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抗DNA酶B滴度测定在风湿性心脏病诊断中的价值
目的探讨抗DNA酶B检测用于风湿性心脏病诊断的价值.方法检测43例风湿性心脏病伴活动性风湿热,39例风湿性心脏病不伴风湿热活动和40例非风湿性心脏病(对照组)病人血清的抗DNA酶B抗体,并进行对比.结果风湿性心脏病伴活动性风湿热组,风湿性心脏病不伴风湿热组和对照组抗DNA酶B阳性率分别为81.4%,20.1%和5%,与对照组比较,前两组的P值分别为＜0.001和＜0.05.结论抗DNA酶B检测可以作为诊断风湿性心脏病伴活动性风湿热的一个指标.
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85例支原体肺炎核酸分子杂交检测结果报告
支原体为临床引起原发性非典型性肺炎的一种重要病原体,晚近报告颇多,并有局部流行趋势[1].本病诊断长期依赖于血清抗体滴度测定及病原体分离培养等.但因存在耗时较久,检出阳性率颇低以及灵敏性和特异性欠佳等缺点,致使不能达到临床早期诊断的目的.
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MF-59佐剂流感疫苗在老年人中的安全和免疫原性
几乎每年冬季均有流感病毒流行，A型或B型发病率高达40%，并持续6周以上。特别是发达国家，65岁以上老人80%～90%因流感而死亡。作者报道在流感季节，老年人中使用MF-59佐剂流感疫苗的安全性和免疫原性，并与无佐剂疫苗作比较。 对象与方法意大利米兰男性和女性门诊老年人，任何病人有已知或怀疑为免疫抑制而影响免疫原评价和明显影响安全性评价的疾病，均排除在外。 首次免疫的211名随机分成2组：①无佐剂灭活亚单位流感病毒疫苗(AGRIPPALTM)组；②预先混合，含同样剂量亚单位疫苗和佐剂MF-59(FLUADTM)组。所有病人按原计划继续第2和第3次免疫。73名接受无佐剂疫苗，80名像第2次免疫一样为佐剂疫苗，第3次免疫分别为55名和62名。 观察疫苗反应，每剂疫苗30min后立即注射，注射后6h应记录温度及局部和全身反应。随后6d，每天1次，所有反应均应随访直到消除。 流感病毒毒株抗原选自WHO。MF-59为混合无菌水包油乳剂。乳化用物理稳固乳剂和小油滴在高温下混匀，加吐温80和山梨聚糖三酸甘油防止融合小滴，终疫苗为亚单位抗原和佐剂混合的MF-59。稳定性至少12个月，0.5ml剂量三角肌内注射。 血清学测定为接种当天、接种前和接种后28d血清标本，3种流感疫苗抗原(A/H1N1、A/H3N2和B)用凝集抑制(HI)检测抗体滴度。HI法用0.4%豚鼠红细胞代替鸡红细胞。疫苗中亚单位抗原包括纯化和检测所用。为了评价首次和第2次免疫，开始测定的血清稀释为1∶8，第3次免疫为1∶10。 免疫原性，研究首次免疫98名为非佐剂疫苗，94名为佐剂疫苗，第2次免疫分别为62和71，第3次免疫分别为51和61。 仅首次免疫，中和抗体滴度测定抗疫苗AH3N2病毒株，A北京32/92和抗AH3N2病毒株，A山东19/93。 结果两组平均年龄相似，FLUADTM和AGRIPPALTM(64～87)。性别(51%和56%为男性)，既往抗流感免疫史(两组为86%)。0～3d注射部位疼痛FLUADTM组要多于AGRIPPALTM组。两组免疫后48h注射部位疼痛完全消失。FLUADTM组中62%为轻度，其余为中度。对照组87%为轻度，注射部位发红无显著差异。FLUADTM组第3次免疫后较多见注射部位硬化，(16%VS 4%对照组P<0.05)。全身反应率低，3年中除1例外，两组相似。FLUADTM组第2次免疫后常见头痛(对照组10%VS 3%P<0.05)，FLUADTM组类似高比率头痛，首次和第3次免疫后则无。 于首季免疫原性用HI滴度测定28d FLUADTMGMT组的B、A/H3N2和A/H1N1抗原高于对照组，对B和A/H3N2抗原百分比显示当天抗体滴度增加4倍，28d滴度≥128，显著高于FLUADTM组。 于免疫前后检测抗流感A/H3N2株，A/北京/32/92中和抗体滴度，FLUADTM组中A/山东/9/93中和抗体滴度显著高于对照组。 讨论作者后指出，MF-59佐剂流感疫苗在老年人中具有良好的安全和免疫原性，且无特殊局部和全身反应。(高巧英摘张伊璜校)
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乙型肝炎病毒(adr亚型)重组逆转录病毒包装及滴度测定
目的 包装乙型肝炎病毒(adr亚型)重组逆转录病毒并进行滴度测定,为下一步构建乙型肝炎病毒(adr亚型)转基因小鼠奠定基础.方法 将乙型肝炎病毒(adr)全基因组插入到逆转录病毒载体pLNCL中获得了乙型肝炎(adr)重组逆转录病毒载体,鉴定正反向后,脂质体转染PA317包装细胞,G418抗性压力下进行筛选得到阳性细胞克隆,扩大培养后进行滴度测定,选取产毒率高细胞克隆株,然后扩大培养、浓缩,进行滴度测定.结果 分别获得HBV(adr)全基因组正向和反向插入的重组逆转录病毒.正连重组逆转录病毒载体经PA317细胞包装,经筛选、浓缩后滴度为106 CFU/ml,反连重组逆转录病毒载体经PA317细胞包装,经筛选、浓缩后滴度为105 CFU/ml.结论 PA317细胞包装了含乙型肝炎病毒(adr)全基因组的重组逆转录病毒.
关键词： 乙型肝炎病毒(adr) 重组逆转录病毒载体 转染 包装 滴度测定 -
冻干乙型脑炎活疫苗的热稳定实验分析
冻干乙脑活疫苗制品检定项目中,有一项热稳定性实验,系将疫苗存放于37℃ 7d,然后与同批次存放于4℃的疫苗同时检测其病毒滴度,以检查疫苗滴度的下降情况.本文作者应用武汉生物制品研究所生产的数批冻干乙脑活疫苗在37℃存放不同天数,观察疫苗的稳定性,以选取适宜的时间进行热稳定性检定.作者选取武汉所生产的乙脑活苗4批,批号为991231、991232、2000101、20000102,分别存放于4℃,37℃1、3、5、7、9d,然后用蚀斑法进行病毒滴度测定,当疫苗在37℃存放5天时,滴度下降较快,且达到局部范围内的低值,几批疫苗的实验结果非常接近(如作曲线图可以看到在37℃ 5 d 是一个明显的折点,5d后反而无大变化.)
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消化系疾病的实验室诊断新方法
胃肠疾病若干相关自身抗体的检测一、乳糜泻(CD)CD又称麸质敏感性肠病、非热带口炎性腹泻,是因对麸质不耐受所致的小肠粘膜损害,在欧洲、北美洲和澳州较常见,而在亚洲和非洲相对少见.目前用于诊断CD的实验室检查包括以下几项. 1.抗肌内膜自身抗体(IgA-EmA):通常采用免疫荧光法进行测定,人脐带成分或猴食管常被用作测定基质.IgAEmA是协助诊断CD的经典检测指标,特异性一般＞95%.因此,IgA-EmA阳性者常需作小肠活检以明确诊断. CD患者经严格去麸质饮食后,其IgA-EmA滴度可恢复正常.因此,IgA-EmA滴度测定也可用于检测去麸素饮食的临床疗效.值得注意的是,CD患者常伴有选择性IgA缺乏症,对这些患者应同时测定IgG-EmA,以免漏诊.
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人分化抑制因子3重组腺病毒的制备及鉴定
目的 构建人细胞分化抑制因子3(Id3)重组腺病毒载体,制备并鉴定人Id3重组腺病毒,为研究Id3基因在细胞中的表达及其对细胞功能的影响奠定基础.方法 以pUC57-Id3为模板扩增人Id3基因,克隆到质粒pUC18中,pUC18-Id3经EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切补平之后与载体pAxCAwtit连接,构建重组粘粒载体pAxCAwtit-Id3,包装试剂盒包装重组粘粒,转染大肠埃希菌,鉴定正确后大量制备重组pAxCAwtit-Id3,经酶切线性化后,用脂质体法转染HEK293A细胞,包装成重组腺病毒Ad-Id3,制备高滴度的重组腺病毒Ad-Id3,利用TCID_(50)法计算重组腺病毒滴度,经RT-PCR及western blot检测Id3基因的表达.结果 Id3基因成功克隆到腺病毒载体中,重组腺病毒滴度为1.8×10~(10)PFU/ml,用RT-PCR检测到Id3基因的转录产物,westernblot检测到Id3在A549细胞中的高水平表达.结论 成功构建Ad-Id3重组腺病毒载体,并在A549细胞中得到高效表达.
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ELISA试验的质量控制
酶联免疫吸附试验(ELISA)是一种常用的固相酶免疫测定方法,是在放射免疫分析理论的基础上发展起来的一种非放射性标记免疫技术,具有灵敏度高、特异性强、重复性好,所用试剂稳定、易保存,试验操作简便,结果判断客观等特点[1].既适合大规模筛查试验如人群健康体检和流行病学筛查,又可以用于少量标本的检测;既可定性、定量分析又可进行滴度测定等,因此被广泛应用于临床检验和卫生检验等方面.但ELISA的影响因素较多,必须加强质量控制才能充分发挥其方法学的优点,更好地为临床检验和卫生检疫服务.
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脂肪特异性蛋白27基因的慢病毒载体的构建及其在星状细胞中的表达
我们通过构建脂肪特异性蛋白27( Fsp27)基因的慢病毒载体,并感染活化态肝星状细胞(HSCs),为探讨该基因的抗纤维化作用奠定基础.一、材料与方法1.材料:293T及HSCs由温州医学院实验动物中心提供;病毒构建所需试剂分别购自Genechem公司、Promega公司及TaKaRa公司.2.Fsp27重组表达载体的构建:设计Fsp27基因引物序列,以大鼠cDNA为模板进行聚合酶链反应( PCR)扩增.将PCR产物和载体连接后转化感受态大肠杆菌,对长出的克隆菌落进行PCR鉴定及测序分析.3.慢病毒颗粒的包装和生产:将Fsp27慢病毒与293T细胞的混合培养.收集细胞上清进行病毒滴度测定.收集感染3d后的293T细胞.提取蛋白电泳鉴定.
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人骨形态发生蛋白-7重组腺病毒载体的构建
目的 为了研究人骨形态发生蛋白-7(hBMP7)导入骨缺损模型中的治疗作用,构建重组腺病毒载体.方法 将hBMP7基因全长定向克隆入穿梭质粒pACCMV-plpA,构建pACCMV/rhBMP7穿梭质粒,应用磷酸钙-DNA共沉法将穿梭质粒及包装质粒PJM17共转染293细胞,经细胞内同源重组后,构建骨形态发生蛋白-7重组腺病毒Ad pACCMV/rhBMP7.结果 成功构建了重组质粒pACCMV/rhBMP7,经293细胞包装后,扩增纯化测定病毒滴度为1×1011pfu/mL.结论 成功构建人骨形态发生蛋白-7重组腺病毒Ad pACCMV/rhBMP7,为骨缺损、骨不连的基因治疗奠定了基础.
