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黄草乌HPLC指纹图谱分析方法研究
目的 建立黄草乌指纹图谱的高效液相色谱分析法.方法 利用高效液相色谱法,采用Agilent Zorbax SB-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,乙腈-磷酸三乙胺溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL/min, 检测波长为267 nm,建立黄草乌高效液相指纹图谱方法.结果 研究建立的高效液相指纹图谱有良好的重现性,不同产地的黄草乌共有15个色谱峰(RSD≤3%,n=15),共有峰相对峰面积有一定的差异.结论 该方法效果良好,结果稳定可靠,可为提高黄草乌质量控制标准提供参考.
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黄草乌原药材与土壤无机元素相关性研究
目的了解黄草乌原药材及其土壤无机元素的特征,分析两者的相关性.方法对不同产地黄草乌原药材及生长地土壤中15种无机元素含量进行测定,所得数据用SPSS11.0软件进行分析比较.结果黄草乌原药材与土壤中无机元素含量不相关;黄草乌对钙、铅、磷的吸收有富集作用,个旧风筝山地区对钙的富集作用明显;华宁岔那地区黄草乌对各种无机元素的富集作用都很强.结论黄草乌主要通过主动吸收调控无机元素的含量;黄草乌对镍和铬,铁和钴、锡和钴、铁和锡的吸收累积有很好的协同吸收作用.
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黄草乌根部内生真菌的分离与鉴定
目的 从黄草乌的根部分离鉴定内生真菌.方法 利用PDA培养基进行黄草乌根部内生真菌的分离与纯化,根据菌落的形态特征并结合真菌的ITS序列进行菌株鉴定.结果 从黄草乌根部共分离到内生真菌52株,鉴定为20属34种,绝大部分属于子囊菌门,其中镰刀菌属和青霉菌属为优势属.结论 黄草乌根部的内生真菌具有多样性,可作为潜在的资源供药物筛选.
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黄草乌生长发育规律研究
目的 通过田间试验,对黄草乌生长发育规律进行初步研究.方法 采用人工栽培的方法,从黄草乌出苗开始,每隔15 d取一次样,测量其主要农艺性状、植株各部分鲜生物量、干生物量、决根鲜生物量以及干生物量.结果 地上部分,4～5月为黄草乌缓慢生长期;6～7月为快速生长期;8月以后逐渐衰老;地下部分,5月中旬新根逐渐长出;7月中旬至9月底为块根快速生长期;10月以后块根基本停止生长.结论 6月初～7月中旬,是黄草鸟地上部分的快速生长期,应合理进行水肥调控;7月中旬～9月底,是地下部分的快速生长期,应在7月底之前完成封顶打权,促进地下部分生长,以获得高产;10月以后地下部分停止生长,可进行采收.
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UPLC-MS/MS法检测黄草乌中毒人体肝脏中的主要生物碱成分
目的 建立人体肝脏中粗茎乌头碱甲、滇乌碱和塔拉萨敏的超高效液相色谱—串联质谱(UPLC-MS/MS)检测方法.方法 样品经处理后,采用电喷雾离子源正离子多反应监测模式进行质谱分析,以特征离子对和保留时间对人体肝脏和黄草乌块根中的粗茎乌头碱甲、滇乌碱和塔拉萨敏进行定性分析,外标标准曲线法进行定量分析.结果 粗茎乌头碱甲、滇乌碱和塔拉萨敏在1 ～100 ng· mL-1范围内线性关系良好(r ＞0.999 0),粗茎乌头碱甲、滇乌碱和塔拉萨敏的检出限均低于0.05 ng· mL-1,定量限均低于0.10 ng·mL-1;方法回收率高于80％,RSD小于5％.结论 本文建立的粗茎乌头碱甲、滇乌碱和塔拉萨敏的UPLC-MS/MS检测方法灵敏度高、准确度好,适用于黄草乌中毒案件生物检材中粗茎乌头碱甲、滇乌碱和塔拉萨敏的分析检测.
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探针药物法评价黄草乌酒对大鼠肝脏CYP1A2、CYP3A1和CYP2E1的影响
目的：探讨黄草乌酒对大鼠CYP450亚型(CYP1A2、CYP3A1、CYP2E1)的代谢活性的影响。方法采用Cocktail探针法(咖啡因、咪达唑仑和氯唑沙宗),利用超高效液相色谱—串联质谱(UPLC-MS/MS)测定黄草乌酒对大鼠CYP450亚型活性影响。将大鼠随机分为5组,分别为空白对照组、白酒组、单草乌组、低草乌酒组和高草乌酒组,各组动物连续灌胃给药14 d,于第15 d腹腔注射Cocktail探针药液,并于腹腔注射探针药液前后不同时间点断尾采血。使用UPLC-MS/MS测定各探针药物的血药浓度,评价CYP450亚型的代谢活性。结果氯唑沙宗的半衰期(T1/2)均低于空白对照组(P<0.05),表明酒精、黄草乌和黄草乌酒对CYP2E1均有明显的诱导作用。与空白对照组相比,酒精对CYP1A2和CYP3A1的诱导不明显。与白酒组相比,黄草乌酒对CYP3A1和CYP2E1的诱导以及对CYP1A2的抑制作用均无显著性差异。结论黄草乌与酒精合用后可诱导CYP2E1的活性,发生药物间相互作用,增加黄草乌对大鼠的肝毒性。
关键词： 黄草乌 酒精 Cocktail探针药物 CYP450 UPLC-MS/MS -
制黄草乌化学成分研究
目的:对制黄草乌的化学成分进行研究.方法:采用硅胶、氧化铝和反相C18柱色谱及重结晶等方法进行分离纯化,通过质谱、核磁共振技术和理化性质进行结构鉴定.结果:从制黄草乌的甲醇提取物中分离得到10个化合物,分别鉴定为:滇乌碱(1)、8-去乙酰基滇乌头碱(2)、geniculatine C(3)、黄草乌碱乙(4)、黄草乌碱丙(5)、黄草乌碱丁(6)、talatisamine(7)、β-谷甾醇(8)、β-胡萝卜苷(9)、β-谷甾醇乙酸酯(10).结论:化合物1～10均为首次从制黄草乌中分离得到.
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黄草乌及其混淆品ITS序列的分析鉴别
目的:比较黄草乌及其混淆品滇南草乌ITS序列的差别.方法:分别提取黄草乌及滇南草乌总DNA,进行PCR扩增、扩增产物直接测序,利用DNAStar、ClustalX1.81及MEGA4.0软件进行序列分析.结果:通过对黄草乌及其混淆品的ITS数据矩阵,得到ITS1产生229个一致位点、19个变异位点和13个信息位点；5.8S产生162个一致位点、2个变异位点和1个信息位点；ITS2产生217个一致位点、3个变异位点和1个信息位点.除了5.8S没有碱基的转换和颠换,ITS1存在2个碱基转换和1个颠换,ITS2只存在1个颠换.黄草乌2个居群和滇南草乌3个居群的ITS测序结果经数据矩阵分析后,发现二者ITS2区间第596个碱基处为鉴定二者的稳定的信息位点,黄草乌2个居群的所有样品在此位点的碱基为(C),而滇南草乌3个居群的所有样品在此位点的碱基为(A).结论:黄草乌与其混淆品滇南草乌的核rDNA的ITS序列存在碱基的差异,有特定的变异位点,且位点变异表现出ITS1大于ITS2,因此,能在分子水平上将二者分开.
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黄草乌的生药学研究
目的:时黄草乌进行系统的生药学研究.方法;采用种源鉴定、性状鉴定、显微及理化鉴定的方法.结果:详细描述了黄草乌的生药性状、横切面构造、粉末特征及理化鉴别的研究结果.其主要特征为:块根椭圆球形,茎缠绕,叶片坚纸质,五角形,花序有3～6花,皮层有石细胞,并含有众多淀粉粒,茎横切面中柱鞘纤维宽广,叶肉组织为异面型,气孔不定式.花粉粒具三个萌发孔.理化预实验表明其所合成分为:生物碱、糖类、苷类、蛋白质、多肽.由薄层色谱图看出,地上部分与地下部分舍有相同的化学成分.结论:本研究为黄革乌全草制定药材质量标准及开发利用该药材提供了生药学资料.
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HPLC法同时测定黄草乌中滇乌碱和草乌甲素的含量
目的 建立同时测定黄草乌中滇乌碱和草乌甲素含量的高效液相色谱方法.方法 采用Waters XTerra(R) MS C18(250mm ×4.6mm,5μm)色谱柱;流动相为0.025mol/L磷酸二氢钾溶液(1000ml加1ml磷酸)-乙腈:四氢呋喃(25:15)为流动相梯度洗脱,流速1 ml/min,柱温30℃;检测波长260nm.结果 滇乌碱和草乌甲素分别在5.27=421.6μg/ml、5.02～ 401.6μμg/ml范围内呈良好的线性关系,平均回收率分别为99.7％～104.3％、96.8％～99.3％,RSD分别为1.34％、0.82％.结论 经方法学验证,本法可用于同时测定黄草乌中滇鸟碱、草乌甲素的含量,为该药材的质量控制和临床用药安全提供了有力的分析手段.
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UPLC-MS/MS法研究滇乌碱在大鼠体内组织的分布
目的 建立灌胃给药滇乌碱的大鼠中毒模型,用高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法测定大鼠血液及各组织中滇乌碱的含量,研究滇乌碱在大鼠体内的分布情况.方法 将SD大鼠随机分为3组,分别按2.2mg/kg,1.1mg/kg和0.7mg/kg剂量灌胃高、中、低剂量组大鼠,给药2 h后处死,迅速采取大鼠的心血、胃、小肠、肝脏、胰腺、肾脏、肺脏、脾脏、心脏、膀胱、睾丸和全脑,液- 液萃取法处理后,用UPLC-MS/MS法测定各生物检材中滇乌碱的含量.结果 滇乌碱大鼠中毒模型给药剂量为1.1 mg/kg,滇乌碱在大鼠体内分布由高到低的顺序为胃、小肠、肝脏、胰腺、肾脏、肺脏、脾脏、心脏、膀胱、睾丸、心血和大脑.结论 滇乌碱在大鼠体内分布广泛,尤以胃、小肠和肝脏中含量高,该结论为黄草乌中毒的检验材料选取提供依据.
关键词： 黄草乌 滇乌碱 UPLC-MS/MS 大鼠 体内分布
