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螃蟹甲大孔吸附树脂50％乙醇洗脱物对大鼠CCl4肝损伤的保护作用
目的:探讨螃蟹甲中大孔吸附树脂50％乙醇洗脱物对四氢化碳(CC14)致急性肝损伤的保护作用及其可能机制.方法:60只Wistar大鼠随机分为正常组,模型组,联苯双酯组(联苯双酯滴丸100 mg·kg-1),螃蟹甲大孔吸附树脂50％乙醇洗脱物(EPY-50)高、中、低剂量组(400,200,50 mg·kg-1),连续ig给药4d,正常组和模型组均ig给予纯化水,第3天给药1h后,ip15％CC14橄榄油,正常组ip橄榄油,染毒2,22 h后再次给药,末次给药1h后,眼眶静脉丛采血,测血清中丙氨酸转氨酶(ALT),天冬氨酸转氨酶(AST),丙二醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD)的水平,处死大鼠剖取肝脏,测肝指数及肝组织中MDA,SOD,谷胱甘肽还原酶(GSH)含量,并做肝脏组织病理学检查.结果:与正常组比较,模型组大鼠血清中AST,ALT水平显著增加(P＜0.01),肝组织匀浆液中的MDA含量明显升高(P＜0.05),SOD,GSH含量均明显降低(P＜0.05),肝脏指数显著增加(P＜0.01),表明CCl4造模成功.与模型组比较,EPY-50高、中剂量组能显著降低CCl4致急性肝损伤大鼠血清中AST,ALT水平(P ＜0.05,P＜0.01),并显著减少肝组织中MDA含量,提高SOD,GSH的含量,降低肝指数(P ＜0.05,P＜0.01),改善肝组织病理状态.结论:EPY-50对大鼠CCl4致急性肝损伤有保护作用,其作用机制可能与其抗氧化活性有关.
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糙苏素的抗肿瘤活性研究
目的:探讨藏药螃蟹甲中环烯醚萜类成分糙苏素(phlomiol)的抗肿瘤作用.方法:采用MTT法检测糙苏素对体外培养的2种人肿瘤细胞增殖的抑制作用;体内试验采用小鼠实体瘤S180、肝癌H22细胞株接种小鼠,连续给药14 d,计算抑瘤率.采用MTT比色法检测糙苏素对S180荷瘤小鼠NK细胞杀伤活性的影响和对S180荷瘤小鼠T淋巴细胞增殖反应的影响.结果:糙苏素在50～150 mg·L-1对2种肿瘤细胞增殖均有抑制作用,且呈剂量依赖关系(r=0.989,P<0.05);体内试验结果显示小鼠分别灌胃给予2.5,5,10 mg·kg-13个剂量的糙苏素,对接种的实体瘤S180、肝癌H22细胞株的抑瘤率分别为28.5%～65.0%.35.0%～74.5%.同时,糙苏素可显著提高S180荷瘤小鼠淋巴细胞增殖活性(P<0.05),显著增加S180荷瘤小鼠NK细胞的杀伤能力(P<0.05).结论:糙苏素对体外培养的人肿瘤细胞和接种的小鼠肿瘤具有明显抑制作用,能够增强淋巴细胞增殖功能和NK细胞的杀伤能力,具有抗肿瘤和免疫调节功能.
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HPLC测定藏药螃蟹甲中5个环烯醚萜苷的含量
目的:建立RP-HPLC同时测定藏药螃蟹甲中5种环烯醚萜苷的含量.方法:色谱柱为Symmetry C18(4.6mm×150mm,5μm),流动相为乙腈(A)-水(B)梯度洗脱,0～5min,7%A,5～10min,7%～12%A,10～40min,12%A;流速1.0ML·min-1;柱温20℃,检测波长235nm.结果:sesamoside,山栀苷甲酯,7,8-dehydropenstemoside,penstemoside和8-0-乙酰山栀苷甲酯分别在0.050～0.650(r=0.9993),0.050～0.350(r=0.9995),0.040～0.280(r=0.9994),0.010～0.070(r=0.9996),0.040～0.280(r=0.9997)g·L-1与峰面积线性关系良好;平均加样回收率均96%～104%,RSD均小于5.0%(n=6).结论:此方法简便、准确,重复性好,结果稳定,可作为螃蟹甲药材的质量控制方法.
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螃蟹甲内生真菌Chaetosphaeronema sp.的化学成分研究
目的研究一株来源于藏药螃蟹甲内生真菌 PHY-24的化学成分。
方法采用麦麸培养基，对内生真菌 PHY-24进行放大培养，通过硅胶柱色谱、MCI 柱色谱、ODS 柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、高效液相色谱等对其发酵液中的化学成分进行分离纯化，利用 NMR、MS 等波谱方法进行化学成分的结构鉴定，并测定这些成分抗 HIV-1整合酶链转移反应活性。
结果从内生真菌 PHY-24发酵液的乙酸乙酯提取部分分离并鉴定了4个化合物，分别是：integrastatin B（1）、2-乙酰基-3,5-二羟基-苯乙酸（2）、curvulin （3）、O-methylcurvulinic acid（4）。其中化合物（1）和（2）具有抗 HIV-1整合酶链转移反应活性，其 IC50分别为6.22和75.1μmol/L。
结论4个化合物均为从此属真菌中首次分得，其中化合物（1）、（2）具有抗 HIV-1整合酶链转移反应活性。化合物（2）的活性为首次报道。 -
藏药螃蟹甲苯乙醇苷对急性高原肺水肿大鼠的保护作用
目的 研究藏药螃蟹甲中苯乙醇苷类成分(PhGCs)对急性高原肺水肿模型大鼠的保护作用.方法 70只大鼠按体重随机分为常压空白组(NG),常压+苯乙醇苷组(NG+PhGCs,400mg/kg),缺氧模型组(HG),苯乙醇苷高(PhGCs-H,400mg/kg)、中(PhGCs-M,200mg/kg)、低(PhGCs-L,50mg/kg)3个剂量组,地塞米松组(Dex,4mg/kg),每组10只.PhGCs预防灌胃给药3d,第4天起除常压空白组外,其余各组均置于模拟海拔8000m的高原环境,连续缺氧暴露72h建立实验性高原肺水肿动物模型,然后处死大鼠,干湿比重法检测肺组织含水量,HE染色后光镜下观察大鼠肺组织病理学改变,分光光度法检测大鼠肺组织中SOD、GSH酶的活性及MDA含量,ELISA法检测大鼠血清及肺组织中IL-lβ、TNF-α的含量.结果 与NG组比较,NG+PhGCs组大鼠肺组织含水量未见明显变化,HG组大鼠肺组织含水量明显增加(P＜0.05).与NG组比较,HG组大鼠肺组织充血水肿,大量炎症细胞浸润,肺泡间隔及肺泡壁明显增宽;SOD、GSH酶活性明显降低(P＜0.05),而IL-lβ、TNF-α、MDA含量明显增加(P＜0.05).与HG组比较,PhGCs各剂量组大鼠肺组织含水量明显降低,炎症细胞浸润、肺泡间隔及肺泡壁增宽程度减轻,SOD、GSH酶活性增加,而IL-1β、TNF-α、MDA含量明显降低(p＜0.05).结论 螃蟹甲所含的PhGCs可明显改善由急性缺氧所致大鼠急性肺损伤的氧化应激和炎症反应,对急性高原肺水肿模型大鼠具有一定保护作用.
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螃蟹甲中苯乙醇苷对急性减压低氧大鼠脑组织的保护作用及血管内皮生长因子表达的影响
目的 探讨螃蟹甲中苯乙醇苷对模拟高原低压低氧环境下大鼠脑组织的保护作用及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 Wistar大鼠随机分为常压空白组,低氧模型组,地塞米松(4 mg·kg-1)组,螃蟹甲中苯乙醇苷高、中、低(400、200、50 mg ·kg-1)剂量组,每组10只.常压空白组、低氧模型组灌胃灭菌注射用水(10 ml ·kg-1),其余各组按照预设剂量灌胃给药,连续给药4d.第4天给药后1h,除常压空白组外,其余各组均置于减压舱内模拟高原海拔8000 m连续低氧暴露72 h,建立实验性高原脑水肿大鼠模型.干湿质量法测定大鼠脑组织含水量,HE染色观察大鼠脑组织病理改变,实时RT-PCR检测大鼠脑组织中VEGF mRNA的表达,Western blotting检测大鼠脑组织中VEGF蛋白表达水平.结果 与常压空白组比较,缺氧模型组大鼠脑组织含水量明显降低(P＜0.05),水肿明显,表现为部分神经元肿胀或浓缩,亦见大量神经细胞皱缩变形,核固缩或碎裂等;脑组织中VEGF mRNA和蛋白表达量均显著上调(P＜0.01).与缺氧模型组比较,地塞米松组和螃蟹甲中苯乙醇苷低、中、高剂量组大鼠脑组织含水量明显降低(P ＜0.05,P＜0.01),脑组织中VEGF mRNA和蛋白表达量均明显下调,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 螃蟹甲中的苯乙醇苷能减轻低压低氧导致的脑水肿,保护脑组织,此作用可能与下调脑组织中VEGF表达有关.
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HPLC测定藏药螃蟹甲中8-乙酰氧基山栀子苷甲酯的含量
目的 建立藏药螃蟹甲中8-乙酰氧基山栀子苷甲酯的HPLC测定方法,为进一步控制螃蟹甲药材及其制剂的质量提供参考依据.方法 色谱柱为Symmetry C18(4.6mm×150mm,5μm),流动相:乙腈-水(6:94),HAc调pH=4.50,流速0.8mL/min,柱温20℃,检测波长234 nm.结果 8-乙酰氧基山栀子苷甲酯浓度在0.787-14.76μg·mL-1范围内与峰面积积分值线性关系良好(r=0.9999);加样回收率为99.21%(RSD=1.68%).螃蟹甲药材中8-乙酰氧基山栀子苷甲酯平均含量为(0.62±0.19)mg·g-1.结论 本方法简便、准确、专属性强,可用于螃蟹甲药材中8-乙酰氧基山栀子苷甲酯的含量测定.
关键词： 螃蟹甲 HPLC 8-乙酰氧基山栀子苷甲酯 -
藏药螃蟹甲中一个新的呋喃拉布素型二萜苷
为了研究藏药螃蟹甲的化学成分,采用不同的色谱方法对其进行分离纯化,根据得到化合物的理化性质和光谱数据鉴定其结构.分离鉴定了1个呋喃拉布素型二萜苷类化合物,命名为15,16-epoxy-8(9),13(16),14-labdatrien-7-ketone-19-oic acid-β-D-glucopyranosyl ester(糙苏苷F).该化合物为新化合物.
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西藏药用植物螃蟹甲可培养内生真菌的分离、鉴定及抗HIV-1整合酶链转移活性研究
从西藏药用植物螃蟹甲(Phlomis younghusbandii Mukerjee)的叶和茎中分离得到52株内生真菌.经分子鉴定(基于ITS序列和28S序列),内生真菌分属于Phoma、Chaetosphaeronema、Fusarium、Leptosphaeria 等12属,其中拟茎点霉属(Phoma)为其优势菌群.使用原核表达的可溶型一型人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)的整合酶(integrase,IN),对52株内生真菌的发酵产物进行体外抗HIV-1 整合酶链转移反应活性试验,结果发现,来自Chaetosphaeronema属真菌的7个样品对整合酶链转移反应表现出强烈的抑制作用,其对应的IC50值分别为6.60、5.20、2.86、7.86、4.47、4.56和3.23 μtg·mL-1.该研究表明,螃蟹甲内生真菌在发现抗HIV-1整合酶活性物质方面有进一步的开发价值.
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藏药螃蟹甲挥发油化学成分的GC-MS分析研究
目的研究螃蟹甲根的挥发油化学成分.方法采用气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)对螃蟹甲根的挥发油化学成分进行了分析鉴定.结果从分离出的30多个峰中鉴定出21个化学成分.结论螃蟹甲挥发油的主要化学成分为丁香酚、十六烷酸、9,12-(反,反)十八二烯酸甲酯和愈创醇等成分.
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藏药露木尔的研究进展
综述藏药露木尔的化学成分,药理作用和质量控制等方面的研究概况,并提出了在露木尔的研究过程中存在的问题,从而为露木尔的进一步研究和利用提供依据.
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HPLC法测定藏药螃蟹甲中苯乙醇苷类化合物的含量
目的 建立RP-HPLC法同时测定藏药螃蟹甲中3个苯乙醇苷的含量.方法 色谱柱为Symmetry C18(4.6 mm ×150 mm,5μm),流动相为甲醇-水(36:64),冰醋酸调pH至4.5；流速1.0 ml/min;柱温20℃,检测波长330 nm.结果 毛蕊花糖苷、alyssonoside、异毛蕊花糖苷分别在20～500(r=0.999 6),10～130(r=0.999 5),10～130(r=0.999 7) μg/ml范围间与峰面积线性关系良好；平均加样回收率均在96％ ～ 104％之间,RSD均小于5％(n=6).结论 该方法专属性强、灵敏度高、精确度与重现性好,可作为螃蟹甲药材的质量控制方法.
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藏药螃蟹甲化学成分研究(Ⅱ)
目的:研究藏药螃蟹甲的化学成分.方法:采用多种柱层析方法对螃蟹甲浸膏进行分离纯化,根据波谱数据和理化性质鉴定化合物的结构.结果:从螃蟹甲乙酸乙酯提取部位分离鉴定出4个化合物,分别为Phlomisoside Ⅲ(Ⅰ)、β-胡萝卜苷(Ⅱ)、山柰素(Ⅲ)、熊果酸(Ⅳ).结论:化合物Ⅲ和Ⅳ为首次从该植物中分离得到,为螃蟹甲药理作用的研究奠定了基础.
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独一味、螃蟹甲、糙苏和萝卜秦艽中5个环烯醚萜苷的含量测定
目的:建立测定独一味、螃蟹甲、糙苏和萝卜秦艽中5个环烯醚萜苷含量的HPLC方法.方法:色谱柱为Symmetry C18(150 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈(A)-水(B)梯度洗脱,0～5 min:6%A;5～10 min:6%～12%(A);10～40 min:12%(A);流速1.0 mL/min;柱温20℃.检测波长235 nm.结果:sesamoside、山栀苷甲酯、7,8-dehydropenstemoside、penstemoside和8-O-乙酰山栀苷甲酯分别在50～650 μg/mL(r=0.9995),50～350 μg/mL(r=0.9995),40～280 μg/mL(r=0.9997),10～70 μg/mL(r=0.9997),40～280 μg/mL(r=0.9994)范围间与峰面积线性关系良好;平均加样回收率均在96%～104%之间,RSD均小于5%(n=6).结论:该方法简便、准确,重复性好,可用于分析独一味、螃蟹甲、糙苏和萝卜秦艽中5个环烯醚萜苷的含量.
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藏药螃蟹甲化学成分研究(Ⅰ)
目的:对藏药唇形科糙苏属植物螃蟹甲的化学成分进行分离和鉴定.方法:采用多种柱层析方法进行分离纯化,根据光谱数据和理化性质鉴定化合物.结果:从乙酸乙酯部位分离出12个化合物,目前鉴定了5个化合物,分别为:山栀苷甲酯(Ⅰ)、大黄素(Ⅱ)、大黄酸(Ⅲ)、木犀草素(Ⅳ)、小檗碱(Ⅴ).结论:化合物Ⅱ～Ⅴ为首次从该植物中分离得到,化合物Ⅴ为首次从该属植物中分离得到.
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藏药螃蟹甲的化学成分研究
目的:研究螃蟹甲地上部分的化学成分.方法:乙醇提取,氯仿、正丁醇依次萃取,硅胶柱层析分离纯化,通过理化常数和波谱分析鉴定化合物结构.结果:分离得到8个化合物,分别鉴定为8-乙酰山栀苷甲酯(8-acetylshanzhiside methyl ester) (1)、山栀苷甲酯(shanzhiside methyl ester) (2)、糙苏素(phlomiol) (3)、果糖丁苷(4)、sesamoside (5)、pulchelloside-Ⅰ (6)、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(luteolin-7-O-β-D-glucopyranoside) (7)、胡萝卜苷(daucosterol) (8).结论:上述化合物均为首次从螃蟹甲地上部分中分离得到.
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藏药螃蟹甲HPLC指纹图谱研究
目的:建立螃蟹甲药材的HPLC指纹图谱,用于螃蟹甲的品质控制及产地鉴别.方法:采用高效液相色谱法对拉萨、昌都、林芝、那曲、山南、乃东、错那等产地的10个螃蟹甲药材进行HPLC图谱的比较.结果:以14个共有峰为评价指标,并对其中的4个色谱峰进行了指认,HPLC分析色谱条件的精密度、稳定性、重复性良好.结论:本方法各色谱峰分离较好,达到指纹图谱要求,可用于不同产地螃蟹甲药材的指纹图谱的测定和质量评价.
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藏药螃蟹甲中苯乙醇苷对模型大鼠急性高原脑水肿的改善作用
目的：研究藏药螃蟹甲中苯乙醇苷（PhGCs）对模型大鼠急性高原脑水肿的改善作用。方法：60只Wistar大鼠随机分为常氧空白（等容灭菌注射用水）组、缺氧模型（等容灭菌注射用水）组、地塞米松（4 mg/kg）组与PhGCs高、中、低剂量（400、200、50 mg/kg）组。复制模型前6 d ig给药，ig给药第4 d起除常氧空白组外，其余各组大鼠均置于模拟海拔8000 m的高原环境，连续缺氧暴露72 h以复制大鼠高原脑水肿模型。苏木精-伊红染色后光镜下观察大鼠脑组织病理改变；干湿质量法测定大鼠脑含水量；测定大鼠脑组织中丙二醛（MDA）含量与超氧化物歧化酶（SOD）、还原型谷胱甘肽（GSH）活性；酶联免疫吸附（ELISA）法测定大鼠血清中与脑组织中白细胞介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）含量。结果：与常氧空白组比较，缺氧模型组大鼠脑组织出现明显水肿，细胞和血管周围腔隙增宽，可见炎性细胞浸润；大鼠脑含水量增加；大鼠脑组织MDA含量增加，SOD、GSH活性减弱；大鼠血清与脑组织IL-1β、TNF-α含量增加，差异均有统计学意义（P＜0.01或P＜0.05）。与缺氧模型组比较，PhGCs高、中、低剂量组大鼠脑组织炎症细胞浸润程度减轻，脑含水量减少；PhGCs高、中剂量组大鼠脑组织MDA含量减少，SOD、GSH活性增强，大鼠血清与脑组织IL-1β、TNF-α含量减少，差异均有统计学意义（P＜0.01或P＜0.05）。结论：PhGCs能明显减轻由急性缺氧所致大鼠急性脑损伤状态，对模型大鼠急性高原脑水肿有一定改善作用。
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RP-HPLC法同时测定4种唇形科植物中3个苯乙醇苷的含量
目的:建立同时测定唇形科植物独一味、糙苏、螃蟹甲和萝卜秦艽中3个苯乙醇苷成分(acteoside、alyssonoside、isoacteoside)含量的方法.方法:采用高效液相色谱法.色谱柱为SymmetryC18(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(用醋酸调pH为4.5,梯度洗脱),流速为1.0 ml/min,柱温为20℃,检测波长为330 nm.结果:acteoside、alyssonoside、isoacteoside的质量浓度分别在20～620、5～125、5～125 μg/ml范围内与各自峰面积积分值呈良好线性关系(r分别为0.999 4、0.999 8、0.999 7);精密度、稳定性、重复性试验的RSD＜5％;平均加样回收率分别为101.15％、96.98％、102.01％,RSD分别为3.41％、3.64％、1.80％(n均为6).结论:该方法简便、准确、重复性好,可用于测定独一味、糙苏、螃蟹甲和萝卜秦艽中3个苯乙醇苷的含量.
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藏药螃蟹甲的镇痛抗炎作用
目的 研究螃蟹甲的镇痛抗炎作用.方法 以螃蟹甲水提取物为研究对象,采用小鼠醋酸扭体法、热板法、耳肿胀法、足肿胀法及毛细血管通透性实验等方法来观察其镇痛抗炎作用.结果 螃蟹甲水提取物能显著减少小鼠扭体反应的次数,高剂量组能明显延长热板所致的小鼠舔后足的时间,对小鼠耳肿胀及足肿胀均有显著的抑制作用,且能降低毛细血管的通透性,显著抑制醋酸所致的小鼠腹腔炎症渗出.结论 螃蟹甲水提取物具有较好的镇痛抗炎活性.
