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伴生菌对猪苓几种酶活性的影响
目的:研究猪苓Grifola umbellata在与伴生菌Companionfungus共培养过程中,伴生菌对猪苓几种酶的活性影响.方法:测定与伴生菌共培养过程中猪苓菌丝几丁质酶、β-1,3-葡聚糖酶、蛋白酶及胞外多酚氧化酶的活性.结果:伴生菌能诱导猪苓几丁质酶及β-1,3-葡聚糖酶活性的提高;蛋白酶活性没有明显变化;液体培养时,在培养的后期猪苓与伴生菌共培养的发酵液中两种胞外多酚酶活性均居于猪苓与伴生菌单独培养的酶活性之间.结论:伴生菌与猪苓的营养互补可能为猪苓提供一些菌核形成的相关物质,从而有利于猪苓形成菌核.
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内生真菌对台湾金线莲栽培及酶活性的影响
目的:研究在野外盆栽条件下内生真菌对台湾金线莲的影响.方法:组培苗移栽1年后收获,统计成活率,称鲜重和干重,同时测定几丁质酶、β-1,3-葡聚糖酶、多酚氧化酶、苯丙氨酸解氨酶活性.结果:接菌的台湾金线莲成活率达100%.对台湾金线莲鲜重的增加有极显著差异,对干重的增加有显著差异,且接菌后4种酶活性均高于对照组.结论:在台湾金线莲的家栽过程中可利用内生真菌提高成活率.
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三七几丁质酶基因PnCHI1的克隆及表达特性分析
几丁质酶(chitinase,EC3.2.1.14)广泛存在于多种生物体中,催化水解几丁质(chitin),在抗真菌防卫反应体系中具有重要作用,同时几丁质酶还调控植物的生长和发育,参与细胞的程序性死亡(programmed cell death,PCD).该实验基于三七Panax notoginseng中编码几丁质酶的EST序列设计引物,采用快速扩增cDNA末端技术,克隆得到1个新的几丁质酶基因的全长cDNA序列,命名为PnCHI1.PnCHI1的cDNA全长为1 022 bp,含有822 bp的开放阅读框,26 bp 5'-非翻译区以及174bp的3'-非翻译区,编码具有273个氨基酸的蛋白质.该基因编码的蛋白属于糖苷水解酶19家族成员,进化树分析表明PnCHI1编码的氨基酸序列属于Ⅳ类几丁质酶.qRT-PCR分析结果显示,植物信号分子水杨酸、茉莉酸甲酯、H2O2和乙烯处理可均明显诱导三七根中PnCHI1的转录水平;三七叶片接种人参链格孢Altemaria panax后,PnCHI1的表达量迅速升高,呈波动上升趋势;外源茉莉酸甲酯预处理三七根部,PnCHI1的表达水平上升,接种茄腐镰刀菌Fusarium solani后,PnCHI1的转录水平急剧上升,接种后4h达到高转录水平;而无菌水预处理三七受茄腐镰刀菌侵染过程中,PnCHI1的表达量逐渐上升,至48h达到大值.上述结果表明PnCHI1参与三七对根腐病菌以及黑斑病菌的防卫反应.
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甲壳动物几丁质酶基因结构与功能的研究进展
甲壳动物几丁质酶不仅参与蜕皮过程,也参与几丁质类食物的消化和抵御病原体的侵染,近年来受到了越来越多的关注.本文对甲壳动物几丁质酶基因的分子结构及其功能的新进展作一综述.
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产几丁质酶海洋细菌的筛选及发酵条件的优化
目的:筛选产几丁质酶活力的菌株,研究菌株产酶的适发酵条件,并对酶解产物进行检测.方法:利用平板透明圈法初筛产几丁质酶的菌株,再利用DNS法复筛菌株,将初酶液和胶体几丁质在37℃水浴反应,经离心,透析,浓缩,再通过薄层色谱(TLC)和高效液相色谱(HPLC)对酶解产物进行检测.结果:SG-05海洋细菌能降解几丁质为3～5聚合度的几丁寡糖.其发酵液大酶活可达0.85 U·mL-1.结论:利用平板透明圈法和DNS法相结合,可以较为迅速准确筛选到产几丁质酶活力的菌株,利用薄层色谱和商效液相色谱法可准确对酶解产物进行定性分析,通过发酵条件的优化,产酶活力提高近2倍.
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内生真菌对福建金线莲栽培及酶活性的影响
目的 研究在野外盆栽条件下内生真菌AR-18对福建金线莲(Anoectochilus roxburghii)生长发育的影响.方法 福建金线莲组培苗接菌移栽于草炭土或蛭石基质中,1年后收获,观察苗的生长势,统计成活率,称鲜重和干重,同时测定β-1,3-葡聚糖酶、几丁质酶、多酚氧化酶和苯丙氨酸解氨酶活性.结果 在草炭土和蛭石基质上,接菌的福建金线莲苗成活率均达100%;真菌对福建金线莲鲜重的增加有极显著促进作用(P<0.01),分别为对照组的1.77和1.83倍;真菌对福建金线莲干重的增加有显著促进作用(P<0.05),分别为对照组的1.13和1.28倍.接菌后4种酶活性均高于对照组.结论 在福建金线莲的家栽过程中可利用内生真菌提高成活率和产量.
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基因枪转化双价防卫基因获得抗立枯病白术
目的 通过基因工程育种获得抗病转基因白术株系.方法 在已建立的高效白术茎尖再生体系基础上,利用基因枪介导法转化水稻几丁质酶基因(RCH10)和苜蓿β-1,3-葡聚糖酶基因(AGLU),对所获得的转基因株系进行PCR分析、GUS染色以及抗病性检测.结果 获得了25个PCR检测阳性的转基因株系,其中5个株系对白术立枯病抗性增强.结论 利用转基因技术获得抗病新株系,可以缩短抗病品种育种年限,同时拓宽了白术抗病育种的基因库.
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芽胞杆菌菌株产几丁质酶发酵条件的研究
从采自大连地区24份土样中分离筛选到一株产几丁质酶活性较高的芽胞杆菌(Bacillus sp.)B-41,该菌株产几丁质酶适的发酵条件为:碳源为胶体几丁质,氮源为酵母浸汁,pH7.2,温度42℃,振荡培养4天.
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几丁质酶的研究进展
目的 介绍近年来几丁质酶的研究进展,为几丁质酶及其降解产物的进一步研究奠定基础.方法 通过系统的文献调研,以近年来20余篇国内外相关文献为依据,进行归纳总结.结果 总结了几丁质酶的性质、分类、结构、调控机制及应用.结论 研究几丁质酶对于医药、农业及化工等领域具有重要意义,具有广阔的市场开发价值.
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几丁质酶在抗真菌感染中的研究现状及展望
几丁质是大多数真菌细胞壁的主要成分之一,几丁质酶是一类可以催化水解几丁质的蛋白.随着研究的深入,几丁质酶独特的抗真菌特性越来越受到人们的重视,在多个领域的研究应用已日趋活跃,本文主要就近年来几丁质酶在抗真菌感染方面的研究状况作一介绍.
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儿童和成人变应性鼻炎患者血清YKL-40检测 及初步探讨
目的 对儿童和成人变应性鼻炎(AR)患者血清YKL-40含量进行检测,探讨其相关性.方法 选取36例AR患者作为实验组,男18例,女18例,年龄9～52岁,平均(24.94±10.98)岁;其中儿童AR患者(<18岁)13例,成人AR患者(≥18岁)23例.健康成人5例作为对照组,男3例,女2例,年龄25～37岁,平均(30.8±4.58)岁.采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组外周血血清中的YKL-40含量.结果 儿童患者组、成人患者组和成人对照组血清YKL-40含量的中位数分别为107.44 ng/L、60.19 ng/L和71.38ng/L,三组比较差异有统计学意义(P=0.001).血清YKL-40含量进一步组间两两比较,儿童患者组显著高于成人患者组,差异有统计学意义(P<0.001);儿童患者组也高于成人对照组,差异有统计学意义(P=0.046);而成人患者组与成人对照组的差异无统计学意义(P=0.264).结论 血清YKL-40水平在AR儿童中升高,但YKL-40是否参与AR的早期发病及其机制尚待进一步探讨.
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家蝇几丁质酶基因的序列分析、克隆和诱导表达
目的 对EST筛选得到的家蝇几丁质酶Ⅰ(MDC Ⅰ)基因进行序列分析,克隆其eDNA序列并在大肠杆菌中表达.方法 采用EST测序技术从已构建的家蝇幼虫cDNA质粒文库中筛选到MDC Ⅰ基因,对其进行序列测定和分析.以该基因的cDNA文库质粒为模板,通过PCR方法对MDC Ⅰ基因进行扩增,以pET 28a(+)为载体构建重组质粒,再转化到表达宿主菌大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达.表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定.结果 MDC Ⅰ基因全长751 bp,编码251个氨基酸,理论分子量28,62家kDa;等电点5.78,有1个chitinase 18家族的活性位点.构建了具有正确基因序列的MDCⅠ重组表达质粒,重组蛋白在大肠杆菌BL21( DE3)中表达.结论 MDCⅠ基因可在原核表达系统中表达,为进一步研究该蛋白的生物学、免疫学活性奠定了基础.
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3个重要酶的多克隆抗体的制备条件优化
目的：制备优质的抗几丁质酶、α-甘露糖苷酶、谷胱甘肽转硫酶的多克隆抗体。方法利用纯化的不同免疫剂量的3种酶分别免疫不同兔龄的新西兰兔。结果使用0.3mg纯化蛋白、免疫6月龄的新西兰兔所制备出的抗体效价高、特异性好。结论这一结果为今后规模化制备相关多克隆抗体奠定了坚实的实验基础。
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人壳三糖酶基因的cDNA克隆、序列分析及其意义
目的:克隆人壳三糖酶(chitotriosidase)基因并进行序列分析.方法:分离和培养人外周血单核巨噬细胞,提取总RNA,反转录成cDNA,通过PCR方法扩增壳三糖酶编码基因,克隆至pUC19载体,测序并分析其序列.结果:所克隆的壳三糖酶基因在外显子10处没有24个碱基的重复序列.结论:该壳三糖酶基因属于野生型,在抗真菌病方面,可能有着重要而广阔的临床应用前景.
关键词： chitotriosidase基因 几丁质酶 克隆 真菌病 -
几丁质酶研究现状及展望
几丁质酶(EC3.2.1.14)催化几丁质水解为几丁寡糖和N-乙酰氨基葡萄糖,随研究深入,显示出越来越突出的生物学功能.本文介绍了几丁质酶的底物专一性、生理功能、抑制真菌功能及转基因研究现状.
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小球藻病毒PBCV-1溶壁活性研究
目的:了解小球藻病毒PBCV-1侵入小球藻NC64A细胞的溶壁活性.方法:通过已建立的Lysin-NC64A细胞壁消解敏感指示系统,进行PBCV-1病毒颗粒溶壁酶活的检测;应用冻融实验比较各种酶在溶壁过程中的作用.结果:PBCV-1病毒颗粒具有降解宿主细胞壁的活性,参与其溶壁活性的酶是几丁质酶、壳聚糖酶和β-1,3-葡萄糖苷酶,其中壳聚糖酶的活力高低并不与其裂解活性成正比.结论:几丁质酶可能在PBCV-1病毒侵入及释放过程中起主要作用,而壳聚糖酶只作为一个辅助成分.
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植物源农药杀虫与抑制几丁质酶活性的测定
目的 研究青蒿叶、桉树叶、红树植物白骨壤叶乙醇提取物对大蜡螟虫的毒杀作用以及对虫体几丁质酶活性的抑制作用.方法 采用室内药液喷虫法测定3种植物乙醇提取物的杀虫活性与抑制几丁质酶活性.结果 青蒿、桉树、红树植物白骨壤叶乙醇提取物对大蜡螟24h的校正死亡率分别为(69.00±3.87) %,(53.47±11.63) %,(18.60±6.70) %.对大蜡螟几丁质酶的抑制率分别为(20.33±1.42)%,(20.59±1.72)%,(13.56±1.58)%.结论 青蒿叶与桉树叶植物乙醇提取物的杀虫活性与抑制几丁质酶活性显著高于红树植物白骨壤叶乙醇提取物(P<0.05).
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棉铃虫单核衣壳核多角体病毒几丁质酶基因的克隆与表达
根据棉铃虫单核衣壳核多角体病毒(HaSNPV)几丁质酶基因的序列,设计引物,引入适当的酶切位点,利用PCR扩增出不含N末端信号肽以及C末端内质网定位肽的几丁质酶基因片段.将该基因片断克隆至原核表达载体pProEXHTb,经IPTG诱导,在大肠杆菌DH5α中获得了高效表达,表达产物的大小为60kD,含量占菌体总蛋白量的40%.利用来源于AcMNPV 几丁质酶的抗体对表达蛋白进行检测,获得特异性的显色信号,证实所获原核表达产物与杆状病毒的几丁质酶具有同源性.
关键词： 棉铃虫单核衣壳核多角体病毒 几丁质酶 克隆 表达 -
WHS3菌株产几丁质酶对棉铃虫HaSNPV的增效作用
WHS3 (Serratia marcescens)菌是一株几丁质酶的高产菌株,在诱导培养基中几丁质 酶的产量可达84.4μg/mL.通过对中国棉铃虫进行的生物测定表明:WHS3菌所产的几丁质酶 (A3)能有效地提高HaSNPV的毒力20%～70%, LT50、LT90比对照组缩短天数高可达1.1d、1.3d.
关键词： WHS3菌株 几丁质酶 棉铃虫核型多角体病毒 -
家蚕蚕蛹过敏原几丁质酶基因的克隆和原核表达载体的构建
目的 克隆、表达家蚕蚕蛹过敏原几丁质酶基因,并构建其原核表达载体.方法 提取家蚕的总RNA,RT-PCR克隆家蚕过敏原几丁质酶的全长基因,设计简并引物,扩增家蚕几丁质酶基因的完整开放阅读框,与pET-28a载体连接,构建原核表达载体.结果 成功克隆家蚕主要变应原几丁质酶基因并构建其原核表达载体.该基因含有长度为1 668 bp的开放阅读框,编码555个氨基酸.该蛋白质的相对分子质量为61 500,电点为5.78,编码序列与数据库中已知的家蚕几丁质酶基因的同源性为99%.结论 成功克隆家蚕蚕蛹主要过敏原几丁质酶基因并构建了原核表达载体,为家蚕蚕蛹过敏原几丁质酶的重组表达和免疫活性鉴定等奠定了基础.
