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狭叶十大功劳内生真菌Colletotrichum fioriniae F18的次级代谢产物研究
对分离自狭叶十大功劳茎中的一株内生真菌Colletotrichum fioriniae F18进行化学成分研究,从其大米发酵产物中分离得到1个新吲哚生物碱makomotindoline B(1)和2个己知吲哚衍生物:3-indoleacetic acid methyl ester (2)和N-acetyltryptamine (3),以及6个芳香化合物:对羟基苯乙酸(4)、对羟基苯乙醇(5)、对甲氧基苯乙酸(6)、4-hydroxyphenethyl 2-(4-hydroxyphenyl)acetate (7)、regiolone(8)和N-苯乙基乙酰胺(9).通过质谱和核磁共振等技术确定了上述化合物的结构,并通过圆二色谱ECD量子化学计算确定了化合物1的绝对构型.抗菌活性测试结果表明,化合物1～9对Bacillus subtilis、Staphylococcus aureus、Escherichia coli和Pseudomonas aeruginosa无明显抑制作用,对基因缺陷型紫色杆菌Chromobacterium violaceum也无群体感应抑制活性.
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八角莲内生真菌Penicillium sp.的杂萜和丁内酯类化学成分研究
从八角莲内生真菌Penicillium sp.的静息发酵培养物中获得12个化合物,主要包括7个杂萜类化合物.通过现代波谱学鉴定技术分别鉴定为1 1β-acetoxyisoaustinone (1)、isoberkedienolactone (2)、austin (3)、austinolide (4)、dehydroaustinol (5)、dehydroaustin(6)、chrodrimanin A (7)、chrodrimanin B (8)、O-methylmellein (9)、3-(propan-2-ylidene)-pyrrolidine-2,5-dione (10)、(D-3-[2,5-dioxo-3-(propan-2-ylidene)-pyrrolidin-1-yl] acrylic acid(11)和N-(4-hydroxy-2-methoxyphenyl)-acetamide (12).杂萜化合物1和丁内酯类化合物2为新化合物.运用Gaussian 09进行量子化学方法计算化合物2的ECD光谱(TDDFT/B3 LYP/aug-cc-pVDZ基组水平),与其ECD实验值曲线具有极佳的拟合,确定了化合物2的绝对立体构型.研究发现,来源于4个或5个乙酰单元的聚酮前体的杂萜类化合物(1,3～8)可以同时存在于同一株野生型青霉属真菌中.同时,化合物经体外细胞毒活性测试,对HCT-116、HepG2、BGC-823、NCI-H1650和A2780五种细胞系均显示出较弱的生物活性,IC50值大于10 μmol·L-1.
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西藏药用植物螃蟹甲可培养内生真菌的分离、鉴定及抗HIV-1整合酶链转移活性研究
从西藏药用植物螃蟹甲(Phlomis younghusbandii Mukerjee)的叶和茎中分离得到52株内生真菌.经分子鉴定(基于ITS序列和28S序列),内生真菌分属于Phoma、Chaetosphaeronema、Fusarium、Leptosphaeria 等12属,其中拟茎点霉属(Phoma)为其优势菌群.使用原核表达的可溶型一型人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)的整合酶(integrase,IN),对52株内生真菌的发酵产物进行体外抗HIV-1 整合酶链转移反应活性试验,结果发现,来自Chaetosphaeronema属真菌的7个样品对整合酶链转移反应表现出强烈的抑制作用,其对应的IC50值分别为6.60、5.20、2.86、7.86、4.47、4.56和3.23 μtg·mL-1.该研究表明,螃蟹甲内生真菌在发现抗HIV-1整合酶活性物质方面有进一步的开发价值.
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抗紫杉醇单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立
目的:制备抗紫杉醇单克隆抗体并建立间接ELISA检测方法.方法:用琥珀酸酐法将紫杉醇(taxol)与牛血清白蛋白(BSA)偶联制成全抗原taxol-BSA,采用紫外波长扫描法和薄层层析检测法对合成抗原进行鉴定；以taxol-BSA免疫Blab/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/O进行融合,经间接ELISA法筛选、融合细胞有限稀释法克隆、克隆化杂交瘤细胞株的亚类鉴定等筛选出单克隆抗体杂交瘤细胞株,并对单克隆抗体的特异性进行鉴定；用杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水,应用辛酸-饱和硫酸铵沉淀法纯化腹水.同时,对间接ELISA法反应条件进行了优化.结果:获得了3株能稳定分泌抗紫杉醇单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为taxol-A1,taxol-A2和taxol-A3；taxol-A3株腹水效价为1:128 000,属于IgG2b亚型；建立的间接ELISA法检测条件为15 μg· mL-1抗原、4℃包被过夜、1％ BSA封闭lh,PBS做抗体稀释液,单抗反应时间为30 min,酶标二抗作用时间lh,10％浓硫酸终止反应.结论:获得了特异性的抗紫杉醇单克隆抗体并建立了间接ELISA检测方法.本研究制备的抗紫杉醇单克隆抗体及建立的间接ELISA检测方法,为从内生真菌生物合成紫杉醇发酵液中迅速、高效地分离纯化和检测紫杉醇奠定了基础.
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产甘草次酸内生真菌RE7的鉴定及抑菌活性研究
目的:研究甘草内生真菌RE7及其次生代谢产物,旨在深入开发应用该菌株.方法:甘草内生真菌RE7对10种受试致病菌具有较强抑制活性,结合其形态特征观察及18 SrDNA序列同源性分析对该菌株进行鉴定,利用柱色谱法对RE7发酵液进行分离.结果:内生真菌RE7为轮枝孢属大丽轮枝菌(Verticillium dahalia),并可从该菌发酵液中分离得到甘草次酸.结论:RE7的获得可为甘草次酸成分的开发利用提供新途径.
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黑果枸杞内生真菌R43的次生代谢产物的研究
目的:对分离自黑果构杞根部的内生真菌R43进行鉴定,并对其发酵物的化学成分进行研究.方法:采用大米固体培养基对R43进行发酵;根据形态学特征和ITS序列对菌株R43进行鉴定;采用各种色谱方法分离乙酸乙酯提取物中的化学成分,并根据化合物的波谱数据确定结构.结果:经形态学特征及ITS序列鉴定菌株R43为塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis).从其发酵产物中分离得到6个化合物,分别为rubrofusarin B(1),campyrone A(2),asperpyrones A(3),2,5-二羟基-苯乙酸(4),麦角甾醇(5),甘露醇(6).结论:化合物4为首次从真菌发酵产物中分离得到.化合物1对大肠杆菌有很好的抑制活性,小抑菌浓度为1.95 μg· mL-.
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红树林木果楝属植物内生真菌Trichoderma sp.Xy24的两个萜类和一个聚酮类化合物
从一株红树林木果楝属植物内生真菌Trichoderma sp.Xy24中分离得到3个化合物,包括一个Harziane二萜harzianone(1),一个菖蒲烷型倍半萜醇trichoacorenol (2)以及一个具有完全对称结构的聚酮类化合物trichodimerol (3).其化学结构通过旋光、质谱以及核磁共振波谱等波谱方法确定.化合物3具有中等程度的抗病毒活性.
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紫花玉簪内生真菌分离鉴定及其抗氧化活性研究
以紫花玉簪为研究对象,从其根部分离得到13株内生真菌,并通过IST序列扩增后18S rDNA进行鉴定.以总抗氧化能力,DPPH自由基清除能力,ABTS+在自由基清除能力为指标,研究13种内生真菌菌丝体醇提物抗氧化活性,并测定其总多酚含量.结果表明,HoV1(尖孢镰刀菌属)和HoV4(附球菌属)粗提物多酚含量较高(1.90±0.03 mg/g,2.41± 0.01 mg/g),且表现出较强的综合抗氧化能力.其总抗氧化能力分别为(63.46±0.26 U/g,66.05±0.71 U/g),ABTS+自由基清除IC50分别为(30.25±0.05 μg/mL,24.66±0.65 μg/mL),DPPH自由基清除IC50分别为(83.42± 0.24 μg/mL,59.136 μg/mL).另外,尖孢镰刀菌属的HoV8具有优于BHT的DPPH自由基清除活性(IC50=16.02 μg/mL).这些真菌都有望开发成为新型天然抗氧化制剂.
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4种药用半红树植物内生真菌的分离及其抗菌活性研究
目的研究4种药用半红树植物内生真菌的抗菌活性,旨在获得有良好抗菌活性的菌株,以寻找新型抗菌物质.方法以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌为试验菌株,用琼脂块法对分离的真菌进行了抑菌试验.结果从4种植物中共分离到52株内生真菌,其中有18株真菌对至少1种试验菌株有抗菌活性,占总分离菌株的34.6%.结论海洋植物的内生真菌中存在着丰富的抗菌天然活性物质,这可为寻找新型抗菌物质提供资源.
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5种石斛内生真菌的分离及其抗菌活性研究
目的 对我国云南产5种石斛的内生真菌进行分离,并研究其抗菌活性,以获取5种石斛内生真菌的资源及分布情况,获得具有良好抗菌活性的菌株,同时为深入地了解石斛与内生真菌协同进化的共生关系提供参考.方法 以平板分离法分离内生真菌;用琼脂块法对获取的菌株进行抗菌活性筛选.结果 从5种石斛中共分离获得155株内生真菌;其中共有48株真菌对至少1种供试验菌株有抗菌活性,占总分离菌株的30.97%.结论 5种石斛中内生真菌种类丰富,分离和筛选具抗菌内生真菌是获取天然抗菌活性物质的有效途径.
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促进金线莲生长发育的内生真菌筛选研究
目的 筛选促进金线莲生长发育的优良内生真菌.方法 在离体培养条件下,将金线莲试管苗与4株分离自兰科植物的内生真菌在5种供试培养基上共培养,根据菌苗共生特点筛选适宜的双重培养基.在此基础上,将17株分离自兰科植物的真菌与金线莲苗共生培养,以鲜重和增高为指标,筛选可促进金线莲生长发育的内生真菌.结果 17株真菌中有1株显著促进金线莲苗增高(P<0.05),3株极显著促进金线莲苗增高(P<0.01),高促增高可达对照的2.04倍,其中2株为金线莲有益真菌.结论 双重培养基和金线莲有益真菌的筛选为研究内生真菌和金线莲的共生机制及人工栽培金线莲新方法奠定了基础.
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云南美登木内生真菌Alternaria sp.Ly81中的混合萜类化合物的研究
目的 研究云南美登木内生真菌Alternaria sp.Ly81的次生代谢产物,并对所得的单体化合物进行抗肿瘤活性筛选.方法 采用RP-18,Sephadex LH-20,硅胶等材料进行色谱柱色谱分离化合物,用现代波谱技术鉴定化合物的结构,用MTT法测试单体化合物活性.结果 从4L固体发酵提取物中分离得到9个混合萜类化合物,分别鉴定为tricycloalternarene 2a(1)、tricycloalternarene 1a(2)、tricycloalternarene 1b(3)、tricycloalternarene 2b(4)、tricycloalternarene 3b(5)、tricycloalternarene 4b(6)、tricycloalternarene 5b(7)、tricycloalternarene-H(8)和tricycloalternarene F(9).结论 化合物1～9均为首次从该菌株中分离得到,且首次用Mosher酯反应确定了化合物1的绝对构型,活性筛选结果显示化合物3对Lewis肺癌细胞3LL有强抑制活性.
关键词： 云南美登木 内生真菌 Alternaria sp. 混合萜 抗肿瘤活性 -
铁皮石斛软腐病的生物防治
目的 利用本实验室丰富的内生真菌资源筛选出具有良好生物防治铁皮石斛软腐病的菌株,为开发内生真菌生物防治技术和大田应用打下基础.方法 采用内生真菌与软腐病原菌PDA平皿对峙实验确定的18株内生真菌用于生物防治实验,先采用瓶苗共培养的方法确定对铁皮石斛苗致病力弱或具有促生长作用的菌株用于盆栽苗实验,进而确定内生真菌的生物防治效果.结果 通过盆栽苗生物防治软腐病病原菌终极腐霉的实验研究,利用统计学分析确定了2株具有良好生物防治效果的内生真菌菌株4829和3952,铁皮石斛苗的存活率分别达到66.7％和60.5％.结论 石斛属植物内生真菌具有良好的生物防治铁皮石斛软腐病效果.
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滇牡丹内生真菌的分离及其抑菌活性研究
目的 研究滇牡丹内生真菌的种群组成及其代谢产物的抑菌活性,获得抗菌活性较好的菌株,以寻找新型抗菌物质.方法 采用内生菌常规分离法对健康滇牡丹植株的根、茎、叶进行内生真菌的分离鉴定.以11种指示菌,采用纸片扩散法对分离获得的内生真菌进行抑菌活性实验.结果 从滇牡丹植物中分离到81株内生真菌,经形态鉴定,分属于19个属.抑菌实验表明,有46株内生真菌对至少1种指示菌有抑制作用,占分离总菌株的56.8%.结论 滇牡丹内生真菌中存在着丰富的抗菌天然活性物质.可为寻找新型抗菌物质提供资源.
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海南粗榧内生真菌S26中次生代谢产物的研究
目的 对海南粗榧内生真菌S26发酵液的化学成分进行研究.方法 用多种柱色谱技术对化合物进行分离纯化,用波谱技术和理化性质鉴定化合物的结构,采用MTT法测定化合物的抗肿瘤活性.结果 从海南粗榧内生真菌S26的发酵液中分离得到1个环二肽和1个脂肪酸,分别鉴定为(3R,12aS).3-methyl-2,3,6,7,12,12a-hexahydro-pyrazino[1,2-b]β-carboline-1,4-dione(1)和棕榈酸(2).结论 化合物1是首次分到的天然产物,化合物2在体外对胃癌细胞SGC-7901具有一定的抑制活性.
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药用植物沉香内生真菌的分离及抗菌活性研究
目的 研究药用植物沉香内生真菌的杭菌活性,旨在获得有良好抗菌活性的菌株,以寻找新型抗菌物质.方法 以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌为实验菌株,用琼脂块法对分离的真菌进行了抑菌实验.结果 从沉香植物中共分离到26株内生真菌,其中有7株真菌对至少1种实验菌株有抗菌活性,占总分离菌株的26.92%.结论 药用植物沉香的内生真菌中存在着丰富的抗菌天然活性物质,这可为寻找新型抗菌物质提供资源.
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濒危药用植物八角莲内生真菌分离鉴定及抗菌活性研究
目的 考察广西八角莲[Dysosma versipellis (Hance)M.Cheng]内生真菌的多样性并筛选具有抗菌活性的菌株.方法 采用琼脂块法筛选具有抗菌活性的内生真菌;应用ITS-rDNA法鉴定所有分离的内生真菌,并对具有强抗菌活性的菌株进行形态学观察.结果 从八角莲根茎叶中共获得19株真菌,其中根12株,叶5株,茎2株;鉴定结果表明,这19株真菌分属于8目13属.抗菌活性筛选发现DV04对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠杆菌(Escherichia coli和白色念珠菌(Candida albicans)均有较强的抗菌活性,鉴定结果显示,该菌株属于Leptodontidium属暗色有隔真菌(DSE)真菌.结论 八角莲中存在丰富的内生真菌,DV04菌株可作为抗菌活性候选菌株进行深入研究.
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白木香内生真菌发酵产物抑制HIV-1整合酶活性筛选
目的 研究白木香内生真菌的抗人类免疫缺陷病毒(HIV)活性,旨在获得具有显著活性的菌株,以寻找新的抗获得性免疫缺陷综合征药物来源,降低生产成本.方法 以人类免疫缺陷病毒-1整合酶为靶点,利用人类免疫缺陷病毒-1整合酶链转移反应筛选内生真菌发酵产物的抗人类免疫缺陷病毒活性,并对其中活性好的一株内生真菌进行了活性指导下的化合物分离.结果 不同时期不同地点采集的白木香材料分离所得78株内生真菌,其中有9株真菌显示出良好的活性(抑制率＞80％),占总分离菌株的11.54％.其中毛壳菌属菌株球毛壳菌HN-AS-8的发酵液活性好,IC50为9.44 μg· mL-1,从其活性部位得到3个已知化合物,其中化合物1具有一定的人类免疫缺陷病毒整合酶链转移反应抑制活性,IC50为35.4 μmol·L-1,化合物1和3为首次从该属真菌中分离得到的化合物.结论 白木香的内生真菌具有潜在的抑制人类免疫缺陷病毒-1整合酶活性物质,这为新型抗获得性免疫缺陷综合征药物的开发提供了更丰富的资源.
关键词： 内生真菌 抗人类免疫缺陷病毒活性 白木香 球毛壳菌 -
温莪术内生真菌的分离及其抗菌活性的初步研究
目的 研究温莪术内生真菌的种群组成及其代谢产物抗菌活性.方法 采用内生菌常规分离法对健康温莪术植株体内的内生真菌进行了分离鉴定.以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、沙门氏菌、巴氏杆菌趵测试菌种,对温莪术根、茎,叶中分离的56株内生真菌进行抗菌活性筛选.结果 经初步鉴定,这些内生真菌为5目、6科、24属;抑菌实验表明,56株内生真菌中有39株对5种测试菌均有不同程度的抑制作用.结论 温莪术植物含有丰富多样的内生真菌,且多数内生真菌都表现为较高的抑菌活性.
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南方红豆杉内生真菌的分离及抗菌活性筛选研究
目的 对我国广西产的野生南方红豆杉内生真菌进行分离,并研究其抗菌活性,旨在筛选具有良好抗菌活性的真菌菌株,以寻找新型抗菌物质.方法 以组织块分离法获得内生真菌,并以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌为实验菌株,用琼脂块法和纸片扩散法对分离的菌株进行抗菌活性筛选.结果 从南方红豆杉根、茎、叶中共分离到34株内生真菌,其中有8株真菌对至少1种实验菌株有抗菌活性,占总分离菌株的23.53％.结论 南方红豆杉内生真菌种类多样,而且存在着丰富的抗菌天然活性物质,这可为寻找新型抗菌物质提供可利用的候选菌株.
