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中国西南7种石斛植物活性内生真菌及其遗传关系
目的:对中国西南地区7种石斛植物的内生真菌进行抗菌活性筛选,考察活性菌株之间的遗传关系.方法:采用组织块法分离真菌,琼脂扩散法进行抑菌活性筛选,通过rDNA的ITS序列为基础鉴定活性真菌,用邻接法(NJ)和大简约法(MP)进行遗传关系考察.结果:从7种石斛属植物分离到98株真菌,它们对Escherichia coli,Bacillus subtilis,Staphylococcus aureus,Candida albicans,Cryptococcus neoformans和Aspergillus fumigatus的抑制率分别是1.02％,102％,184％,1.02％,1.02％,10.2％,其中DL-3,DL-18,DL-21,DM-2,DG-10和DN-1显示出了对B.subtilis,S.aureus和A.fumigatus较强的生长抑制性.24株活性真菌隶属于7个目,11个属,14个种,NJ和MP系统树阐明活性菌之间的亲缘关系.结论:本研究对于考察珍惜濒危石斛属植物的内生真菌的生物活性以及它们之间的遗传关系具有重要的生态价值,为石斛根茎部活性真菌的研究提供参考.
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人参黑斑病菌生防内生真菌的分离筛选、鉴定及抑菌特性
为获取优良人参黑斑病菌生防内生真菌,该文采用平板对峙培养法,对健康人参叶片分离的1株优势内生真菌进行了筛选评价,并结合形态学观察及ITS序列分析对筛选出的生防内生真菌进行了鉴定.结果表明,对峙培养发现这株菌株对人参黑斑病菌具有较好的抑制作用,抑菌率为(60.21±0.12)％,标记为FS-01菌株;FS-01菌株与人参黑斑病菌对峙培养的菌丝交界处,人参黑斑病菌菌丝出现了溶解、断裂和缠绕.未灭菌的FS-01菌株发酵液对人参黑斑病菌的抑菌率为(41.62±0.17)％;灭菌的FS-01菌株发酵液对人参黑斑病菌的抑菌率为(13.94±0.21)％.经鉴定,FS-01菌株为毛壳菌属Chaetomium中的球毛壳菌C.globosum.
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贵州白苞蒿抗肿瘤、抗氧化内生真菌的筛选与鉴定
白苞蒿Artemisia lactiflora是一种重要的药用植物.对已分离获得的54株白苞蒿内生真菌粗提物分别采用MTT法和DPPH法进行体外抗肿瘤和抗氧化活性筛选,并采用分子生物学方法对筛选出的活性内生真菌进行鉴定.结果显示,共计10株(18.5％)白苞蒿内生真菌粗提物对入骨髓白血病细胞系(HL-60)、人乳腺癌细胞系(MCF-7)和人前列腺癌细胞系(PC-3)生长的抑制活性较好,其中以链格孢属GYBH47菌株粗提物的抗肿瘤活性佳,对3种肿瘤细胞株的生长均有抑制作用;共计2株(3.7％)白苞蒿内生真菌粗提物的抗氧化活性较好,其中,拟茎点霉属GYBH42菌株粗提物同时具有抗氧化活性和细胞毒活性.表明贵州白苞蒿内生真菌是寻找有价值的生物活性成分的潜在资源,其生物活性成分值得进一步研究和开发.
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多产区川芎内生真菌菌群组成的PCR-DGGE分析
研究采用PCR-DGGE和DNA测序技术,探究了四川5个不同产区间川芎内生真菌群的差异性.结果表明川芎内生真菌群落结构存在不同个体、不同产区间的差异,同产区不同个体川芎内生真菌的相似程度较高,不同产区间的相似程度较低；道地产区都江堰市石羊镇川芎的内生真菌群落结构较其他4个产区丰富,同时与其他产区相似度均很低,存在其他产区未见的特有种.综合分析认为在四川5产区中,都江堰市石羊镇的川芎内生真菌种群为多样且群落结构相对固定,这可能是川芎道地性形成的重要原因.
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濒危药用植物八角莲菌根的显微结构观察
内生真菌在其宿主植物生长过程中扮演着重要的角色.为了探讨濒危植物八角莲菌根的结构及内生真菌的分布情况,对其野生植株菌根进行了显微结构的观察.结果表明,野生八角莲植株与内生真菌关系密切,其根中定殖着2种不同形态的真菌;真菌主要分布于表皮层和皮层,其中皮层中分布着膨大的菌丝结构.研究结果为八角莲属植物菌根结构及其与宿主相互作用的系统研究提供了参考.
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镰刀菌诱导结香对白木香叶内生真菌分布和群落构成的影响研究
为了研究沉香形成前后白木香叶组织中内生真菌的分布和群落构成,采用石蜡永久制片法观察白木香叶组织显微结构,细胞化学法确定内生真菌的分布.通过改良的CTAB法对白木香进行总DNA提取,利用真核生物通用引物同时对植物和内生真菌rDNA ITS序列进行PCR扩增,构建内生真菌rDNA ITS文库,RFLP分析和序列测定,用PUAP软件进行系统发育分析,构建大简约树.结果表明:镰刀菌诱导结香前后,白木香内生真菌菌丝主要分布于海绵组织和韧皮部,结香后韧皮部内生真菌菌丝相对丰度明显增大;茎点霉是未结香白木香叶内生真菌优势种群,刺盘孢菌是已结香白木香叶内生真菌优势种群;刺盘孢菌是未结香和已结香白木香唯一共有内生真菌,且丰度差异较大.不依赖分离培养的分子生物学方法可快速直观地用于植物组织内生真菌的鉴定.白木香叶内生真菌具有一定的遗传多样性,沉香形成前后白木香内生真菌群落构成差异较大.
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荒漠植物牛心朴子内生真菌的分离与鉴定
目的:研究荒漠植物牛心朴子内生真菌类群在不同器官中分布的多样性及其与生态环境的关系,并初步筛选牛心朴子具有潜在生物活性的内生真菌.方法:采用PDA培养基,分别对陕西、宁夏野生牛心朴子内生真菌进行分离、纯化；根据菌落的形态特征并结合真菌的ITS序列进行菌株鉴定；采用稻瘟酶模型,初步筛选活性菌株..结果:从牛心朴子中共分离得到内生真菌94株,鉴定为6目9科13属9种,其中宁夏产地47株,根5株,茎14株,叶28株,鉴定为4目5科9属8种；陕西产地47株,其中根16株,茎18株,叶13株,鉴定为4目6科8属5种；18株真菌代谢产物能完全抑制稻瘟霉孢子萌发,其中N4和S17菌株的发酵液病原菌菌丝生长的抑制作用均比较强.结论:荒漠植物生心朴子内生真菌具有多样性,不同地理环境和组织类型对内生真菌的数量和种群组成存在显著差异；宁夏牛心朴子菌株分布于叶中较多,陕西牛心朴子菌株分布于茎、叶中较多；牛心朴子内生真菌具有显著的抗稻瘟菌活性.
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三裂叶海棠内生真菌的分离,鉴定及活性测定
目的:分离鉴定三裂叶海棠Malus sieboldii中内生真菌,并检验其抗病原真菌,抗肿瘤,抑制蛋白酶活性.方法:传统形态学和现代分子生物学方法鉴定菌种,采用杯碟法,MTT法,和BRpNA法测试真菌活性.结果:内生真菌按形态学归为22类,其中Non-sporulating,Alternaria,Colletotrichum,Aspergillus,Fusarium,Gliocladium,Cunninghamella是主要群落.通过对ITS rDNA测序,确定了有活性Non-sporulating的种属.活性测试结果显示30的菌株对至少1种植物病原菌有活性,菌株3,4分别具有细胞毒和蛋白酶抑制活性.结论:首次对三裂叶海棠的内生真菌进行了系统的分离、鉴定和活性筛选工作,证明三裂叶海棠是一种寄生活性内生真菌的潜在资源.
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肉苁蓉内生真菌多样性研究
目的:研究肉苁蓉内生真菌菌群的多样性.方法:分别于春、秋季在宁夏和内蒙古两地采集健康的肉苁蓉进行内生真菌的分离,对分离的内生真菌采用玻片法和胶带粘贴法进行分类鉴定.结果与结论:共分离得到618株内生真菌菌株,其中453株为产孢菌株,鉴定为22个属,占分离菌株总数的73.30%,以镰孢属Fusarium(25.89%)和枝顶孢霉属Ammonium(16.99%)为优势种群.肉苁蓉内生真菌在数量和种类上存在极其丰富的多样性,同时在部位、地区以及季节存在一定的差异性.
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新疆药用阿魏属植物内生真菌的生态分布与多样性
为了探索新疆药用阿魏属植物内生真菌的生态分布与多样性,采用微生物学研究方法与技术,从多伞阿魏、阜康阿魏、大果阿魏、新疆阿魏、里海阿魏及羊食阿魏的根、叶及茎中分离内生真菌;运用形态和分子生物学方法对其进行了鉴定;并使用Shannon-Wiener多样性指数和Sorenson系数,分析6种药用阿魏内生真菌的组成、分布、多样性及相似性.分离得到内生真菌337株,分属于38个属,其中,链格孢属、短梗霉属及镰刀菌属为优势菌群;在新疆阿魏中分离得到的内生真菌多,阜康阿魏根中分离出来的内生真菌Shannon-Wiener多样性指数(H’)大,达到1.85;多伞阿魏叶和新疆阿魏叶的内生真菌菌群相似性高,相似性系数达到0.75.结果显示,6种新疆药用阿魏植物中皆存在内生真菌;阿魏不同部位内生真菌的分布、多样性及相似性等均存在差异,具有一定的物种及组织专一性;为阿魏属植物内生真菌的深入研究奠定了理论基础.
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檀香内生真菌多样性及其抗菌与促生特性的研究
为了揭示檀香内生真菌分布特点及其在抗菌物质开发和檀香快速栽培研究中的潜在应用,该研究对檀香内生真菌的生物多样性及其抗菌与促生特性进行了研究.檀香内生真菌分离及类群分析结果显示:分离到的325株檀香内生真菌(其中来自根86株,茎105株,叶134株)隶属于16个属;不同部位内生真菌的分离率与定殖率呈现相同的变化规律,从高到低依次为叶、茎、根;根部内生真菌的多样性指数明显高于茎和叶,不同部位优势内生真菌类群存在较大的差异:根部为镰刀菌属(Fusarium,占50.00％)和链格孢属(Alternaria,占10.47％),茎部为链格孢属(占58.11％)和枝顶孢霉属(Acremonium,占20.00％),而叶部是盘长孢属(Pantoea),占74.63％.40株代表性檀香内生真菌菌株发酵液的抗菌活性分析结果显示:90％内生真菌至少对其中1种测试菌表现出抑制活性,其对大肠杆菌、产气肠杆菌、伤寒沙门菌、痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌具有抑制活性的菌株分别占总数的45.0％,30％,47.5％,55％,72.5％,62.5％.对它们的促生特性进行分析,筛选到5株具溶磷活性的内生真菌,8株可分泌IAA的内生真菌,以及4株可产铁载体的内生真菌,其中内生真菌Monilia sp.TXRF45既具溶磷活性、又能产生IAA和铁载体.以上研究结果表明檀香内生真菌具有丰富的物种多样性且其分布具有一定的组织特异性,部分菌株具有较好的抗菌和促生活性,它们在抗菌活性物质的开发和快速栽培研究中具有潜在的应用前景.
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玄参内生真菌分离、鉴定及系统发育分析
分别从武隆产区玄参根、主茎、侧枝、叶片和重庆市区栽培玄参侧枝中分离内生真菌,根据形态学特征和26SrDNAD1/D2测序结果对其进行鉴定,并进行了种群多样性分析,对优势属炭疽菌属内生真菌构建了系统发育树.试验结果显示:真菌种群多样性指数,武隆玄参叶片>主茎=侧枝>根,重庆玄参侧枝>武隆玄参侧枝.共计分离得到内生真菌58株,绝大部分是各种植物病原菌,其优势属为刺盘孢属Colletotrichum,其中绝大多数是C.gloeosporioides和C.boninense.叶片和子芽可能是内生菌侵染的主要途径;内生菌和病原菌可能相互转化,受环境、基因型等多种因素影响.
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金钱松内生真菌JJ18灭螺活性与菌株鉴定
目的 研究金钱松内生真菌JJ18发酵液醇提物杀螺活性和对湖北钉螺糖原和总蛋白的生理生化影响,并进行菌株鉴定.方法 按照世界卫生组织(WHO)的杀螺剂浸泡试验法观察不同浓度下JJ18发酵液提取物的灭螺效果,采用蒽酮显色法测定处理后钉螺软体的糖原含量变化,凯氏定氮法测定其蛋白质含量.采用核糖体rDNA ITS区序列分析进行鉴定,并进行系统进化分析.结果 JJ18菌株发酵液醇提物灭螺效果显著,试验浓度400 mg/L作用3 d后灭螺率达到100%,与1 mg/L氯硝柳胺溶液处理2～3 d的灭螺效果相当;经统计分析:72 h灭螺的LC50和LC90浓度分别为145.0和311.9 mg/L.JJ18发酵液醇提物处理后钉螺软体的糖原含量显著下降,减少幅度从10.42%～28.03%;蛋白质含量的变化不明显.鉴定该菌为黑曲霉.结论 金钱松内生真菌JJ18代谢产物的杀螺活性有开发应用的可能性,显示了植物内生真菌是筛选新型灭螺药物的重要资源.
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具有灭螺活性的金钱松内生真菌JJ18发酵条件优化
目的 通过改进发酵工艺提高金钱松内生真菌JJ18的杀螺活性.方法 采用单因素和正交试验对发酵培养基及发酵条件进行优化.按照 WHO 的杀螺剂浸泡试验法,以杀螺率为主要衡量指标,同时考察发酵液的生物量.对金钱松内生真菌 JJ18 发酵条件进行优化.结果 以马铃薯175g/L为氮源,初始 pH 值6.0,葡萄糖和蔗糖15 g/L为碳源,磷酸二氢钾0.5mmol/L 为代谢调节因子,接种量 2%,250 ml三角瓶装液量50ml,温度30℃,120 r/min,发酵7 d,杀螺活性大提高16.7%.生物量与杀螺率存在一定的相关性.结论 通过改变发酵工艺可以提高杀螺活性,金钱松内生真菌 JJ18 具有开发应用的潜力.
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1株高效低毒具有杀钉螺活性的内生真菌
江苏大学生药学研究小组从金钱松(Pseudolarix amabilis)(采于江苏大学校内)的叶(JY)、茎(JJ)中分离出108株内生真菌,从中筛选出18株具有抗真菌、抗细菌活性内生真菌,并按照WHO的浸泡法进行了灭螺试验研究.
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檀香形成部位内生真菌多样性研究
目的旨在考查檀香形成部位内生真菌的定植情况，并探讨檀香结香部位木材和正常生长的健康木材之间内生真菌的差异，揭示真菌诱导檀香结香的原因。
方法采用组织块分离法对檀香结香部位木材和正常生长的健康木材进行内生真菌的分离培养和统计分析，并采用形态学和分子生物学两种方法对分离得到的真菌进行鉴定。
结果檀香结香部位木材内生真菌定植率较高（92.5%），而正常木材内生真菌定植率较低（27.5%）。分离率也是檀香结香部位木材较高（0.9），健康正常木材较低（0.25）。檀香正常生长的健康白木材分离的内生真菌只有2种；结香部位木材分离得到13种，隶属于4个属，分别为拟茎点霉属、镰孢属、曲霉属和 Phaeoacremonium。在檀香结香部位分离的内生真菌中，优势菌属是镰孢属和拟茎点霉属；在檀香健康木材分离的优势菌属是拟茎点霉属。
结论檀香结香部位木材内生真菌表现出了较高的种属多样性。檀香局部结香可能是由外界损伤和真菌的侵染诱导而形成的。 -
螃蟹甲内生真菌Chaetosphaeronema sp.的化学成分研究
目的研究一株来源于藏药螃蟹甲内生真菌 PHY-24的化学成分。
方法采用麦麸培养基，对内生真菌 PHY-24进行放大培养，通过硅胶柱色谱、MCI 柱色谱、ODS 柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、高效液相色谱等对其发酵液中的化学成分进行分离纯化，利用 NMR、MS 等波谱方法进行化学成分的结构鉴定，并测定这些成分抗 HIV-1整合酶链转移反应活性。
结果从内生真菌 PHY-24发酵液的乙酸乙酯提取部分分离并鉴定了4个化合物，分别是：integrastatin B（1）、2-乙酰基-3,5-二羟基-苯乙酸（2）、curvulin （3）、O-methylcurvulinic acid（4）。其中化合物（1）和（2）具有抗 HIV-1整合酶链转移反应活性，其 IC50分别为6.22和75.1μmol/L。
结论4个化合物均为从此属真菌中首次分得，其中化合物（1）、（2）具有抗 HIV-1整合酶链转移反应活性。化合物（2）的活性为首次报道。 -
五种药用石斛内生真菌抑制HIV-1整合酶活性研究
目的 评价5种药用石斛内生真菌发酵产物抑制HIV-1整合酶的活性.方法 将分离自石斛的202株内生真菌提取物共404个采用高通量ELISA法评价其抑制HIV-l整合酶活性；对抑制活性大于100％的样品进行量效关系考察并进行体外抑制肿瘤细胞活性筛选.结果 筛选得到19个对HIV-l整合酶抑制活性大于80％的样品,其中样品5119F、5297F、5097F、5140J和5211F的抑制率分别达到117.96％、113.53％、108.62％、103.74％和109.02％,其对应的IC50值分别为0.02024、0.003125、0.00862、0.01007 和 0.01192 mg/ml.结论石斛属药用植物内生真菌是一个潜在的、丰富的用于筛选HIV-1整合酶抑制剂的资源库,值得进一步研究和开发.
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植物内生菌抗病毒活性成分的研究进展
自从1993年首次从短叶红豆杉的韧皮部分分离到一株产紫杉醇的内生真菌后,研究者就开始不断地从内生菌中分离出各种活性代谢产物[1],这其中就包括抗病毒活性代谢产物.乙型肝炎病毒、甲型H1N1和H5N1型高致病性禽流感病毒、人类免疫缺陷病毒( HIV)和严重急性呼吸综合征病毒( SARS-CoV)等引起的病毒性传染病,对人类的健康产生巨大的影响.抗病毒药物已成为全世界新药研发的一个重要课题[2].植物内生菌的次生代谢产物是可以重复利用的资源,可以通过菌种诱变、培养条件改变以及代谢调控等手段进行目标产物的优化,因而在药物研发中发挥了巨大的作用.本文着重论述了国内外新近发现的抗病毒化合物,并按照化学结构官能团进行了如下分类.
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角果木内生青霉菌FJ-1化学成分研究
采用硅胶、葡聚糖凝胶柱色谱等方法对角果木内生真菌F J-1的化学成分进行分离,从中分离得到了2个化合物.通过化合物的理化性质和波谱数据鉴定其结构分别为7-hydroxydeoxytalaroflavone (1)和deoxytalaroflavone (2),其中化合物1为新化合物.通过滤纸片扩散法测定其抗菌活性,化合物1、2对金葡菌和耐甲氧西林金葡菌显示有弱抑制活性.
