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一株具有抗HepG2活性的胡桃楸内生真菌的分离及研究
目的:从胡桃楸树皮部分离抗癌活性菌株,筛选抗癌活性菌株,进行菌种鉴定,并对其发酵产物体外抗癌活性进行初步研究.方法:采用菌丝顶端纯化法从胡桃楸树皮部分离、纯化抗癌活性菌株;以MTT法对上述活性菌株发酵液体外抗癌活性进行初步评价;形态学观察结合ITS序列分析法对筛选出的高抗癌活性菌株进行了菌种鉴定;单独对高抗癌活性菌株进行了体外抗癌活性试验.结果:分离得到FSN001～014共14株内生真菌,初步评价发现菌株FSN006具有较强的抗癌活性,鉴定为半知菌亚门,丝孢纲,丛梗孢目,木霉菌属长枝木霉.MTT结果显示FSN006发酵液对人肝癌HepG2细胞具有明显的生长抑制作用,在稀释20倍后仍能达到半数抑制效果.同等条件下阳性对照药姜黄素的IC_(50)为11.49 mg·L~(-1).同时发酵液对正常肝细胞HL-7702的抑制程度仅相当于癌细胞抑制率的1/4左右,表现出较好的癌细胞选择性,有望开发成一种水溶性的高效低毒的抗癌药物.结论:胡桃楸树皮部存在多种内生真菌,其中分离得到的一个菌株具有较强的抗癌活性;其抗癌活性成分及其是否与胡桃楸中抗癌活性物质存在相关性等问题有待进一步深入研究.
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大戟科4种药用植物及其内生真菌脂肪酸组分研究
目的: 研究大戟科药用植物和其内生真菌相互关系,为探索大戟科植物生物活性物质来源,开发新药资源奠定基础.方法:用气相色谱分析了大戟科乌桕、大戟、泽漆、重阳木4种药用植物新鲜叶、茎及其28株内生真菌的脂肪酸组分,并比较它们的差异.结果:植物脂肪酸主要为α-亚麻酸、棕榈酸、亚油酸、油酸;内生真菌脂肪酸主要为亚油酸、油酸和棕榈酸.结论:内生菌可以自主合成脂肪酸,因此可以作为分类鉴定的参考依据之一.植物及内生菌脂肪酸在α-亚麻酸含量上表现出极大的差异,推测可能和内生菌营养吸收及内生菌和宿主植物相互作用有关.
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川芎内生真菌的分离与鉴定
目的:探讨川芎内生真菌类群与川芎品种和产地的关系.方法:采用平板分离法分离川芎的内生真菌,采用点植法对分离菌株进行分类鉴定.结果:从6个产地的川芎根茎样品共获得内生真菌50株,经形态观察分类鉴定为l纲、3目、4科、13属.结论:不同产地及不同品种川芎的内生真菌在数量、分布、种群及其组成存在差异,推测川芎内生真菌种群可能和川芎的特定生境有关.
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快速筛选金钱松内生真菌抗真菌活性的研究
目的:筛选金钱松内生真菌抗病源真菌的活性菌株.方法:首次对金钱松内生真菌进行了分离,以稻瘟霉PyricuLaria oryza P-2b为筛选模型,采用微量稀释法筛选金钱松内生真菌抗真菌活性,研究其抗病源真菌的能力.结果:金钱松内存在着大量且具有抗稻瘟霉P-2b活性的内生真菌,占内生真菌总数的44.8%.其中JJ314,JJ323可诱导稻瘟霉P-2b菌丝念珠状、膨大变形,JJ324可抑制孢子萌发,它们对红色毛癣菌Trichophyton rubrum、新型隐球菌Cryptococcus neoformans、白色念珠菌Candida albicans等病源真菌都具有强烈的活性.结论:金钱松内生真菌是潜在的抗真菌药物资源.
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金钱松内生真菌JJ18杀螺作用实验研究
目的:研究金钱松内生真菌JJ18的杀螺作用、活性部位及该菌株杀螺活性的传代稳定性,从而探索其应用的可能性.方法:按照WHO的杀螺剂浸泡试验法观察不同处理下JJ18发酵液杀螺效果.结果:JJ18菌株发酵液的活性成分集中在胞外液,当胞外液浓度10%时,72h杀螺率接近90%,且发酵外液成盐后有良好的耐热性,强光照下7 d内活性物质基本不改变,菌株传代稳定,杀螺活性成分集中在正丁醇萃取部位.结论:金钱松内生真菌JJ18代谢产物的杀螺活性,有开发应用的可能性.
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槲寄生内生真菌在槲寄生寄生过程中的作用
目的:研究槲寄生内生真菌在槲寄生寄生过程中的作用.方法:将槲寄生8个不同部位的组织进行外植体培养,分离纯化其内生真菌,利用CMC平板培养和DNS法筛选出具有较高纤维素酶活性的菌株;将槲寄生寄生的膨大部位进行组织切片,染色观察其内生真菌的组织分布.结果:槲寄生体内分布着丰富的真菌菌丝;从槲寄生各组织部位共分离出83株内生真菌;初步筛选得到38株可降解纤维素的菌株,19株降解纤维素能力较强,其中10株分离自槲寄生寄生的膨大部位.结论:内生真菌分泌纤维素酶可降解枫杨树的细胞壁及细胞间隙组织,协助槲寄生的吸器穿透枫杨树组织,帮助槲寄生在枫杨树上寄生.
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蛇足石杉内生真菌抗乙酰胆碱酯酶活性筛选及分类鉴定
目的:从蛇足石杉Huperzia serrata(Thunb.ex Murray) Trevis.内生真菌中筛选具有抗乙酰胆碱酯酶活性的菌株.方法:利用乙酰胆碱酯酶水解α-萘乙酯的产物和固蓝B盐发生显色反应的原理,用薄层色谱-生物自显影法对59株蛇足石杉内生真菌发酵产物进行抗乙酰胆碱酯酶活性筛选,并通过18s rDNA和5.8s rDNA序列分析结合形态学特征对目标菌株进行分类鉴定.结果:蛇足石杉内生真菌LQ2F01在抗乙酰胆碱脂酶活性筛选中呈现阳性颜色反应,18s rDNA和5.8s rDNA序列分析并结合形态学分类表明该菌株属枝顶孢霉属Acremonium.结论:蛇足石杉内生真菌LQ2F01表现出和宿主植物相同的抗乙酰胆碱脂酶活性,在天然药物开发以及内生真菌与宿主植物关系的研究中具有重要意义.
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4种内生真菌对金钗石斛无菌苗生长及其多糖和总生物碱含量的影响
目的:研究离体培养时4种菌根真菌对金钗石斛生长及化学成分含量的影响.方法:利用纯培养的菌根真菌分别与金钗石斛无菌苗共生培养,观测它们对金钗石斛生长及其多糖和总生物碱含量的影响.结果:与对照相比,Mycena sp.(MF23)极显著降低了金钗石斛鲜重的24.9%(P＜0.01);所有实验菌株对金钗石斛干重均无显著性影响;Epulorhiza sp.(MF18)和MF23显著提高了金钗石斛的折干率(P＜0.05),Mycena sp.(MF24)极显著提高了金钗石斛的折干率(P＜0.01),分别多提高了51.3%,43.8%和63.3%;Epulorhiza sp.(MF15)和MF24比对照极显著增加了金钗石斛气生根数量的4.25倍和4.13倍(P＜0.01);MF23极显著减少了金钗石斛基生根数量的46.5%(P＜0.01);MF15,MF18,MF23和MF24分别可使金钗石斛多糖含量提高153.4%,52.1%,18.5%,76.7%; MF23使金钗石斛总生物碱含量提高18.3%.结论:在离体培养条件下,内生真菌与金钗石斛共生培养能影响金钗石斛的生长和总生物碱的含量,提高多糖的含量.
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内生真菌对台湾金线莲栽培及酶活性的影响
目的:研究在野外盆栽条件下内生真菌对台湾金线莲的影响.方法:组培苗移栽1年后收获,统计成活率,称鲜重和干重,同时测定几丁质酶、β-1,3-葡聚糖酶、多酚氧化酶、苯丙氨酸解氨酶活性.结果:接菌的台湾金线莲成活率达100%.对台湾金线莲鲜重的增加有极显著差异,对干重的增加有显著差异,且接菌后4种酶活性均高于对照组.结论:在台湾金线莲的家栽过程中可利用内生真菌提高成活率.
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白木香内生真菌多节孢Nodulisporium sp.A4的化学成分研究
目的:研究来源于药用植物白木香、具有抗肿瘤活性的内生真菌多节孢Nodulisporium sp.A4的化学成分.方法:采用马铃薯葡萄糖(PD)液体培养基培养、乙酸乙酯萃取得到内生真菌A4的发酵液和菌丝体粗提物,采用正相硅胶柱色谱、反相硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20柱色谱、制备薄层色谱和重结晶等方法对粗提物进行分离纯化,运用现代波谱技术(NMR,MS)结合文献对照鉴定化合物结构.采用MTT法测定化合物的体外抗肿瘤活性.结果:从内生真菌A4的发酵液中分离获得7个化合物,分别为5-methyl-2-vinyltetrahydrofuran-3-ol(1),6-methyl-2-(5-methyl-5 -vinyltetrahydrofuran-2 -yl)hept-5-en-2-ol (2),6α-hydroxycyclonerolidol(3),rel-( 1S,4S,5R,7R,10R) -10-desmethyl-1 -methyl-11 -eudesmene(4),酪醇(5),8-甲氧基-1-萘酚(6),1,8-二甲氧基萘(7).从内生真菌A4的菌丝体中分离获得3个化合物,分别为麦角甾醇(8),过氧化麦角甾醇(9),啤酒甾醇(10).药理活性评价结果表明在作用浓度为100 mg·L-1时,化合物3和4对肿瘤细胞SF-268和NCI-H460的抑制率分别为89.1％,44.2％和82.3％,79.8％.结论:化合物1为新的天然产物,化合物2,3,7,10为首次从该属真菌中分离得到,化合物3和4对肿瘤细胞SF-268和NCI-H460的增殖具有一定的抑制作用.
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喜树内生真菌Diaporthe sp.XZ-07中的2个新内酯及其抑制肿瘤活性研究
对1株喜树内生真菌Diaporthe sp.XZ-07的次生代谢产物进行研究.采用RP-18,Sephadex LH-20,硅胶等材料进行色谱柱分离纯化得到2个新化合物,鉴定为5-((E)-1,4,5-trihydroxyhex-2-enyl) furan-2(5 H)-one(1)和(5Z)-5-(2,3,4,5-tetrahydroxyhexylidene) furan-2(5H)-one(2).用MTT法测试化合物活性,结果显示化合物1对Hela有较强抑制活性,化合物2对MCF-7,SH-SY5Y,3LL均有较强抑制活性.
关键词： 喜树 内生真菌 Diaporthe sp. 内酯 抗肿瘤活性 -
植物内生真菌Periconia sp.F-31中的一个新内酯类化合物
对一株番荔枝内生真菌Periconia sp.F-31中的次生代谢产物进行研究.通过硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、半制备HPLC等方法分离纯化得到了2个化合物,根据波谱学方法分别鉴定为5-(1-羟己基)-6-甲基-2H-吡喃-2-酮(1)、2-(3-羟基-4-甲基苯)-丙酸(2).化合物1为新化合物,化合物2为新的天然产物,首次对化合物2的NMR数据进行了报道.
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广藿香内生真菌Cerrena sp.中倍半萜类成分及其细胞毒活性研究
为了研究广藿香内生真菌Cerrena sp.A593的次级代谢产物及其细胞毒活性,采用正、反相硅胶柱、Sephadex LH-20凝胶柱、HPLC等色谱方法从菌株A593发酵液中分离得到8个倍半萜类化合物,经波谱数据分析,分别鉴定为chloriolin B(1),chloriolin C(2),pleurocybellone A(3),dihydrohypnophilin(4),cucumin F(5),antrodin A(6),10α-hydroxyamorphan-4-en-3-one(7),connatusin A(8),所有化合物均为首次从Cerrena属真菌中分离得到.体外细胞毒活性结果显示:化合物1～3对HepG-2,SF-268,MCF-7,NCI-H460 4种肿瘤细胞株具有抑制活性,其IC50在20.33～63.13 μmol·L-1.
关键词： Cerrena sp. 内生真菌 广藿香 倍半萜 细胞毒活性 -
一株番荔枝内生真菌的化学成分研究
目的:研究一株来源于海南刺果番荔枝、能够抑制肿瘤细胞增殖的内牛真菌F-31(黑团孢霉,Periconia sp.)的化学成分.方法:采用改良PDA培养基,对内生真菌F-31进行放大培养,通过大孔树脂吸附、硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、高效液相色谱等色谱手段对其发酵液及菌丝中的化学成分进行分离,利用IR,MS,NMR等多种波谱手段鉴定获得的化合物的结构,应用MTT法评价化合物的体外抗肿瘤活性.结果:从内生真菌F-31的菌液乙酸乙酯层提取部分和菌丝部分提取物中分离并鉴定了6个化合物,分别为:5-(3-hydroxybuty1)furan-2(5H)-one(1),chloranthalactone E(2),5,7-二甲氧基-6-羟基香豆素(3),(1'R,2'R,3'S,4'R)-1,2,4-三唑核酸(4),L-亮氨酸(5),L-苯丙氨酸(6).药理活性评价结果表明该6个化合物均无明显的体外抗肿瘤活性.结论:所得的化合物中,化合物1为新化合物.
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广藿香内生真菌Diaporthe longicolla A616细胞毒活性次级代谢产物研究
为了研究广藿香内生真菌Diaporthe longicolla A616的活性次级代谢产物.采用正相硅胶、C18反相、Sephadex LH-20凝胶、HPLC等色谱技术从该菌株的发酵产物中分离得到了10个化合物,经波谱数据分析和文献比对,分别鉴定为1,3-diamino-1,3-dimethylurea(1),(7R,9R)-7-hydroxy-9-propyl-5-nonen-9-olide(2),ergosta-5,7,22-trien-3β-ol(3),(22E,24R)-ergosta-4,6,8(14)-22-tetraen-3-one(4),(22E,24R)-3β,5α-dihydroxy-6β-ergosta-7,22-diene(5),citreoisocoumarin(6),glycerol monolinoleate(7),1-(2-hydroxyethoxy) ethyl (E)-octadec-9-enoate(8),cyclo-(L-Pro-L-Ala) (9),cyclo(L)-Pro-(L)-Val(10),其中,化合物6～10为首次从Diaporthe属真菌中分离得到.体外细胞毒活性结果显示化合物4和5对肿瘤细胞株SF-268,MCF-7,NCIH460和HepG-2具有显著的抑制活性,IC50分别为5.3,6.5,12.2,6.1μmol·L-1和8.2,5.2,6.1,9.4 μmol·L-1.
关键词： Diaporthe longicolla 内生真菌 广藿香 细胞毒活性 -
格木内生真菌烟曲霉的代谢产物
采用GPY培养基对格木内生真菌烟曲霉Aspergillus fumigatus菌株进行培养发酵,发酵产物经冻融处理后分离得到菌液与菌丝体.菌丝体经乙醇提取后,分别用乙酸乙酯和正丁醇萃取,根据肿瘤细胞毒活性筛选结果,选择菌体的乙酸乙酯萃取物进行化学成分研究.运用硅胶色谱柱、凝胶Sephadex LH-20柱色谱、反相柱色谱和制备HPLC等多种色谱技术,采用波谱学方法从中分离鉴定了5个二酮哌嗪化合物,其结构分别为cyclo-(R-Pro-R-Phe)(1),cyclo-( trans-4-OH-D-Pro-D-Phe)(2),cyclo-(R-Tyr-S-Ile)(3),cyclo- (R-Phe-S-Ile)(4),cyclo-(R-Val-S-Tyr) (5).
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娃儿藤内生真菌Diaporthe sp.次生代谢产物研究
通过硅胶柱色谱、中压ODS柱色谱和反相HPLC等多种色谱分离方法,从娃儿藤内生真菌Diaporthe sp.乙酸乙酯提取物中分离得到7个化合物,分别鉴定为(2S,3S)-2,3-dihydroxybutyl 2-hydroxy-3,5,6-trimethylbenzoate(1),xylariphthalide A(2),convolvulol(3),cis-4-hydroxy-6-deoxytalone(4),phomoxydienes B(5),5,6-dihydroxy-2,3,6-trimethylcyclohex-2-enone(6),trans-cyclo-(D-tryptophanyl-L-tyrosyl) (7).其中化合物1为新化合物,其结构由NMR、质谱、ECD数据确定.化合物1具有抑制人肺成纤维细胞MRC-5活化的药理作用,抑制率为64.0％(10 μmol·L-1).MTT实验结果表明化合物2和4对人胃癌细胞BGC-823具有选择性抑制作用,IC50分别为1.5,8.6 μmol· L-1.
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温郁金内生真菌E8菌株的鉴定及次生代谢产物的研究
目的:对温郁金内生真菌活性较高的E8菌株进行菌种鉴定,并对其代谢产物的化学成分进行研究.方法:采用形态学观察结合ITS序列分析法对E8菌株进行了菌种鉴定;应用多种层析手段对其代谢产物的化学成分进行分离和纯化,并依据理化性质及波谱数据鉴定其化学结构.结果:经鉴定菌株E8为青霉属的草酸青霉Penicillium oxalicum Curie & Thom;从菌株E8的代谢产物中分离纯化了4个化合物,分别鉴定为大黄酚(1)、大黄素(2)、黑麦酮酸A(3)和β-谷91醇(4).结论:内生真菌草酸青霉P.oxalicum首次从药用植物温郁金中分离;4个化合物均为首次从温郁金内生真菌中分离得到,微生物发酵也是生产这些化合物的一条新途径.
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滇牡丹内生真菌PR35的鉴定及次生代谢产物的研究
目的:对滇牡丹内生真菌PR35菌株进行菌种鉴定,并对其次生代谢产物的化学成分进行研究.方法:采用形态学观察结合ITS rDNA序列分析法进行菌种鉴定；应用多种柱色谱方法对其次生代谢产物进行分离纯化,并依据其理化性质及波谱数据鉴定化合物结构.结果:菌株PR35鉴定为长梗木霉Trichodema longibrachiatum；从菌株PR35的发酵产物中分离获得5个化合物,分别鉴定为1-(2,6-dihydroxyphenyl) -3-hydroxybutan-1 -one(1),1-(2,6-dihydroxyphenyl)propan-1-one (2),1-(2,4,6-trihydroxyphenyl) butan-1 -one (3),4-methoxy-1 -naphthol(4)和啤酒甾醇(5),其中化合物1～3对灰葡萄孢、燕麦镰孢和紧密单孢枝霉显示明显的抗真菌活性.结论:内生真菌长梗木霉首次从滇牡丹植物中分离获得,5个化合物均为首次从滇牡丹内生真菌中分离得到,其中化合物4为首次从微生物发酵产物中获得.
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内生真菌在中药现代化中的作用
中药现代化是中药走出国门、为国际所认可和接受的必要基础,是振兴传统中药产业的必经之路.在中药现代化进程中存在着各种挑战:重金属超标、有效成分含量低、创新性弱、中药资源利用与保护间的矛盾等.如何应用生命科学的新理论、新技术来解决这些问题已成为当务之急.近年研究发现,内生真菌在药用植物生长发育等过程中发挥着不可替代的积极作用,对中药材生产的质和量影响较大.故该文对内生真菌在揭示药用植物道地性、中药材栽培种植、资源保护和开发利用等方面的作用进行阐述,探讨其在中药现代化中的应用前景,以期为促进中药现代化的发展提供新思路、新动力.
