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基于ITS序列分析对紫花地丁的分子鉴别
目的:通过研究比较紫花地丁与其易混中药材ITS序列的差异和规律,建立紫花地丁与其易混药材之间的分子鉴别方法.方法:分别从紫花地丁和易混品中提取总DNA,用ITS序列通用引物扩增,扩增产物双向测序.结果:紫花地丁与其他易混品在ITS1和ITS2区段存在特异鉴别位点共8个.结论:根据ITS序列特征,能有效区分紫花地丁和其他易混中药材.ITS序列是紫花地丁鉴定的有效的分子标记.
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中国西南7种石斛植物活性内生真菌及其遗传关系
目的:对中国西南地区7种石斛植物的内生真菌进行抗菌活性筛选,考察活性菌株之间的遗传关系.方法:采用组织块法分离真菌,琼脂扩散法进行抑菌活性筛选,通过rDNA的ITS序列为基础鉴定活性真菌,用邻接法(NJ)和大简约法(MP)进行遗传关系考察.结果:从7种石斛属植物分离到98株真菌,它们对Escherichia coli,Bacillus subtilis,Staphylococcus aureus,Candida albicans,Cryptococcus neoformans和Aspergillus fumigatus的抑制率分别是1.02％,102％,184％,1.02％,1.02％,10.2％,其中DL-3,DL-18,DL-21,DM-2,DG-10和DN-1显示出了对B.subtilis,S.aureus和A.fumigatus较强的生长抑制性.24株活性真菌隶属于7个目,11个属,14个种,NJ和MP系统树阐明活性菌之间的亲缘关系.结论:本研究对于考察珍惜濒危石斛属植物的内生真菌的生物活性以及它们之间的遗传关系具有重要的生态价值,为石斛根茎部活性真菌的研究提供参考.
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真菌诱导白木香产生沉香的野外实验与分析
目的 采用野外小规模实验和室内分析相结合的方法验证3株真菌YNAS04、YNAS06和YNAS08诱导白木香产生沉香的可行性.方法 采用真菌诱导法诱导白木香产生沉香,利用气相-质谱联用技术(GC-MS)对诱导结香材料挥发油成分中的化合物进行检测,通过比对诱导材料高频菌与原接入菌的形态及核糖体基因内部转录间隔区序列(internal transcribed spacer,ITS)一致性来验证接入菌的有效性.结果 3株真菌定植于白木香6个月,YNAS04、YNAS06和YNAS08诱导产生材料的重量分别为(1.786±0.473),(2.964±0.492)和(3.615±0.591)g,高于空白对照(1.325±0.407)g和阴性对照(1.462±0.417)g.GC-MS检测到3株活性真菌诱导材料含有代表沉香品质的主要化学成分倍半萜类化合物和色原酮类似物.菌种验证结果表明,3株活性真菌在诱导材料中为优势菌,分别占分离菌种的90.0％,97.5％和91.25％.结论 利用3株活性真菌诱导白木香产生沉香可以应用于实际生产,是可持续、高效生产沉香的良好方法.
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中药白芷的分子遗传及其原植物分析
目的探讨中药白芷各来源的亲缘关系,明确中药白芷的原植物问题.方法用随机扩增多态DNA(RAPD)方法对中药白芷的4种商品类型祁白芷、禹白芷、杭白芷、川白芷和兴安白芷[Angelica dahurica(Fisch.ex Hoffm.)Benth.et Hook.f.ex Franch.etSay.]、台湾白芷(A. formosana de Boiss)、雾灵当归(A.porphyrocaulis Nakai et Kitagawa)及黑水当归(A.amurensis Schisch)进行分析,在此基础上,对其ITS区作了序列分析.结果 RAPD分析共扩出206条带,其中多态性条带188条,占88.3%,通过计算遗传距离得到严格一致树.各样品扩增所得ITS1序列为439bp,ITS2序列为410bp,进行排序和同源性比较,4种商品白芷的序列与台湾白芷是完全相同的.对台湾白芷、兴安白芷、雾灵当归和黑水当归的ITS 1,ITS 2与ITS 1+ITS 2分别进行大简约树和邻接树的计算,6组数据得到2种树型.结论4种商品类型来源于台湾白芷,建议定名为Angelica fornosana de Boiss cv.officinarum cv.nov..雾灵当归、兴安白芷和台湾白芷应作为互相独立的种来对待.
关键词： 随机扩增多态DNA法 ITS序列分析 兴安白芷 台湾白芷 雾灵当归 -
药品中水蛭来源鉴定
《中国药典》2015年版第一部,中药材水蛭来源有三个水蛭科动物蚂蝗(WhitmaniapigraWhitman,宽体金钱蛭)、水蛭(HirudonipponicaWhitman,日本医蛭)或者柳叶蚂蝗(Whitmaniaacranulata,尖细金钱蛭).利用分子生物学,对药品及投料药材总DNA提取,PCR扩增,分析比较其ITS基因片段,通过生物软件比对,鉴定水蛭来源.
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基于ITS序列鉴定三叶木通与白木通
目的 应用ITS条形码鉴定三叶木通与白木通中药材.方法 对三叶木通与白木通的8份材料的核糖体DNA ITS区序列进行测定与分析,同时利用MEGA v5.1软件分析遗传距离并构建NJ树.结果 ①参试的8份材料的ITS区序列全长均为653 bp,整个ITS序列区共有8个碱基位点(1.23％)发生了变异,其中在第56位碱基上,三叶木通为“G”,白木通为“A”,该位点可作为三叶木通与白木通鉴别的关键位点;②三叶木通和白木通的亲缘关系很近,但仍可以根据ITS序列进行聚类分析加以鉴别.结论 ITS序列可对三叶木通与白木通中药材作出鉴别.
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PTP1B抑制活性真菌F956的鉴定和代谢产物研究
目的 研究PTP1B抑制活性真菌菌株F956及其代谢产物.方法 通过形态观察及ITS序列系统发育分析鉴定活性菌株F956;对其发酵产物进行分离纯化获得单体化合物并通过综合波谱解析确定代谢产物的化学结构.对得到的化合物进行分子对接及PTP1B抑制活性评价.结果 F956鉴定为Mucor fragilis(易脆毛霉);从其代谢产物中得到2个具有PTP1B抑制活性的化合物F956-5和F956-6,其中F956-5与化合物JBIR-12相同,F956-6为JBIR-12的13位羟基甲基化衍生物,分子对接结果显示F956-6可占据PTP1B的活性位点;其对PTP1B的IC50分别为7.12和13.92μg/mL.结论 化合物F956-5(JBIR-12)和F956-6由易脆毛霉产生及其对PTP1B的抑制活性均为首次报道.
