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胃癌组织中c-Met蛋白过表达与EBV的相关性
目的:研究EBV相关胃癌(EBV associated gastric carcinomas,EBVaGC)和EBV阴性胃癌(EBV negative gastric carcinomas,EBVnGC)组织中c-Met基因的扩增及表达,探讨c-Met基因扩增和表达与EBV感染的相关性以及二者在胃癌发生发展中的作用.方法:应用半定量多聚酶链反应(PCR)检测EBVaGC 13例和EBVnGC 45例组织中c-Met基因的扩增,免疫组化抗原热修复技术检测c-Met蛋白表达.结果:EBVaGC和EBVnGC组织中均检测到c-Met基因扩增,EBVaGC组织与EBVnGC组织间c-Met基因的扩增水平无显著性差异.EBVaGC癌组织c-Met基因过度扩增率为53.8%(7/13),EBVnGC癌组织c-Met基因过度扩增率为44.4%(20/45),两组之间无差异.EBVaGC和EBVnGC癌组织中c-Met蛋白阳性率分别为76.9%(10/13)和64.4%(29/45),两组之间无显著性差异.EBVaGC和EBVnGC癌组织中c-Met蛋白过表达率分别为69.2%(9/13)和37.8%(17/45),统计学分析表明EBVaGC癌组织中c-Met蛋白的过表达高于EBVnGC组,两组之间有差异(χ2=4.0 345,P=0.0 446).EBVaGC和EBVnGC癌组织中c-Met基因的表达和扩增与肿瘤大小、肿瘤部位、淋巴结转移、分化程度以及临床分期等均无相关性.结论:胃癌组织中均存在c-Met基因的扩增,EBVaGC与EBVnGC组织中c-Met基因扩增水平和c-Met蛋白阳性率无明显差异,但EBVaGC癌组织中c-Met蛋白的过表达率高于EBVnGC组.
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c-met在良性、癌前和恶性外阴肿瘤中的表达及意义
目的:探讨c-met基因在外阴癌变中的作用.方法:选取30例外阴鳞癌(VSCC)、25例外阴上皮内瘤变(VIN)、20例癌旁营养不良(VD)、15例尖锐湿疣(VCA)和5例外阴正常表皮,采用c-met兔多克隆抗体用免疫组化SABC法进行研究.c-met表达与外阴鳞癌的临床病理特征相比较.结果:c-met阳性表达及阳性细胞率显著高于VINⅢ和VCA(P＜0.05),与癌旁增生型VD差别不显著.VIN Ⅰ～Ⅱ、正常外阴表皮、癌旁硬化苔藓型VD无表达.c-met表达与VSCC组织分型有关(P＜0.05),更强表达于高分化型中(P＜0.05).结论:c-met没有参与正常外阴鳞状上皮细胞的生长和分化过程.无论细胞有无异型性,c-met的表达与细胞的增殖活跃有关.c-met的表达是外阴癌变的早期事件.
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肝癌组织中c-MET基因突变的研究
目的研究肝癌原癌基因c-MET突变和缺失.方法采用PCR-SSCP和DNA测序方法,对37例肝癌患者肿瘤组织标本的c-MET基因15-19外显子进行检测,研究c-MET基因的缺失和突变情况.结果发现5例有c-MET基因外显子15-19存在点突变,突变率为7.4%.结论 c-MET基因的突变与肝癌的发生和发展有一定的联系.
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c-met表达水平对肝细胞癌术后复发转移的预测价值
目的 通过检测肝癌手术切除标本中c-met mRNA的表达,分析其与肝癌病理特征之间的关系,探讨c-met mRNA对肝癌术后复发转移的预测价值. 方法 将研究对象分为HCC组(61例)、癌旁组(61例)、乙型肝炎后肝硬化组(10例)、正常肝脏组(8例)4个组,利用实时荧光定量RT-PCR检测方法,测定各组c-met mRNA的表达水平,并与肝癌患者的病理因素进行相关分析;从61例HCC病例中选取病理分期为Ⅲ A 的患者共40 例,比较在同一病理分期下 c-met mRNA 的表达对预后的影响.结果 HCC组c-met mRNA的表达量明显升高,与其它三组相比,差异有统计学意义(P<0.05);肝硬化组表达量高于正常肝组织,差异有统计学意义(P<0.05),癌旁与肝硬化组之间差异无统计学意义(P>0. 05). 本组资料中c-met mRNA的表达与肝内转移、血管侵犯相关,合并肝内转移、血管侵犯者表达量显著高于未合并肝内转移、血管侵犯(P<0.05);c-met mRNA的表达与病理因素(肿瘤大小、肝硬化形成、包膜、病理学分级)无关(P>0.05).40例Ⅲ A期患者中,c-met mRNA相对低表达组(n=20)与高表达组(n=20)中位无瘤生存期分别为390天与120天,无瘤生存率95%的置信区间分别为(18,258)天与(14, 918)天,两者差异具有统计学意义(P<0.05);在单因素分析中c-met均为独立预后危险因子,其风险比为2.342,95%的置信区间为(1.292,4.247)(P<0.01). 结论 c-met可能在HCC发生发展过程中起重要作用. c-met mRNA表达上调与合并肝内转移、血管侵犯有关,提示c-met可能促进肝细胞癌肝内转移. 肝癌组织c-met mRNA定量检测可作为肝细胞癌术后复发的预测指标,并可为肝癌术后是否需要进行进一步综合治疗提供参考.
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原癌基因C－met在食管鳞癌中的表达与预后相关性研究
目的：探讨C－met基因mRNA阳性表达与食管鳞癌复发、转移及预后的相关性。方法：应用RT－PCR技术检测50例食管鳞癌组织和20例癌旁正常食管组织中C－met mRNA的表达情况，统计学分析C－met mRNA表达与临床病理资料、复发转移及预后的相关性。结果：C－met mRNA在食管鳞癌组织中阳性表达率明显高于癌旁正常食管组织（P ＜0．01）；C－met mRNA阳性表达率与癌组织浸润深度（P ＜0．05）、淋巴结转移（P ＜0．01）和TNM （P ＜0．01）分期有关，而与患者年龄、性别、病变长度和癌组织分化程度无关；C－met mRNA阳性表达者与阴性表达者在术后5年内发生复发、转移的例数分别为16（59．3％）和5（21．7％），差异有统计学意义（P ＜0．01）；C－met mRNA阳性表达者的5年生存率为25．9％，明显低于阴性表达者的60．9％（P ＜0．01）；COX回归多因素分析提示C－met mRNA阳性表达是影响食管鳞癌患者预后的独立危险因素（HR＝6．026， P ＝0．005）。结论：C－met mRNA的检测对判断食管鳞癌的复发、转移及预后有重要临床意义。
关键词： 食管 鳞状细胞癌 逆转录-聚合酶链反应 c-Met基因 预后 -
肝细胞生长因子对四氯化碳损伤肝细胞的保护作用及相关基因表达
利用无血清原代培养大鼠肝细胞,观察重组人肝细胞生长因子(rhHGF)对CCl4染毒肝细胞的保护作用. 结果表明: (1) rhHGF (5 ng/ml)预处理后可显著提高CCl4 (15 mmol/L)染毒肝细胞存活率,降低细胞内丙氨酸氨基转移酶(ALT)、 K+的漏出;(2) 表皮生长因子(EGF,50ng/ml)和rhHGF (5 ng/ml)合用预处理肝细胞,CCl4染毒后细胞内ALT、 K+漏出较rhHGF和EGF单独保护组进一步降低;(3)大鼠肝部分切除和CCl4 (50%,2.5 ml/kg bw)染毒后,再生肝内HGF基因及其受体基因/c-met的表达分别较假手术和盐水对照组显著升高. 结果提示,rhHGF对CCl4染毒大鼠肝细胞具有保护作用;EGF和rhHGF有协同保护作用;HGF及其受体的表达在肝脏再生及修复中可能有重要作用.
关键词： 重组人肝细胞生长因子 表皮生长因子 c-Met基因 四氯化碳 肝细胞原代培养 -
新疆地区食管鳞状细胞癌患者c-Met基因的表达及其意义
目的 分析c-Met基因在新疆地区食管鳞状细胞癌(ESCC)患者癌组织及癌旁组织中的表达水平,探讨其与临床病理参数间的关系.方法 用半定量RT-PCR法检测60例ESCC患者(汉族和哈萨克族各30例)癌组织及癌旁组织中c-Met mRNA的表达水平,并分析c-Met mRNA与临床病理参数间的相关性.结果 ESCC患者c-Met mRNA的表达率在癌组织与癌旁组织中差异无统计学意义(48.33％ vs 35.00％,x2=2.194,P=0.139);但c-Met/ GADPH比值差异有统计学意义(0.54±0.12 vs0.43 ±0.09,t=5.789,P=0.007).不同民族、性别、年龄、肿瘤大小、部位和分化程度的ESCC患者癌组织中c-Met mRNA的表达水平差异无统计学意义(P均＞0.05),不同肿瘤浸润深度和临床病理分期及发生淋巴结转移的ESCC患者癌组织中c-MetmRNA的表达水平差异有统计学意义(P均＜0.05),且呈正相关(r分别为0.827,0.695,0.746,P均＜0.05).结论 新疆地区ESCC患者c-Met基因的表达水平在癌组织升高,且与肿瘤浸润深度、临床病理分期及淋巴结转移有关.
关键词： 食管鳞状细胞癌 c-Met基因 半定量RT-PCR法 临床病理参数 -
c-Met基因过表达脐带间充质干细胞株的构建
目的 建立c-Met慢病毒载体转染人脐带间充质干细胞(hUMSC),为治疗肝衰竭作为种子细胞.方法 培养hUMSC,经流式细胞技术检测细胞表面表型,转染c-Met慢病毒载体,在荧光显微镜下观察转染效率,确定佳多重感染复数(MOI).采用嘌呤霉素抗性筛选稳定表达c-Met的hUMSC细胞系,采用Western-blot法检测细胞c-met蛋白表达量.结果 P5代细胞高表达CD44、CD90和CD105抗原,不表达CD31、CD45和CD34相关造血细胞抗原,符合人脐带间充质干细胞的特性;构建成功的c-Met慢病毒载体转染人脐带间充质干细胞佳MOI=80,经嘌呤霉素筛药,在荧光显微镜下观察发现荧光阳性率为100%,且经Western-blot法检测证实该细胞过表达c-Met蛋白.结论 成功构建过表达c-Met基因的脐带间充质干细胞,为进一步实验打下了基础.
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RON、Hepsin和C-Met在浸润性乳腺癌中的表达及其意义
目的 探讨浸润性乳腺癌组织中RON和Hepsin、C-Met的免疫表达及其意义.方法 采用免疫组化PV-6000法检测了87例浸润性乳腺癌组织中RON和Hepsin、C-Met基因的表达情况.结果 Hepsin、C-Met、 RON在87例浸润性乳腺癌组织中的阳性表达率分别为70.1%、64.4%、65.5%, 三者的阳性表达两两呈正相关(P＜0.01),同时与浸润性乳腺癌的病理学分级、淋巴结转移亦呈正相关性(P＜0.01).结论 Hepsin、C-Met、RON与浸润性乳腺癌的预后因素有相关性,联合检测可以更好地提示患者的预后.
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鼻咽癌组织中c-met基因表达及其与癌侵袭和转移的关系
鼻咽癌易浸润和转移,远处转移是患者死亡的主要原因,早期控制肿瘤转移对降低鼻咽癌患者死亡率,提高患者自下而上率非常重要[1].
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pSilencer2.0-c-Met-siRNA基因在裸鼠体内对人喉癌Hep-2细胞生长的影响
目的 探讨psilencer2.0-c-Met.siRNA重组质粒对人喉癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤生长的影响.方法 采用裸鼠喉癌皮下荷瘤模型模拟c-Met-siRNA基因治疗实验,观察c-Met-siRNA重组质粒的抗瘤疗效,Western-blot法检测重组质粒对c-Met基因及MMP-2、MMP-9、VEGF基因表达的影响.结果 肿瘤接种后第35 d,重组质粒组肿瘤体积为13 827 mm<'3>,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);重组质粒组瘤体内c-Met、MMP-2、MMP-9、VEGF基因表达率比对照组明显降低(P<0.05).结论 pSilencer2.0-c-Met-siRNA重组质粒能明显抑制人喉癌Hep-2细胞移植裸鼠成瘤后的生长,siRNA表达质粒介导的基因治疗有希望成为喉癌靶向性c-Met治疗的新策略.
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结直肠癌中FHIT、c-met基因表达与增殖的关系及其预后研究
目的研究FHIT基因、c-met基因和增殖细胞核抗原(PCNA)在结直肠癌中的表达及其关系.方法采用枸橼酸-微波-Sp免疫组织化学方法检测52例蜡块标本中FHIT基因、c-met基因及PCNA的表达.结果c-met基因在大肠癌组织中的表达显著高于正常黏膜中的表达,在组织学分级中由高到低依次增高,且组间相比,差异有显著性(P＜0.05).FHIT基因在正常黏膜中的表达显著高于癌组织中的表达(P＜0.05).FHIT基因、c-met基因与淋巴结转移有关,PCNA与淋巴结转移无关.PCNA表达与c-met表达呈正相关(rs=0.384),与FHIT表达无相关性(rs=0.165),FHIT与c-met表达呈负相关(rs=-0.535).结论FHIT基因、c-met基因表达与结直肠癌发生及发展有关,二者可共同作为结直肠癌预后的判断指标.
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c-met在喉鳞状细胞癌中的表达及意义
目的:探讨原癌基因c-met在喉癌组织中的表达及其与喉癌临床病理的相关性.方法:采用免疫组织化学染色方法检测了42例喉癌组织,25例非癌组织(癌旁组织及声带息肉)中c-met蛋白的表达情况.结果:免疫组织化学检测结果显示c-met蛋白在喉癌组织中的阳性表达率为64.3％,显著高于癌旁组织及声带息肉(P＜0.05).c-met蛋白表达与肿瘤的病理分级、临床分期、淋巴结转移有关(P＜0.05),而与患者年龄无关(P＞0.05).结论:c-met在喉癌组织中异常高表达,提示在喉癌的发生、发展中可能起重要作用.
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RNAi沉默c-Met基因对人脑胶质瘤U251细胞增殖及侵袭能力的影响
目的 探讨RNA干扰技术沉默c-Met基因表达对人脑胶质瘤U251细胞生长活力及体外侵袭能力的影响.方法 将设计好的c-Met基因干扰载体转染至U251细胞中,根据转染质粒不同分为空白对照组(不转染任何质粒)、空载体组(转染空载体)和干扰组(转染重组质粒).采用四唑盐比色法(MTT)检测细胞的生长活力的变化;采用Transwell小室法检测细胞侵袭能力的变化.结果 MTT检测结果显示干扰组光密度值(0.156±0.164)显著低于空白对照组(0.21±0.146;P＜0.05)和空质粒组(0.191±0.138;P＜0.05),而空质粒组和空白对照组无显著差异(P＞0.05).细胞体外侵袭能力检测结果显示,干扰组穿膜细胞数[(13.60±3.34)个]显著低于空白对照组[(32.90±6.49)个;P＜0.05]和空质粒组[(23.10±2.77)个;P＜0.05],而空质粒组和空白对照组无统计学差异(P＞0.05).结论 沉默c-Met基因表达能明显抑制U251细胞的生长活力及其侵袭能力.
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下调c-Met表达对肝癌细胞侵袭生长能力的影响
目的:探讨下调c-Met表达对肝癌(HCC)细胞侵袭生长能力的影响.方法:采用小干扰RNA(siRNA)技术沉默HCC细胞株Bel-7402和HepG2的c-Met基因,应用细胞计数试剂盒(CCK-8)方法:克隆形成实验检测细胞增殖和生长,流式细胞仪检测细胞周期的变化,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,蛋白质印迹法(Western blot)方法检测相关信号通路蛋白Ras、Raf、p-Erk、cyclin D1、β-catenin和Slug的表达.结果:siRNA技术能成功下调Bel-7402和HepG2的c-Met基因表这.下调c-Met表达后,HCC细胞增殖活性下降,发生明显DNA合成前期G1期停滞,侵袭能力减弱,Raf、p-Erk、cyclinD1、β-catenin和Slug蛋白表达下降.结论:下调HCC细胞c-Met基因的表达能够抑制细胞增殖和生长,阻滞细胞周期,减弱细胞侵袭能力,其机制可能与干扰Ras/Raf/ERK、Wnt通路和EMT过程有关.
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全反式维甲酸对转化生长因子β诱导的肾小球系膜细胞Sp1及c-met表达的影响
肝细胞生长因子(HGF)是一种多效性的细胞因子,c-met是HGF现已知的唯一的受体,HGF与c-met结合后,发挥相应的生物学效应[1].Sp1蛋白是众多基因的基本转录因子,能与c-met基因启动子区域的多重GC盒结合,是调节肾脏细胞表达c-met的重要转录因子[2].全反式维甲酸(ATRA)能抑制肾脏纤维化,保护肾功能.本研究探讨ATRA对肾小球系膜细胞Sp1、c-met表达的影响,以进一步了解ATRA对肾脏的保护机制.
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大肠癌c-met基因mRNA定量表达研究
目的:检测c-met基因在大肠癌中的表达情况及其在大肠癌侵袭转移过程中的变化规律.方法:采用荧光实时定量PCR方法检测30例大肠癌及切端正常大肠组织c-met基因的mRNA转录水平,采用免疫组织化学SP法检测其蛋白表达情况.结果:c-met在63%(19/30)的正常大肠组织和90%(27/30)的大肠癌组织中阳性表达.大肠癌组织中c-met在mRNA转录和蛋白水平的表达均高于正常大肠组织(P<0.05).c-met的表达与大肠癌的淋巴结转移、浸润深度和Dukes分期明显相关,差异具有显著性(P<0.05):而与大肠癌的病理组织学类型和分化程度无关(P>0.05).结论:c-met在大肠癌的侵袭与转移q-发挥着重要作用.检测c-met mRNA含量可作为判断大肠癌浸润、转移的良好参考指标.并可为将来大肠癌的诊断、分期和治疗开辟一个新的方向.
