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骨髓间质干细胞突变的致瘤肿瘤干细胞分离及培养
目的 建立合适的骨髓间质干细胞突变的肿瘤细胞系F6(肿瘤干细胞)分离及体外长期培养方法并探讨其生物学特性.方法 采用抗CD133-PE抗体经流式细胞仪分选F6肿瘤干细胞(F6 CSCs),研究不同培养体系时F6 CSCs体外生长的影响,探讨适体外培养条件.结果 一次分选获得F6 CSCs纯度达到80%.分选的F6 CSCs对Balb/c小鼠有体内致瘤能力,在含2%胎牛血清的L-DMEM营养液中可以长期稳定的培养,其CD133表面标志的表达维持在68.87%.结论 低浓度胎牛血清的培养液能维持F6 CSCs的生长并保留其相应的生物学特性,这为肿瘤干细胞体外培养及研究提供了新的思路和方法.
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肿瘤干细胞标志物CD133检测在胃癌诊断中的意义
目的 检测胃癌组织和癌旁组织中肿瘤干细胞标志物CD133的表达,探讨其与临床病理参数的相关性和在肿瘤诊断中的意义.方法 收集36例胃癌患者手术切除的癌组织和对应的癌旁组织,用RT-PCR检测CD133的mRNA表达,用免疫组织化学技术检测CD133蛋白质的表达,分析CD133 mRNA在胃癌组织中的表达与临床病理参数的相关性.结果 CD133 mRNA表达阳性率为胃癌组织66.7%(24/36),癌旁组织为16.7%(6/36),差异有统计学意义(P<0.01);胃癌组织中CD133袁达阳性率与肿瘤分化状态相关,低、未分化组高于中、高分化组(P<0.01),但与年龄、性别、肿瘤大小、浸润深度、TNM分期和有无淋巴结转移无关.结论 肿瘤干细胞标志物CD133的表达与胃癌的发生及分化状态相关,可作为胃癌诊断的一个新的分子标志物.
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免疫磁珠分离脐血CD133阳性细胞的方法研究
目的探讨免疫磁珠分离脐血CD133阳性细胞的方法.方法6%羟乙基淀粉(HES)和Ficoll-Paque联合应用分离出脐血中单个核细胞,再用MACS CD133磁珠分离试剂盒分选其中的CD133+细胞.结果经MACS分离的脐血中CD133+细胞数平均为(6.3±2.9)×105/ml,占单个核细胞的(1.41±1.14)%,经流式细胞仪检测CD133+细胞纯度为75%～85%.结论免疫磁珠法是分离脐血CD133阳性细胞的较好的方法.
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CD24、CD133、P75NTR、ABCG2食管鳞癌中表达及与临床病理因素和淋巴结转移的关系
目的 控讨CD24、CD133、P75NTR、ABCG2在食管鳞癌(ESCC)中表达及与临床病理因素和淋巴结转移(LNM)的关系.方法 应用免疫组化SP法检测40例食管鳞癌(LNM阳性组与阴性组各20例)和20例正常食管标本中CD24、CD133、P75NTR、ABCG2蛋白表达,并对两组病例的检测结果及相关临床病理资料作对比研究.结果 CD24、CD133、P75NTR、ABCG2蛋白食管鳞癌表达分别为72.5%、62.5%、60.0%、52.5%,与正常食管表达差异均有统计学意义(P<0.05);且与侵袭深度和LNM组与非转移组表达差异均有统计学意义(P<0.05); CD24、CD133表达呈正相关(P<0.05);这两组在癌侵袭深度(侵袭肌层与穿透肌层的癌)及LNM率分别是41.7%和62.5%有明显差异(P=0.002).结论 CD24、CD133、P75NTR、ABCG2蛋白食管鳞癌高表达,可能与癌侵袭深度和LNM相关,联合检测可能作为预测ESCC LNM和预后的参考指标.
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CDK8与CD133在乳腺癌新辅助化疗疗效评价中的作用
目的 探讨CDK8与CD133在乳腺癌新辅助化疗疗效评价中的作用.方法 选择2016年1月至2017年12月,徐州市中心医院临床Ⅱ、Ⅲ期原发性乳腺癌患者40例,行空芯针穿刺活检,病理证实为乳腺癌后予新辅助化疗至少3个周期,用免疫组化和蛋白质印迹法检测化疗前后标本CDK8与CD133的变化.结果 新辅助化疗前后,TNM分期、肿瘤直径大小、淋巴结转移个数相比,差异有统计学意义(P<0.05).CDK8与CD133在乳腺癌中高表达,新辅助化疗后乳腺癌组织CDK8与CD133表达减少;癌旁正常乳腺组织及纤维腺瘤组织CDK8和CD133表达量均低于新辅助化疗前乳腺癌组织(均P<0.05).新辅助化疗前后,CDK8和CD133变化一致,且与疗效变化一致.结论 CDK8与CD133可作为新辅助化疗疗效预测因子.
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多肽修饰载紫杉醇脂质体靶向A549肺癌干细胞的研究
目的：制备与肺癌干细胞标志物CD133具有高度亲和力的多肽修饰载紫杉醇脂质体（CD133 specific-binding peptide conjugated paclitaxel loaded liposome，TLP-PTX），考察TLP-PTX与A549肺癌干细胞的结合能力及其对A549肺癌干细胞和肺癌干细胞移植瘤的抑制作用。方法采用薄膜分散法制备TLP-PTX，观察其粒径，电位及紫杉醇的包封率等理化性质。采用细胞摄取实验和肿瘤球穿透实验考察TLP-PTX与A549肺癌干细胞的亲和力。通过MTT实验和肺癌干细胞肿瘤球抑制实验观察TLP-PTX对肺癌干细胞的抑制效果。结果制备得到的TLP-PTX粒径为（115.8±8.3）nm，紫杉醇的包封率为88.5％。经过CD133特异性多肽修饰后能够明显增强肺癌干细胞和肿瘤球对脂质体的摄取能力，A549肺癌干细胞对TLP的摄取效率是LP的2.6倍，差异有统计学意义（P＜0.05）。MTT实验结果表明TLP-PTX对A549肺癌干细胞的毒性显著强于LP-PTX和紫杉醇溶液（P＜0.05）；A549肺癌干细胞肿瘤球抑制实验表明TLP-PTX具有良好的抗肿瘤效果。结论 TLP-PTX能够特异识别A549肺癌干细胞表面的CD133，介导脂质体进入细胞，抑制肺癌干细胞增殖。TLP-PTX是一种有效的A549肺癌干细胞靶向给药系统。
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大豆黄酮对人肝癌SMMC7721细胞增殖及肿瘤干细胞CD133表达的影响
目的：探讨大豆黄酮对人肝癌SMMC7721细胞增殖及肿瘤干细胞CD133表达的影响。方法将肝癌SMMC7721细胞分成6组：阴性对照组不加药；根据添加大豆黄酮浓度的不同，分成100μg/mL 组、200μg/mL 组、300μg/mL 组、400μg/mL 组、500μg/mL组，培养24 h、48 h、72 h后MTT法检测细胞的抑制率、测定每组细胞中己糖激酶和碱性磷酸酶活性和CD133表达水平并进行比较。结果大豆黄酮浓度越高，对肝癌细胞的抑制作用越强；随着处理时间的延长，抑制作用有所下降；尤其在400μg/mL浓度组和500μg/mL浓度组，时间效应更明显。与对照组相比，经不同浓度大豆黄酮处理的肝癌细胞己糖激酶活性和碱性磷酸酶活性均显著降低（P＜0.01），肿瘤干细胞CD133表达明显下降（P＜0.01），并且浓度越高下降幅度越大。结论大豆黄酮能够抑制肝癌SMMC7721细胞的增殖，并降低肿瘤干细胞CD133的表达。
关键词： 大豆黄酮 肝癌SMMC7721细胞 CD133 -
高迁移率族蛋白B1调控放疗残存胰腺癌细胞的干性获得
目的:研究高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对放疗后残存胰腺癌细胞的干性转化作用.方法:酶联免疫吸附实验(ELISA)检测在不同放疗剂量下(0、4、8、10、12 Gy)胰腺癌SW1990细胞上清液中HMGB1的含量;通过不同剂量(0、4、6、8、10 Gy)放疗后,流式细胞术检测残存SW1990细胞获得CD133+细胞的比例;获取10 Gy放疗剂量下SW1990细胞的上清液,然后将8 Gy放疗后残存SW1990细胞分成4组:PBS组、上清液+EP(ethyl pyruvate,丙酮酸乙酯,为胞外HMGB1特异性抑制剂)组、上清液组、HMGB1(100 ng/mL)组,流式细胞术检测各组细胞CD133+细胞的比例,同时 蛋白质印迹实验检测干性标志分子SOX2和OCT4蛋白表达.结果:ELISA结果显示,胰腺癌SW1990细胞上清液中HMGB1的浓度在10 Gy放疗剂量时大(217.3±34.97)ng/mL.流式细胞术检测结果显示,在8 Gy放疗后SW1990细胞中CD133+细胞比例大(22.63±0.74)%.同时流式细胞术检测结果显示,上清液+EP组、上清液组、HMGB1(100 ng/mL)组中CD133+细胞相对于PBS组的比值分别是2.2±0.11、3.2±0.19和6.4±0.32(F=143.4,P<0.01).蛋白质印迹结果显示,上清液组与HMGB1(100 ng/mL)组中干性相关蛋白SOX2和OCT4的表达明显上调(P<0.01).结论:放疗后胰腺癌SW1990上清液中存在HMGB1,并且HMGB1会调控残存SW1990细胞干性的获得.
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成人骨髓间质干细胞向神经干细胞的诱导分化
目的:建立诱导成人骨髓间质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向神经干细胞分化的体外培养方法,为细胞移植修复神经系统损伤提供种子细胞.方法:原代贴壁培养成人BMSCs并传代培养至第3代时,将细胞接种于铺有琼脂糖的培养瓶,用神经干细胞培养基(含B27,EGF,bFGF)抗贴壁诱导培养.将诱导培养的神经球(neurospheres)传代扩增.用免疫荧光染色和蛋白质印迹法,对贴壁培养的BMSCs和抗贴壁诱导培养的神经球细胞表达神经干细胞标志蛋白的水平进行检测和比较.结果:抗贴壁诱导培养可使BMSCs形成神经球,初级神经球传代可扩增形成次级神经球.神经球细胞高表达音猬因子、神经细胞黏附分子以及神经干细胞标志蛋白巢蛋白和CD133.结论:琼脂糖抗贴壁,神经干细胞培养基诱导培养可使成人BMSCs形成神经球,神经球细胞具有神经干细胞样特征,该方法可为细胞移植修复神经系统损伤提供大量的种子细胞.
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肾癌OS-RC-2细胞CD133的表达及意义
目的: 培养肾癌干细胞球,研究其表面分子特性.方法: 肾癌细胞悬浮于含有表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)和成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)的无血清培养基中培养,培养7天后收集细胞球,流式细胞仪检测CD133及CD34的表达.结果: 悬浮培养2天后出现肾癌干细胞球,培养7天后干细胞球明显增多,流式细胞仪检测发现表达CD133+CD34-细胞约占(8.33±1.26)%,对照肾癌细胞组表达CD133+CD34-细胞只占(1.24±0.36)%;干细胞球通过含10%胎牛血清培养基继续培养,又恢复原来的生长特点.结论: 利用无血清悬浮培养方法得到的肾癌干细胞球高表达干细胞表面分子标记CD133.
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薏苡仁酯对胃癌BGC-823细胞侵袭迁移能力的影响及其机制
目的:研究不同浓度薏苡仁酯对胃癌BGC-823细胞株的侵袭、迁移能力及CD44、CD133表达的影响.方法:以不同浓度薏苡仁酯作用于BGC-823细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率,黏附试验、Transwell小室侵袭迁移实验检测细胞黏附、侵袭、迁移能力,RT-PCR法检测细胞CD44、CD133 mRNA表达水平.结果:薏苡仁酯可抑制BGC-823细胞增殖,其抑制效应呈剂量时间依赖性;经薏苡仁酯作用后BGC-823细胞的侵袭、迁移及黏附能力降低;CD44、CD133 mRNA的表达与薏苡仁酯浓度亦呈负相关.结论:薏苡仁酯能降低胃癌BGC-823细胞株的侵袭、迁移、黏附能力,其机制可能与通过下调CD44、CD133表达有关.
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CD133、TROP-2在非小细胞肺癌中的表达及相关性研究初探
目的:探讨肿瘤干细胞标志物CD133、人滋养层细胞表面抗原-2(trophoblast cell-surface antigens 2,TROP-2)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及意义.方法:用免疫组化、免疫荧光法检测CD133、TROP-2在NSCLC中的表达,激光共聚焦显微镜观察其定位和共定位.结果:①CD133、TROP-2在NSCLC组织中的阳性表达率分别为30.00％和41.25％,均明显高于癌周正常肺组织及肺良性病变组织(P＜0.01)；②细胞分化程度越低,CD133表达阳性率越高(P=0.024)；③CD133、TROP-2在有淋巴结转移组的阳性表达率高于无淋巴结转移组(P＜0.05),TROP-2的阳性表达率随着TNM分期的升高而升高(P＜0.05)；④CD133、TROP-2在NSCLC中的表达具有密切相关性(P＜0.001),且两种蛋白有共定位现象.结论:CD 133 、TROP-2的阳性表达均与NSCLC的侵袭、转移密切相关,初步证实二者在NSCLC组织中存在共定位关系,CD133联合TROP-2或许能成为NSCLC的肿瘤干细胞筛选标记物.
关键词： 非小细胞肺癌 肿瘤干细胞 CD133 人滋养层细胞表面抗原-2 -
DDX4（VASA）在卵巢癌中的表达及其临床意义
目的：研究DDX4(VASA)在卵巢癌中与CD133基因和蛋白水平的差异性表达，从而探讨其可能的临床应用价值。方法：利用卵巢癌细胞株SKOV3，从基因和蛋白水平检测DDX4(VASA)和CD133表达的差异；同时以体内卵巢肿瘤组织为研究对象，利用免疫组化的方法检测DDX4(VASA)在其中的表达情况。结果：(1)在卵巢癌细胞SKOV3中， DDX4(VASA)蛋白和mRNA的表达水平明显高于CD133；(2)DDX4(VASA)在卵巢癌组织中高表达，且在不同卵巢癌组织类型中分布位置不同。结论：DDX4(VASA)的高表达与卵巢癌的发生、发展密切相关，检测DDX4(VASA)在卵巢癌中的差异性表达，对了解卵巢癌的生物学行为和完善卵巢癌的早期诊断有一定的临床价值。
关键词： DDX4(VASA) CD133 细胞株SKOV3 卵巢癌组织 -
人肺腺癌细胞系SPCA1边缘细胞亚群的初步分析
目的 检测和分选人肺腺癌细胞系SPCA1中的边缘细胞,并对其表面标志进行初步分析.方法 用流式细胞仪检测和分选SPCA1中的边缘细胞和主群细胞,并用细胞免疫化学和激光共聚焦检测ABCG2和CD133在SPCA1中的表达.结果 边缘细胞亚群占SPCA1细胞的0.7％,维拉帕米阻断后减少至0.0％.细胞免疫化学结果显示ABCG2和CD133在SPCA1的边缘细胞中高表达,而在未分选的SPCA1细胞和主群细胞中则低表达.结论 人肺腺癌细胞系SPCA1中存在边缘细胞,提示肺癌干细胞的存在.
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肿瘤干细胞标志物CD133在乳腺癌组织中的表达及其临床意义
目的 探讨肿瘤干细胞标志物CD133在乳腺癌组织中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组织化学方法检测109例乳腺癌组织和60例乳腺良性肿瘤组织中CD133的表达,分析其与乳腺癌亚型及临床病理参数间的关系.结果 109例乳腺癌组织中,CD133表达的阳性率为46.8%(51/109),60例乳腺良性肿瘤的阳性率为0.33%(2/60),两者差异具有高度统计学意义(P<0.01);109例乳腺癌组织中,CD133蛋白的表达随病理级别的增加而升高(P<0.05),随临床分期升高及肿瘤直径增大呈下降趋势(P>0.05);乳腺癌4种亚群中,Basal-like亚群中CD133蛋白的阳性率高,为69.2%,显著高于其他亚群,差异有统计学意义(P<0.05).结论 早期低分化或未分化癌更富于干细胞,可能与肿瘤细胞恶性演进有关;CD133蛋白的表达具有区分不同乳腺癌亚型作用以及在乳腺癌的预后预测具有重要作用.
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大肠癌CD133(+)、Musashi-1(+)干细胞与临床病理学因及MGMT、ERCC1、TS关系的研究
目的 探讨大肠癌CD133(+)、Musashi-1(+)干细胞与临床病理因素及MGMT、ERCC1、TS的关系.方法 应用免疫组织化学方法(SP法)检测42例大肠癌组织的CD133、CD138、Musashi-1、MGMT、ERCC1、TS蛋白,对各指标之间的相关关系及其与临床病理学因素之间的关系进行分析.结果 ①CD133与组织类型、Dukes分级、静脉侵袭、远处转移及毛细血管密度(MVD)等有关(P<0.05);CD138、Musachi-1与组织类型、浆膜侵犯、静脉侵袭、淋巴管侵袭、淋巴结转移、远处转移及MVD等有关(P<0.05),CD138并与神经纤维间隙侵袭(NI)有关(P<0.05);CD133与CD138的表达呈负相关(P<0.01),与Musashi-1的表达呈正相关(P<0.01).②MGMT、ERCC1与组织类型有关(P<0.05);TS与组织类型、Dukes分级、淋巴管侵袭、淋巴结转移有关(P<0.05);MGMT表达与ERCC1、TS表达呈负相关(P<0.01),ERCC1表达与TS表达呈正相关(P<0.01).③ CD133、Musashi-1的表达均与MGMT的表达呈负相关(P<0.01),与TS、ERCC1的表达呈正相关(P<0.01).结论 ① CD133(+)、Musashi-1(+)细胞在大肠癌的浸润与转移中起重要协同作用.② CD133(+)、Musashi-1(+)细胞与MGMT、TS、ERCC1耐药基因蛋白的表达具有密切关系,后者在大肠癌的侵袭中也具重要作用.
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肿瘤干细胞标志物CD133在食管鳞癌中的表达及其临床意义
目的:探讨CD133在食管鳞癌组织中的表达及其临床意义.方法:采用免疫组织化学方法检测肿瘤组织中CD133的表达情况,分析CD133的表达与食管鳞癌I临床病理特征及预后的关系.结果:肿瘤组织中CD133的表达与肿瘤浸润深度、TNM分期、淋巴结转移及5年生存率相关(P<0.05),与组织分化无关(P>0.05).结论:CD133的表达在食管鳞癌的发生、发展、转移中发挥重要作用,可考虑作为临床评价食管鳞癌肿瘤生物学行为及评估预后的指标之一.
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CD133和B7-H4在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义
目的 检测CD133和B7-H4在非小细胞肺癌(NSCLC)标本中的表达,并探讨两者的关系及其临床意义.方法 采用流式细胞术检测CD133及B7-H4在NSCLC患者胸水中的表达;采用免疫组化SP法检测103例NSCLC手术标本、25例癌旁组织及24例肺部良性病变组织中CD133及137-H4的表达.结果 CD133和B7-H4在NSCLC胸水中均见表达.肺癌组织CD133表达率49.51%(51/103),B7-H4表达率66.99%(69/103),均高于良性病变组织及癌旁组织(P<0.01).CD133表达与肿瘤分化程度有关(P<0.01),并且与B7-H4表达相关(P<0.01).COX回归分析显示CD133阳性表达与NSCLC患者的预后不良有关.结论 CD133与B7-H4在NSCLC中过度表达,可能参与肿瘤逃避宿主的免疫监视过程;CD133可能是NSCLC患者独立的风险因子.
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乳腺癌组织中CD133和VEGF的表达及意义
目的 研究CD133及血管内皮生长因子(VEGF)在乳腺癌组织中的表达及其意义.方法 采用免疫组织化学方法检测109例乳腺癌组织中的CD133及VEGF的表达,并对结果进行分析.结果 乳腺癌组织中CD133和VEGF蛋白的表达率分别是46.8%(51/109)和84.4%(92/109),其阳性表达率随肿瘤病理级别的升高而明显增加(P＜0.05).乳腺癌Basal-like亚群中CD133蛋白的阳性率表达高达69.2%,高于其他亚群(P＜0.05).CD133与VEGF表达密切相关(P＜0.01).结论 CD133与VEGF蛋白表达可能与乳腺癌肿瘤干细胞生长有关.
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CD133在肝细胞性肝癌中的表达及其临床意义
目的 探讨肿瘤干细胞标志物CD133在肝细胞性肝癌(HCC)组织中的表达及其临床意义.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测25例手术切除的HCC原发组织、癌旁组织中CD133 mRNA的表达,分析CD133的表达与临床参数的关系.结果 HCC原发组织和癌旁组织中CD133 mRNA表达的阴性率分别为72.0%和4.0%(P<0.01);原发组织CD133 mRNA的表达与肿瘤大小、甲胎蛋白(AFP)阳性表达有关(P<0.01),与性别、年龄及组织分化程度均无关.结论 CD133的表达与HCC的大小及AFP阳性表达有关,可能在HCC的诊断及判断复发中有一定价值.
