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肿瘤细胞对p(35)Be快中子的辐射敏感性研究
目的 比较肿瘤细胞对p(35)Be快中子及γ射线的辐射敏感性，为肿瘤的快中子治疗提供理论依据。方法 用细胞集落存活方法研究人黑色素瘤细胞(WM9839)、人口腔上皮癌细胞(KB)、人结肠腺癌细胞(LS-T-117）和人前列腺癌细胞(PC3M)等4种细胞对快中子及γ射线的辐射敏感性，用彗星电泳技术研究WM9839细胞在快中子及γ射线照射后DNA损伤的修复效应。结果细胞存活实验表明，p(35)Be快中子照射后4种肿瘤细胞的D0值(或SF2值)较γ射线照射后差异减小，即4种肿瘤细胞对快中子的辐射敏感性差异减小；快中子2 Gy照射后，WM9839细胞DNA损伤修复曲线整体上下降较γ射线2 Gy照射后慢，到180 min时，DNA损伤残留率明显高于γ射线2 Gy照射。结论 快中子治疗肿瘤可以很好地弥补低LET射线放射治疗的不足，特别是对低LET射线较为耐受的肿瘤细胞，如KB细胞和WM9839细胞。
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慧星电泳用于肿瘤细胞辐射敏感性检测的研究
目的探讨彗星电泳方法检测肿瘤细胞对γ射线的辐射敏感性的可行性.方法以自行设计的图像分析系统,用彗星电泳方法检测4种人肿瘤细胞受γ射线照射后细胞初始DNA损伤,以及细胞经30 min修复时DNA损伤残余率;用细胞集落存活法检测2 Gy γ射线照射后细胞存活率.结果 4种肿瘤细胞初始DNA损伤与辐射敏感性无关,2 Gy γ射线照射后4种细胞存活率(SF2)与细胞经30 min修复后的DNA损伤残余率相关明显(r＝-0.87).结论本实验方法有可能成为一种快速、准确检测肿瘤细胞内在辐射敏感性的方法.
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山东济宁辐射事故受照人员生物剂量估算及彗星电泳检测分析
目的 探索特大剂量照射后外周血和骨髓染色体培养方法,拟合6 Gy以上大剂量照射染色体双着丝点+环剂量-效应曲线,对山东济宁"10.21"事故受照者进行准确生物剂量估算和DNA损伤检测.方法 采集2例受照者外周血和骨髓细胞,制备染色体标本,计数双(多)着丝点+环数目;用正常离体人血拟合6～22 Gy双+环剂量效应曲线及数学方程;对2例事故受照者进行生物剂量估算.用碱性单细胞凝胶电泳方法检测受照者外周血DNA损伤.结果 B的外周血染色体双+环平均数为4.47个/细胞;A的外周血培养无分裂细胞,骨髓染色体双+环平均数为9.15个/细胞.用6～22 Gy剂量效应方程估算全身平均受照剂量,B为9.4 Gy,A为19.5 Gy.单细胞凝胶电泳可见2例受照者的多数彗星细胞呈小头大尾形状.结论 用新建立的6～22 Gy染色体畸变剂量效应曲线估算2例受照者的生物剂量,已分别达到极重度骨髓型放射病和肠型放射病水平.
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补充脱氧嘌呤和嘧啶核苷对淋巴细胞DNA损伤修复的影响
目的脱氧核苷是构成DNA分子的重要组分,通过补充脱氧嘌呤和嘧啶核苷探讨对DNA损伤修复的影响.方法采用"彗星"电泳技术分析DNA断裂损伤,用100μmol/LH2O2诱导人体外周血淋巴细胞DNA损伤后分为两组:一组为对照组,另一组为脱氧核苷补充组(20μ1,10-4mol/L).结果对照组淋巴细胞从初始到培养2h后DNA损伤程度逐渐下降,由167.75下降为68.1(AU);而补充脱氧胸苷组DNA损伤修复能力与对照组相比无明显增高,同时补充DNA合成所必须的四种脱氧核苷经过3h的培养后也没有出现明显促进DNA损伤修复的作用.结论体外补充脱氧核苷对DNA修复未显示有意义的作用,与DNA损伤修复过程利用脱氧核苷的途径可能不同于DNA的复制合成有关.
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松节藻醇提物对正常小鼠抗氧化活性的影响
目的 研究松节藻醇提物对正常小鼠抗氧化活性的影响.方法 通过单细胞微凝胶电泳法检测松节藻醇提物对H2O2诱导的正常小鼠淋巴细胞DNA损伤的防护作用.分别采用黄嘌呤氧化酶法、DTNB直接法、TBA硫代巴比妥酸法检测小鼠血清中的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)的量.结果 松节藻醇提物对H2O2诱导的正常小鼠淋巴细胞DNA损伤具有一定的防护作用,并且能升高小鼠血清中SOD和GSH-Px活性.降低MDA的量.结论 松节藻醇提物具有一定的抗氧化活性.
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核酸内切酶在DNA断裂损伤检测中的应用研究
利用人体淋巴细胞和Hela细胞并经100μMH2O2诱导DNA损伤,然后分为对照组和实验组,后者补充25μl 1μg/ml的核酸内切酶Ⅲ.结果显示对照组淋巴细胞经4h培养后DNA断裂损伤下降到63.85(专用单位);补充核酸内切酶Ⅲ的实验组DNA断裂损伤明显增加达到161.93(P＜0.05).对照组Hela细胞培养4h后DNA断裂损伤为19,而实验组断裂损伤明显高于对照组达到172.1(P＜0.01).提示实验组DNA断裂损伤的增高可能包括H2O2所致DNA直接断裂和核酸内切酶Ⅲ切除修复过程中所形成的修复性断裂两部分,反映了DNA总体损伤水平.
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苯接触与淋巴细胞DNA损伤
采用气相色谱法检测广州某鞋厂112名(男43名,女69名)工人的血苯浓度,应用微核试验及彗星电泳测定淋巴细胞DNA损伤.结果显示,苯接触者血苯浓度升高(P＜0.001),以刷胶车间工人高(0.029 6 μmol/L),其次为成型车间(0.003 5 μmol/L),对照组工人血苯值为(0.000 4 μmol/L).3组间DNA损伤差异有非常显著意义(P＜0.001),刷胶车间工人微核率为5.2‰,彗尾DNA含量为42.6%;成型车间工人两项指标分别为2.1‰,38.8%;对照组则为0.5‰和32.3%.提示苯可致淋巴细胞DNA损伤,损伤程度与苯接触量有关.
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3种临床常用烤瓷合金对小鼠成纤维细胞L929的毒性评价
目的:评价3种临床常用牙科烤瓷合金材料的细胞毒性.方法:采用一种能快速评定细胞增殖率和细胞毒性的CCK-8比色法,检测镍铬合金(Ni,77.36%)、钴铬合金(Co,61.0%)、金合金(Au,58.0%)等3种烤瓷合金材料对小鼠成纤维细胞L929相对增殖率的影响;应用单细胞凝胶电泳(彗星电泳),检测3种烤瓷合金材料对小鼠成纤维细胞L929 DNA的损伤情况.采用SAS9.0软件包对数据进行统计学分析.结果:镍铬合金组、钴铬合金组和金合金组细胞的相对增殖率分别为(75.9510±7.6244)%、(84.8920±8.2660)%和(88.5420±12.3611)%.镍铬合金组的细胞毒性显著高于钴铬合金组(P＜0.05)和金合金组(P＜0.05),而钴铬合金组与金合金组之间无显著差异(P＞0.05),但3种材料的细胞毒性分级均为1级,表现为轻微毒性;镍铬合金组DNA损伤程度的彗星数目显著高于钴铬合金组(P＜0.05)和金合金组(P＜0.05).而钴铬合金组与金合金组无显著差异(P＞0.05).结论:钴铬烤瓷合金材料的细胞毒性显著低于镍铬烤瓷合金材料,而与58%金烤瓷合金材料的细胞毒性接近.临床上应尽可能选择钴铬烤瓷合金或58%金烤瓷合金等细胞毒性较低的烤瓷合金材料.
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纳米羟基磷灰石的分子生物相容性研究
目的 通过对纳米羟基磷灰石(nanosize-hydroxyapatite,nHA)的毒性检测,初步探讨生物材料分子生物相容性研究的必要性.方法 通过形态学观察、四甲基偶氮唑蓝(methl thiazolyl tetrazolium,MTT)实验及彗星电泳检测nHA的毒性.结果 倒置显微镜观察显示不同浓度的 nHA浸提液对体外培养细胞的形态无明显影响;MTT实验表明nHA对细胞生长和增殖无明显抑制作用,不同浓度浸提液的细胞毒性均为1级,无毒,与生长良好的L-929细胞形态观察结果相符合;彗星电泳结果显示随 nHA浸提液浓度和时间的递增彗星率逐渐增大.结论 nHA具有良好的细胞相容性,但对L-929细胞DNA可能有损伤作用,提示可能有遗传毒性作用,因此检测纳米材料分子生物相容性非常必要.
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电离辐射导致左半身照射小鼠非照射区域骨髓细胞DNA损伤
目的 探讨局部电离辐射后非照射区域骨髓细胞的DNA改变.方法 将6～8周龄雄性昆明小鼠随机分为正常对照组、全身照射组、全身屏蔽照射组以及半身照射组4组,用铅屏蔽建立半身照射模型,以8.0 Gy 60Co γ射线照射,检测小鼠血清SOD、MDA、TNF-α变化,用彗星电泳、嗜多染红细胞微核形成率(fMPCE)等方法观察非照射区域骨髓细胞DNA损伤情况.结果 半身照射条件下,小鼠血清TNF-α、MDA升高,SOD降低(P＜0.01);非照射区域骨髓彗星样细胞比例明显增加,嗜多染红细胞微核形成率显著增高(与正常对照组比P＜0.01).结论 局部电离辐射作用后,可导致非照射区域造血细胞产生损伤效应.TNF-α的增加和氧自由基的激活可能参与了该损伤过程.
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姜黄素对过氧化氢诱导血管内皮细胞损伤的保护作用
目的 观察姜黄素对过氧化氢(H2O2)诱导的血管内皮细胞损伤的影响.方法 以100 μmol/L H2O2作用2 h为致伤因素,5,10,15 μmol/L姜黄素为保护因素,比色法检测培养基中一氧化氮(NO)的浓度及彗星电泳法检测DNA断裂.结果 100 μmol/L H2O2引起内皮细胞NO分泌减少,彗星尾距显著增加.姜黄素干预使NO分泌增加,而彗星尾距显著减小(p<0.05).结论 姜黄素可保护氧化应激引起的内皮损伤及功能障碍,从而可能从病因上预防妊高征.
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生产工人吸烟、被动吸烟对淋巴细胞DNA损伤的分析
目的探讨生产工人吸烟、被动吸烟对淋巴细胞DNA损伤的影响.方法用彗星电泳方法测定359名电梯厂工人(男性252人,女性107人)外周血淋巴细胞DNA的损伤,205人为生产作业工人,另154人为管理人员(对照组).结果吸烟可使DNA损伤增加(P＜0.001),测定的彗星矩(Tail Moment,TM)以每日吸烟者为大(0.93 μm),其次为偶尔吸烟者(0.76 μm)和戒烟者(0.70 μm),而以从不吸烟者为小(0.56 μm);被动吸烟亦可使TM增加(P=0.021);生产工人DNA损伤增加的TM值远大于管理人员[0.74 μm(0.68～0.80)与0.53 μm(0.49～0.56),P＜0.001];协方差分析表明吸烟(P＜0.001)、被动吸烟(P＜0.032)和性别(男性,P＜0.001)对TM值有影响,DNA损伤与年龄(P=0.001)呈正相关.结论吸烟、被动吸烟可致淋巴细胞DNA损伤,男性较女性DNA损伤为重,年龄与DNA损伤呈线性相关.
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紫外线对皮肤角质形成细胞DNA的损伤效应以及白藜芦醇的保护作用
目的:研究紫外辐射对皮肤角质形成细胞(HaCaT 细胞)DNA 断裂损伤的影响和白藜芦醇的保护作用. 方法:采用彗星电泳研究照射剂量为0 ~ 90 mJ/cm2时,紫外辐射对DNA的损伤效应以及不同浓度(0.1、1.0、10.0 μmol/L)白藜芦醇预处理的保护作用. 结果:在0 ~ 90 mJ/cm2照射剂量范围内,未检测到UVA 对 DNA 的损伤效应. UVB 和 UVC 组, 彗星电泳图和 5 个检测指标 (TailDNA%、TailLength、CometLength、TailMoment、OliveTailMoment )均显示随照射剂量增加对 DNA 损伤加重的量效关系,且相同剂量UVC造成的损伤 > UVB. 0.1 μmol/L白藜芦醇预处理可明显减轻紫外辐射引起的DNA损伤. 结论:在0 ~ 90 mJ/cm2剂量范围内,紫外辐射可引起DNA断裂并存在量效关系. 白藜芦醇可保护DNA免于紫外辐射所造成的DNA断裂损伤.
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彗星电泳判断川陈皮素诱导的A549细胞死亡方式
目的:探讨川陈皮素诱导的A549细胞死亡方式.方法:40、80 μg/ml的川陈皮素分别处理A549细胞12、24、46h后,用彗星电泳法来检测DNA的损伤情况,并判断细胞的死亡方式.结果:40 μg/ml的川陈皮素能诱导A549细胞凋亡,而80μg/ml的川陈皮素则诱导A549细胞坏死.结论:当川陈皮素作用剂量较小时,以诱导A549细胞凋亡为主;而当作用剂量较大时,则以诱导坏死为主.
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异鼠李素对肺癌的影响及其抗肿瘤机制的初步探讨
目的:探讨异鼠李素体外对人肺癌细胞A549、体内Lewis肺癌增殖的影响及初步研究其抗肿瘤机制.方法:以不同浓度异鼠李素加入体外培养的A549细胞中,用MTT比色法,细胞计数法,细胞生长曲线的测定、细胞形态学变化、克隆形成、3H-TdR掺入实验等观察测定体外抗肿瘤活性,用流式细胞仪、基因组DNA片段分析,彗星电泳、免疫组化等观察其对肿瘤细胞凋亡的诱导作用;采用Lewis细胞C57BL/6鼠移植瘤,观察药物对移植瘤的影响.
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过氧化氢诱导的人正常和早老细胞中DNA损伤及其修复研究
目的 研究人早老细胞和正常衰老细胞在氧化应激条件下的DNA损伤和修复.方法 采用免疫荧光技术和彗星电泳技术,分别检测3组不同群体倍增数(PD)的人正常二倍体成纤维细胞BJ（青年组第14代,成年组第30代,衰老组第45代）和2组不同PD的人赫-吉二氏综合征(HGPS)细胞（青年组第8代,衰老组第17代）的DNA基础损伤程度.研究过氧化氢诱导造成以上细胞组DNA损伤及去除致损因素正常培养后的修复水平,采用免疫荧光和彗星电泳技术检测细胞在沉默DNA损伤修复蛋白着色性干皮病蛋白A(XPA)表达前后的修复能力.结果 BJ细胞衰老组DNA损伤程度较高,与成年组相比,对DNA损伤诱导因子更加敏感(P＜0.05)；成年组与青年组相比,对损伤诱导因子也更敏感(P＜0.05).HGPS细胞青年组的DNA基础损伤程度即已达到衰老BJ细胞类似或更高水平,且与BJ细胞具有一致的DNA损伤年龄变化趋势.经siRNA沉默XPA表达后可部分恢复HGPS细胞的修复能力,对BJ细胞则没有影响.随年龄增长无论正常还是早老细胞,DNA损伤程度增加,修复效率降低.结论 XPA功能异常抑制了HGPS细胞的损伤修复.
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人21.5kDa MBP基因对肝癌HepG-2细胞增殖与凋亡作用研究
增殖曲线显示阳性转染组细胞有增殖和抗凋亡的作用,DNA琼脂糖电泳显示对照组有大量的DAN ladder形成,Caspase-3免疫组化证实对照组细胞Caspase-3表达显著升高,彗星电泳和TUNEL原位杂交显示对照组DNA损伤及凋亡严重而转染组较轻. 结论人21.5kDa MBP对肝癌HepG-2细胞有促进增殖和抗凋亡的作用.
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长期摄入含贫铀的饲料对雄性大鼠的遗传毒性研究
目的:大鼠长期食入一定剂量的贫铀后是否会产生遗传毒性. 方法: 给予初断乳大鼠含贫铀饲料,摄入的剂量分别为0,0.4,4,40 mg/(kg·d),4 mo后,观察亲代(F0代)和子代(F1代)大鼠精子畸形率,骨髓细胞微核率的改变,用单细胞凝胶电泳法研究贫铀对精子DNA的损伤程度. 结果: 摄入小剂量贫铀的F0代大鼠精子畸形率和彗星细胞的各指标与正常组差异无统计学意义(P＞0.05). 但中、高剂量组F0和F1代的精子畸形率、骨髓细胞微核率和彗星细胞率均增加(P＜0.01),并与摄入贫铀的剂量和摄入时间呈一定的相关关系. 结论: 长期摄入一定剂量的贫铀可对大鼠产生遗传毒性.
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精子DNA损伤与自然流产的关系
目的 评价男性精子DNA损伤与女性配偶不明原因自然流产的关系,并验证单细胞凝胶电泳(彗星电泳)这种简单、敏感的方法在临床上预测妊娠质量的价值.方法 分别将52例配偶近期有不明原因自然流产史男性的精子和52例配偶近期有正常妊娠史男性的精子进行了彗星电泳分析,并对比分析了其中各32例男性精浆的抗氧化能力.结果 配偶近期有自然流产史男性精子彗星细胞平均尾长和1～4级彗星细胞的百分率均明显高于配偶近期有正常妊娠史男性精子彗星细胞相应的值,并且精浆抗氧化能力明显低下,两组实验结果对比各数据均有显著性差异.结论 女性配偶有不明原因自然流产者,其男性精子有较严重的DNA损伤,并且精浆抗氧化能力明显低下.精子彗星电泳能够用来在临床上预测妊娠质量.
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应用DNA彗星电泳法检测辐照食品
[目的]通过彗星电泳法检测样品单细胞DNA损伤从而鉴别辐照食品。[方法]选取12种食品基质，经1KGy、3KGy、5KGy、7KGy、10KGy剂量辐照后，进行彗星电泳检测，并对检测时效性进行研究。[结果]除熟制鸡肉外，其他样品均可通过彗星电泳法检测到辐照状况，检测灵敏度达1KGy辐照剂量；辐照产生的DNA损伤具有明显的剂量-效应关系，以TL、TDNA%指标分析存在平台期，以TM、OTM指标分析则不存在平台期；辐照后6h-5d均可检测到明显的彗星图像。[结论]彗星电泳法适用于除熟制食品外的含DNA食品的辐照检测，方法稳定性好，检测灵敏度高。
