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CAPS在钙离子触发的囊泡释放中的作用
钙离子依赖的分泌激活蛋白(Ca2+-dependent activator protein for secretion,CAPS)是一类在进化中高度保守的促分泌蛋白,它存在两种异构体:CAPS1和CAPS2,两者在不同发育阶段的表达水平及组织中的分布上均有所差异.以往的研究认为CAPS1作为磷脂酰肌醇二磷酸(phosphatidylinositol diphosphate,PIP2)连接蛋白参与钙离子调节的大的致密核心囊泡(large dense-core vescicle,LDCV)与膜融合过程.近的研究表明,CAPS1还作用于LDCV与膜融合的上游阶段,在分泌性囊泡的形成以及维持其稳定性方面发挥作用.
关键词: 钙离子依赖的分泌激活蛋白 大的致密核心囊泡 胞吐作用 -
神经突触化学传递中胞吐作用的分子机制
目录一、参与胞吐作用的相关蛋白(一)突触囊泡膜蛋白(二)突触前膜有关蛋白(三)胞液可溶性蛋白质(四)其他蛋白质
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SynaptotagminⅡ在大鼠嗜碱性白血病细胞胞吐中的调节作用研究
目的研究SynaptotagminⅡ(简称Syt2)在RBL-2H3(简称RBL)胞吐中的作用.方法利用钙离子载体和抗原分别刺激Syt2+和Syt2-(分别为Syt2过表达和表达减弱的RBL),诱导其活化而分泌,检测分泌的β-氨基已糖苷酶、组织蛋白酶D和5-羟色胺,分析Syt2对于细胞分泌的影响. 结果与对照相比,Syt2+分泌的β-氨基已糖苷酶无明显区别,而Syt2-分泌的β-氨基已糖苷酶增加达3.5倍,结果说明Syt2的过表达对β-氨基已糖苷酶分泌无影响,而Syt2表达减弱却促进 β-氨基已糖苷酶的分泌.与对照相比,Syt2+分泌的组织蛋白酶D减少近一半,而Syt2-分泌的组织蛋白酶D增加近1倍,说明Syt2的表达量与组织蛋白酶D分泌量成负相关关系.与对照相比, Syt2+分泌的5-羟色胺无明显差别,而Syt2- 分泌的5-羟色胺有少量增加,说明Syt2的表达量对于5-羟色胺分泌有轻微影响.结论 Syt2主要对于RBL溶酶体胞吐起负调控作用.
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运动与骨骼肌中钙振荡
Ca2+作为细胞第二信使,对调节肌肉兴奋一收缩耦联、分泌细胞兴奋一分泌耦联、神经元可塑性、递质释放、胞吐作用、卵母细胞受精信号,以及多种酶活性、细胞分化、生长等发挥关键的作用.即使在同一细胞,Ca2+也能激活不同的信号通路[1,2].然而,Ca2+作用原理却似乎十分简单:Ca2+作为单原子二价阳离子既不被分解也不被合成,只是通过与效应蛋白的结合与解离,以及在不同细胞器之间的运动,来实现其对生物学过程的控制[3].
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Synaptotagmin1在小鼠卵母细胞体外受精过程中的作用
目的 探讨小鼠受精时卵母细胞皮质颗粒胞吐的动态变化以及Synaptotagmin1 (Syt1)对小鼠受精过程的影响.方法 活细胞实时拍摄系统观察小鼠卵母细胞受精时皮质颗粒发生胞吐的动态变化特点.利用Syt1-Morpholino干扰方法,并设立对照,采用免疫荧光、Western blot和qRT-PCR方法分析Syt1在小鼠受精和不同时期受精卵中的作用,并统计分析Syt1对小鼠受精率的影响.结果 活细胞实时拍摄系统成功显示了小鼠皮质颗粒胞吐的动态过程,未发现胞吐位置与纺锤体和染色体位置之间存在明确的位点关系,但是部分位置在卵母细胞极体附近.Syt1在小鼠受精后30 min~24 h不同时期受精卵中的表达量逐渐增加.Syt1表达降调后影响了小鼠受精及皮质颗粒分布,降低了小鼠受精率.结论 用活细胞实时拍摄系统动态观察了小鼠皮质颗粒受精时胞吐的动态变化,Syt1直接参与了小鼠卵母细胞的受精过程.
关键词: 受精 合子 胞吐作用 Synaptotagmin1 -
延长针刺时间大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核非突触部位胞吐数量的变化
目的:用形态与功能相结合的方法,观察在甲醛致痛时,延长针刺时间并增强针刺频率,大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核内大颗粒小泡非突触部位胞吐的情况.方法:实验于2004-06/12在承德医学院中心实验室完成.选择成年健康Wistar大鼠60只,雌雄不拘.按完全随机法分为3组,即针刺组、甲醛+针刺组及生理盐水组,每组20只.每组再随机分为5个亚组,每个亚组4只.①针刺组大鼠应用针麻仪(9-6805Ⅱ型、输出电压5 V)在相当于人的"四白穴"处给予针刺.②甲醛+针刺组先给予大鼠前爪跖侧皮下注射5g/L甲醛150 μL致痛10 min,然后进行针刺,针刺方法同上.③生理盐水大鼠只给予前爪皮下注射生理盐水150μL,不给予针刺.以上3组大鼠中,每组的5个亚组大鼠在原实验(针刺0.5,1,1.5,2,2.5 h,针刺疏密波频率40 Hz/s)基础上,将针刺时间分别延长至4,6,8,10,12 h,针刺疏密波频率增至60Hz/s.在分别给予实验条件处理后立即将各组大鼠麻醉处死,经升主动脉插管灌注生理盐水150 mL,经固定液固定后取出脑干,切片,电镜下观察,记录大颗粒小泡于非突触部位的胞吐情况.结果:60只大鼠全部进入结果分析,实验过程中无脱落.①各组大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核大颗粒小泡于非突触部位的胞吐数量比较:在针刺镇痛早期,各组大颗粒小泡于非突触部位的胞吐数量均增加,到10 h时达高峰,甲醛+针刺组反应明显,针刺组次之,生理盐水组无明显变化.3组间比较,差异有显著性意义(P<0.01).以后随针刺时间延长大颗粒小泡的数量及胞吐呈下降趋势,逐渐出现大颗粒小泡衰竭现象.②胞吐按下列过程连续进行:大颗粒小泡与质膜接触、融合进而形成小的开放通道;通道进一步开大,呈"Ω"样,其内的物质开始排入细胞间隙;大颗粒小泡完全将其内的物质排入细胞间隙,自身的单位膜成为细胞膜的一部分.结论:在一定时间内,大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核大颗粒小泡于非突触部位的胞吐数量随针刺时间的延长而增加.在针刺镇痛过程中,三叉神经脊束核尾侧亚核可能通过大颗粒小泡于非突触部位胞吐释放其内储存的化学物质,参与了对甲醛致痛的抑制作用,从而起到镇痛作用.
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胎盘Hofbauer细胞及其hAⅤ表达
胎盘是妊娠期间存在的特有器官,不仅能够实现母体和胎儿间物质交换,还可以通过胎盘屏障抵抗各种侵入胚胎的病原微生物。 Hofbauer细胞是胎盘巨噬细胞,位于绒毛间质内,能够捕获和提呈抗原信息,参与母胎免疫反应;其表面表达人膜联蛋白Ⅴ( Human AnnexinⅤ, hAⅤ)等多种受体。 hAⅤ是钙离子依赖的磷脂结合蛋白家族成员,参与细胞内、外多种代谢过程,如细胞信号转导、分化、细胞膜运输、胞吞、胞吐作用等。本文围绕胎盘Hofbauer 细胞及其hAⅤ研究进展进行综述,现将结果报道如下。
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重症肺炎患者中性粒细胞胞吐作用的改变
目的研究重症肺炎患者中性粒细胞的功能改变.方法采用免疫化学法测定32例重症肺炎患者中性粒细胞胞吐作用和氧化酶反应的变化,并与健康对照组比较.结果重症肺炎患者血液中性粒细胞的基础和PMA刺激的胞吐作用均明显下降(P<0.01);重症肺炎患者的基础和PMA刺激的反应性氧属(ROS)产生明显增加;重症肺炎患者肺部中性粒细胞释放乳铁蛋白、髓过氧化物酶(MPO)和ROS增加,PMA刺激后相似;肺炎的严重性与血液中性粒细胞释放乳铁蛋白呈负相关.结论重症肺炎患者中性粒细胞胞吐作用明显受损,与预后相关.
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嗜碱性粒细胞CD63分子表达变化在过敏性疾病诊断中的意义
通过流式细胞术进行的体外嗜碱性粒细胞激发试验不仅能够敏感地、特异性诊断多种过敏性疾病,而且可以有效检测特异性免疫治疗的疗效.CD63表达于细胞内颗粒内,在激活状态的嗜碱性粒细胞,由于胞吐作用使细胞内颗粒与细胞膜融合则CD63高表达于细胞膜,CD63是目前常用的流式细胞术检测嗜碱性粒细胞激发试验的标记分子之一.
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小窝蛋白-1的生物学功能及其急性肺损伤
概述一、小窝小窝早是由Palade于1953年在电镜下观察内皮细胞时发现,当时称之为“质膜囊泡”,而“小窝”一词是由Yamada在1955年提出,描述胆囊上皮细胞上“与细胞外相交流的小口袋、囊泡、洞穴或凹陷”.随后,在其他多种细胞上也发现类似结构,其直径为50~100 nm,呈烧瓶形或Ω形,也有呈扁平形、囊泡形及管形等,它们可单独存在,也可由单个融合成葡萄串状和长管形.而且它们在细胞表面可以是开放的或是关闭的,以产生胞吞或胞吐作用.小窝主要由脂类及蛋白质组成,其中脂类包括胆固醇、鞘磷脂、鞘糖脂,蛋白质包括小窝蛋白、脂质锚定蛋白等.
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Lysosomal Exocytosis in Schwann Cells Contributes to Axon Remyelination
髓鞘形成是一个包括协同性的胞吐、内吞、mRNA转运和细胞骨架的动态变化的复杂过程.尽管髓鞘的异常在溶酶体贮积症中很常见,但对溶酶体在髓鞘形成和维持中所扮演的角色仍不清楚.本文发现Schwann细胞中的晚期内涵体/溶酶体包含大量的髓鞘蛋白P0,含量占超过一半的外周神经系统中的致密髓鞘的总蛋白并且在不同的刺激下表现出Ca2+依赖性的胞吐作用.Rab27a(一种将分泌溶酶体运输至细胞膜的小GTP酶)下调,极大地阻碍了Schwann细胞中的溶酶体胞吐作用,减少了再生坐骨神经的髓鞘形成.这些发现强调了Schwann细胞中溶酶体的新角色,提示调节Schwann细胞中的溶酶体胞吐作用在外周神经系统中有很重要的生理和病理意义.
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膜转运在骨疾病中的作用
人体内多种细胞均存在两种膜转运主要的途径:内吞与分泌,调节细胞的功能.成骨细胞与破骨细胞在调控骨重塑与平衡过程中,内吞与分泌亦发挥了重要的作用.内吞和分泌的调控因子基因突变已被确认为骨疾病的原因.由此可见,研究骨细胞膜转运中基因分子机制为骨骼疾病的新治疗目标提供了依据.
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溶酶体在肿瘤演进过程中作用的研究进展
溶酶体内部呈酸性环境,含有50余种酸性水解酶以及多种溶酶体特异性膜蛋白,主要功能是接受和降解大分子物质.在某些肿瘤细胞中溶酶体的功能存在异常,部分酸性水解酶的表达会发生变化.抑制溶酶体胞吐作用能够抑制肿瘤侵袭转移,因为既不影响酸性水解酶的活性,也会导致溶酶体膜的不稳定,增加肿瘤细胞对药物的敏感性.
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受体介导内吞引起的巨噬细胞质酸化和胞吐作用;p53基因Cdna突变及其蛋白高表达与大肠癌预后关系;巨噬细胞吞噬过程中膜磷脂流动性和受体流动性的关系;经阴道输卵管插管行配子输卵管移植的临床研究;受体介导内吞对巨噬细胞膜电位、胞浆和溶酶体Ph的影响;清除循环肿瘤坏死因子对急性肺损伤的影响
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肥大细胞脱颗粒机制研究进展
肥大细胞是一种高度特异的分泌细胞,能释放多种细胞因子、细胞毒素、趋化因子及蛋白酶等一系列具有细胞毒的活性物质,使平滑肌收缩和微血管通透性升高,并募集炎症细胞,引起组织损伤和变态反应.其脱颗粒的分子机制是一个由多种蛋白质分子介导的,各个环节受到精确调控的复杂过程.肥大细胞的这种脱颗粒反应,既是机体的一种防御反应,也是速发型变态反应和炎症等病理反应的基础.
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三氧化二砷诱导小鼠肝癌细胞H22外泌exosome及相关机制研究
目的 探讨三氧化二砷在小鼠肝癌细胞H22外泌exosome中的影响. 方法 MTT法筛选二氧化二砷的合适药物浓度;密度梯度离心和超速离心法提纯exosome,Bradford法对exosome总蛋白进行定量分析;Western blot检测影响小囊泡vesicle分泌的复合体SNARE的重要组成及凋节蛋白Syntaxin的表达;结合钙荧光探针Fura-2、荧光倒置定量显微镜测定细胞内游离钙的相对浓度.结果维持小鼠肝癌细胞H<22>90%存活48 h的药物浓度为1.25 μmmol/L;药物作用前后,细胞数为5×104ml-1的H22细胞常规培养48 h所得细胞悬液200 ml,经密度梯度离心和超速离心所得exosome的总蛋白浓度分别为(0.85±0.13)、(0.96±0.10)mg/ml,差异具有统计学意义(P<0.05);三氧化:砷作用前后,H22细胞均有Syntaxin蛋白表达,三氧化二砷处理后,其表达明显增加(P<0.05). 结论 SNARE复合体假说也适用于小鼠肝癌细胞H22的exosome外泌过程,三氧化二砷在exosome的外泌过程中有一定的促进作用.