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藏药甘青乌头抗单纯疱疹病毒Ⅱ型体内外作用研究
目的 探讨藏药甘青乌头抗单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)的作用和机制.方法 MTT法测定甘青乌头对Vero细胞的毒性,采用细胞病变法和蚀斑法测定甘青乌头体外抗病毒活性,以半数抑制浓度和治疗指数为评价指标;定量荧光PCR法和蚀斑法考察甘青乌头体外抗病毒作用机制.用HSV-2建立小鼠脑炎模型,对甘青乌头体内抗单纯疱疹病毒的抗病毒活性进行评价.结果 甘青乌头对Vero细胞的半数中毒浓度(CC50)为5.57 g·L-1.细胞病变法和蚀斑法测得甘青鸟头的半数有效浓度(EC50)分别为2.25,1.68 g·L-1,治疗指数TI分别为2.47,3.32.LD50值为0.85 g·kg-1.甘青乌头延长了小鼠的平均存活时间,对小鼠的死亡显示出10%的保护率.甘青乌头能直接灭活HSV-2,能够显著抑制HSV-2的感染性;对病毒吸附到细胞没有抑制作用,能抑制HSV-2大分子的增值.抑制HSV-2 DNA合成的抑制倍数达102.结论 甘青乌头体外具有较强的抗HSV-2的活性,抗病毒作用是通过抑制病毒复制循环的各个环节起作用的.
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麻腮风水痘联合减毒活疫苗中水痘病毒滴定方法的比较
目的 探讨麻腮风水痘联合减毒活疫苗(measles,mumps,rubella and varicella combined vaccine,live,MMRV)中水痘病毒在人二倍体细胞(MRC-5和2BS)上蚀斑的形成情况,建立不中和法检测MMRV中水痘病毒滴度,并进行验证.方法 观察麻疹、腮腺炎和风疹病毒在人二倍体细胞上形成的细胞病变形态,以及风疹病毒对水痘病毒蚀斑形成的影响;通过完全中和、部分中和以及未中和等方法,检测MMRV中水痘病毒的滴度,终建立不中和法检测水痘病毒滴度,并对方法进行重复性和准确性验证.结果 风疹病毒不高于4.0 lgCCID50/孔时,水痘病毒在MRC-5或2BS细胞中产生的蚀斑形态发生微小改变,但蚀斑数量与完全中和风疹病毒后差异无统计学意义(P＞0.5).采用完全中和、部分中和以及未中和等方法检测MMRV中水痘病毒的滴度差异无统计学意义(P＞0.5),且不中和法检测水痘疫苗病毒滴度的重复性(RSD为2.3％)和准确性(回收率为97.8％～100％)均较好.结论 在人二倍体细胞(2BS或MRC-5)上,不使用抗血清中和直接进行四联疫苗中水痘病毒的滴度检测完全可行,可替代MMRV中经典的使用抗体中和的病毒滴定方法.
关键词： 麻腮风水痘联合减毒活疫苗 二倍体细胞 水痘病毒 病毒滴度 蚀斑法 -
应用蚀斑法滴定17D黄热疫苗效力
目的用蚀斑法代替小鼠法滴定黄热疫苗效力.方法用Vero细胞蚀班法与小鼠法同时滴定14批黄热疫苗.结果两种方法滴定结果差异无显著意义(t=1.14,P>0.05),二法呈正相关(r=0.5289,PFU与LD50的比率为5.75,在WHO推荐的3～30之间[1]).判定结果时间由原来的21d缩短为6d.结论蚀斑法具有快速、经济、操作简单、重复性好诸多优点,可以代替小鼠法.
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冻干乙型脑炎活疫苗的热稳定实验分析
冻干乙脑活疫苗制品检定项目中,有一项热稳定性实验,系将疫苗存放于37℃ 7d,然后与同批次存放于4℃的疫苗同时检测其病毒滴度,以检查疫苗滴度的下降情况.本文作者应用武汉生物制品研究所生产的数批冻干乙脑活疫苗在37℃存放不同天数,观察疫苗的稳定性,以选取适宜的时间进行热稳定性检定.作者选取武汉所生产的乙脑活苗4批,批号为991231、991232、2000101、20000102,分别存放于4℃,37℃1、3、5、7、9d,然后用蚀斑法进行病毒滴度测定,当疫苗在37℃存放5天时,滴度下降较快,且达到局部范围内的低值,几批疫苗的实验结果非常接近(如作曲线图可以看到在37℃ 5 d 是一个明显的折点,5d后反而无大变化.)
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BHK21细胞对蚀斑法检测乙型脑炎减毒活疫苗结果的影响分析
目的 分析BHK21细胞对蚀斑法检测乙型脑炎减毒活疫苗系统的影响,降低检测系统误差.方法 比较BHK21细胞以不同频次传代培养时的细胞生长状态,以及以不同接种浓度进行疫苗病毒滴度检测时,对检测系统稳定性的影响.结果 BHK21细胞培养4d传代,其形态良好、边缘光滑、胞质透光性好、细胞分散均匀、细胞活率达到95％以上;BHK21以105细胞/mL浓度接种时,乙型脑炎减毒活疫苗及其病毒滴度参考品的变异系数小,分别为0.66％和0.64％.结论 BHK21细胞培养4d传代、以105个/mL浓度接种时用蚀斑法检测病毒滴度系统稳定,可供乙型脑炎减毒活疫苗滴度检测参考.
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森林脑炎中和抗体蚀斑减少试验方法的建立及疫苗免疫人体后抗体检测
为评价森林脑炎疫苗的免疫效果,采用森林脑炎病毒的BHK细胞适应株,以BHK细胞为培养基质,建立了检测森林脑炎中和抗体的蚀斑减少试验方法,并用蚀斑减少法、小鼠法及ELISA法检测了原制森林脑炎灭活疫苗免疫人体后的中和抗体水平;免疫血清为按疫苗免疫程序免疫健康志愿者采血分离而制备.结果表明蚀斑减少法与小鼠法的特异性相近且敏感性较好、简便快速,缩短检测周期,为疫苗流行病学调查及新型疫苗的研究提供了快速的检测方法;原制灭活疫苗人体二针免疫后,人体血清中和抗体阳转率仅30%左右,急需提高现用原制灭活疫苗的质量.
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应用病毒蚀斑法滴定狂犬病毒毒力的方法验证
目的:建立病毒蚀斑法作为狂犬病毒毒力滴定的比较精确的方法.方法:我们采用比较法,平行测定35批狂犬病Vero细胞疫苗,比较病毒蚀斑法与NIH小鼠法测定狂犬病毒滴度的结果.结果:病毒蚀斑法和NIH小鼠法具有一定相关性,且判定结果时间由NIH小鼠法测定的21天缩短为病毒蚀斑法测定的10天.结论:病毒蚀斑法具有快速、经济、操作简单、重复性好等诸多优点,适用于狂犬疫苗生产研究中的病毒毒力滴定.
