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大鼠额叶皮质损害后胚脑移植适宜时期的探讨
目的:探讨脑外伤后进行脑组织移植的适宜时期.方法:机械抽吸法制作大鼠右侧额叶皮质损害模型.在大鼠额叶皮质损害后立即、2周及2月时采用铺片法将E15-17天胚脑额叶皮质移植入皮质损害腔内.动物存活2月再进行脑功能测试和形态学观察.结果:额叶皮质损害后立即移植鼠移植侧δ、0频段相对功率值显著高于健侧(P<0.05),α、β频段相对功率值显著低于健侧(P<0.05),脑电功率谱曲线两侧明显不对称,表明受损的脑功能也没有恢复.额叶皮质损害后2周及2月移植鼠移植侧δ、0、α、β频段相对功率值均与健侧近似(P>0.05),脑电功率谱曲线两侧基本对称,脑电功率谱改善.形态学观察可见损害后立即移植鼠少见有移植组织存活,损害后2周及2月移植鼠,绝大多数见有良好的移植组织存活.结论:大鼠额叶皮质损害后2周至2月均为胚脑组织移植适宜时期.
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帕金森病的外科手术治疗
帕金森病的外科手术治疗近十年来再度兴起,本文就英文文献将其综述如下:1历史的回顾帕金森病(Parkinson's Disease,简称PD)的外科治疗始于二十世纪初.早期仅限于锥体系,锥体外系概念产生后才转移到基底节.1939年偶然发现毁损尾状核可缓解震颤.1953年又偶然发现结扎脉络膜前动脉疗效较好,当时以为此动脉仅供血苍白球,便开始了苍白球毁损的探索:苍白球毁损术发展分三阶段:(1)50年代的前背侧苍白球毁损术;(2)60年代腹后侧苍白球毁损术(PVP);(3)90年代后的PVP.
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神经细胞及转基因细胞脑内移植的基础与临床研究
目的探讨移植的胚胎小脑组织在成年小鼠脑内,黑质细胞和TH转基因细胞移植在猴脑内,人胚脑细胞植入人脑内能否存活及观察植入的神经元能否纠正和改善中枢神经系统的功能缺陷和症状.方法 (1)将胎龄13 d的C57BL/6小鼠胚胎小脑组织悬液植入3个月龄的BALB/c成年小鼠小脑内.(2)将构建的TH基因修饰细胞及胚脑黑质细胞植入猴帕金森病模型脑尾状核内.术后进行组织学观察.在此基础上,将胎龄为9～12周的人胚胎小脑细胞悬液植入到6例重度小脑萎缩病人的小脑内,并观察疗效.选用自动流产人胚黑质细胞及肾上腺髓质细胞悬液移植到5例晚期帕金森病病人脑尾状核内.结果小鼠及猴的动物实验组织学证实神经细胞移植后可在受体脑内存活和再生,并有浦氏细胞分化成熟和迁徙到颗粒细胞层.TH基因修饰细胞移植到猴的尾状核内,可以纠正帕金森病猴的症状和体征;移植6个月后组织切片表明猴帕金森病模型脑微包囊内转基因细胞存活而且TH基因表达呈强阳性.6例重度小脑萎缩病人及5例晚期帕金森病病人移植后近期疗效良好,多数病例远期疗效退步,仅有2例病人疗效稳定.结论未成熟的神经细胞或转基因细胞在受体脑内可以存活,并具有神经细胞再生和改善神经功能的潜力.
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大鼠胎脑神经细胞与胶原复合体移植对脑损伤的修复
目的:评价胶原蛋白(Collagen)的细胞相容性;研究胶原蛋白(C)与大鼠胎脑神经细胞(FBN)复合体(C-FBN)脑内移植对脑损伤的修复作用. 方法 :将大鼠FBN与胶原蛋白联合体外培养,进行光镜、扫描电镜观察.并将体外联合培养3～5 d的C-FBN(移植前 48 h培养液中加入 BrdU)移植到大脑皮质损伤模型的大鼠脑损伤部位,术后 3, 6, 10, 15及 30 d光镜、 BrdU免疫细胞化学染色(ICC)、透射电镜观察脑组织对移植物的反应、移植细胞生长状态及载体在体内的降解情况等. 结果 :胶原蛋白对 FBN生长无不良影响;脑组织对移植物无明显的免疫排斥反应;胶原蛋白与周围脑组织整合好,有血管长入移植物中;载体内有大量存活神经细胞,而且术后各时段都检出 BrdU阳性细胞;移植区有突触形成;胶原蛋白海绵吸收、降解快,可诱导组织再生. 结论 :胶原具有良好的细胞相容性和组织相容性,是神经组织工程的一种较为理想的生物载体材料;生物材料与胎脑神经细胞联合培养移植是治疗脑损伤较有前途的新方法.
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小鼠胚胎干细胞植入大鼠脑内分化的研究
目的观察小鼠胚胎干 (ES)细胞植人大鼠隔区和海马内后的分化情况 , 并对其作研究和分析.方法成年 SD大鼠 35只,体质量 200～ 250 g,雌雄不限.以 SD大鼠为宿主,将 ES细胞移植入宿主隔区和海马内,移植后 l,2,3,4和 8周后取脑,冷冻切片,进行 Nissl,M6,NSE,GFAP免疫组织化学染色.结果 ES细胞移植入大鼠隔区和海马内后,从第 2周开始表达 M6、 GFAP、 NSE等抗原,持续至第 4周,主要位于移植区内,较少迁移.结论小鼠 ES细胞移植入大鼠隔区和海马内后,分化为神经元,神经胶质细胞.
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新生动物神经干细胞脑内移植的研究进展
神经干细胞移植应用于成人临床已较长时间,但总的移植效果欠佳,目前尚无神经干细胞移植治疗儿童中枢神经系统疾病的报道.新生动物神经干细胞移植的实验研究发现,新生动物的移植效果明显优于成年动物,显示了神经干细胞移植在儿科临床应用的可观前景.该文就新生动物优于成年动物的移植特点及新生动物脑损伤后神经干细胞的移植效果作一简要综述,为临床神经干细胞的应用提供理论依据.
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脉络丛上皮细胞在脑缺血中的神经保护作用
脉络丛上皮细胞可分泌多种生物活性肽,包括生长因子和神经营养因子,对促进大脑发育、维持大脑形态和功能稳定具有重要作用.此外,脉络丛上皮细胞具有神经干细胞的特性,将其作为移植细胞治疗脑缺血具有合理性.离体实验和动物实验均证实,脉络丛上皮细胞可通过多种机制抗氧化损伤、减少细胞凋亡和抑制炎性反应,从而发挥神经保护作用.文章对脉络丛上皮细胞在脑缺血中的神经保护作用进行了综述.
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大鼠脑外伤后胎脑移植的增殖细胞核抗原和Bcl-2的表达
目的:研究大鼠脑外伤后胎脑移植的增殖细胞核抗原(PCNA)和Bcl-2的表达.方法:自由落体撞击法制作脑外伤模型,延迟2周作创伤灶内胎脑细胞移植,伤后6周观察创伤灶HE染色,PCNA和Bcl-2的免疫组化染色、计数.结果:伤后均表现为胶质细胞和毛细血管的增生,胎脑移植后更明显;PCNA表达两者基本相同;Bcl-2在单纯损伤组未见表达,而在损伤后移植组明显表达.结论:胎脑移植可促进创伤脑区Bcl-2表达,对脑外伤引起的神经细胞死亡具有保护作用.
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星形胶质细胞在脑内移植中的作用
目的探讨星形胶质细胞在脑内移植中的作用.方法应用人胚胎皮质的星形胶质细胞移植于恒河猴脑皮质内,通过免疫组化方法动态观察星形胶质细胞的形态变化.结果星形胶质细胞在宿主组织中可继续生长、分化,其胶质纤维突起生长形成,并与宿主组织呈渐进融合.同时,星形胶质细胞与移植组织中毛细血管的形成关系密切,并可能直接参与毛细血管的形成过程.结论星形胶质细胞移植对于改善宿主脑组织的微环境条件,促进其结构功能修复具有积极意义.
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细胞移植在中枢神经系统疾病中的应用
近些年的研究证实中枢神经组织有再生能力,但损伤后修复功能较差,很多实验结果不能令人满意.既往的脑移植或脑组织移植大的生物学障碍是移植物难以在宿主体内生存或发育,移植效果的稳定性及其功能的恢复不肯定.干细胞是具有多种分化潜能和自我更新能力的细胞,广泛存在于造血系统.其低免疫源性、多潜能分化及不断自我更新能力,使研究者的策略转向了细胞移植.本文对近年来细胞移植在中枢神经系统疾病中的应用研究作一综述.
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胎脑组织移植对额叶皮质损伤后基底前脑胆碱能神经元变性的影响
目的观察胎脑组织移植对额叶皮质损伤后大鼠基底前脑胆碱能神经元变性的影响.方法用外科手术破坏大鼠双侧额叶皮质8d后,将胎脑组织移植到预制脑创腔内.3个月后,用Y型迷宫检测动物的学习、记忆机能,用组织化学方法检测基底前脑含乙酰胆碱脂酶(AChE)活性神经元,并与对照组比较.结果双侧额叶皮质损伤后动物的学习、记忆能力明显下降,基底前脑胆碱能神经元明显减少,与正常组比较,差异有显著性(P<0.05)和差异有极显著性(P<0.01).胎脑组织移植后3个月,双侧额叶皮质受损动物的学习、记忆机能明显改善,基底前脑胆碱能神经元数量明显增加,与对照组比较,差异有显著性(P<0.05).结论胎脑组织移植可有效地预防双侧额叶皮质受损大鼠的学习、记忆机能的下降和基底前脑胆碱能神经元数量的减少.
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大鼠胎脑组织冻存与同种异体移植
目的探讨冻存大鼠胎脑细胞体外培养的活性及其移植后的存活情况。方法对经冷冻保存1～24周的WK大鼠胎脑细胞进行体外培养，观察其存活情况，并将保存24 h后培养14 d的胎脑细胞行脑内定位移植。结果冻存1～24周的胎脑组织其活细胞率在90 %以上，复苏后培养14 d的胎脑细胞活性强；胎脑细胞移植后可在受者体内存活至少30 d以上。结论冷冻保存后培养的胎脑细胞能够存活，并可用于移植。
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帕金森病脑内移植治疗的临床研究进展
脑内细胞移植是神经修复学研究的一个重要方面,对帕金森病的治疗有广阔应用前景.近年来用于研究的细胞有多种,临床结果初步显示有一定效果的细胞类型有:中脑细胞、视网膜色素上皮细胞、交感神经细胞、颈动脉体球细胞、骨髓基质细胞和嗅鞘细胞等,值得深入探讨,本文就该领域的研究近况作一综述.
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小鼠胚胎干细胞植入大鼠脑内存活和增殖
[目的]观察小鼠胚胎干细胞(ES细胞)植入大鼠的隔区和海马内后存活和增殖的情况.[方法]以SD大鼠为宿主,将BrdU标记的ES细胞植入宿主的隔区和海马内,移植后l、2、3、4和8周后取脑,冰冻切片,进行尼氏、BrdU、PCNA免疫组织化学染色,观察ES细胞存活和增殖的情况.[结果]ES细胞移植人大鼠隔区和海马内后,从第l周到第3周,移植物呈团块生长,第4周移植物较第3周缩小,第8周未发现移植物;BrdU和PCNA(核增殖抗原)免疫染色结果阳性.[结论]小鼠ES细胞移植人大鼠隔区和海马内后,可以存活增殖4周左右.
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影响人胚胎脑组织冷藏因素的研究
人胎脑组织的良好保存是临床上中枢神经系统疾病或损伤的患者获得脑组织移植的根本保证.本人从事神经细胞冷藏技术多年,曾对人胎脑神经细胞的冷藏保存进行了系列研究.我们对人胎脑组织在4℃冰箱和-196℃液氮内保存、脑组织块与脑细胞悬液冷藏和人胎脑组织与大鼠胎脑组织冷藏后的活细胞成活率进行了比较,并对冷藏时合理控制温度下降速度进行了探索.收集2hr内水囊引产8～16W的人胚胎,在无菌条件下取大脑皮质或黑质,入不含钙镁的PBS中.将脑组织剪碎(脑组织块冷藏组被剪成2mm3小组织直接入MEM培养液)过200目尼龙网制成悬液,离心去上清后加入EME培养液并分装数管.取一管进行台盼蓝染色做细胞总数计数、活细胞及死亡细胞计数,为冷藏前对照.其余分别放入4℃冰箱保存和-196℃液氮内保存(先4℃ 10min,再入-20℃ 10min,然后再投入液氮中).这样可以合理的控制温度的下降速度,从而减少快速冷冻对细胞的损伤.结果表明,4℃冰箱保存组1～5d的细胞成活率明显高于液氮保存组.但5d后4℃冰箱保存组的细胞逐渐死亡,而液氮保存组细胞成活率并不随保存时间的延长而明显改变.因此 ,需要长期保存的脑组织以液氮冷藏为宜,而短期内将用于科研和临床的脑组织好采用4 ℃冰箱保存.我们在实验中发现,以脑组织块的形式放入培养液进行液氮冷藏,复苏后制成悬液在镜下观察,其细胞成活率高于悬液保存组,且细胞形态与冷冻前接近.其机制有待进一步探讨.冷藏前我们还对加有10%的二甲基亚砜的细胞悬液与未加组的细胞悬液进行了观察比较, 发现前者的细胞成活率略低于后者.我们认为二甲基亚砜对细胞可能有一定的毒性作用.我们还发现在同样条件下,大鼠脑组织冷藏后的细胞成活率高于人的脑组织细胞成活率.说明人的脑组织冷藏要求条件高、难度大.我们采用所掌握的冷藏技术已成功地将人胚胎黑质细胞移植到了大鼠帕金森氏病动物模型的脑中,并获得了预期的结果.
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胰岛素对神经系统的作用研究进展
神经系统(Nervous system,NS)损伤后的再生修复的研究已进行百余年,初的研究是1890年Thompson等[1]用脑组织移植来修复创伤性脑损害.自1928年Cajal等研究表明受损的NS神经元缺乏修复的能力以来,人们普遍认为NS损伤后的再生能力极其受限.
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脑损伤及胎脑移植的实验研究
目的 观察胎脑细胞悬液延迟移植于脑损伤的生长情况。 方法 46只SD大鼠采用自由落体撞击法制备脑损伤模型。16只 仅做单纯脑损伤，伤后14，20，30，40 d处死大鼠做HE染色形态学观察；另30只做胎脑移 植，于伤后 14 d做同种胎脑经机械分离的细胞悬液延迟移植，移植后 1，5，14，30，75 d处死大鼠做H E染色形态学观察。 结果 所有实验大鼠生长良好，无肢体偏瘫。胎脑细胞悬液浓度为4.4 8×107/ml，活细胞占85.3％，神经细胞占48.2％。伤后14 d表现为陈旧性损 伤，随时间 推移，创伤灶被胶质细胞充填。移植后5 d出现免疫细胞，14 d胎脑细胞存活，宿主的毛细 血管、胶质细胞增生，30 d胎脑细胞发生分化，75 d胎脑细胞与宿主相互融合。免疫细胞和 小部分移植物碎片同时始终存在。 结论 大鼠脑损伤后行胎脑细胞悬液移植，移植物是可以存活并可能发 挥功能的。
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牛磺酸对胚胎中脑细胞移植后的保护作用
①目的观察牛磺酸对帕金森病（PD）模型大鼠胚胎中脑细胞移植术后移植细胞的存活及生长的影响。②方法应用6-羟基多巴胺（6-OHDA）制备偏侧损毁的PD模型大鼠，将胚胎腹侧中脑（VM）细胞悬液或生理盐水（NS）（对照组）立体定位移植到模型大鼠的损毁侧纹状体中，VM移植大鼠于术后侧脑室分别注射NS或牛磺酸，56d后通过免疫组织化学酪氨酸羟化酶（TH）染色观察纹状体中多巴胺（DA）能神经元（TH阳性细胞）的存活及生长情况。③结果行胚胎中脑细胞移植术后，在PD模型大鼠的损毁侧纹状体中可检测到移植成活的DA能神经元，侧脑室注射牛磺酸组比侧脑室注射NS组细胞成活数目明显增多（F=508.5,q=3.9,P<0.01）。而在对照组模型大鼠的损毁侧纹状体中未检测到DA能神经元。④结论牛磺酸可有效改善移植细胞的存活条件，并促进移植细胞的生长。
