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小切口二尖瓣腱索拉伤联合冠脉回旋支Ameroid环植入建立小型猪缺血性二尖瓣返流模型
目的：探索一种简便、稳定、均一的建立大动物慢性IMR模型的方法。
方法：12只西藏小型猪，体重20~25 kg，雄性。动物术前禁食12~16 h，常规麻醉（氯胺酮35 mg/kg，地西泮1.5 mg/kg），行气管插管并接呼吸机。于左侧腋后线水平第2-3肋间开胸，暴露左心耳，利用小切口自制拉钩定位拉伤二尖瓣后叶腱索联合冠脉左回旋支Ameroid环植入建立小型猪IMR模型。分别在术前、术后即刻、1周、2周、4周和8周和12周通过心电图、血清学、冠脉造影、超声心动图、核磁共振检查对动物模型进行评价。 -
两种建立慢性舒张性心衰模型方法的比较
目的：采用微创方法，建立一种稳定、快速成模且贴近临床复杂发病机制的小型猪慢性舒张性心衰模型。
方法：选取健康成年西藏小型猪随机分为二尖瓣返流组和二尖瓣返流合并左冠状动脉回旋支（LCX）慢性缺血组。动物常规麻醉，气管插管接呼吸机，左侧第3~4肋间微创开胸，采用自制挂钩经左心耳入左心室拉伤二尖瓣至中度反流，合并LCX慢性缺血组分离左冠状动脉回旋支，植入Ameroid环。动物于术前、术后即刻行心电图检查判断手术过程是否造成动物急性心肌缺血。术前、术后即刻、术后1周、术后2周、术后1个月、术后2个月、术后3个月和术后9个月对动物行超声心动图检查，以对心脏整体功能和形态改变进行评价。 -
不同循环冷冻消融术对西藏小型猪肝部冷冻消融效果的比较
目的 以西藏小型猪为模型,比较肝部双循环冷冻-复温与三循环冷冻复温消融效果的差异.方法 西藏小型猪9头,开腹后行肝冷冻消融术.每头猪分别实施两循环冷冻-复温(10-5-10-5,min)消融和三循环冷冻-复温(5-5-5-5-10-5,min)消融,两组总冷冻时间相同.冷冻过程中分别测量冷冻中心点温度、冷冻形成冰球大直径.术后7d取肝组织解剖、测量冷冻引起的表面损伤区大长径及内部坏死区大长径,并观察冷冻区域病理变化情况.结果 三循环冷冻组形成的冰球表面大长径大于两循环组；7 d后两冷冻组冷冻后形成表面和深度损伤区大小相近.两循环冷冻组与三循环组冷冻损伤区病理分区相同,但三循环冷冻组引起完全坏死区域更大.结论 相同的冷冻时间内,三循环冷冻组对肝脏的冷冻消融效果更好.
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西藏小型猪 GH 基因部分序列的 SNP 分析
目的：对西藏小型猪GH基因（部分序列）进行SNP分析，筛选体型较小的基因型。方法采用PCR产物直接测序法对108头西藏小型猪GH基因5′端部分片段进行单核苷酸多态性（ SNP）分析。结果通过比对发现GH基因共有5个变异位点，其中T45 C位点的多态信息含量高。不同基因型生长性状比较的结果显示：在GH基因中T45C突变位点上TC基因型6～8月龄的西藏小型猪的腹围值较小，G84A突变位点上AA基因型3～5月龄的西藏小型猪的体重、体长值较小，G93A突变位点上GG基因型6～8月龄的西藏小型猪的体长、体高值较小。结论在GH基因中T45C、G84A、G93A位点突变的TC、AA、GG基因型可能与体型较小有关。同时发现西藏小型猪在以上位点遗传变异程度大，具有较高的杂合度和遗传多样性，可以为选育工作提供比较丰富的素材。
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西藏小型猪肋软骨细胞的分离培养及鉴定
目的 分离培养西藏小型猪肋软骨细胞,并对其进行鉴定.方法 实验采用3日龄西藏小型猪,二步消化法分离培养西藏小型猪肋软骨细胞(PCCs),同样的方法分离培养小鼠的肋软骨细胞(MCCs),观察两个物种软骨细胞的形态,并分别以西藏小型猪胚胎成纤维细胞(PEFs)和小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)为阴性对照,对所分离培养的软骨细胞进行甲苯胺蓝染色鉴定以及胶原蛋白Ⅱ、蛋白聚糖的免疫荧光鉴定.结果 成功分离培养西藏小型猪和小鼠肋软骨细胞,两种细胞的形态有差别,所分离培养的两个物种的软骨细胞均呈甲苯胺蓝染色阳性,胶原蛋白Ⅱ、蛋白聚糖免疫荧光阳性.结论 成功建立了西藏小型猪肋软骨细胞分离培养及鉴定的方法.
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西藏小型猪与人血液流变学指标的比较分析
目的 探讨西藏小型猪与人血液流变学指标间的变化规律.方法 采集成年西藏小型猪和人的血液样品,分别检测其WBV(高、中、低切变率)、PV、HCT、ESR及Fi等5项血液流变学指标.结果 (1)雄性西藏小型猪的150s-1、30s-1、5s-1、1s-1WBV值和Fi含量均显著低于雌性(P<0.05, P<0.01, P<0.05, P<0.01, P<0.01);(2)在人的血液流变学指标中男性的WBV值(1s-1)和HCT值显著高于女性(P<0.05,P<0.01);(3)西藏小型猪的HCT值和Fi含量与人相比存在显著差异(P<0.01),其余指标均无显著性差异(P>0.05).结论 西藏小型猪除HCT和Fi两指标与人有差异外,其余指标均与人基本接近.
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西藏小型猪发情周期血清性激素和生化指标的变化规律
目的 研究西藏小型猪发情周期内不同阶段血清性激素水平和生化指标的动态变化规律及其相关性.方法 对6头雌性西藏小型猪在发情周期内的发情当天、第5天、第10天、第15天、再次发情时分别采血5 mL并分离血清,应用放射免疫法测定血清睾酮(T)、孕酮(P4)、雌二醇(E2)、促卵泡生成激素(FSH)、促黄体生成激素(LH)、泌乳素(PRL);用自动生化仪测定血清钙(Ca)、镁(Mg)、磷(P)、碱性磷酸酶(ALP)、肌苷(Cm)、总胆固醇(CHO)、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb).结果 在发情周期不同阶段,西藏小型猪P4、CHO水平存在差异显著性;E2和Ca、Mg、CHO间,P4和CHO、TP、ALb间,PRL和P间均呈现显著性相关.结论 在发情周期的不同阶段西藏小型猪的血清性激素水平和生化指标呈现规律性变化,部分指标间存在相关性.
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西藏小型猪心脏、呼吸系统组织学观察
目的 积累西藏小型猪心脏和呼吸系统的组织学资料,对西藏小型猪在相关生物学研究上的应用提供参考.方法 将西藏小型猪心脏和呼吸系统各脏器固定于10%中性甲醛溶液中,常规石蜡切片,HE染色,光镜下观察.结果 西藏小型猪心脏壁厚,心内膜下浦肯野纤维粗,束细胞大而清晰,排列规则;心肌纤维粗大,排列紧密,横纹较模糊,润盘少且不清楚,肌间血管丰富;心外膜较厚.西藏小型猪鼻黏膜较厚;气管和支气管假复层柱状纤毛上皮排列紧密,纤毛粗而长,黏膜下腺体量少;肺支气管周围无炎性细胞浸润,肺泡腔内尘细胞极少,肺泡壁和肺间质血管较丰富.结论 西藏小型猪心脏、呼吸系统表现出高原动物组织学特点,其这种特点对今后西藏小型猪实验所涉及的组织学判断有重要参考价值.
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戊巴比妥钠联用速眠新Ⅱ对西藏小型猪麻醉效果观察
目的 观察联合应用速眠新Ⅱ和戊巴比妥钠对西藏小型猪的麻醉效果.方法 采用速眠新Ⅱ(0.1mL/kg)肌内注射和3%戊巴比妥钠生理盐水溶液(0.2 mL/kg)静脉注射联合麻醉方法对15头行胚胎移植术的西藏小型猪进行麻醉,观察动物麻醉维持时间、镇痛效果、呼吸频率和心率变化及术后苏醒情况.结果 80%(12头/15头)西藏小型猪初始量麻醉状态维持45 min以上,20%(3头/15头)西藏小型猪手术过程中追加麻醉.麻醉期间肌肉松弛效果好,动物呼吸和心率平稳.手术过程中西藏小型猪呼吸频率为(12～22)次/min,心率为(63～85)次/min,麻醉过程中未出现麻醉死亡,术后苏醒时间为30～60 min.结论 速眠新和戊巴比妥钠混合麻醉效果好,且麻醉剂量较以往大幅减少,术后苏醒快.戊巴比妥钠联用速眠新复合麻醉对西藏小型猪是一种较理想的麻醉方法,且动物麻醉安全性高.
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应用16S rRNA 高通量测序法比较人与常用实验动物口腔菌群的异同
目的：应用16S rRNA 高通量测序法测定几种常用实验动物（西藏小型猪、比格犬、猕猴、新西兰兔、Wistar 大鼠）的口腔菌群，并和人的口腔菌群进行对比分析，为口腔微生态的动物模型研究提供基础性资料。方法用一次性棉拭子采集西藏小型猪、比格犬、猕猴、新西兰兔、Wistar 大鼠和人的口腔菌群标本，提取样品总 DNA，使用带标签的通用引物扩增16S rRNA V4区片段，Illumina 测序，经 BIPES 以及 QIIME 分析比较菌群多样性及结构。结果人与5种常用实验动物口腔菌群的丰富度均差异显著（P ＜0．05），不同种类动物有其各自独特的口腔菌群，但猴的口腔菌群与人为相似。结论根据与人口腔某类菌群的相似程度，5种动物中，猴口腔的梭菌属（Fusobacterium）、卟啉菌属（Porphyromonas）水平与人相似，提示猴可能是研究人口腔菌群较适宜的模型动物。从特定菌门角度，西藏小型猪可能是研究与变形菌门（Proteobacteria）相关疾病的较适宜模型动物；比格犬可能是研究与螺旋体门（Spirochaetes）相关疾病的较适宜模型动物。
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西藏小型猪部分脏器血管铸型标本制作
目的 研究西藏小型猪内脏铸型,对西藏小型猪在相关生物医学研究上的应用提供参考.方法 应用过氯乙烯和牙托粉单独或混合填充剂灌注方法制作西藏小型猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和脑铸型研究其血管分布规律.结果 西藏小型猪内脏铸型外观完整美观,保持正常解剖状态、位置,充分显示和暴露主干的分支分布,各管道饱满,管道粗细适当,标本色泽鲜艳.结论 通过单独或混合灌注过氯乙烯和牙托粉填充剂可以成功制作西藏小型猪铸型标本,所做标本显示的脏器血管分布情况对相关生物医学研究具有重要应用价值.
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生长激素基因在西藏小型猪不同生长阶段和不同组织器官中的表达
目的：对西藏小型猪生长激素基因在不同脏器和不同年龄阶段的表达水平进行测定。方法采用Real－time PCR的方法，以GAPDH为内参，定量分析0岁（1日龄）、0．1岁（36日龄）、0．25岁（90日龄）、0．5岁（180日龄）、1岁（360日龄）、2岁（720日龄）、3岁（1080日龄）的西藏小型猪的心、肝、脾、肺、肾、肌肉、皮肤组织中生长激素基因mRNA表达水平，并且进行比较分析。结果生长激素基因在各个年龄阶段的西藏小型猪的心、肝、脾、肺、肾、肌肉、皮肤中均有表达。在不同脏器的表达中，生长激素基因在0岁、0．5岁时皮肤中的表达量高，肌肉组织中的表达量低。在0．25岁、1岁时肺组织中表达量高，在0．1岁、3岁时肝脏表达量高；在不同年龄阶段的表达中，生长激素基因在0．1岁时表达达到峰值。结论西藏小型猪的生长激素基因的表达呈现出明显的时空特异性。
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西藏小型猪MSTN基因分子克隆及序列分析
目的：扩增西藏小型猪的肌肉生长抑制素（ MSTN）基因编码区全长序列，并对序列进行生物信息学分析。方法提取西藏小型猪肝脏组织的RNA，反转录成为cDNA，利用RT-PCR方法扩增MSTN基因编码区全长序列，将纯化的片段与pMD19-T载体连接，转化大肠杆菌DH5α，筛选阳性克隆并测定其序列，利用生物信息学方法分析其序列特征，并与其他12种物种构建系统进化树。结果西藏小型猪MSTN基因编码区全长1128 bp，编码375个氨基酸，氨基酸序列同源性分析表明，与版纳微型猪MSTN氨基酸序列相似性高，为99％。结论 MSTN基因西藏小型猪除了与鸡和斑马鱼亲缘关系较远外，与人、犬、版纳微型猪、绵羊、山羊、牛、马、黑猩猩、大鼠、小鼠的关系都较为接近，其中与版纳微型猪的亲缘关系为接近。
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一种高效转染西藏小型猪胚胎成纤维细胞的方法
目的：应用Nucleofector II核转染仪将外源基因EGFP导入西藏小型猪胚胎成纤维细胞（PEFs），并与脂质体转染的方法进行比较，寻求一种高效转染猪胚胎成纤维细胞的方法。方法使用 Lonza 公司的Nucleofector II核转染仪，参考已报道的转染程序与相应的转染试剂，将绿色荧光蛋白（ GFP）基因导入西藏小型猪PEFs，并与脂质体转染的方法进行对比研究，比较两种方法的转染效率。结果转染5 h后，核转染仪组镜下即可见绿色荧光，转染效率高达80％，远远高于脂质体转染的方法。结论用Nucleofector II核转染仪能实现西藏小型猪PEFs的高效转染，为高效制备转基因克隆西藏小型猪提供了可靠的方法。
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西藏小型猪10种猪病血清学调查
目的 对西藏小型猪进行10种猪病(猪瘟、伪狂犬病、篮耳病、猪流感、圆环病毒感染、细小病毒病、乙型脑炎、弓形体病、衣原体病和布氏杆菌病)的血清学调查.方法 采用ELISA或凝集试验方法对10头已注射猪瘟疫苗的原代(F0代)母猪和40头20日龄乳猪、50头第一代(F1代)3～5月龄猪进行10种猪病的血清学检测.结果 猪瘟病毒、细小病毒和乙型脑炎病毒抗体阳性率分别是母猪为80.0%、80.0%、70.0%;20日龄乳猪为45.0%、25.0%、45.0%;3～5月龄猪为4.0%、76.0%、80.0%.圆环病毒抗体阳性率母猪为60.0%,20日龄乳猪为5.0%.3～5月龄猪为0%;篮耳病病毒、伪狂犬病病毒、猪流感病毒、弓形体、衣原体、布氏杆菌在不同年龄西藏小型猪中抗体阳性率均为0%.结论 不同年龄西藏小型猪未受篮耳病病毒、伪狂犬病病毒、猪流感病毒、弓形体病、衣原体病、布氏杆菌病感染.
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西藏小型猪与国内家猪细胞色素b氨基酸序列的比较研究
目的 西藏小型猪Cyt b氨基酸序列进行分析,研究其遗传分化及其与部分国内家猪的亲缘关系.方法 提取西藏小型猪的全基因组DNA,设计引物扩增cyt b基因,测序后将碱基序列转换为氨基酸序列并进行比对分析.结果 cyt b氨基酸序列分析表明,西藏小型猪与欧洲猪有三个位点氨基酸存在着差异,其中在295位点,大部分A型西藏小型猪与欧洲猪同为缬氨酸(V),而B型和少部分A型为异亮氨酸(I).结论 显示国内家猪与西藏小型猪有很近的亲缘关系.同时西藏小型猪群体内存在分化,mtDNA控制区的结构变化与功能基因的结构变化存在相关性.
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胰头部氩氦刀冷冻手术动物实验的护理
[目的]以西藏小型猪为动物模型探讨胰头部氩氦刀冷冻手术的护理配合,以保证手术的顺利进行.[方法]8头西藏小型猪胰头部采用美国氩氦刀冷冻,2头作为实验对照.所有参与实验的西藏小型猪术前、术中和术后均实施严格的整体护理.[结果]10头西藏小型猪顺利完成手术,均于术后第2天恢复,术后7d均存活.[结论]在西藏小型猪胰头部氩氦刀冷冻手术中实施严格的护理措施,有利于冷冻手术的顺利实施.
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西藏小型猪慢性肺动脉高压动物模型的建立
目的 采用野百合碱(MCT)诱导方法建立幼龄西藏小型猪慢性肺动脉高压(PH)动物模型,并通过右心导管术和肺脏结构形态进行评价.方法 2月龄西藏小型猪12头,体质量5.0～6.0kg.随机均分为实验组(MCT组)和对照组,分别腹腔注射给予MCT 12.0 mg/kg和同样剂量的溶剂(体积分数75％乙醇);6周后采用右心导管术测定小型猪肺动脉压;观察小型猪右心肥大指数和肺组织病理改变.结果 与对照组相比,MCT组西藏小型猪平均肺动脉压显著增加(24.62±1.38 mmHg vs 15.10±0.76 mmHg,P＜0.01).肺组织有明显血管堵塞、血管腔消失,也可见肺小血管重构,有肺小动脉闭塞、向心性内膜增厚(丛状血管)的改变.实验组小型猪右心肥大指数增加明显(0.36±0.16 vs 0.28±0.13,P＜0.01).结论 通过腹腔注射MCT 6周后,可以建立西藏小型猪慢性PH动物模型,其病理特征与人类PH临床指标相似.
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西藏小型猪胰岛细胞体外分离和纯化方法
目的 确定成体西藏小型猪胰岛细胞体外分离、纯化的理想条件,为异种移植治疗糖尿病提供高质量的胰岛细胞.方法 对比不同质量浓度的胶原酶(1 mg/ml,2 mg/ml,3 mg/ml,4 mg/ml)和同一质量浓度不同时间点(0 min,15 min,30 min,45 min,60 min,75 min,90 min)分离获得胰岛细胞的数量和效果;使用Ficoll400密度梯度离心、淋巴分离液分离、离心和静置4种方法纯化胰岛细胞悬液,比较终收集到的胰岛细胞数量和效果；用DTZ染色计算胰岛细胞的纯度；用AO/PI染色计算胰岛细胞存活率.结果 确定了不同质量浓度的胶原酶获取胰岛细胞的佳时间,胶原酶l mg/ml和2 mg/ml组为45 min,3 mg/ml和4 mg/ml组为30 min,各组在佳时间点获得胰岛细胞的数量多的为1 mg/ml组,胰岛细胞形态完整；4种纯化方法中,收集的胰岛细胞数量由多到少依次为静置组＞ Ficoll400密度梯度离心组＞离心组＞淋巴分离液离心组.经AO/PI染色后检测胰岛细胞的存活率为95.00％以上.结论 在组织块剪碎消化的情况下,胶原酶质量浓度1 mg/ml、消化时间45 min的分离条件可获得数量较多的胰岛细胞,Ficoll400密度梯度离心的纯化手段收集到的胰岛细胞效果好.
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两种盐酸特比萘芬乳膏经离体小型猪皮渗透吸收的比较研究
目的 比较研究两家企业生产的盐酸特比萘芬乳膏对离体小型猪皮的透皮吸收性能.方法 采用改良的Franz扩散池,离体小型猪皮片涂药后不同时间采样,用高效液相色谱法测定接收液和皮片中盐酸特比萘芬的浓度.结果 盐酸特比萘芬乳膏透皮释放量很低,在80％乙醇生理盐水释放液中,某企业生产的乳膏产品和中美天津史克制药有限公司生产的乳膏产品在48h时累积透皮渗透量分别为55.23 mg/cm2和63.33 mg/cm2,48 h的累积透过率分别为:1.09％、1.19％.结论 两家企业生产的乳膏产品在相同渗透介质下,对于离体小型猪皮的透皮无显著性差别,二者透皮情况相当.盐酸特比萘芬乳膏主成分大部分滞留在皮肤上,只有极少数透过皮肤屏障,有利于其发挥局部治疗作用.
