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凤丹内生真菌Fusarium oxysporum次生代谢产物的研究
目的 研究凤丹内生真菌Fusarium oxysporum的次生代谢产物.方法 运用多种色谱法对菌株F.oxysporum发酵液的醋酸乙酯萃取部位进行分离纯化,采用波谱分析对化合物的结构进行鉴定.结果 从菌株F.oxysporum发酵液的醋酸乙酯萃取部位中共分离得到23个化合物,分别鉴定为(2S)-脯氨酸(1)、(22E,24R)-7,22-二烯-3β,5α,6β-麦角三醇(2)、环-(S-脯氨酸-S-亮氨酸)(3)、环-(L-丙氨酸-L-脯氨酸)(4)、环-(缬氨酸-脯氨酸)(5)、环-(R-脯氨酸-S-苯丙氨酸)(6)、环-(D-顺-4-羟脯氨酸-L-苯丙氨酸)(7)、环-(L-反-4-羟基脯氨酸-L-苯丙氨酸)(8)、环-(谷氨酸-酪氨酸)(9)、环-(L-4-反-羟基脯氨酸-L-亮氨酸)(10)、环-(L-色氨酸-L-脯氨酸)(11)、环-(L-亮氨酸-甘氨酸)(12)、N-(3-(1H-吲哚-3-基)丙基)乙酰胺(13)、吲哚-3-乙酸(14)、2-哌啶酮(15)、2-吡咯烷酮(16)、胸腺嘧啶(17)、(5S)-5-((4-羟基苯基)甲基)-2,4-咪唑烷二酮(18)、(3S,6S)-3-(2-丁基)-6-(1-羟乙基)-2,5-哌嗪二酮(19)、环-(丙氨酸-亮氨酸)(20)、环-(S-脯氨酸-S-苯丙氨酸)(21)、环-(酪氨酸-脯氨酸)(22)、环-(L-苯丙氨酸-L-酪氨酸)(23).结论 除化合物2、6、14外,其余化合物均为首次从该菌株发酵液中分离得到.
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一株毛壳属内生真菌次生代谢产物研究
目的 研究一株毛壳属内生真菌Chaetomium sp.的次生代谢产物.方法 采用硅胶、凝胶和半制备等多种色谱方法进行分离纯化,根据波谱学数据鉴定化合物结构.结果 从发酵提取物中共分离得到10个化合物,分别鉴定为chetoseminudin B(1)、gonytolide C(2)、chaetone D(3)、1H-indole-3-carbaldehyde (4)、1H-吲哚-3-羧酸(5)、indole-3-methylethanoate (6)、3R,4R*-二羟基-3-甲基戊烷-2-酮(7)、大黄素(8)、3β,5α,9α-trihydroxy-(22E,24R)-ergosta-7,22-dien-6-one(9)、(3β,5α,6β,22E)-6-methoxyergosta-7,22-diene-3,5-diol (10).结论 化合物1～10均为首次从该菌种中分离得到.
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三叶青内生真菌Phomopsis sp.YK-7的化学成分研究
目的 研究三叶青Tetrastigma hemsleyanum内生真菌Phomopsissp.YK-7发酵产物中的化学成分.方法 采用色谱分离技术进行分离和纯化,并根据谱学数据鉴定化合物的结构.结果 从Phomopsis sp.YK-7的发酵产物中分离得到15个化合物,包括13个芳基苯并呋喃类化合物和2个甾体类化合物,分别鉴定为wittifuran X(1)、4-hydroxy-2-(4'-hydroxy-2'-methoxyphenyl)-6-methoxybenzofuran-3-carbaldehyde (2)、erypoegin J (3)、桑辛素S(4)、桑辛素T(5)、桑辛素C(6)、wiffifuran E(7)、iteafuranal A(8)、burttinol D(9)、7-methoxy-2-(4-methoxyphenyl)-3-methyl-5-(3-prenyl)-benzofuran (10)、桑辛素N (11)、桑辛素P(12)、桑辛素M(13)、过氧麦角甾醇(14)和25-hydroxy-ergosta-4,6,8(14),22-tetraen-3-one (15).结论 化合物1～9为首次从该属真菌中分离得到.
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南海红树林内生真菌Penicillium aurantiogriseum299次级代谢产物研究
目的 对南海红树林内生真菌黄灰青霉菌Penicillium aurantiogriseum 299的次级代谢产物进行研究.方法 采用色谱技术对Penicillium aurantiogriseum 299的次级代谢产物进行分离纯化,根据化合物的理化性质、波谱分析数据以及与文献谱图对照的方法确定化合物的结构.结果 从南海红树林内生真菌Penicillium aurantiogriseum 299的次级代谢产物中分离得到了4个化合物,分别鉴定为aurantiogrisidino1 a/b (1a/1b)、4-(2'-羟基-丁炔氧基)苯甲酸(2)、(S)-penipratynolene (3)、aurantiamine (4).结论 化合物1a/1b为新化合物,化合物2是首次从青霉菌属真菌中分离得到.
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怀山药内生真菌厚孢镰刀菌的次生代谢产物研究
目的 研究怀山药内生真菌厚孢镰刀菌Fusarium chlamydosporum的次生代谢产物.方法 利用硅胶、凝胶等色谱技术进行分离纯化,通过波谱技术分析鉴定化合物结构.结果 从厚孢镰刀菌的甲醇提取物中分离得到8个化合物,分别鉴定为过氧麦角甾醇(1)、麦角甾-4,22-二烯-3-酮(2)、邻苯二甲酸二丁酯(3)、邻苯二甲酸二异丁酯(4)、烟酸(5)、琥珀酸(6)、戊二酸(7)和Nb-乙酰基色胺(8).结论 所有化合物均为厚孢镰刀菌中首次分离得到.
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广藿香内生真菌索氏平脐蠕孢中1个新旋孢腔菌醌类化合物及其生物活性
目的 研究分离自广藿香内生真菌索氏平脐蠕孢Bipolaris sorokiniana A606的活性次级代谢产物的化学结构及其活性.方法 运用正相硅胶、C18反相硅胶、Sephadex LH-20凝胶和HPLC等色谱技术对菌株B.sorokiniana A606发酵液的醋酸乙酯萃取物进行分离纯化,并通过各种谱学分析方法进行结构鉴定;采用SRB染色法和滤纸片法分别测定化合物的细胞毒和抗菌活性.结果 从B.sorokiniana A606发酵液的醋酸乙酯萃取物中分离得到2个化合物,分别鉴定为(39*,4aS*,6aS*,12bS*)-3-(2-羟基-2-丙烷基)-6a,12b-二甲基-9-[(2R*,4R*)-2-(4-甲基-3-己酮基)]-1,2,3,4a,5,6-六氢吡喃并[3,2-a]氧杂蒽-8,11-二酮(1)和precochlioquinol D(2).结论 化合物1为新化合物,命名为11-羟基-12,13-去氢旋孢腔菌醌B.化合物2为首次从该属真菌中分离得到.其中化合物1具有细胞毒和抗菌活性.
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土茯苓内生芒果球座菌的次级代谢产物及其抗肿瘤活性研究
目的 研究土茯苓内生芒果球座菌Guignardia mangiferae的次级代谢产物及其抗肿瘤活性.方法 采用硅胶柱、反相硅胶柱、凝胶柱和制备薄层色谱等色谱技术进行分离纯化,通过现代波谱技术进行结构鉴定；以神经胶质瘤细胞SF-268、乳腺癌细胞MCF-7、大细胞肺癌细胞NCI-H460为供试细胞株,采用SRB法对化合物进行体外抗肿瘤活性研究.结果 从土茯苓内生芒果球座菌的100 L液体发酵提取物中分离得到12个化合物,经波谱数据分析鉴定其中10个化合物,分别为15-hydroxyl tricycloaltemarene 5b(1)、guignardiaene D(2)、guignardiaene C (3)、guignardone A(4)、guignardone B(5)、3-(4-甲苯氧基)-丙酸(6)、2.4-壬二醇(7)、麦角甾酮(8)、酪醇(9)、对羟基苯甲醛(10).杂合萜类化合物1～S对SF-268细胞具有选择性的抑制作用,化合物6、7对MCF-7细胞具有选择性的抑制作用.结论 化合物6～10均为首次从该属真菌中得到,其中化合物6、7为新的天然产物.
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蛇足石杉内生真菌Penicillium chrysogenum MT-12中2个新二苯醚类成分
目的 研究蛇足石杉内生真菌Penicillium chrysogenum MT-12经固体发酵培养后的代谢产物.方法 利用硅胶、Sephadex LH-20及半制备液相色谱等方法进行分离纯化,根据化合物的理化性质及IR、MS、NMR等光谱数据鉴定化合物的结构;利用体外模型进行抗炎、乙酰胆碱酯酶抑制活性筛选.结果 从P.chrysogenum MT-12固体发酵培养后的代谢产物中共分离鉴定8个二苯醚类化合物,分别为黄青霉内酯A(1)、黄青霉内酯B(2)、talaromyoneA(3)、isopenicillide (4)、penicillide (5)、hydroxypenicillide (6)、purpactinA(7)、黄青霉内酯C(8).结论 化合物1、2为新化合物,化合物3为首次从青霉属中分离得到,化合物4～8为首次从产黄青霉菌中分离得到;化合物1、2对脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7的NO产生有一定抑制活性,半数抑制浓度(IC50)值分别为(72.6±2.3)、(41.2±1.4) μmol/L,而所有化合物在100 μmol/L时对乙酰胆碱酯酶不显示抑制活性.
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铁皮石斛内生真菌的分离及其体外抑菌和抗肿瘤活性初步研究
目的 分离铁皮石斛Dendrobium officinale内生真菌,研究内生真菌的分布并初步探讨和筛选具有抑菌和抗肿瘤活性的特异菌株.方法 利用组织分离法和分子生物学方法分离、鉴定内生真菌;以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌作为受试对象,采用对峙法和管碟法分别对内生真菌及其发酵代谢产物的醋酸乙酯萃取相进行抑菌实验;采用MTT法对内生真菌代谢产物醋酸乙酯萃取相进行体外抗肿瘤活性检测.结果 从铁皮石斛中分离得到28株内生真菌,分子鉴定结果显示,分离的内生真菌归属于10个属,其中镰刀菌属为优势属.抑菌实验结果显示28株内生真菌中,有7株至少能对1种指示菌有抑菌作用,其代谢产物的醋酸乙酯萃取相对3种指示菌和HepG2细胞具有不同程度的抑制作用.结论 铁皮石斛内生真菌种群丰富,从中分离得到的内生真菌具有潜在的抑菌和抗肿瘤活性,为进一步开发抑菌、抗肿瘤候选药物奠定基础.
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利用稻瘟霉模型筛选粗疣合叶苔内生真菌中的活性菌株
目的 利用稻瘟霉模型快速筛选粗疣合叶苔内生真菌中具有生物活性的菌株,并对活性菌株T11进行鉴定.方法 首次对粗疣合叶苔内生真菌进行了分离,通过观察内生真菌醋酸乙酯提取物引起稻瘟霉分生孢子或菌丝形态生长异常或生长抑制的情况,初步确定具有生物活性的菌株,进一步进行体外抗真菌及抗肿瘤活性筛选,对活性好的T11菌株进行了分类鉴定.结果 粗疣合叶苔分离得到47株内生真菌,具有抗稻瘟霉活性的活性菌株40株,占总分离菌株的85.1%.其中T11号菌株可明显抑制真菌生长和肿瘤细胞增殖.结论 粗疣合叶苔内生真菌具有明显的抗真菌和细胞毒作用,是潜在的抗菌、抗肿瘤药物资源.
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产冬凌草甲素菌株筛选鉴定及其抗肿瘤活性研究
目的 对冬凌草内生真菌进行筛选鉴定,并研究其体外抗肿瘤活性,以期得到冬凌草甲素高产抗肿瘤活性菌株.方法 采用TLC法和HPLC法对前期从冬凌草中分离出的256株内生真菌进行筛选,HPLC-MS测定菌株发酵液中的冬凌草甲素.结合形态学特征、ITS序列对筛选出的菌株进行鉴定.MTT法测定筛选菌株的体外抗肿瘤活性.结果 从冬凌草中分离出的256株内生真菌经筛选,获得1株冬凌草甲素高产菌株M-J-5,鉴定为青霉属草酸青霉菌Penicillium oxalicum Currie et Thom,其对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞活性具有一定抑制作用.结论 从冬凌草内生真菌中筛选得到产冬凌草甲素且具抗肿瘤活性的菌株M-J-5.
关键词： 冬凌草甲素 内生真菌 抗肿瘤 草酸青霉菌 人乳腺癌细胞系MCF-7 -
40株银杏内生真菌抗菌活性比较及其活性成分研究
目的 比较银杏内生真菌的抗菌活性,并对其抗菌活性成分进行分析.方法 采用组织分离法从健康银杏叶、枝条、果实等组织中分离、纯化内生真菌;以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌、酿酒酵母、黑曲霉和根霉为抑菌指示菌,采用滤纸片和平板孔阱扩散法,对40株银杏内生真菌发酵液抗菌活性进行初筛和复筛;利用硅胶柱色谱、凝胶SephadexLH-20柱色谱、制备型HPLC、薄层色谱(TLC)和HPLC-MS等方法,对抗菌活性较高的草酸青霉菌Penicillium oxalicumYXY009菌株的抗菌成分进行分析.结果 40株银杏内生真菌中,18株为不产孢真菌;产孢真菌中,青霉属和曲霉属为优势菌属,分别占总菌数的17.5％和15.0％;YXY009菌株发酵液的抑菌活性明显高于其他菌株,对酿酒酵母和根霉抑菌圈直径分别达到(22.35±1.32)和(23.60±0.83) mm;从YXY009菌株发酵液中分离得到抑菌活性有效成分,初步鉴定为毛果杨苷.结论 首次从银杏内生真菌代谢产物中分离出具有广谱抗菌活性的化合物毛果杨苷.
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内生真菌链格孢菌醋酸乙酯提取物对金黄色葡萄球菌抑菌机制的研究
目的 研究分离自药用植物白毛蛇Humata tyermanni的内生真菌链格孢菌发酵产物醋酸乙酯提取物(B06e)对金黄色葡萄球菌细胞膜完整性和通透性的影响.方法 采用二倍稀释法测定B06e对金黄色葡萄球菌的小抑菌浓度(MIC);测定B06e作用前后金黄色葡萄球菌培养液电导率,206、280 nm处吸光度(A)值的变化并结合流式细胞术研究B06e作用前后细胞膜通透性的变化.利用扫描电子显微镜(SEM)及傅里叶红外变换光谱(FT-IR)研究B06e对细胞膜结构的影响.结果 B06e对金黄色葡萄球菌的MIC为50 μg/mL.3×MIC处理组的电导率是对照组的1.06倍;经B06e处理后,反应液的A260和A280值均显著高于对照组;3×MIC处理组的β-半乳糖苷酶活性是对照组的9.43倍;流式细胞仪分析表明3×MIC处理组被碘化丙啶(PI)着染的阳性细胞比例是对照组的47.63倍;SEM和FT-IR分析结果显示,B06e处理后,菌体细胞结构发生了损伤.结论 B06e能增强金黄色葡萄球菌细胞膜的通透性,破坏细胞膜的完整性,造成外源物质的大量流入和细胞质的大量外泄,从而使得菌体细胞内渗透压和代谢调控紊乱,终导致细菌丧失生长繁殖的能力.
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见血封喉内生真菌的分离鉴定及抑菌活性研究
目的 分离和鉴定见血封喉Antiaristoxicaria根韧皮部中的内生真菌,并检测其抑菌活性.方法 以金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌methicillin-resistant Staphylococcus gtureus (MRSA)和白色念珠菌Candida albicans作为指示菌,采用杯碟法对内生真菌发酵上清液进行抑菌试验.结果 从见血封喉根的韧皮部中分离出6株内生真菌,经形态鉴定分属于聚端孢霉属(Trichothecium LK.ex Fr.)、枝顶孢霉属(Acremonium LK.ex Fr.)和丝核菌属(Rhizoctonia DC.ex Fr.).其中内生真菌J6的发酵上清液对MRSA有抑菌活性,抑菌圈直径为18 mm.结论 首次对见血封喉内生真菌进行了研究,内生真菌J6对MRSA有明显的抑菌活性,其抑菌活性成分值得进一步研究.
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皱边石杉内生真菌资源遗传多样性的ISSR分析
目的 采用ISSR标记技术从分子水平探讨皱边石杉内生真菌资源的遗传多样性,建立皱边石杉内生真菌资源遗传分化指纹图谱,为筛选可产石杉碱甲的目标菌株提供快捷的判别依据.方法 以从皱边石杉中分离的100株内生真菌为材料,建立其ISSR优化反应体系并分析其遗传多样性；TLC、HPLC检测发酵产物.结果 优化筛选的10条ISSR引物对皱边石杉内生真菌进行遗传多样性分析,共扩增出3 975条清晰条带,多态性条带占100％.遗传相似系数为0.59～0.96,在0.64水平,皱边石杉内生真菌可分为11类；在0.67水平,第Ⅰ类又可分为5个亚类.采用引物UBC868对13号菌株及皱边石杉基因组DNA扩增,在500、200 bp均具有清晰的扩增条带,发酵产物经TLC和HPLC检测,发现13号菌株与宿主植物皱边石杉同样可产生石杉碱甲.结论 皱边石杉内生真菌资源遗传多样性高,遗传距离较远,遗传基础较宽,与13号菌株同属一类的内生真菌可作为石杉碱甲生产的潜力菌株进行重点筛选和诱变.
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刺五加亚精胺合成酶基因的克隆及内生真菌对其表达的影响
目的 克隆刺五加亚精胺合成酶(spermidine synthase,SPDS)基因,并分析内生真菌对其表达的影响.方法 采用cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术克隆刺五加SPDS基因全长cDNA序列.运用生物信息学方法对该基因进行分析.RT-PCR法检测内生真菌菌株P116-1a、P116-1b、P109-4和P312-1对SPDS基因表达的影响.结果 刺五加SPDS基因的cDNA全长为1 541 bp,开放阅读框长1 002 bp,编码333个氨基酸的蛋白,包含SPDS家族的基本结构和标志性序列.RT-PCR结果显示,内生真菌可显著提高刺五加SPDS基因的表达量(P＜0.05),大表达量出现在菌株P116-1b回接90 d时,是对照的2.06倍.结论 首次克隆了刺五加SPDS基因的cDNA全长序列,并证实内生真菌可显著提高刺五加SPDS基因的表达,为阐明内生真菌提高刺五加三萜皂苷量的机制及刺五加的抗逆性改良奠定了基础.
关键词： 刺五加 亚精胺合成酶(SPDS) 基因克隆 表达分析 内生真菌 -
大戟内生真菌对其生长和两种萜类物质量的影响
目的 探讨内生真菌促进大戟药材生产的方法.方法 接种大戟内生真菌到大戟组培苗,将建立共生后的组培苗移栽室外.生长1年后,检测生物量和萜类的量.结果 内生真菌E4(Fusarium sp.Ⅰ)和E5(Fusarium sp.Ⅱ)均促进了宿主植物生长,使根的鲜质量分别提高了49.45%和59.74%;并使大戟的折干率提高了2.99%和6.48%;同时提高了大戟组培期和室外生长1年后二萜物质异大戟素和三萜物质大戟醇的量.室外生长1年后,E4处理组.异大戟素和大戟醇分别比对照提高了92.79%和40%;E5处理组,异大戟素和大戟醇分别比对照提高了105.32%和241.38%.结论 内生真菌E4和E5对大戟有促生长作用,并能同时促进其萜类的合成.
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杜仲叶和果实中内生真菌的分离及抑菌活性
目的 从杜仲Eucommia ulmoides叶和果实中分离具有抑菌作用的内生真菌.方法 采用平板培养法从杜仲叶片和果实中分离内生真菌,通过对峙法和生长速率法考察这些内生真菌的抑菌活性,并通过HPLC法考察其具有代谢产生杜仲有效活性成分的能力.对具有良好抑菌效果和能够代谢杜仲活性成分的内生真菌进行ITS序列测定,鉴定其归属.结果 从健康叶片和果实中分离到52株内生真菌,其中2个菌株的提取液中含有绿原酸,11个菌株至少对4种病原菌具有抑制作用,其中29号菌株(链格孢属Alternaria sp.)对芽孢杆菌Fusarium graminearum的抑制效果好,其抑制率高达82.6％.通过与GenBank数据比对,这些内生真菌分别属于链格孢属Alternaria、黑孢属Niqrospora和座囊菌纲(Dothideomycetes).结论 从杜仲叶和果实中分离到11株具有抑菌作用的内生真菌,这些具有抑菌作用的内生真菌可用于生物制药和农业产业.
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一株产长春新碱内生真菌的初步研究
目的通过长春花叶内生真菌的分离,筛选产生长春新碱的菌株.方法从长春花叶中分离内生真菌,对其发酵提取物进行TLC和HPLC分析.结果从长春花叶中分离筛选到一株无孢菌群菌株:97CY3.它能产生长春新碱,HPLC测定其长春新碱含量约为0.205 μg/L.结论长春花内生真菌中,有的菌株可产生与宿主所产相同的抗癌物质长春新碱.
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北沙参内生真菌的抑菌活性与分类研究
目的 研究北沙参内生真菌的抗菌活性,鉴定活性真菌的分类地位.方法 采用植物组织分离法从北沙参基原植物珊瑚菜Glehnia littoralis中分离内生真菌.以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色假丝酵母为指示菌株,采用牛津杯法研究北沙参内生真菌的抑菌活性,对具有抑菌活性的内生真菌进行分子鉴定.结果 有4株内生真菌对大肠杆菌具有抑制作用,内生真菌发酵浓缩液抑菌圈直径与4 U/mL硫酸庆大霉素抑菌圈直径的比值(d/D)大可达1.07;有15株内生真菌对金黄色葡萄球菌具有抑制作用,d/D值大为0.65;有3株内生真菌对白色假丝酵母具有抑制作用,内生真菌发酵浓缩液与0.2 mg/mL氟康唑的d/D值大可达1.27.19株具有抑菌活性的内生真菌归于4个目,5个科,7个属,8个种.结论 北沙参植物中存在多种抑菌活性的内生真菌,对于北沙参内生真菌资源的开发及药材道地性的评价具有一定的指导意义.
