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丙型肝炎病毒结构基因转基因小鼠引起肝脏脂肪变
目的:建立持续表达和诱导表达型丙型肝炎病毒(HcV)结构基因(包括核心蛋白和包膜蛋白El、E2编码基因)的转基因小鼠动物模型,探讨HcV结构基因表达导致肝脏脂肪变的病理改变.方法:以含有近全长HcV cDNA的质粒为模板,通过多聚酶链反应(PcR)技术扩增HcV结构基因的DNA片段(约2.2kb),克隆到真核表达载体pcDNA4HisMas和pMT/BiP/V5-HisA中,分别构建成持续表达型表达载体pcDNA4HisMas-HcV core-E2和诱导表达型表达载体pMT/BiP/V5-HisA-HcV core-E2.以限制性内切酶分析和目的DNA片段的核苷酸序列分析,证实构建HcV结构基因的真核表达载体正确无误.以脂质体体外转染cos-7细胞系,利用抗-HcV E2的多克隆抗体进行westem blot杂交分析,证实转染细胞中有HcV E2蛋白的表达.利用小鼠受精卵细胞核微注射方法,导入线性化表达载体的DNA,利用假孕小鼠的受精卵植入方法,建立了表达HcV结构基因的转基因小鼠模型.对于持续表达型转基因小鼠的死胎、6月龄以及硫酸铜诱导表达型的转基因小鼠模型的肝脏组织,进行HE染色和病理学特征的分析.结果:构建了持续性表达和可诱导性表达型的HcV结构基因表达载体pcDNA4HisMas-HcV core-E2和pMT/BiP/V5-HisA-HcV core-E2,体外转染cos-7细胞证实转染细胞中有HcV E2抗原的表达.对于持续表达型转基因小鼠死胎肝脏病理学特征进行分析,发现肝组织尚未分化发育完成,肝内有大量造血细胞,肝细胞空泡变性,单个核细胞聚集现象.对于持续表达HcV结构基因的6月龄转基因小鼠的肝脏进行病理学分析,发现中央静脉区肝细胞小泡型脂肪变性,中央静脉周围细胞溶解坏死,中央静脉明显扩大,少数组织中亦见大泡型脂肪变性.对于可诱导型转基因小鼠的肝脏进行病理学分析,发现肝小叶内中央静脉周围坏死区累及5-10个小叶,周围无淋巴细胞浸润,交界区可见多数肝细胞核异常,或固化,或呈花环状,或溶解为淡蓝色无定形基质.泡浆内残留大量脂肪小泡,肝脏脂肪变与核异常有-移行过程.结论:建立了表达HCV结构基因的转基因小鼠,发现HCV结构基因的转基因小鼠肝脏有典型的脂肪变病理改变,为进一步研究HCV感染引起的慢性丙型肝炎合并脂肪变的特征和机制研究奠定了基础.
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反义表皮生长因子受体可调控表达型质粒的构建及意义
通过反义表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)表达型质粒阻断细胞EGFR表达,可以从一个新的角度深化对EGFR生物学作用的研究.
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胃癌相关易感基因W41的原位表达分析
目的:进一步分析人胃癌相关易感基因W41在胃癌组织的表达情况.方法:利用循环引物介导原位标记(C-PRINS)技术,检测胃癌标本的W41 mRNA表达,并采用生物素连接辣根过氧化物酶标记,DAB显色法,以提高石蜡切片检测mRNA表达的敏感性.用Image-Pro Plus 图象分析软件计算每个细胞胞浆中阳性染色信号的单位面积光密度值(IOD),每例标本IOD的平均值代表W41表达水平.结果:W41在胃癌、有肠化癌旁组织、无肠化癌旁组织和正常胃黏膜中表达结果经F检验有显著性差异(F=8.810, P=0.001).组间比较结果示胃癌组织表达高于正常组织(P<0.05),癌旁肠化组织和无癌旁肠化组织的表达亦高于正常组织(P<0.05),而癌与癌旁肠化组织和无癌旁肠化组织之间的表达没有差异(P>0.05).W41在腺癌和印戒细胞癌的表达经 t 检验无显著性差异(t=1.304, P=0.029).结论:W41在胃癌及癌旁组织中表达高于正常胃黏膜,在肠化组织有明显表达,提示W41表达水平与胃黏膜癌变有关;C-PRINS法在信号强度、操作便利和时间上明显优于经典原位杂交.
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基底细胞样乳腺癌相关信号通路研究进展
根据基因微阵列分析,乳腺癌的分子分型分为5种亚型:Luminal A型、Luminal B型、正常乳腺样(normal-like)型、Her-2/neu基因过表达型以及基底细胞样乳腺癌,其中,基底细胞样乳腺癌生物学行为复杂,对传统的治疗手段无效,与其他亚型乳腺癌相比预后更差[1].与使用抗HER2靶向治疗的HER2阳性乳腺癌相反,BLBCs尚无有效的靶向治疗药物[2],目前对于BLBCs的发病机制仍知之甚少[3].基因组/转录蛋白组学分析对于阐明BLBCs的分子病理学、发现药物靶点具有十分重要的意义[4].
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大鼠血红素加氧酶-1变异体对血清胆红素水平的影响
新生儿高胆红素血症是临床常见病症,传统疗法只能清除已经形成的胆红素,至今尚无一条有效途径能起到早期预防和治疗的作用。微粒体血红素加氧酶-1 (Heme Oxygenase-1, HO-1) 是血红素氧化降解为胆绿素的限速酶,抑制HO-1活力则能有效降低血清胆红素水平。本实验采用定点突变法以构建变异体大鼠HO-1 cDNA(25位组氨酸→丙氨酸,His25Ala),检测变异体HO-1活力,并在酶促反应系统内加入与野生型HO-1等量的变异体HO-1,测定胆红素含量,以评价变异体HO-1的抑制作用,为临床防治新生儿高胆红素血症提供一条新途径。 一、材料与方法 1.剪切的野生型大鼠 HO-1 cDNA表达型质粒的构建:BamHI酶切表达型质粒pcDNA3后形成的粘性末端经DNA聚合酶I填平(Klenow大片段)。
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疾病严重性-诊治意识模糊-经济压力——Her2阳性乳腺癌针对性治疗需医保助力
乳腺癌是目前我国女性癌症发病率高的一种癌症,严重威胁女性的生命健康.在所有乳腺癌患者中,有20%~25%的人属于Her2基因过表达.与其它乳腺癌患者相比,Her2基因过表达型乳腺癌更容易出现复发和转移,平均生存期较短,且对一些常规治疗药物不敏感.然而,在我国现阶段,困扰此类患者的还不仅仅是疾病本身的严重性.
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乳腺基底细胞样癌的临床病理分析
近年通过对乳腺癌的基因芯片等研究, 并结合患者的预后,对其进行了基因和免疫表型分类,将其分为5 种亚型:基底样型、HER2 高表达型、正常乳腺样型及管腔A 型、管腔B 型,前两型预后较差[1].
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三阴性乳腺癌相关基因的研究进展
乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一,是一种异质性较高的恶性肿瘤.Perou等[1]通过采用cDNA微阵列技术将乳腺癌分成导管A型、导管B型、人表皮生长因子受体(Her-2)过表达型和基底样(Basal-like)型.Bryan等[2]首次明确提出了三阴性乳腺癌(triplenegative breast cancer,TNBC)的概念,即雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(prog-esterone receptor,PR)和Her-2表达均为阴性的一种特殊类型的乳腺癌.近年来,随着医疗水平的不断提高,乳腺癌相关基因的研究越来越深入,基因表型分析领域的研究成果为TNBC的治疗和预后评估提供了很大帮助,本文将对TNBC相关基因的研究进展进行综述.
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围着床期小鼠胚胎表达肿瘤易感基因101(TSG101)
揭示肿瘤易感基因101(TSG101)在围着床期胚胎中的时空表达型.方法:收集囊胚、培养获得着床前、着床后以及长开的小鼠胚胎.利用全胚原位杂交以及全胚免疫染色方法检测围着床期小鼠胚胎中TSG101的时空表达型.结果:TSG101表达于围着床期胚胎的内细胞块和滋养层细胞中,其中内细胞块细胞中的表达更强.结论:围着床期胚胎表达TSG101,暗示TSG101在胚胎着床过程中发挥作用.