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BHK细胞文献资料
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双亚型(H5/H7)流感病毒血凝素基因真核表达质粒的构建及其在BHK细胞中的表达
目的 构建双亚型(H5/H7)流感病毒血凝素真核表达载体,并在幼仓鼠(BHK)细胞中进行表达.方法 通过PCR方法分别改造流感病毒H5亚型血凝素(HA)和H7亚型HA基因片段,在融合片段间引入具有柔性功能的(G_4S)_3 linker和具有自裂解功能的口蹄疫蛋白2A linker.将融合后的基因片段H5HA-H7HA克隆至真核表达载体pVAX1.选用BHK真核表达细胞系,用脂质体转染法将纯化后的表达质粒在细胞进行表达,转染后48 h,用间接免疫荧光法(IFA)检测目的基因的表达情况.结果 表达双亚型(H5/H7)流感病毒血凝素基因的重组真核表达质粒pVAX1-H5HA-H7HA 经酶切和测序证明构建正确.转染重组质粒的BHK细胞可检测到目的蛋白的表达.结论 成功构建了真核表达质粒pVAX1-H5HA-H7HA,并在BHK真核细胞中正确表达,为H5、H7双亚型核酸疫苗的研究奠定了基础.
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应用病毒蚀斑法滴定狂犬病毒毒力的方法验证
目的:建立病毒蚀斑法作为狂犬病毒毒力滴定的比较精确的方法.方法:我们采用比较法,平行测定35批狂犬病Vero细胞疫苗,比较病毒蚀斑法与NIH小鼠法测定狂犬病毒滴度的结果.结果:病毒蚀斑法和NIH小鼠法具有一定相关性,且判定结果时间由NIH小鼠法测定的21天缩短为病毒蚀斑法测定的10天.结论:病毒蚀斑法具有快速、经济、操作简单、重复性好等诸多优点,适用于狂犬疫苗生产研究中的病毒毒力滴定.
