首页 > 文献资料
-
RON基因反义核酸真核表达载体的构建及其对A549的体外作用
目的肺癌的发生是多因素作用的结果,RON基因参与其中,但它在肺癌的基因治疗中意义尚不明确.本研究旨在探讨RON能否作为肺癌的基因治疗靶点及针对该基因跨膜区段(RONm)反义核酸对肺癌细胞的生物学功能的影响.方法从人肺鳞癌细胞提取总RNA进行RT-PCR、T载体克隆和测序,获得RON基因的跨膜区段,并将其反向插入真核表达载体中,转染肺癌细胞,利用ELISA检测细胞模型RON基因表达后的蛋白水平,同时利用MTT和细胞记数方法监测细胞的生物学活性的变化.结果用RT-PCR亚克隆RONm,测序结果与GenBank(X70040)一致.构建的RONm反义真核表达载体,转染后的肺癌细胞株A549 RON基因表达量和细胞活性明显降低.结论成功构建RONm反义核酸真核表达载体,RON能作为肺癌的基因治疗靶点;RONm反义核酸可有效抑制RON基因的表达阳性肺癌细胞的生长,为进一步研究将RONm反义核酸作为一种的肺癌基因治疗方法打下了分子生物学基础.
-
RNAi沉默RON基因对人结肠癌HT-29细胞侵袭和耐药性的抑制作用
目的:探讨RNAi沉默酪氨酸激酶受体RON(recepteur d'origine nantais)基因对人结肠癌HT-29细胞侵袭和对抗肿瘤药物敏感性的影响.方法:构建RON基因的RNAi慢病毒载体Lv-RON-siRNA.Real-time PCR和Western blotting检测RON基因的沉默效率及RON蛋白表达水平；Transwell侵袭实验和ATP-TCA(ATP-tumor chemosensitivity assay)检测RON基因对HT-29细胞侵袭和对药物敏感性的影响.结果:慢病毒载体Lv-RON-siRNA感染HT-29细胞对RON基因的沉默效果达到70％.Lv-RON-siRNA感染后,HT-29细胞侵袭力较对照组明显降低(0.97±0.072 vs 1.29±0.076,P＜0.05).Lv-RON-siRNA感染后,HT-29细胞对5-氟尿嘧啶(5-fluorouraci,5-FU)的IC90值和IC50值分别为(14.28 ±1.34)、(8.93±1.20) μg/ml,顺铂(cisplatin,DDP)的IC90值和IC50值分别为(1.91±0.22)、(0.64±0.07) μg/ml,均明显低于对照组(P＜0.01).结论:沉默RON基因表达能抑制HT-29细胞的侵袭力,提高细胞对5-FU和DDP的敏感性.
-
RON基因在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义
目的 研究RON基因在人非小细胞肺癌组织中的表达水平及其临床意义.方法 收集2007年1月至 2008年12月手术的肺腺癌及鳞癌组织标本共96例,应用Envision二步法检测96例肺腺鳞癌中RON蛋白的表达情况,统计分析非小细胞肺癌组织中RON表达与临床病理相关因素的关系.另外检测20例正常肺组织中RON蛋白的表达情况,比较RON在肺癌组织和正常组织中的表达情况.结果 RON在肺癌组织中表达明显（63/96,66%）,而正常肺组织中几乎无表达（1/20,5%）.在肺癌组织中,RON在肺腺癌及鳞癌中都有不同程度的表达,两组相比RON的表达差异具有统计学意义,腺癌标本中RON表达明显高于鳞癌（P＜0.05）;不同分化程度的肺腺癌相比,RON的表达也有差异,低分化的肺腺癌明显高于中分化的腺癌和高分化的腺癌（P＜0.05 ),而有淋巴结转移者及晚期组患者组织中RON的表达亦明显高于无淋巴结转移者及早期组患者.结论 RON基因可能在肺癌的发生、发展过程中起着重要作用,提示其可作为肺癌一种新的预后判断指标和治疗靶点.
-
RON、Hepsin和C-Met在浸润性乳腺癌中的表达及其意义
目的 探讨浸润性乳腺癌组织中RON和Hepsin、C-Met的免疫表达及其意义.方法 采用免疫组化PV-6000法检测了87例浸润性乳腺癌组织中RON和Hepsin、C-Met基因的表达情况.结果 Hepsin、C-Met、 RON在87例浸润性乳腺癌组织中的阳性表达率分别为70.1%、64.4%、65.5%, 三者的阳性表达两两呈正相关(P＜0.01),同时与浸润性乳腺癌的病理学分级、淋巴结转移亦呈正相关性(P＜0.01).结论 Hepsin、C-Met、RON与浸润性乳腺癌的预后因素有相关性,联合检测可以更好地提示患者的预后.
-
反义核酸抑制RON基因表达对A549的体外作用
目的探讨针对人RON基因跨膜区段(RONm)反义核酸对肺癌细胞系A549活性和细胞增殖的抑制作用,研究以RON基因为靶的肺癌基因治疗的可能性.方法将人RONm cDNA反向插入到真核表达载体pcDNA3.1中,转染肺癌细胞A549,利用ELISA检测细胞模型RON基因的表达水平,同时利用MTT方法监测细胞生物学活性的变化.结果转染后的肺癌细胞RON基因表达量和细胞活性明显降低,并出现明显的细胞凋亡.结论 RONm反义核酸明显抑制RON基因的表达,同时对肺癌细胞的生长有抑制作用,促进细胞凋亡.
-
RON基因反义核酸真核表达载体的构建策略
目的构建RON基因跨膜区段(RONm)的反义核酸真核表达载体. 方法用RT-PCR技术,从人肺癌细胞提取的总RNA克隆RONm cDNA序列.然后酶切鉴定与测序分析得到RONm的T载体,再将RONm反向插入pcDNA3.1+中,酶切鉴定得到RONm反义真核表达载体.结果用RT-PCR亚克隆RONm,测序结果与GenBank的RONm相应序列(X70040)一致,阅读框无改变.构建出正确的RONm反义真核表达载体.结论成功构建RONm反义核酸真核表达载体,为进一步将RON基因反义核酸作为一种肺癌基因治疗方法的研究打下了分子生物学基础.
-
肺癌组织中RON基因的表达及其临床意义
目的 研究RON基因在人肺癌组织及正常肺组织中的表达水平及其临床意义.方法 用免疫组化SP法检测80例肺癌患者的库存标本和20例同期手术切除的正常肺组织中RON的表达,RON基因表达与临床病理、预后之间的关系.结果 RON基因在肺癌中表达的阳性率为53.75%(43/80),明显高于对照组正常肺组织的表达(0%)(P=0.000).不同性别、年龄的患者和病理类型的肺癌组织中,RON基因的表达差异无显著性(P＞0.05);RON基因表达的阳性率随TNM分期的升高而升高(Ⅰ期29.03%、Ⅱ期65.52%、Ⅲ期75.00%)(P=0.002).Kaplan-Meier生存分析显示KON阳性表达者的1、3及5年生存率(67.44%、20.93%和9.30%)明显低于阴性者(81.08%、45.94%和24.30%)(P=0.029).结论 RON基因可能在肺癌的发生、发展过程中起着重要作用,提示其可作为肺癌一种新的预后判断指标和治疗靶点.
-
反义核酸抑制RON基因表达对A549的体外作用
目的探讨针对人RON基因跨膜区段(RONm)反义核酸对肺癌细胞系A549活性和细胞增殖的抑制作用,研究以RONm为靶的肺癌基因治疗的可能性?方法将人RONm cDNA反向插入到真核表达载体pcDNA3.1中,转染肺癌细胞A549,利用ELISA检测细胞模型RON基因表达水平,同时利用MTT和细胞计数方法监测细胞生物学活性的变化.结果转染后的肺癌细胞RON基因表达量和细胞活性明显降低,并出现明显的细胞凋亡?结论RONm反义核酸明显抑制RON基因的表达,同时对肺癌细胞的生长有抑制作用,促进细胞凋亡?
