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新型免疫抑制剂FTY720对肾间质纤维化大鼠管周毛细血管病变的预防作用
肾小管周围毛细血管(PTC)减少及缺氧可以作为独立因素参与肾小管间质损伤及纤维化的进程,肾小管上皮细胞组成分泌血管内皮生长因子(VEGF)是维持PTC 正常结构与功能的重要因素之一式[1] .FRY720是新合成的免疫抑制剂,由冬虫夏草抽提物中具有免疫抑制作用的成分ISP-1(多球壳菌素)化学修饰而成 [2],可以延缓肾间质纤维化进程 [3],而其延缓肾间质纤维化作用是否与PTC有关尚不清楚,为此通过动物实验观察FTY720对肾间质纤维化中微血管病变的作用.
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固相萃取结合HPLC测定蝉花菌丝体中多球壳菌素的含量
目的 建立蝉花菌丝体中多球壳菌素含量的固相萃取结合高效液相色谱测定法.方法 高效液相色谱法,甲醇超声提取,固相萃取小柱纯化,ODS柱,流动相为乙腈-水(65:35),流速1.0 mL·min-1,柱温30℃,检测波长203nm.结果 多球壳菌素分离良好,加样回收率为98.95%,RSD为2.22%(n=6),在0.15~7.54 μg内呈现良好的线性关系.结论 该方法简便易行、灵敏、重现性好,可用于蝉花菌丝体中多球壳菌素含量的测定.
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芬戈莫德类似物的设计合成及抗肿瘤活性研究
目的 对基于由冬虫夏草提取物多球壳菌素ISP-1结构改造而得到的药物芬戈莫德进行结构修饰,并初步考察其类似物的抗肿瘤活性.方法 以不同J的取代苯为原料,按照本课题组开发的芬戈莫德合成路线,经过傅克酰基化、亚硝基SN2取代反应、羰基还原、双亨利反应和硝基还原反应制得目标化合物.通过MTT方法,检测化合物对3种人类肿瘤细胞Siha、PC-3和MKN-45的抗肿瘤活性.结果 制得芬戈莫德(1)及其18个类似物(2~19),化合物10、11、12具有与芬戈莫德相当的抗肿瘤活性.结论 化合物2~10及12~19为未见文献报道的新化合物,为基于1-磷酸鞘氨醇(S1P)受体拮抗作用的抗肿瘤药物的发现提供依据.
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神经酰胺诱导LX-2细胞凋亡抑制肝纤维发生的作用
目的:探讨神经酰胺对人源肝星状细胞株(HSCs)LX-2的影响以及在肝纤维化治疗中的作用,为寻求肝纤维化治疗的新方法提供理论依据.方法:体外培养人源肝星状细胞LX-2,分为正常细胞对照组及神经酰胺C2给药组(C2终浓度为30、45、60μmol/L),应用神经酰胺从头合成途径的限速酶即丝氨酸棕榈酰转移酶的特异性抑制剂多球壳菌素(myriocin)进一步分析神经酰胺的作用.四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测LX-2的细胞增殖情况,酶消化法测定上清中羟脯氨酸(Hyp)的含量,比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)的活性,Westemblot法检测bax、bcl-2及caspase-3的蛋白表达量.结果:C2各浓度组对LX-2的增殖均有明显抑制作用,且具有剂量依赖性(P<0.05);LX-2经C2处理后细胞内羟脯氨酸含量显著下降(P<0.05);LDH活性与对照组比较均无显著性差异;C2下调LX-2中抗凋亡蛋白bcl-2的表达,上调促凋亡蛋白bax与凋亡执行效应分子caspase-3的表达(P<0.05),bax/bcl-2比值增大.但是,以myriocin 15 μmol/L作用LX-2细胞24 h后,细胞增殖较对照组增多,羟脯氨酸的含量明显升高(P<0.05);LDH活性与对照组比较无显著性差异;bel-2蛋白表达上调,bax、caspase-3蛋白表达下调(P<0.05),bax/bcl-2比值减小.结论:神经酰胺可通过上调bax和caspase-3的表达,下调bcl-2的表达而诱导LX-2细胞凋亡,同时抑制其增殖,从而减少羟脯氨酸的生成,产生抑制肝纤维发生的作用.
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FTY720对大鼠肝细胞移植后脾脏T细胞亚群的实验研究
目前,肝细胞移植已经成为继原位肝移植后又一治疗各类肝功能衰竭及遗传代谢性肝脏疾病的有效方法,但是如何提高肝细胞移植的成活率成为医务工作者需解决的棘手问题。新型免疫抑制剂FTY720是一种新合成的,将冬虫夏草提取物中具有免疫抑制作用的成分多球壳菌素(ISP-I)进行结构改造[1],其在保护移植器官方面有良好的效果。本研究主要通过动物实验探究新型免疫抑制剂FTY720在保护肝脏移植方面的免疫耐受的作用机制。
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芬戈莫德合成路线图解
芬戈莫德(fingolimod,1),化学名为2-氨基-2-[2-(4-正辛基苯基)乙基]-1,3-丙二醇盐酸盐,是诺华公司研发的一种免疫抑制剂,是将子囊菌冬虫夏草的有效成分多球壳菌素(ISP-1)进行结构改造而成[1],意在减少ISP-1的毒性并改善它的理化性质,并终明确了其具有免疫抑制活性所必需的化学结构[2].本品主要有两种作用机制:一是可以改变淋巴细胞的归向,改变细胞间黏附分子-1的合成及表达,可能通过改变Bc1-2/Bax的比值诱导淋巴细胞凋亡[3];二是调节神经细胞的S1P受体[4].2010年美国FDA批准上市,商品名Gilenya,临床用于治疗复发型多发性硬化症.
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多球壳菌素对高糖诱导肾小球系膜细胞肥大及细胞外基质合成的影响
目的观察高糖对大鼠肾小球系膜细胞(GMC)大小及分泌细胞外基质(ECM)成分的影响及从冬虫夏草中提取的免疫抑制活性成分--多球壳菌素(ISP-1)的干预效应.方法正常糖(5.6 mmol/L D-glucose)及高糖(25.2 mmol/L D-glucose)条件下培养GMC,并设高糖加ISP-1(100 mg/L)组.采用流式细胞仪测各组GMC体积[前向角散射光(FSC)平均强度表示细胞大小,ELISA检测高糖条件下不同时间点(0、24、48、72 h)细胞培养上清液中纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)、Ⅲ型前胶原(PcolⅢ)、透明质酸(HA)及层黏连蛋白(LN)含量及ISP-1干预后分泌水平变化.结果同正常糖组比较,高糖可使GMC发生肥大,同时高糖环境下GMC分泌的ColⅣ、FN、PcolⅢ、HA及LN明显增加(P<0.05),48~72 h更明显;ISP-1能有效抑制高糖的上述作用(P<0.05).结论高糖可致GMC肥大和ECM合成增加,ISP-1对高糖所致GMC肥大和ECM合成增加有抑制作用,有望用于糖尿病肾病防治.
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多球壳菌素对激活的大鼠肾小球系膜细胞增生的抑制作用
目的 探讨多球壳菌素(ISP-I)对体外激活的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)的调控作用.方法 分别采用MTT法及流式细胞术检测IL-1、IL-6对GMC的激活作用及ISP-I对激活后GMC增生的抑制作用.结果 MTT法结果显示10 U/ml IL-1及1 000 U/ml IL-6刺激GMC 24、48 h后,反映细胞增生程度的吸光度(A)值较对照组增高(P<0.05);激活的GMC在25~50μg/ml ISP-I作用24、48 h后的A值较对照组低(P<0.05).流式细胞术检测的结果与MTT法一致,即GMC被激活12、24、36 h时的细胞增生率高于对照组(P<0.05);激活的GMC在100μg/ml ISP-I作用下,细胞增生率低于对照组(P<0.05).结论 ISP-I对激活后的GMC有明显抑制作用.
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多球壳菌素对高糖诱导肾小球系膜细胞cyclinD1表达的影响
目的 多球壳菌素(ISP-1)是冬虫夏草中提取的一种新型免疫抑制剂,本研究旨在观察其对高浓度葡萄糖诱导的离体大鼠肥大肾小球系膜细胞(GMC)细胞周期蛋白D1(cyclinD1)表达的影响,并探讨其机制.方法 利用体外培养大鼠GMC,予以高浓度葡萄糖(450mg/dL D-glucose,HG)诱导GMC细胞肥大模型,同时以正常浓度糖(100mg/dL D-glucose,NG)培养作对照,并以加用ISP-1(450mg/dL D-glucose+100μg/mL ISP-1,ISP-1)干预作为干预组.采用流式细胞术检测GMC cyclinD1的表达.结果 与NG组相比,HG组cyclinD1表达明显增高(P<0.05),且随时间的增加逐渐增强.ISP-1干预后可明显抑制高糖上调的cyclinD1表达,其在干预后48h和72h的表达水平与NG组相比差异无统计学意义.结论 高浓度葡萄糖可上调GMC cyclinD1的表达,而ISP-1可明显抑制高糖上调的cyclinD1表达的作用,这可能是ISP-1抑制高糖诱导GMC肥大的重要机制.
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多球壳菌素对肾小球系膜细胞肥大及细胞周期蛋白的影响
糖尿病肾病及高血压肾病会导致慢性肾功能衰竭(CRF),其病理改变为肾小球系膜细胞(GMC)肥大以及系膜基质的积聚,并终导致肾小球硬化[1].目前尚缺乏有效的药物来阻滞肾脏病变的进展.临床观察表明虫草可延缓肾脏病变的进展.近年从虫草分离出多球壳菌素(ISP-1),该物质具有较强的免疫调节活性,有可能是虫草治疗肾病的物质基础.
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虫草类药材中多球壳菌素含量的测定研究
目的:本研究旨在筛选出我国常见虫草中ISP-1含量高的种类,为下一步生产ISP-1提供优质菌种.方法:首次系统地使用HPLC对冬虫夏草、凉山虫草、蛹虫草、古尼虫草和亚香棒虫草中的ISP-1含量进行测定.结果:发现五种虫草中都含有ISP-1,蛹虫草中含量高达0.7933 mg/g,远高于冬虫夏草.结论:从测定结果来看,蛹虫草、凉山虫草、亚香棒虫草中ISP-1含量高于冬虫夏草.可以为下一步生产ISP-1选择优质菌种提供基础.
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柱前衍生化高效液相色谱法测定蝉花菌丝体中多球壳菌素含量
目的:建立柱前衍生化高效液相色谱法测定蝉花菌丝体中多球壳菌素含量.方法:样品采用甲醇超声提取,固相萃取小柱纯化,用邻苯二甲醛衍生化,高效液相色谱法测定.色谱柱为Eclipse XDB-C8柱(150 mm ×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-水(60:40),流速1.0 mL·min-1,检测波长260 nm,柱温30℃.结果:多球壳菌素浓度在6.0~360.0μg·mL-1范围内与其衍生物峰面积呈良好的线性关系(r=0.9985);平均加样回收率(n=6)为98.9%,RSD=2.9%.结论:方法选择性好,灵敏度高,结果准确、可靠,可用于测定蝉花菌丝体中多球壳菌素含量.