和3H-TdR法检测成骨细胞的增生和碱性磷酸酶,用骨钙素衡量成骨细胞的分化状态,用Actin-ring 染色观察破骨细胞形态变化,用图像分析仪分析体外骨吸收陷窝面积,用抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察OCL的形成,用RT-PCR法检测和破骨样细胞形成有关的分子机制.发现:淫羊藿黄酮苷及其代谢产物对大鼠成骨细胞的增生有明显的刺激作用,并能够促进成骨细胞合成分泌碱性磷酸酶, 但对成骨细胞晚期分化指标骨钙素无显著作用.同时,使破骨细胞Actin-ring回缩,从而使骨吸收陷窝面积减少.此外,淫羊藿黄酮苷及其代谢产物通过影响成骨细胞中RANKL和OPG的表达而达到抑制破骨样细胞形成.以上结果说明,淫羊藿黄酮苷及其代谢产物一方面抑制破骨样细胞形成和成熟的破骨细胞对骨基质的吸收,另一方面还能够通过刺激骨形成来调控骨代谢,其中刺激骨形成的效果较强.由此推断淫羊藿黄酮苷可能是淫羊藿抗骨质疏松作用的主要有效成分.
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低频脉冲电磁场对大鼠成骨细胞骨形成的影响及作用机制
目的 观察低频脉冲电磁场(PEMFs)对大鼠成骨细胞(ROBs)骨形成的影响,探讨了环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/环磷腺苷效应结合蛋白(CREB)信号通路的作用机制.方法 取新生Wistar大鼠颅骨,通过多次酶消化法获得ROBs并进行传代融合.采用50 Hz0.6 mT PEMFs处理3、6、9d后,检测ROBs内的碱性磷酸酶(ALP)浓度;处理0、15、30、60、90、120 min后,检测ROBs内骨形成相关因子(RUNX2)和成骨相关转录因子(OSX)蛋白表达,cAMP浓度,p-PKA、p-CREB和CREB蛋白表达.观察p-CREB核转位情况.采用RNA干扰法干扰IFT88后,检测ROBs内RUNX2、OSX、p-PKA和p-CREB蛋白表达情况.结果 PEMFs处理ROBs 3、6、9d后,ALP活性值分别为24.356±4.911、37.688±2.151和39.922±5.486,均明显高于相应对照组的18.531±2.401(P=0.0121)、33.675±4.366 (P =0.0324)和36.574±1.339 (P =0.0134).PEMFs处理30 (P =0.0042和P=0.0058)、60(P=0.0097和P =0.0079)、90 mn (P =0.0083和P=0.0098)时,ROBs内的RUNX2和OSX活性均显著高于未处理组;PEMFs处理30(P =0.0012)和60 min (P=0.0035)时,ROBs内的cAMP浓度明显高于未处理时;PEMFs处理15 (P =0.0018)、30 (P=0.0087)、90(P=0.0250)和120 min (P=0.0350)时,ROBs内的p-PKA水平明显高于未处理组;PEMFs处理15 (P=0.0075)、30 (P =0.0017)、60 (P=0.0074)和90 min (P =0.0096)时,ROBs内的p-CREB水平明显高于未处理组.PEMFs处理ROBs 15 min后,CREB发生磷酸化并聚集于细胞核内.将PKA、p-PKA与初级纤毛共定位染色,结果发现p-PKA定位于初级纤毛上.RNA干扰去除初级纤毛后,干扰组的p-PKA(F=78.602,P=0.0270)和p-CREB(F=76.082,P=0.0089)蛋白表达量及RUNX2(F=41.064,P=0.0230)和OSX (F =57.524,P=0.0310)蛋白表达量均明显低于未干扰组.结论 PEMFs可能是通过初级纤毛相关的cAMP/PKA/CREB信号通路促进ROBs骨形成.
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异欧前胡素对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响
背景:植物雌激素有防治绝经后妇女骨质疏松的作用已得到公认,其作用机制之一是促进了成骨细胞的增殖与分化.目的:观察香豆素类植物雌激素异欧前胡素体外对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响.设计、时间及地点:对比观察实验,于2006-09/2007-12在河北医科大学药学院完成.材料:出生24 h内SD大鼠,异欧前胡素为中国药品生物制品检定所产品.方法:采用改良组织块法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞,将异欧前胡素以1×10-5～1×10-9 mol/L浓度加入细胞培养体系,以未加入药物为空白对照组.作用24,48,72 h后,以MTT法检测成骨细胞的增殖情况,以对硝基苯二钠基质动力学法测定细胞内碱性磷酸酶的活性,以改良Lowry法测总蛋白水平.主要观察指标:成骨细胞的增殖率和碱性磷酸酶活性.结果:大鼠成骨细胞在不同浓度异欧前胡素中培养24 h,未观察到促增殖作用.培养48 h后,开始出现促增殖作用增强,有效浓度为1×10-9～1×10-8 mol/L.培养72 h后,继续有促增殖作用,有效浓度为1×10-8～1×10-7 mol/L.大鼠成骨细胞在不同浓度异欧前胡素存在下培养48 h,未观察到促分化作用,培养72 h后,开始出现促分化作用,有效浓度为1×10<'-6>～1×10-5 mol/L,其他浓度作用不明显.结论:异欧前胡素体外能促进大鼠成骨细胞的增殖与分化.
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大鼠成骨细胞与壳聚糖/羟基磷灰石复合支架降解产物的生物相容性
背景：人们对壳聚糖/羟基磷灰石复合多孔生物支架在体内的降解过程并非十分清楚，而且有关其降解产物对成骨细胞的影响研究也较少。
目的：分析大鼠成骨细胞与壳聚糖/羟基磷灰石复合多孔生物支架降解产物的生物相容性。
方法：将培养的第2代大鼠成骨细胞分别在壳聚糖/羟基磷灰石复合支架降解产物浸提液和含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养液中培养，培养第2，4，6，8，10天分别对两组细胞做MTT细胞计数，采用联合会推荐法测定细胞碱性磷酸酶活性，采用BCA蛋白定量法测定总蛋白。
结果与结论：在壳聚糖/羟基磷灰石复合多孔生物支架降解产物浸提液中培养的大鼠成骨细胞增殖速度、细胞碱性磷酸酶活性、细胞总蛋白合成及碱性磷酸酶与总蛋白的比值明显高于在体积分数为10%胎牛血清DMEM培养液中培养的细胞(P<0.05)。表明壳聚糖/羟基磷灰石复合多孔生物支架的降解产物不仅可促进大鼠成骨细胞的黏附、生长和增殖，还可增强其骨化功能，具有较好的生物相容性。 -
绿原酸通过Shp2激活Erk1/2促进大鼠成骨细胞增殖的实验研究
目的 研究从杜仲叶中提取的绿原酸对大鼠成骨细胞的促增殖作用.方法 MTT法检测分别用0、0.1、1、10 μmol/L 4种不同浓度梯度的绿原酸和0.1μmol/L绿原酸+10μmol/L Shp2抑制剂NSC87887处理大鼠成骨细胞增殖情况;用无血清无酚红DMEM培养基培养的饥饿大鼠成骨细胞用上述药物处理后,用Western blot检测其p-Shp2(Tyr580)、Shp2、P-Erk和Erk蛋白表达.结果 MTT法结果显示绿原酸(0～1μmol/L)促进大鼠成骨细胞的增殖,呈浓度依赖性;Western blot结果显示绿原酸可以诱导大鼠成骨细胞的p-Shp2 (Tyr580)和Erk磷酸化水平升高,而NSC87887可以抑制其促进作用.结论 绿原酸能够促进大鼠成骨细胞的增值,并且是通过Shp2/Erk途径实现的.
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交变拉伸应变及压应力对大鼠成骨细胞FOS蛋白表达及细胞定位的影响
原癌基因c-fos是一种立即早期基因,其表达的蛋白FOS是一种核蛋白,可结合到宿主细胞DNA中负责细胞分裂的基因上,影响基因的转录和复制,促进细胞的有丝分裂.采用免疫细胞化学方法,分别观察受交变拉伸应变和压应力作用下,体外培养的大鼠成骨细胞中FOS蛋白的表达情况及其在细胞中的定位,探索力学作用促进成骨细胞增殖的机理.
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大鼠成骨细胞在改性聚乳酸(MPLA)材料表面的粘附行为研究
采用自由基接枝改性了聚乳酸,并用红外光谱,13C,1H核磁共振谱,热分析仪对改性产物进行了表征.用微管吸吮装置对接种在材料表面的大鼠成骨原代细胞的粘附行为进行了研究.
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益骨汤含药血清对新生大鼠成骨细胞增殖及分泌IL-6的影响
目的 探讨益骨汤含药血清对新生大鼠成骨细胞增殖及分泌IL-6的影响.方法 采用酶消化法获得新生大鼠的成骨细胞,然后以益骨汤含药血清作用于成骨细胞,用MTT法检测成骨细胞增殖,ELISA法测定培养上清中IL-6的含量.结果 益骨汤各剂量组(A、B、C组)能促进成骨细胞的增殖,能使其分泌IL-6的能力下降,与空白对照组(E组)比较有显著性差异(P＜0.05).结论 益骨汤含药血清能够促进成骨细胞的增殖,同时抑制成骨细胞分泌IL-6.
关键词： 益骨汤含药血清 大鼠成骨细胞 细胞增殖 白介素-6(IL-6) -
左旋精氨酸对大鼠成骨细胞的影响
一氧化氮(NO)是一种可高度弥散的自由基.作为第2信使和神经递质,是细胞-细胞间信息传递的重要调节因子[1].NO可以调节成骨细胞(osteoblast,OB)的增殖及其功能活性,从而在维持骨形态和骨重建中起着重要作用.我们在以往实验基础上[1],观察不同浓度的NO外源性供体左旋精氨酸(L-arginine)对大鼠OB增殖,护骨素(OPG)分泌及eNOS和iNOS表达的影响.
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流体剪切力对大鼠成骨细胞增殖及细胞周期的影响
目的:观察流体剪切力对大鼠成骨细胞增殖及细胞周期的影响.方法:大鼠成骨细胞受强度为13 dyne/cm2的流体剪切力刺激60 min,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和流式细胞仪检测细胞的增殖能力和细胞周期.结果:流体剪切力作用后,大鼠成骨细胞增殖能力提高,细胞活性增强.加力组S期细胞百分比(14.67±1.18)%,较对照组S期细胞百分比(8.05±1.08)%约增高82.2%(p＜0.01).结论:流体剪切力具有提高大鼠成骨细胞增殖能力以及增强其细胞活性的作用.
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葛根素对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响
目的:探讨葛根素体外对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响.方法:用改良的组织块法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞,葛根素以不同浓度加入细胞培养体系,作用不同时间后,用MTT法检测成骨细胞的增殖情况;用对硝基苯二钠基质动力学法测定细胞内碱性磷酸酶的活性,用改良的Lowry法测蛋白含量.结果:葛根素在1×10-4mol/L～1×10-8mol/L浓度范围内24h, 48h促进成骨细胞增殖,在1×10-6mol/L～1×10-8mol/L 范围内48h及1×10-8mol/L 72h提高成骨细胞内碱性磷酸酶的活性.结论:葛根素体外能促进成骨细胞的增殖与分化.
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富血小板血浆来源富生长因子血清对大鼠成骨细胞增殖的影响
目的探讨富血小板血浆(PRP)来源的富生长因子血清(SRGF)对体外原代培养大鼠成骨细胞增殖的影响.方法第三代大鼠成骨细胞分为6组,分别加入50 mL/L、25 mL/L、12.5 mL/L的SRGF或贫生长因子血清(SPGF),另设空白对照组,在处理后24 h、48 h、72 h、96 h用MTT法检测大鼠成骨细胞的增殖.结果相同浓度下,SRGF组细胞增殖较SPGF组增加(P＜0.05),其增殖与SRGF浓度呈正相关关系(rs=0.834).结论PRP来源的SRGF具有促进大鼠成骨细胞增殖的作用,该作用与SRGF的浓度相关.
