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超声波提取蛇足石杉内生真菌2F09P03B中石杉碱甲的研究
目的 确定一株蛇足石杉内生真菌2F09P03B发酵培养物中石杉碱甲的超声波辅助提取工艺,以改善石杉碱甲提取率.方法 对提取溶剂、pH值等影响提取效率的因素分别进行单因素实验;对料液比、超声波功率、负载率(duty cycle)、超声时间4个影响超声波提取效率的因素在单因素实验基础上利用正交实验进行优化.结果 超声波辅助提取石杉碱甲的佳工艺条件是:提取溶剂为pH 4.0的酸水,碱性还原反应在pH 7.5～8.O进行,料液比1:20,超声波功率140 W,超声波负载率30%,超声时间40 min.此条件下,该内生真菌石杉碱甲的提取率达0.074%,约为其他传统提取方法的1.5～2倍.结论 超声波辅助提取法的石杉碱甲提取率较其他方法有了显著提高,并能大幅度缩短提取时间,应在蛇足石杉内生真茵2F09P03B石杉碱甲的提取中加以应用.
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碱蓬内生真菌曲霉TQ67次级代谢产物的研究
目的 研究植物碱蓬内生真菌曲霉TQ67次级代谢产物.方法 采用ODS反相柱色谱、高效液相色谱、半制备HPLC等方法对发酵液及茵丝体部分分离纯化,运用核磁、质谱等现代波谱分析方法对化合物进行结构鉴定.结果 得到8个化合物:aspermutarubrol(1)、sydowiols D (2)、sydowiols E(3)、细交链孢酮酸(4)、(E)-5-(羟甲基)-2-(6＇-甲基-2＇-庚烯-2＇-基)酚(5)、sydonol (6)、(7S)-(+)-7-O-methylsydonol(7)和hydroxysydonic acid(8).化合物2/3和化合物1其DPPH的IC50分别为(9.79 ±0.33)和(32.30 ± 1.02) μg·mL-1,FRAP值分别为(230.55±2.50)和(278.99±8.32) μg·mL-1.结论 从碱蓬内生真菌曲霉TQ67中分离得到的化合物2/3和化合物1有较强的抗氧化活性.
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藏药黑果枸杞内生真菌的分离鉴定及抑菌活性研究
目的 从藏药黑果枸杞中分离和鉴定内生真菌,并对其抑菌活性进行研究,旨在从该植物中获得强抑菌活性的菌株,为寻找新型抑菌活性物质提供新的资源.方法 以新鲜黑果枸杞为材料,采用组织分离法从其根、茎、叶中分离内生真菌,依据形态进行初步鉴定；采用滤纸片法测定黑果枸杞内生真菌次生代谢产物的抑菌活性.结果 从黑果枸杞的根、茎、叶中,共分离得到内生真菌81株,其中常态下分离得到60株,高盐条件下分离得到21株.81株内生真菌经鉴定属于7目,10科,13属,抑菌活性测试表明,高盐条件下得到的内生真菌代谢产物活性明显高于一般条件下的,特别是E21菌株平均抑菌圈直径为26～31 mm.结论 采用模拟植物生长环境的方法分离内生真菌,对于特异性菌株的分离具有十分重要的意义.
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广西金线莲内生真菌的分离及抗菌活性研究
目的 研究广西野生金线莲内生真菌的抗菌活性,旨在获得有良好抗菌活性的菌株,以寻找新型抗菌物质.方法 以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌为实验菌株,用琼脂块法和纸片扩散法对分离的真菌进行了抑菌实验.结果 从广西野生金线莲植物中共分离到23株内生真菌,其中有6株真菌对至少1种实验菌株有抗菌活性,占总分离菌株的26.0%.结论 广西野生金线莲内生真菌中存在着丰富的抗菌天然活性物质,这可为寻找新型抗菌物质提供资源.
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药用植物五味子内生真菌的分离及其抑菌活性研究
目的 研究药用植物五味子内生真菌及其次生代谢产物的抑菌活性,旨在获得有良好抑菌活性的菌株,以寻找新型抗菌物质.方法 以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、短小芽孢杆菌、铜绿假单孢菌、单增李斯特菌,肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、酿脓链球菌、屎肠球菌、粪肠球菌和白假丝酵母为试验菌株,用菌饼法及纸片法对分离的真菌及其次生代谢产物进行了抑菌实验.结果 从药用植物五味子中分离到36株内生真菌,其中有33株内生真菌对指示菌均表现出不同的抑菌活性,占总分离菌株的91.67%;有30株内生真菌的发酵液对指示菌株也有一定的抑制作用,占总分离菌株的83.33%.结论 药用植物五味子的内生真菌及其次生代谢产物中存在着丰富的抑菌天然活性物质,这可为寻找新型抗菌物质提供资源.
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牡丹内生真菌MD76的鉴定及次级代谢产物研究
目的 对一株具有抗菌活性的牡丹内生真菌MD76进行鉴定并对其次级代谢产物进行分离.方法 采用形态学观察结合5.8s rDNA ITS序列分析鉴定菌株MD76的种类;利用硅胶、凝胶柱层析等技术对该菌的大米发酵产物乙酸乙酯浸提物进行分离,并通过波谱数据对分离化合物鉴定.结果 鉴定菌株MD76为首都叶点霉Phyllosticta capitalensis,并从该菌发酵物中分离到7种化合物:苯甲酸(1)、对羟基苯甲酸(2)、对羟基苯丙酸(3)、芍药苷(4)、氧化芍药苷(5)、没食子酸(6)、芹菜素(7).结论 首都叶点霉P.capitalensis为首次从牡丹健康组织中分离获得,7种化合物均为首次从该种真菌中提取鉴定.
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内生真菌对福建金线莲栽培及酶活性的影响
目的 研究在野外盆栽条件下内生真菌AR-18对福建金线莲(Anoectochilus roxburghii)生长发育的影响.方法 福建金线莲组培苗接菌移栽于草炭土或蛭石基质中,1年后收获,观察苗的生长势,统计成活率,称鲜重和干重,同时测定β-1,3-葡聚糖酶、几丁质酶、多酚氧化酶和苯丙氨酸解氨酶活性.结果 在草炭土和蛭石基质上,接菌的福建金线莲苗成活率均达100%;真菌对福建金线莲鲜重的增加有极显著促进作用(P<0.01),分别为对照组的1.77和1.83倍;真菌对福建金线莲干重的增加有显著促进作用(P<0.05),分别为对照组的1.13和1.28倍.接菌后4种酶活性均高于对照组.结论 在福建金线莲的家栽过程中可利用内生真菌提高成活率和产量.
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假鹰爪茎、叶组织内生真菌的分布和rDNA ITS序列系统发育分析
目的 研究假鹰爪(Desmos chinensis Lour.)茎、叶组织中内生真菌的分布及其rDNA ITS序列系统发育.方法 采用石蜡永久制片法观察鹰爪茎、叶组织显微结构,细胞化学法确定内生真菌的分布,平板分离法分离培养内生真菌,对分离菌株进行rDNA ITS区PCR扩增和测序,通过rDNA ITS序列进行内生真菌的分类鉴定及系统发育分析.结果 假鹰爪茎中的内生真菌主要分布在韧皮部薄壁细胞,叶中主要分布主脉上方厚角细胞以内的薄壁细胞、栅栏组织、海绵组织.共分离14株内生真菌,分属于拟茎点霉属(Phomopsis)、刺盘孢属(Colletotrichum)和球座菌属(Guignardia),其中拟茎点霉(P.spp.)占总菌株数的57.1％,其次为胶孢刺盘孢(C.gloeosporioides)和芒果球座菌(G.mangiferae).结论 内生真菌在假鹰爪茎、叶组织中均有分布,无明显组织特异性;rDNA ITS序列系统发育较好的揭示了假鹰爪内生真菌的系统进化关系.
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河南产丹参内生真菌的多样性分析
目的 分析我国河南产区药用植物丹参(Salvia miltiorrhiza)内生真菌的多样性.方法 从野生、栽培、仿野生3种生境的不同月份(3,6,9,11月)的丹参内分离内生真菌并鉴定.结果 共分离的277株内生真菌,经形态学和分子生物学鉴定(ITS序列)分属于25个属.野生、栽培和仿野生丹参根的内生真菌有一定相似性(相似性系数:0.31 ～0.38),优势菌群主要有链格孢属Alternaria、木霉属Trichoderma和Cryptosporiopsis;以3月份丹参内生真菌的多样性丰富(辛普森多样性指数:0.73;香农维纳指数:1.39).结论 河南产丹参内生真菌具有丰富的生物多样性,有可能在丹参道地药材的形成中发挥潜在作用.
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药用植物刺五加内生真菌的分离及其抑菌活性研究
目的 研究药用植物刺五加内生真菌及其次生代谢产物的抑菌活性,旨在获得有良好抑菌活性的菌株,以寻找新型抗菌物质.方法 以枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、屎肠球菌、单增李斯特菌、酿脓链球菌、大肠杆菌、铜绿假单孢菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌和白假丝酵母为实验菌株,用菌饼法及纸片法对分离的真菌及其次生代谢产物进行了抑菌实验.结果 从药用植物刺五加中分离到42株内生真菌,其中有37株真菌对至少1种实验菌株有抑菌活性,占总分离菌株的88.10%;有12株内生真菌次生代谢产物对至少1种指示菌有抑菌活性,占总分离菌株的28.57%.结论 药用植物刺五加的内生真菌及其次生代谢产物中存在着丰富的抑菌天然活性物质,这可为寻找新型抗菌物质提供资源.
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石斛属植物内生真菌及菌根真菌物种多样性研究进展
目的 综述兰科石斛属药用植物内生真菌及菌根真菌多样性研究进展.方法 总结国内外石斛属植物内生真菌多样性研究的新文献,结合本实验室近五年的研究结果,分析石斛属植物内生真菌的种类及其与宿主植物的专一性关系.结果 综述了石斛属内生真菌及菌根真菌的分离方法、鉴定手段、种类组成、分布及与宿主植物的专一性关系,分析了目前该领域研究中存在的问题,提出了可能的解决方法,并对未来的研究做了展望.结论 内生真菌及菌根真菌在石斛属植物资源保护和再生中具有广阔的应用前景,仍需继续深入系统的研究.
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药用植物内生真菌多样性研究进展
总结近年来国内外药用植物内生真菌多样性研究的新文献,分析药用被子植物(木本和草本)、裸子植物和蕨类植物等内生真菌的种类多样性,及其作用多样性和与寄主专一性关系.综述了药用植物内真菌的分离方法、鉴定方法、种类多样性、作用多样性及其与寄主专一性的关系,分析了这一领域研究目前存在的问题,并提出了可能的解决方法.药用植物内生真菌具有丰富的种类多样性,其在药用植物资源的保护与资源再生中具有巨大的应用潜力,还有待进行更为系统的研究.
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美登木内生真菌产抗癌物质球毛壳甲素的分离及鉴定
目的通过植物内生真菌的分离,筛选产生抗癌成分的菌株.方法从美登木(Maytenus hookeri)茎、叶中分离内生真菌,对其发酵产物经活性跟踪(抑菌实验),其活性成分用薄层色谱、柱色谱纯化及活性跟踪,再经质谱及核磁共振光谱分析确定结构.结果从美登木中分离筛选到一株球毛壳菌(Chaetomium globosum):98M-6,其产生抗癌化合物球毛壳甲素(chaetoglobosin A).结论美登木内生真菌中,有的内生真菌可产生与宿主所产的美登素(maytensine)不同的抗癌物质.
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黄草乌根部内生真菌的分离与鉴定
目的 从黄草乌的根部分离鉴定内生真菌.方法 利用PDA培养基进行黄草乌根部内生真菌的分离与纯化,根据菌落的形态特征并结合真菌的ITS序列进行菌株鉴定.结果 从黄草乌根部共分离到内生真菌52株,鉴定为20属34种,绝大部分属于子囊菌门,其中镰刀菌属和青霉菌属为优势属.结论 黄草乌根部的内生真菌具有多样性,可作为潜在的资源供药物筛选.
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兰科药用植物的5种内生真菌产生的植物激素
目的研究促进兰科药用植物生长发育的5种内生真菌产生的植物激素,从物质角度探讨内生真菌促进其生长发育的机制.方法从真菌发酵液和菌丝体中分别提取植物激素,用高效液相色谱进行梯度洗脱,分析鉴定其中赤霉素(GA3),吲哚乙酸(IAA)、脱落酸(ABA)、玉米素(Z)、玉米素核苷(ZR)5种植物激素并测定其含量.结果5种内生真菌均能不同程度地产生一种或几种上述激素.结论以上结果为阐明内生真菌促进兰科药用植物生长发育的作用机制提供实验依据.
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红豆杉根的显微结构及其内生真菌分布
目的研究南方红豆杉根的显微结构及其内生真菌的分布.方法取自然生长状态下南方红豆杉根,石蜡切片光学显微观察并照相.结果南方红豆杉根的次生结构由周皮和维管系统组成,次生木质部由轴向系统和径向系统两部分构成.轴向系统由管胞和木薄壁组织细胞组成;径向系统由木射线构成;根的次生韧皮部则由筛胞和韧皮薄壁细胞组成.次生韧皮中分布有少量韧皮纤维,韧皮射线不明显.根被细胞中分布有大量内生真菌菌丝.结论南方红豆杉根的次生构造与其他裸子植物和双子叶植物一致,但次生木质部由管胞,次生韧皮部由筛胞组成.内生真菌分布于红豆杉根被细胞,并只在一定区域细胞中分布.
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一种能产生紫杉醇类化合物内生真菌的分离
目的从东北红豆杉Taxus Cuspidata Sieb et Zucc树皮中分离能产生紫杉醇类化合物的内生真菌.方法采用无菌技术分离东北红豆杉树皮中的内生真菌,并采用高效液相色谱(HPLC)等方法对该真菌培养物进行分析.结果从东北红豆杉树皮中分离得到一种内生真菌,化学分析证明该真菌培养物内含有紫杉醇类化合物.结论 东北红豆杉树皮中含有能产生紫杉醇类化合物的内生真菌.
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山麻黄内生菌Myrothecium roridum LLY的化学成分及其体外细胞毒活性研究
目的 研究山麻黄Ephedra equisetina内生真菌Myrothecium roridum LLY固体发酵产物的化学成分,并进行体外细胞毒活性研究.方法 采用硅胶柱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和高效液相色谱法进行分离纯化,利用高分辨质谱、核磁共振谱等方法鉴定化合物的结构.MTT法进行化合物体外细胞毒活性筛选,并采用流式细胞术和Western blotting法进行化合物细胞毒活性机制初步研究.结果 从M.roridum LLY固体发酵产物中分离得到9个化合物,分别鉴定为吩嗪-1-羧酸(1)、1-甲氧基吩嗪(2)、N-methyl-1H-indole-2-carboxamaide (3)、甲基硫赭曲菌素(4)、ditryptophenaline (5)、7,8-二甲基异咯嗪(6)、deoxyleporin B(7)、尿嘧啶(8)和胸腺嘧啶(9). MTT测定发现,化合物3对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖具有一定的抑制活性,其IC50值为38.0 μg/mL,阳性对照顺铂的IC50值为11.5 μg/mL.细胞周期分析发现,化合物3可导致SMMC-7721细胞S期阻滞;Westem blotting分析发现,化合物3可使SMMC-7721细胞中细胞周期负调控蛋白p27的表达上调,并且Cleaved-PARP蛋白被明显活化.结论 化合物7为1个新的天然产物.化合物3能诱导SMMC-7721细胞凋亡;其对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用与S期细胞周期阻滞相关,并受到p27蛋白的调控.
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潜在抗HIV活性内生真菌Epulorhiza sp.的化学成分研究
目的 探讨内生真菌Epulorhiza sp.中抗HIV活性成分.方法 应用微生物培养的方法获得内生真菌菌丝体,再用溶剂提取,各种柱色谱和重结晶的方法分离内生真菌中的化学成分,通过理化常数测定及波谱学方法鉴定化合物的结构.结果 从内生真菌的醋酸乙酯部位分离得到11个单体化合物,分别为吡咯骈(1,2a)-3,6-二酮六氢吡嗪(1)、(3R,8aR)-hexahydro-3-(2一methylpropyl)-pyrrolo(1,2a)-pyrazine-1,4-dione(2)、核黄素(3)、3-羧基吲哚(4)、2-羟基-4-氧-3,4,5,6-四氢嘧啶(5)、腺苷(6)、胸腺嘧啶(7)、尿嘧啶核苷(8)、鸟嘌呤核苷(9)、4,4-二甲基-1,7-庚二酸(10)、α-棕榈精(11).结论 所有化合物皆为首次从该属真菌中分得,其中3-羧基吲哚据文献报道有抗HIV活性.
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铁皮石斛内生真菌Verticillium sp.KY-18的化学成分研究
目的 研究铁皮石斛Dendrobium officinale内生真菌Verticillium sp.KY-18中氧杂环类化合物.方法 采用色谱分离技术进行分离和纯化,并根据谱学数据鉴定化合物的结构.结果 从Verticillium sp.KY-18的发酵产物中分离得到13个氧杂环类化合物,分别鉴定为2,6-dihydroxy-2-methyl-7-(prop-1E-enyl)-1-benzofuran-3(2H)-one(1)、nigrosporapyrone D(2)、oosponol (3)、2-甲基-4-吡喃酮(4)、6-甲基-5-[(1E)-丁烯基]-2-吡喃酮(5)、penicisochroman D(6)、verrucosapyrone B(7)、(1S,3S)-1,8-dimethoxy-3,5-dimethyl-6-hydroxyisochroman (8)、phomopsinoneA(9)、pseudohalonectrinA(10)、dictafolin-A(11)、2,3-dihydro-5,7-dihydroxy-2,6,8-trimethyl-4H-1-benzopyran-4-one (12)、2-pyrone-4,6-dicarboxylic acid (13).结论 化合物2～10为首次从该属真菌中分离得到;化合物11～13为首次从该真菌中分离得到.
