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红树植物角果木内生真菌Penicillium sp.J54的次生代谢产物研究
目的 红树植物角果木内生真菌Penicillium sp.J54大米固体培养基发酵的次生代谢产物的研究.方法 采用多种色谱技术进行分离纯化,并根据化合物的理化常数、核磁和质谱数据进行结构鉴定;通过滤纸片琼脂扩散法进行体外抗菌活性测试;通过Ellman比色法进行乙酰胆碱酯酶抑制活性测试.结果 从Penicillium sp.J54的大米固体培养基发酵产物中分离得到了6个化合物,分别鉴定为methyl 2-hydroxy-2-(5-hydroxy-2,7-dimethyl-4-oxo-4H-chromen-3-yl)acetate(1)、coniochaetone B(2)、dihydrocitrinone(3)、asperbiphenyl(4)、erythro-11 α-hydroxyneocyclocitrinol(5)和麦角甾-5,7,22-三烯-3β-醇(6).活性测试结果表明化合物3,4和6对烟草青枯病原菌具有微弱的抑制活性,而化合物2则对乙酰胆碱酯酶有较强的抑制活性.结论 化合物1为新化合物,4为首次从青霉菌中分离得到.
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产红色素的三角叶黄连内生真菌发酵条件的优化
目的:对三角叶黄连中一株产红色素的内生真菌进行鉴定,并对其发酵工艺条件进行优化.方法:采用显微鉴定法对目标菌株的菌丝体和孢子的形态特征进行分类鉴定；以红色素效价单位为指标,考察不同的培养基、温度、初始pH、接种量、装液量及发酵时间对红色素产生的影响.结果:通过分离纯化初步鉴定该目标菌株为半知菌类无孢菌群；250 mL摇瓶中产红色素的佳条件为:PDA培养基、温度为18℃、pH为7.5、接种量为20％、初始装液量为100 mL、佳发酵时间为11d.结论:该菌株发酵工艺条件优化后能稳定产生红色素,产色素单位可达1.552 U/mL.
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北极新奥尔松地区地衣内生真菌的抑菌活性
目的 探讨北极地衣内生真菌对3种致病菌金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)ATCC 25923、大肠杆菌(Escherichia coli ATCC 25922和白色念珠菌(Canidia albicans)ATCC 10213的抗菌活性,为发掘新的抗菌物质奠定基础.方法 采用牛津杯法检测1 1株北极内生真菌对S.aureus ATCC 25923、E.coli ATCC 25922和C.Albicans ATCC 10213的抗菌活性.结果 筛选的11株北极地衣内生真菌中,北极内生真菌M227-2和L174-6对3种致病菌均显示较强的抑制活性,对E.coli ATCC 25922、C.Albicans ATCC 10213、S.aureus ATCC 25923的抑菌圈直径分别达到18.3、28.2、32.2 mm和15.1、26.3、16.3 mm.而其余菌株也对C.albicans ATCC 10213均显示不同程度的抑制活性,11株内生真菌中有4株对C.albicans ATCC 10213的抑菌圈直径超过20.0 mm.结论 北极地衣内生真菌对3种检测菌S.aureus ATCC 25923、E.coli ATCC 25922和C.albicans ATCC 10213显示不同程度的抑制活性,尤其其中4株对C.albicans ATCC 10213显示较强的活性,为下一步开发新的抗菌物质提供参考.
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岩白菜内生真菌的分离和分类鉴定
目的:从岩白菜[Bergema purpurascens(Hook f.et Thoms.)Engl.]植物根部分离获得内生真菌,并进行分类鉴定.方法:经显微形态观察对内生真菌进行分类鉴定.结果:从岩白菜植物中分离获得内生真菌89株,将其中的79株鉴定为14个属,优势属种为青霉属和拟青霉属.结论:岩白菜植物内生真菌数量及种群都呈现出多样性特点.
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药用植物广藿香内生真菌的生物活性研究
目的:研究40株广藿香内生真菌的生物活性,为进一步发掘活性代谢产物提供理论依据.方法:采用SRB、PNPG和DPPH法分别测定内生真菌提取物的细胞毒、抑制α-葡萄糖苷酶和清除DPPH自由基等活性.结果:21株内生真菌对肿瘤细胞SF-268、MCF-7、NCI-H460、HepG-2中的至少3种细胞具有抑制活性,IC50值在0.03~20.30 μg/mL之间,其中菌株A616的抑制活性为显著,对4种肿瘤细胞的IC50值分别为0.044、0.031、0.030、0.032μg/mL;13株内生真菌具有抑制α-葡萄糖苷酶活性,其中菌株A598的活性为显著,其IC50值为184.38μg/mL;15株内生真菌具有DPPH自由基清除活性,其中菌株A594、A598、A630显示出较强的DPPH自由基清除能力,IC50值分别为36.33、20.63、59.93 μg/mL.结论:广藿香内生真菌具有多种生物活性,值得进一步深入研究.
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粉背雷公藤内生真菌抗氧化活性的初步研究
目的:从粉背雷公藤新鲜植株中分离具有抗氧化活性的内生真菌.方法:采用组织块培养法分离内生真菌.利用体外清除DPPH自由基实验,测定内生真菌次生代谢产物的抗氧化能力.结果:共分离得到107株内生真菌,其中对DPPH自由基清除率在80%-90%的菌株有7株,大于90%的有7株.结论:粉背雷公藤内生真菌次生代谢产物在抗氧化剂开发方面具有一定的潜力.
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滇南黄草乌内生真菌的分离和初步鉴定
从滇南黄草乌Aconitum vilmorimianum Kom.植物的根和茎中分离获得37株内生真菌,经显微形态观察进行初步鉴定,归属为3目、5科、12属,其中镰孢霉属为优势属;且滇南黄草乌不同部位内生真菌的数量、分布和种群存有差异.
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清香木内生菌对酪氨酸酶活性的影响
目的：探讨清香木内生菌对酪氨酸酶活性的影响。方法：对新鲜清香木的茎和根部位进行内生真菌的分离，经显微鉴定菌株分别为木霉属、镰孢属和假丝酵母属，然后将菌株的发酵液用多孔酶标板法进行酪氨酸酶抑制活性的检测。结果：茎皮部的 PZ －6－2对酪氨酸酶活性抑制作用强，PZ －4次之；根皮部的 QZ －1抑制活性也较强。结论：清香木内生菌对酪氨酸酶活性具有一定的抑制作用。
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滇重楼内生真菌的分离及其抑菌活性
目的 从滇重楼新鲜植株中分离内生真菌并研究其代谢产物抑制人体病原细菌的能力.方法 滇重楼新鲜植株表面消毒后,采用YPD平板分离培养内生真菌.各菌株的液体发酵物经乙酸乙酯萃取并浓缩.然后,以金黄色葡萄球菌、 伤寒沙门菌、 屎肠球菌3种可感染人体的细菌为指示菌,采用滤纸片琼脂扩散法测定抑菌活性.结果 分离到54株内生真菌.其中20株内生真菌有抑菌活性,活性菌株占总菌株数量的37%.其中,J09对上述3种细菌的抑菌圈直径分别为(49.67±1.25)mm、(50.33±0.52)mm、(37.00±1.63)mm,经形态学观察及分子生物学鉴定,J09为灰黄青霉.同时,经高效液相色谱检测确定,该抑菌成分并非青霉素或灰黄霉素.结论 内生真菌(J09)的代谢产物抑菌活性较强,具有开发抗菌药物的潜在价值.
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滇重楼内生灰黄青霉抑菌产物的热稳定性
目的 对1株滇重楼内生灰黄青霉的代谢产物108号洗脱物进行成分分析和热稳定性研究,并与阿莫西林的热稳定性进行对比.方法 采用薄层色谱法和柱色谱法分离提纯该菌株的次生代谢产物;在体外以金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌、屎肠球菌为指示菌,检测108号洗脱物抑菌效果(纸片法),根据抑菌圈直径对比108号洗脱物与阿莫西林的热稳定性.结果 从该灰黄青霉次生代谢产物中,分离得到组分108号洗脱物.经紫外扫描法及薄层色谱分析,初步判定分离产物108号洗脱物为单一化合物.常温下,其对3种不同指示菌的抑菌圈依次为24 mm、25.3 mm、7.6 mm;经121.3℃加热处理后,与阿莫西林相比,该化合物对指示菌均保持了较稳定的抑菌圈直径.结论 化合物108号洗脱物可以耐受高压蒸汽灭菌,在一定程度上具有较强的热稳定性.
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金叶女贞内生真菌分离及抑菌活性
目的 探讨金叶女贞内生真菌的多样性及其次生代谢产物抑制细菌活性.方法 采用植物组织块培养分离法从金叶女贞茎和叶中分离内生真菌,分别进行YPD液体培养,将培养物过滤后用丙酮萃取次生代谢产物,以大肠杆菌(Eschenchia coli)、绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) 为试验指示菌株,用滤纸片法分别测定次生代谢产物对3种供试菌的抑菌活性.结果 从金叶女贞茎和叶中共分离得到29株内生真菌,有25株内生真菌对试验菌株有一定的抑制作用,占总分离菌株的86.2％.不具抗菌活性的菌株为4株,占总分离菌株的13.8％.结论 金叶女贞茎、叶中均存在丰富的内生真菌资源,其次生代谢产物具有良好的抑菌活性.
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滇重楼内生真菌转化万古霉素的研究
目的 利用滇重楼内生真菌生物转化万古霉素.方法 分离滇重楼内生真菌并筛查它们的生物转化能力.鉴定具有转化能力的内生真菌.结果 有2株内生真菌可以转化万古霉素.经鉴定为产黄青霉和Fusarium nematophilum.菌株G01和G03在添加万古霉素的液体培养基中培养6d后,HPLC (High Performance LiquidChromatography)分析发现,万古霉素的峰面积下降并有新吸收峰出现.结论 内生真菌发酵产生了某些新成分.
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1株滇重楼内生真菌的研究——抑真菌活性及分离鉴定
目的 分离滇重楼内生真菌,研究其抑制病原性真菌的作用并进行分类鉴定.方法 从滇重楼植株中分离培养内生真菌.在体外,用指示菌株金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌、普通变形杆菌、痢疾杆菌、大肠埃希菌及白色念株菌进行抑菌活性筛选.对具有抑制白色念珠菌的内生真菌菌株进行培养,观察显微形态特征,确定其分类地位.结果 从滇重楼的根中分离到一株内生真蒲菌株,对白色念株菌有较强抑制作用,鉴定为尤孢菌群.结论 滇重楼内生真菌无孢菌群菌株LRF4具有抑制白色念珠菌的作用.
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一株牛奶子内生真菌Colletotrichum sp.代谢产物的研究
目的 研究牛奶子内生真菌Colletotrichum sp.代谢产物.方法 采用乙酸乙酯萃取、硅胶层析、高效液相色谱制备分离纯化;通过质谱和核磁共振等谱学数据进行化学结构鉴定.结果 从发酵液中分离得到7个化合物,经波谱数据分别鉴定为3-吲哚乙酸乙酯(1)、乙酸-3-吲哚乙酯(2)、吲哚-3-乙酰胺(3)、nectriapyrone(4)、2-(2-羟基丙酰胺)苯甲酰(5)、3-甲色酮(6)和苯乙酸(7).结论 化合物4,5和6为首次从该属真菌中分离得到.
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忽地笑鳞茎中产加兰他敏内生真菌的分离与鉴定
目的 筛选产加兰他敏的内生真菌,为生产加兰他敏寻找新的途径.方法 以忽地笑鳞茎为实验材料,分离内生真菌,利用HPLC对其发酵代谢产物进行检测,筛选能产生加兰他敏的菌株.结果 从忽地笑鳞茎中分离出5株内生真菌,经HPLC分析,真菌GF-1能产生加兰他敏.经初步鉴定,GF-1为半知菌亚门(Deuteromycotina)青霉属(Penicillium LK.ex Fries).结论 忽地笑内生真菌有希望成为生产加兰他敏的新资源.
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甘肃乌拉尔甘草野生与栽培品内生菌的分离及鉴定
目的:通过对甘肃乌拉尔甘草野生与栽培品内生菌的分离,对甘草同属不同品种内生菌的优势菌种进行初步鉴定,比较二者的生理活性差异.方法:采用NA、PDA培养基对甘草野生与栽培品内生菌进行分离和纯化,并以分离频率比较判断各自优势菌种.结果:野生甘草分离到内生细菌65 株,内生真菌7 株,优势菌种为青霉菌属和曲霉属;栽培甘草分离到内生细菌54 株,内生真菌6 株,优势菌种为青霉菌属;野生与栽培甘草的内生真菌分属于6 个属,相同的有5 个属,不同的2个属为丝核菌属和木霉属.结论:野生与栽培甘草具有相趋同数量和种类的内生细菌与内生真菌,但二者内生真菌的菌属及优势菌种存在明显差异.
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温郁金抗炎抗氧化活性内生真菌的筛选
目的 研究温郁金内生真菌的抗炎抗氧化活性,旨在获得有良好抗炎抗氧化活性的菌株,以寻找新型抗炎抗氧化活性物质.方法 采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀及醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性的动物模型对已分离的50株温郁金内生真菌发酵产物进行抗炎活性筛选；采用DPPH法测试内生真菌的抗氧化活性.结果 有21株内生真菌能够抑制二甲苯诱导的小鼠耳肿胀,并且对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性有降低作用,其中菌株E3、E8、E17、E24、E37、E46的抑制作用为显著(P＜0.01),作用与萘普生相当；具有抗氧化活性的菌株8株.并且其抗氧化活性存在剂量效应关系,其中活性菌株E2、E17、E37在质量浓度为140 μg/mL时对DPPH自由基清除率都在90％以上.结论 温郁金含有抗炎抗氧化活性的内生真菌,菌株E2、E3、E8、E17、E24、E37、E46具有良好的抗炎抗氧化效果,具有一定的研究开发前景.
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穿龙薯蓣内生真菌分离鉴定及其抑菌活性研究
目的 分离纯化穿龙薯蓣内生真菌,并对分离得到的内生真菌进行抑菌活性筛选及分类鉴定.方法 采用组织分离法纯化穿龙薯蓣内生真菌,采用载片培养法、挑片培养法、插片培养法,对照《真菌鉴定手册》和《半知菌纲手册》进行初步鉴定;以金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus、白色葡萄球菌Staphylococcus albus、柠檬色葡萄球菌Staphylococcus citreu、四联球菌Micrococcus tetragenus、大肠杆菌Escherichia coli、伤寒杆菌Salmonella typhi、铜绿色假单胞菌Pseudomonas aerugmosa、变形杆菌Bacterium termo、肺炎杆菌Bacillus endocarditidis capsulatus、福氏痢疾杆菌Shigella flexneri、乙型副伤寒杆菌Bacterium paratyphosumB作为受试对象,检测内生真菌菌株发酵液以及菌丝提取物的抑菌活性,应用分子生物学方法对筛选出的活性菌株进行分类鉴定.结果 从穿龙薯蓣叶片中分离得到52株内生真菌,根据形态学特征将10株产孢子的内生真菌初步鉴定为2个目、3个科、9个属;其中有3株内生真菌的菌丝提取物具有广谱抗菌活性,结合形态学和分子生物学特征鉴定C37菌为赤霉属Gibberella真菌,C30和C50菌为链格孢属Alternaria真菌.结论 穿龙薯蓣叶片中存在具有抑菌活性的内生真菌,具有开发抑菌生物制剂的潜力.
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野生刺五加内生真菌分离与鉴定
刺五加为中医临床常用中药，含有多种有效成分，药用价值极高。现阶段，国内外对刺五加的研究不断深入，但是多以外在环境对植物体药用成分的影响为主，忽略了内环境的影响。研究与实践证实［1］，体外培养刺五加的药用成分与效果远低于野生刺五加，并且成分相对不稳定。内生真菌会利用自身活动、代谢产物，对宿主次级代谢产生一定程度的影响［2］。我们对野生刺五加内生真菌分离与鉴定进行分析探讨，报道如下。
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人参内生真菌多样性的初步研究
对人参两个栽培品种园参和移山参的内生真菌多样性进行初步研究.新鲜园参和移山参根经酒精和次氯酸钠消毒后,接种于PDA平板培养基上进行内生真菌的分离、纯化;根据菌落形态和孢子等形态特征,结合真菌的5.8S和ITS序列进行菌株鉴定.从人参中共计分离到内生真菌48株,园参中分离得到27株,移山参中分离到21株.通过形态鉴定及分子生物学方法鉴定了15株,分为14个分类单元,归属到8科9属12种.不同栽培品种的人参内生真菌形态各异,表现出了较丰富的多样性.
