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重组人血小板型磷脂酶A2体外抗金黄色葡萄球菌的活性及其影响因素研究
目的:体外评价具有强正电荷性的重组人血小板型磷脂酶A2(RHP-PLA2)对金黄色葡萄球菌的杀菌活性,观察其在不同影响因素及水平下杀菌活性的变化.方法:用琼脂平板计数法测定杀菌活性,并对影响其杀菌活性的pH、Ca2+、Mg2+、肝素(带负电荷)等因素及水平进行测定.结果:RHP-PLA2杀灭99%金黄色葡萄球菌的低浓度(MBC)为0.08 ng·L-1.在MBC时,当pH为5.0、7.4、9.0时,RHP-PLA2杀菌率分别为44.4%、99.8%、99.5%;1~5 mmol·L-1 Ca2+适于RHP-PLA2发挥杀菌活性;5.12 mmol·L-1乙二醇二乙醚二胺四乙酸、10 mmol·L-1MgCl2及0.30×10-4 IU·L-1肝素可完全抑制RHP-PLA2杀菌作用.结论:RHP~PLA2杀菌活性受pH值和Ca2+浓度的影响.PLA2分子带的正电荷性是其发挥杀菌活性的关键因素.
关键词: 重组人血小板型PLA2 杀菌活性 影响因素 -
肽抗生素hPAB-β的化学合成及其杀菌活性的初步证实
目的化学合成、纯化并初步测定肽抗生素hPAB-β的活性,为后续研究奠定基础.方法采用固相合成法合成肽抗生素hPAB-β,经RP-HPLC纯化,用质谱进行分子量鉴定,谷胱甘肽氧化/还原法复性合成产物,进一步用阳离子交换柱纯化复性产物,收集主峰,药敏法初步测定合成肽的抗菌活性.结果合成肽抗生素hPAB-β的纯度为86.52%,经质谱分析,合成肽的分子量测定值与理论值相符.用谷胱甘肽氧化/还原法复性合成肽取得了较好的效果.复性产物对大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌具有杀灭作用.结论化学合成的肽抗生素hPAB-β具有良好的杀菌活性.
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人支气管肺泡灌洗液抗菌多肽探讨
用酶低温消化获得的人气管上皮细胞,气-液界面无血清培养,细胞呈现复层生长,细胞角蛋白免疫组化染色呈阳性反应,可确认为上皮细胞.琼脂糖弥散法显示培养细胞表面分泌物对绿脓杆菌有明显的抗菌活性.随底层培养基NaCl浓度的增高,杀菌环直径逐渐减小.当NaCl浓度分别为0、20、40、80、160、320mmol/L时,杀菌环直径分别为12、11.5、10、9、4.5、3mm.无血清培养基对绿脓杆菌无杀菌活性.
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抗菌蛋白葛栳纱在乳酸乳球菌中的表达研究
目的:观察人工设计的葛栳素的cDNA在乳酸乳球菌中的表达及其表达产物的抗菌作用.方法:采用统计学方法,统计同种族蛋白质Attacin A cDNA序列各种遗传密码子的出现频率 ,并以此为基础根据已知的葛栳素蛋白质序列设计其cDNA序列.采用PCR重叠延伸法合成葛栳素的cDNA序列,在测序完全正确后将葛栳素基因插入适合乳酸乳球菌MG1363表达的表达载体pNZ8048中,采用电穿孔法转化MG1363,转化的MG1363在电转化后涂布于恢复培养基SGM17 MC(含氯霉素)后放入厌氧培养箱中培养72小时后,挑单个菌落于SGM17培养液(无抗生素), 厌氧振荡培养72小时后收集细胞上清并进行杀菌活性的检测.结论:转化的MG1363细胞上清对大肠杆菌J5具有杀菌活性.结论:人工设计葛栳素的cDNA序列在乳酸乳球菌中得到表达,其表达产物具有抗菌作用.
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国内阿莫西林/克拉维酸钾复方制剂的现状
阿莫西林/克拉维酸钾(amoxicillin/clavulanicacid)复方制剂是英国比切姆公司于1981年首先推出的一个治疗耐药菌感染的优秀药物.阿莫西林生物利用度高、组织分布较好,具有较强的杀菌活性.克拉维酸是竞争性广谱β-内酰胺酶的抑制剂.该复方制剂不仅大大拓宽了抗菌谱,而且大幅度的增加了抗菌活性.该产品投产后,在国际市场上一直畅销.1994年该药品销售额位居世界抗感染药物的首位,2000年市场销售额达到20.94亿美元.
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杀菌性/通透性增加蛋白(BPI)模拟肽对铜绿假单胞菌形态学的影响
目的探讨杀菌性/通透性增加蛋白(BPI)模拟肽10342的体外杀菌作用及其对铜绿假单胞菌形态学的影响.方法培养铜绿假单胞菌PA103、PSPNCA9619、大肠埃希氏菌J5、V517和金葡球菌MSSA25923于对数生长期,调整细菌浓度为105CFU/ml,加入BPI模拟肽10342(100μg/ml),测定其对细菌的杀菌曲线.透射电镜和扫描电镜下观察BPI模拟肽10342(100μg/ml)与铜绿假单孢菌PA103 37℃共培养5、10、15、30min后细菌形态学的变化.结果BPI模拟肽10342具有明显的杀菌作用.与细菌作用5min后,细菌外膜出现轮廓模糊,10rain后细菌内膜出现不完整,至15rain细菌胞膜不清,胞质外流,30rain能见到细菌完全裂解.结论BPI模拟肽10342具有明显的杀菌活性,该活性与破坏铜绿假单胞菌的膜结构密切相关.
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棘白菌素类抗真菌药卡泊芬净
上世纪80年代以前,临床上可供选择的抗真菌药非常有限,直到酮康唑问世后,才相继有氟康唑、伊曲康唑和特比萘芬等药上市,为临床医生治疗浅、深部真菌感染提供了更多的选择.近年来,又研发出了更多的新型抗真菌药物,如专用于局部给药的阿莫罗芬、舍他康唑、利拉萘脂、氟曲康唑等;作用于系统的如伏力康唑、普沙康唑、拉夫康唑等,以真菌细胞壁为作用靶位的棘白菌素类(echinocandins)抗真菌药,卡泊芬净(caspofungin)[1]、米卡芬净(micafungin)和阿尼芬净(anidulafungin)等,这些药物的抗菌谱和抗菌活性均优于氟康唑和伊曲康唑[2],在强大的杀菌活性的同时又大大降低了系统的不良反应[3].
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N-取代-5-磺酰基吡唑肟酯衍生物的合成及生物活性研究
目的 为了获得更好生物活性的吡唑类衍生物.方法 以吡唑酮、盐酸羟胺、硫酚等化合物为原料合成吡唑新化合物,通过光谱鉴定其结构,检测其生物活性.结果 设计合成了5个未见文献报道的吡唑肟醚化合物.其结构经元素分析、1H NMR、IR确认.结论 初步生物活性测试表明,一些化合物具有一定的生物活性.
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人精浆中人鹅型溶菌酶2(HLysG2)的纯化及其酶学活性分析
目的 从人精浆中分离纯化天然人鹅型溶菌酶2 (HLysG2)并对其酶活性进行分析.方法 通过Western blot法检测HLysG2在精液中的分布;分别使用阳离子交换层析、甲壳素亲和层析和分子筛层析技术从精浆中分离目的蛋白并利用Westernblot法及质谱分析对其进行鉴定;使用高效液相色谱(HPLC)法分析纯化产物的纯度;使用比浊法测定HLysG2的适pH值、适离子浓度、适温度和标准酶活性;使用克隆形成单位法测定HLysG2的杀菌活性.结果 利用Western blot法在精浆中检测到HLysG2的存在;从人精浆中分离到相对分子质量(Mr)约21 500的目的蛋白并通过Western blot法及质谱分析鉴定其为HLysG2.纯化产物纯度达到99.0%以上.在pH6.4,30℃,Na+浓度为0.09 mol/L的条件下,HLysG2高酶活性达到13 800 U/mg.体外检测显示HLysG2对溶壁微球菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌具有杀菌作用,但对铜绿假单胞杆菌和大肠埃希菌的杀菌作用不显著.结论 使用层析方法可以从人精浆中成功分离纯化到天然HLysG,其在体外具有对Gram阳性菌的杀菌活性,提示其可能在男性生殖系统的先天免疫中发挥作用.
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头孢噻肟钠致迟发型药疹分析
头孢噻肟钠是第一个用于临床的第3代头孢菌素,对多种革兰阳性球菌及革兰阴性菌有强杀菌活性,价格低廉,不良反应发生率低,临床使用广泛,但不良反应报道也日渐增多[1],而其引发迟发型皮肤变态反应药疹的报告尚少,现就笔者发现17例明确由头孢噻肟钠过敏引发的迟发型皮肤变态反应药疹分析如下.
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阿米卡星对产ESBL大肠埃希菌的体外杀菌活性
目的:探讨临床常规剂量阿米卡星(amikacin, AMK)对产ESBL大肠杆菌的AMK敏感株是否有杀菌作用. 方法:采用时间-杀菌曲线法进行体外实验,AMK浓度根据模拟健康人体内给予400 mg/L静脉点滴后2,4,6,8和12 h内的平均血药浓度设定. 结果:2,4,6 h组待测菌分别在设定时间内菌落数降至0.1%以下,8,12 h组待测菌菌落数未在设定时间内降至0.1%以下. 结论:临床常规剂量的AMK对产ESBL大肠杆菌(AMK敏感株)具有良好的杀菌活性,其主要杀菌作用在给药后的前4 h.
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改良人源LL-37杀菌肽的融合表达及其杀菌活性
目的:将改良LL-37多肽以融合肽形式表达、纯化,并初步研究其杀菌活性. 方法:将编码改良的LL-37多肽的DNA序列放入载体pET-30a(+),转入工程菌BL21 star(DE3)中,用IPTG诱导表达得到含6×His标记的改良融合蛋白LL-37. 再以TALON柱芯亲和层析、SDS-PAGE和Western blot鉴定后,用FXa裂解融合肽. 将裂解后多肽进一步用强阳离子交换柱Macro-Prep High S纯化、收集各洗脱峰, 脱盐、冻干. 采用抑菌圈法检测改良LL-37的抗菌活性. 结果:改良的LL-37多肽于载体pET-30a(+)在杆菌BL21 star(DE3)中高效融合表达,用凝胶扫描显示融合蛋白的表达量约占全菌蛋白的35%. 融合蛋白经纯化后用SDS-PAGE鉴定在Mr 4000处见单一条带. 经抑菌圈法检测改良的LL-37多肽对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌都具有很好的杀菌力. 结论:改良的人源性LL-37多肽以原核细胞进行融合表达是可行的,并具有较强的杀菌活性.
关键词: 人源杀菌肽LL-37 蛋白质融合表达 杀菌活性 -
什么是抗菌药物作用的时间依赖性和浓度(剂量)依赖性
抗菌药物作用的时间依赖性是指抗菌药物的杀菌活性与抗菌药物同细菌接触的持续时间成正比,即药物的抗菌疗效取决于药物在组织中浓度维持在小抑菌浓度(MIC)以上的持续时间.
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青霉素静滴及其他
青霉素是一种重要的β-内酰胺抗生素.因其具有杀菌活性强、毒性低、价格低廉、使用方便等优点,目前仍是处理致敏菌所致各种感染的首选药物,在基层单位更是经常使用.
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抗菌肽葛佬素在非洲绿猴肾细胞株COS-7中的表达及其活性的初步分析
目的观察自行设计的葛佬素cDNA在非洲绿猴肾细胞株COS-7中的表达及其表达产物的抗菌作用. 方法分析同种族蛋白质Attacin A cDNA序列各种遗传密码子的出现频度,结合已知的葛佬素蛋白质序列,设计、合成其cDNA序列.经测序验证后,将葛佬素基因插入真核细胞表达载体pCDSI中, 构建载体pBZHG.随后以脂质体为载体,对COS-7细胞进行质粒pBZHG和空载体pCDSI的转染,72 h后收集细胞培养上清液,进行杀菌活性的检测(以正常COS-7细胞培养上清作对照). 结果人工设计的葛佬素cDNA序列在COS-7中得到表达.与转染空载体的细胞和正常细胞比较,转染pBZHG的COS-7细胞培养上清对大肠杆菌J5具有杀菌活性. 结论笔者所设计的葛佬素cDNA序列是正确的,由此可为深入研究葛佬素的抗菌及抗内毒素作用提供实验依据.