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新藤黄酸体外抗肺癌血管生成的作用机制研究
为了观察新藤黄酸(gambogenic acid,GNA)对肺癌血管生成的影响及初步的作用机制.该实验以新藤黄酸处理肺腺癌A549细胞的条件培养基培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),建立非直接接触型细胞共培养体系;应用Matrigel胶建立HU-VEC的二维培养模型,观察新藤黄酸对血管生成的影响;DAPI染色倒置荧光显微镜下观察新藤黄酸对HUVEC细胞凋亡的影响;Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术分析新藤黄酸对HUVEC凋亡率的影响;Western blot法检测新藤黄酸对HUVEC中PI3K,p-PI3K,Akt,p-Akt,VEGF蛋白表达的影响;采用PTEN-siRNA转染细胞后,RT-PCR法检测PI3K,Akt基因的表达水平.结果表明,新藤黄酸能明显抑制血管生成,其抑制效果与剂量相关;DAPI染色荧光显微镜下可见HUVEC可出现凋亡形态特征;Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测结果显示新藤黄酸诱导HUVEC细胞凋亡;Western blot法检测结果表明新藤黄酸下调了p-PI3K,p-Akt蛋白的表达水平,而对PI3K,Akt蛋白表达影响不明显.RT-PCR法检测表明PTEN-siRNA转染入细胞后,能上调PI3K,Akt mRNA基因的表达.体外研究表明新藤黄酸能抑制肺癌血管生成,抑制血管生成的机制可能与PI3K/Akt信号通路有关.
关键词： 新藤黄酸 人脐静脉内皮细胞(HUVEC) 肺癌A549 血管生成 细胞凋亡 -
丹参-人参组分配伍对肺癌A549增殖、凋亡和骨架的影响
中药组分配伍抗肿瘤研究是近年来治疗恶性肿瘤的新方向.该研究通过正交设计优选丹参-人参活性组分抗肺癌A549的有效配伍,并探讨其对肺癌A549细胞增殖、凋亡和骨架的影响.研究发现,正交设计优选出丹参-人参组分配伍抗肺癌的佳组合为丹参总酚酸、人参总皂苷和人参多糖的佳配伍剂量为5,10,5 mg· L-1.并利用CCK-8法结合实时细胞分析技术检测丹参-人参组分配伍对肺癌细胞增殖的量效和时效关系,结果显示丹参-人参组分配伍能以时间和剂量依赖性的方式显著抑制肺癌A549细胞的增殖.进一步采用流式细胞术分析丹参-人参组分配伍对肺癌细胞凋亡的影响和高内涵细胞成像系统分析丹参-人参组分配伍对肺癌细胞骨架蛋白F-actin表达的影响,结果显示丹参-人参组分配伍能够显著诱导肺癌A549细胞凋亡和显著降低肺癌A549细胞骨架的面积,且呈一定的剂量依赖性.综上表明丹参-人参组分配伍能抑制肺癌A549细胞的增殖和生长,具有治疗肺癌的应用前景,其机制与诱导肿瘤细胞凋亡及减少微丝形成相关.
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人参稀有皂苷组分联合紫杉醇治疗A549肺癌的实验研究
中药组分联合化疗药物抗肿瘤是近年来临床肿瘤治疗的新方向.该研究通过MTT法优选人参稀有皂苷组分与紫杉醇的优配比,并探讨其对肺癌A549细胞增殖、凋亡能力及体内抗肿瘤药效的影响.研究发现,优选出人参稀有皂苷组分与紫杉醇的配比为4∶6时,对肺癌A549细胞增殖的抑制作用与等剂量的紫杉醇相当.进一步研究发现,联合使用对A549细胞凋亡的诱导作用显著增加,同时上调caspase-3蛋白表达,下调Bcl-2/Bax比率.荷瘤鼠模型显示两者联用可以显著抑制肿瘤生长,并减轻紫杉醇抗肿瘤时的肝毒副作用.该文建立的人参稀有皂苷组分-紫杉醇多组分体系,通过促进紫杉醇诱导细胞凋亡抑制肺癌A549细胞的增殖和生长,减少了紫杉醇的用量,达到降低紫杉醇的毒性,增强抗肺癌的效果,为后期研究及临床应用提供了理论依据.
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RON基因反义核酸真核表达载体的构建及其对A549的体外作用
目的肺癌的发生是多因素作用的结果,RON基因参与其中,但它在肺癌的基因治疗中意义尚不明确.本研究旨在探讨RON能否作为肺癌的基因治疗靶点及针对该基因跨膜区段(RONm)反义核酸对肺癌细胞的生物学功能的影响.方法从人肺鳞癌细胞提取总RNA进行RT-PCR、T载体克隆和测序,获得RON基因的跨膜区段,并将其反向插入真核表达载体中,转染肺癌细胞,利用ELISA检测细胞模型RON基因表达后的蛋白水平,同时利用MTT和细胞记数方法监测细胞的生物学活性的变化.结果用RT-PCR亚克隆RONm,测序结果与GenBank(X70040)一致.构建的RONm反义真核表达载体,转染后的肺癌细胞株A549 RON基因表达量和细胞活性明显降低.结论成功构建RONm反义核酸真核表达载体,RON能作为肺癌的基因治疗靶点;RONm反义核酸可有效抑制RON基因的表达阳性肺癌细胞的生长,为进一步研究将RONm反义核酸作为一种的肺癌基因治疗方法打下了分子生物学基础.
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SDZ诱导肺癌A549细胞凋亡
目的 旨在探讨SDZ体外对肺癌A549细胞生长的作用.方法 采用hoechst染色、荧光显微镜下观察SDZ诱导肺癌A549细胞凋亡的作用. 结果经SDZ 1000 μg/ml作用24 h肿瘤细胞即可发生凋亡 ,凋亡率达31.7%. 结论 SDZ体外可诱导肺癌A549细胞凋亡.
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六神丸对肝癌BEL7402、肺癌A549和白血病HL60的体外抗肿瘤作用
目的 研究六神丸对肿瘤细胞生长的影响.方法 采用MTT法,对六神丸进行体外抗肿瘤活性的研究.结果 显示六神丸对人癌细胞系,白血病细胞株HL60、肝癌BEL7402H和肺癌A549均有不同程度抑制作用(P＜0.01),其中高浓度组对白血病细胞株HL60、肝癌BEL7402H、肺癌A549的抑制率分别达到87.4％、91.3％、80.0％.结论 六神丸在实验给药浓度下对上述3种人癌细胞的生长具有一定的抑制作用.
关键词： 六神丸 体外抗肿瘤活性 肝癌BEL7402 肺癌A549 白血病细胞株HL60 -
雷帕霉素抑制人肺腺癌细胞A549增殖的实验研究
目的 初步探讨雷帕霉素抑制A549 细胞增殖及其可能机制.方法 将20 nmol/L 雷帕霉素作用A549 细胞24、48、72 h后,MTT 法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR 法检测Survivin mRNA 的表达,western blot 检测Survivin 蛋白的表达.结果 对照组和雷帕霉素作用A549 细胞24、48、72 h 后,生长抑制率分别为(1.61±0.09)%、(12.13±0.68)%、(20.82±1.02)%、(51.68±2.96)%,细胞凋亡率分别为(1.17±0.07)%、(10.01±0.34)%、(16.68±0.52)%、(38.23±1.04)%,Survivin mRNA 和蛋白相对表达水平分别为(0.77±0.09)、(0.54±0.13)、(0.33±0.08)、(0.19±0.12)和(0.62±0.06)、(0.46±0.08)、(0.29±0.08)、(0.15±0.11).雷帕霉素能够呈时间依赖性的抑制A549 细胞的增殖及诱导A549 细胞的凋亡(P ＜0.05),并能够下调Survivin 的表达(P ＜0.05).结论 雷帕霉素能够抑制A549 细胞增殖,并诱导其凋亡,其效应与下调Survivin 的表达有关.
