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低氧性肺动脉高压大鼠肺组织硫化氢的变化
本文旨在探讨低氧对大鼠内源性硫化氢体系的变化.采用生化反应方法测定血浆中硫化氢的含量和肺组织中硫化氢合酶的活性,采用定量竞争性RT-PCR的方法检测肺组织中胱硫醚-γ-裂解酶(CSE) mRNA的含量.结果显示,与对照组相比,低氧组大鼠的血浆硫化氢含量明显减少[(192.2±22.1)μmol/L vs (301.6±32.4)μmol/L, P＜0.01)],肺组织中硫化氢合酶的活性明显下降[(0.127±0.023) vs (0.278±0.099 )nmol/mg wet tissue·min, P＜0.01], CSE mRNA的含量明显减少[(1.02±0.15)×10-6 fmol vs (2.17±0.22)×10-6fmol, P＜0.01].以上研究表明,低氧对大鼠的内源性硫化氢体系有抑制作用.
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硫化氢对柯萨奇病毒感染的病毒性心肌炎小鼠的保护作用
目的研究硫化氢对柯萨奇病毒B3（Coxsachievirus B3， CVB3）感染的病毒性心肌炎小鼠的保护作用以及胱硫醚γ-裂解酶（ CSE）/硫化氢（ H2 S）通路在其体内的表达情况。方法将110只5周龄的雄性BALB/c小鼠随机分为4组：正常对照组、病毒性心肌炎组、硫氢化钠（外源性H2 S供体）组和DL-炔丙基甘氨酸（ PAG，CSE不可逆抑制剂）组。以腹腔注射CVB3建立急性病毒性心肌炎模型，接种当天记为第0天，24 h后每组每日经腹腔分别注射相应干预药物。分别于接种后第4天和第10天从各组随机抽取10只处死，留取血清和心肌标本。观察心肌炎症病理改变，酶联免疫吸附法检测H2 S及IL-6、TNF-α等炎症因子含量，逆转录-聚合酶链反应法检测心肌组织CVB3、CSE的mRNA表达水平，免疫组化及蛋白质印迹法定性、定量检测CSE蛋白水平表达。结果与正常对照组比较，病毒性心肌炎组血清和组织H2 S浓度、CSE mRNA、CSE蛋白水平表达均明显下调，给予NaHS干预可明显上调H2 S水平，减轻心肌损伤、减轻炎症细胞浸润以及间质水肿，对病毒CVB3 mRNA的表达有抑制作用，而给予PAG干预，可明显抑制H2 S和CSE表达，加重心肌损伤、炎症细胞浸润及间质水肿，促进CVB3 mRNA的复制。结论在病毒性心肌炎中，CSE/H2 S通路表达明显受到抑制，给予PAG干预可明显抑制该通路的表达，加重心肌损伤，促进病毒复制，外源性供给硫化氢可对感染心肌起到保护作用，且可抑制病毒复制。
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游泳运动后自发性高血压大鼠主动脉一氧化氮的变化及其对胱硫醚-γ-裂解酶/硫化氧体系的影响
目的:观察运动对自发性高血压大鼠(SHR)主动脉一氧化氮合酶(NOS)、一氧化氮(NO)、胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)和硫化氢(H2S)的影响,探讨运动干预后SHR大鼠内源性NO的变化对主动脉CSE/H2S体系的调节作用.方法:选用雄性SHR大鼠16只,随机分为高血压对照组(SC组)和高血压运动组(ST组),每组8只.同时选用雄性Wistar大鼠8只,为正常对照组(WC组).ST组大鼠进行8周、每周6次、每次90min中等强度的无负重游泳运动.结果:8周90min游泳运动后,SC组大鼠血压较实验前显著升高(P＜0.01),ST组大鼠血压较SC组大鼠血压显著下降(P＜0.01),且与实验前相比无显著性差异(P＞0.05)；ST组大鼠较SC组大鼠主动脉NOS、NO、CSE和H2S水平显著升高(P＜0.05).结论:运动可抑制SHR的血压上升,增加SHR主动脉NOS和NO的含量,内源性NO对SHR主动脉CSE/H2S体系在运动缓解血压上升中呈促进作用,这一过程参与了运动降压的调控机制.
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免疫组化定量分析吸烟对大鼠胸主动脉中胱硫醚-γ-裂解酶的影响
目的 定量研究烟草烟雾对大鼠胸主动脉的胱硫醚-γ-裂解酶影响.方法 16只10周龄SD大鼠随机分为对照组(正常呼吸条件下饲养)和吸烟组(每天吸烟20支,连续90 d),每组8只.被动吸烟大鼠模型造完后断颈处死,取其近心端胸主动脉于10%的福尔马林固定1～2 d,采用免疫组化染色和显微图像定量分析法,观察大鼠胸主动脉胱硫醚-γ-裂解酶的面积密度和光密度.结果 吸烟组的大鼠胸主动脉中胱硫醚-γ-裂解酶的表达面积密度明显低于对照组(6.79±1.04vs.14.98±2.32,P＜0.01);其光密度值也明显低于对照组(0.15±0.04 vs.0.21±0.03,P＜0.01).结论 吸烟可导致大鼠胸主动脉中的胱硫醚-γ-裂解酶含量降低.
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肝星状细胞合成气体信号分子H2S的测定及其意义
目的:测定活化肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)H2S的生成率及对细胞增殖的影响.方法:采用活化大鼠HSC-T6,分4组:对照组、炔丙基甘氨酸(D-Propargylglycine,DL-PPG)组、N-硝基-L-精氨酸甲酯(Nitro-L-arginine methyl ester,L-NAME)组、氯化高铁血红素(hemin)组,每组重复6个皿.RT-PCR检测HSC-T6胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)mRNA水平,亚甲基蓝分光光度法测定H2S生成率,MTT法观察不同浓度外源性H2S供体-NaSH(0,50,100,500,1000 μmol/L)对HSC-T6增殖的影响.结果:HSC-T6能自分泌H2S,DL-PPG可明显减少HSC-T6 H2S生成率(4.55 nmol/min±1.06 nmol/min vs 6.79 nmol/min±1.27 nmol/min,P<0.05).RT-PCR显示:HSC-T6 CSEmRNA阳性,DL-PPG、hemin均降低HSC-T6CSEmRNA水平(P<0.05);L-NAME对HSC-T6CSE mRNA无明显影响.50 μmol/L NaSH可明显促进HSC-T6增殖(细胞存活率为116%),500-1000 μmol/L NaSH对细胞增殖无明显影响.结论:活化HSC自分泌H2S,并且影响其增殖.H2S在肝纤维化及肝硬化门脉高压症的发生机制可能有重要作用.
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内源性硫化氢在不同时期大鼠肝硬化中的作用
目的: 观察内源性胱硫醚- γ - 裂解酶(cystathionine gamma-lyase, CSE)/硫化氢(hydrogen sulfide, H2S)(CSE/H2S)体系在不同时期肝硬化大鼠模型上的变化, 以探讨内源性H2S在肝硬化发生发展过程中的作用.方法: 制备四氯化碳诱导的肝硬化大鼠模型,在第15、30、52天取大鼠门静脉血检测H2S浓度, 用免疫组化和RT-PCR方法观察肝组织CSE mRNA的表达.结果: 肝硬化早、中、晚期大鼠门静脉血中H2S的含量均显著低于正常对照组( F =126.208, P = 0.000), 且H2S浓度随着肝脏病变的加重而逐渐降低( r = -0.777, P<0.05). 肝硬化不同时期肝组织CSE蛋白的灰阶值均低于正常对照组( F = 156.04, P = 0.000), 表明CSE表达增强. 各组CSE mRNA的表达均分别显著高于正常对照组( F = 23.927, P = 0.000), 且随着肝脏病变的加重表达逐渐增加.结论: H2S体系在肝硬化发生发展中起着保持血管舒张状态的重要作用.
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硫化氢对动脉粥样硬化的影响及其与CX3CR1的关系
目的 在高脂饮食ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化模型中,探讨硫化氢对动脉粥样硬化斑块的影响及其与斑块内趋化因子受体CX3CR1的关系.方法 10周龄、雄性纯合子ApoE基因敲除小鼠予以高脂饮食喂养,在高脂饮食喂养第4、8、12、24周时处死小鼠并留取血浆和主动脉,通过化学比色法和Westem Blot技术检测血浆硫化氢水平和主动脉胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)表达情况一部分小鼠在高脂饮食4或12周后开始每天予以硫化氢供体药物NaHS(1 mgkg-1,i.p)或生理盐水.高脂饮食24周后,通过超声生物显微镜成像技术评估小鼠主动脉及其主要分支内的动脉粥样硬化情况,随后处死小鼠并留取主动脉,通过H&E染色和免疫组化技术进一步观察小鼠头臂干动脉粥样斑块的病变情况及CX3CR1的表达水平.结果 在动脉粥样硬化斑块形成早期,即出现了CSE表达水平的显著降低,随着斑块的进展,CSE的表达水平进一步下调和CSE活性明显下降,终导致血浆硫化氨水平的显著降低.动脉粥样硬化早期或中晚期予以NaHS均可显著延缓动脉粥样硬化斑块的形成和进展,但是NaHS早期干预,其抗动脉粥样化的益处显著优于中晚期干预.NaHS的抗动脉粥样硬化益处可能与其抑制斑块内CX3CRl的表达有关.结论 动脉粥样硬化过程中存在着内源性硫化氢代谢紊乱,予以NaHS干预可抑制斑块内CX3CR1的表达和延缓动脉粥样硬化的进展,早期NaHs干预的疗效显著优于中晚期干预.
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硫化氢对糖尿病大鼠肾脏病变的减缓作用
目的 内源性硫化氢(H_2S)干预对糖尿病肾病大鼠肾小球病变的影响. 方法 把SD大鼠随机分成4组.建立糖尿病大鼠模型后,其中2组分别给以硫氢化钠和DL-propargylglycine治疗8周.免疫组化法检测肾组织中α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及纤维粘连蛋白(FN)分布及含量的变化. 结果 与H_2S组相比,糖尿病大鼠肾脏中α-SMA和FN的分布范围广泛,含量明显增加(P<0.01). 结论 外源性H_2S干预能够减缓糖尿病大鼠肾小球病变的进展.
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硫化氢对烧伤大鼠肠道组织干扰素-γ、肿瘤坏死因子-α含量的影响
目的 实验研究硫化氢(H2S)对烧伤大鼠肠道组织干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的影响,探讨H2S在烧伤大鼠肠道黏膜屏障功能中发挥的作用.方法 将104只健康雄性SD大鼠随机分为烧伤组(96只)和正常对照组(8只),其中烧伤组又分为单纯烧伤组(n=32)、炔丙基甘氨酸(PPG)干预组(n=32)、硫氢化钠(NaHS)干预组(n=32).各烧伤组分别于伤后2d、7d、14 d、21 d四个时相点取8只SD大鼠回肠组织,匀浆后取上清液用ELISA方法检测各组大鼠肠道组织中IFN-γ、TNF-α的含量变化情况.正常对照组适应性饲养1周后取回肠组织,检测IFN-γ、TNF-α的含量.结果 与正常对照组相比,单纯烧伤组、NaHS干预组、PPG干预组各时相点TNF-α和IFN-γ水平均明显升高(P＜0.05),在烧伤后2 d TNF-α水平高,烧伤后14 d IFN-γ水平达到高值,之后呈逐渐下降趋势.NaHS干预组各时相点TNF-α水平较单纯烧伤组均明显降低(P＜0.05),而IFN-γ水平明显升高；PPG干预组各时相点TNF-α水平较单纯烧伤组均升高,差异有统计学意义(P＜0.05),而IFN-γ均降低.结论 H2S可以显著降低烧伤大鼠肠道组织TNF-α水平,升高IFN-γ的水平,表明H2S可减轻肠道炎性反应,保护肠道黏膜屏障作用,为烧伤后应用外源性H2S加强肠道黏膜屏障功能提供了新思路.
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胱硫醚-γ-裂解酶/硫化氢系统在大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的保护作用
目的 研究胱硫醚-γ-裂解酶/硫化氢(CSE/H2S)系统在大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的保护作用,探讨其病理生理学意义.方法 将72只健康Wistar大鼠平均分为4组:假手术组(sham组)、缺血再灌注组(IR组)、IR+硫氢化钠组(IR+NaHS组)、IR+DL-炔丙基甘氨酸组(IR+PAG组).采用Pringle法夹闭30 min后恢复血流建立缺血再灌注损伤模型.再灌注后1、3、6 h取材检测血清H2S水平和CSE活性、肿瘤坏死因子(TNF)-α和白介素(IL)-10水平、肝组织中凋亡蛋白TNF-α表达、观察细胞凋亡状态以及肝脏组织学变化.结果 与sham组比较,IR组各时间点的血清H2S水平以及CSE活性均明显上升(P＜0.05),血清炎性细胞因子含量明显增高(P＜0.01),凋亡蛋白TNF-α表达也显著增加(P＜0.05).NaHS的应用可显著降低缺血再灌注后血清中炎性因子水平(P＜0.01)、减少细胞凋亡蛋白表达(P＜0.05)及减轻肝脏损伤(P＜0.05),而应用抑制剂PAG则结果相反.结论 CSE/H2S系统参与肝脏缺血再灌注损伤的内源性防御体系,应用外源性H2S通过参与炎症反应、减轻肝细胞损伤、抑制凋亡,从而在肝脏缺血再灌注损伤中起到保护作用.
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硝普钠对早产兔动脉导管胱硫醚-y-裂解酶-硫化氢体系的影响
目的 探讨一氧化氮(NO)供体硝普钠对早产兔动脉导管胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)-硫化氢(H2S)体系的影响.方法 孕龄21 d日本大耳白兔16只,随机分为对照组,腹腔注射硝普钠(NO供体)小剂量(1 mg/kg)组,中剂量(2.5 mg/kg)组,大剂量(5 mg/kg)组,每组4只,对照组单纯用空针穿刺孕兔腹腔,各腹腔注射硝普钠组待孕龄23和25 d时分别腹腔注射相应剂量的硝普钠.待孕龄第26天时对各组动物进行麻醉解剖取胎兔(对照组取得胎兔28只,硝普钠小剂量组27只,中剂量组29只,大剂量组26只),胎兔心脏取血1ml后立即解剖胎兔取动脉导管组织.用去蛋白方法测定胎兔血浆H2S含量,用实时荧光定量RT-PCR测定动脉导管组织中CSE基因,用Western-blot测CSE蛋白表达情况.结果 对照组胎兔血浆H2S含量为(55.68±6.57) μmol/L,动脉导管组织CSEmRNA表达量为1.07±4.12；硝普钠腹腔注射小剂量组分别为(60.02±6.09) μmol/L,3.46±0.18；中剂量组为(64.71 ±7.12) μmol/L,10.93 ±0.22；大剂量组为(70.63±8.07) μmol/L和19.57 ±0.17,小剂量组与对照组、中剂量组与小剂量组、大剂量组与中剂量组比较均P＜ 0.05,胎兔动脉导管CSE蛋白表达随着孕兔注射硝普钠剂量的增大而逐渐增多.结论 硝普钠对早产兔动脉导管中CSE-H2S体系在一定浓度范围内具有浓度依赖性促进作用.
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胱硫醚-γ-裂解酶在大鼠耳蜗的分布及其在噪声刺激后的表达变化
目的 探讨大鼠耳蜗胱硫醚-γ-裂解酶(cystatllionine-γ-lyase,CSE)的分布情况及在噪声刺激后的表达变化.方法 通过免疫组织化学及免疫荧光染色技术,观察CSE在正常成年SD大鼠耳蜗内的分布及定位.32只SD大鼠被分成4组:正常对照组、1天组、1周组、3周组,后3组分别暴露于110 dB SPL宽带白噪声中.采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法 检测大鼠接受强噪声刺激前后CSE在耳蜗内的表达变化.结果 CSE主要表达在大鼠耳蜗的血管纹,螺旋突,以及耳蜗微小血管处;在耳蜗内外毛细胞、各类支持细胞、盖膜及蜗神经节处未见明显表达.随着噪声刺激时间的延长,CSE在mRNA水平的表达呈先增长后下降的趋势.结论 CSE在耳蜗内的分布及其在噪声刺激后的表达变化,提示其在改善耳蜗血循环方面可能发挥重要作用.
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硫化氢和一氧化氮对心梗大鼠的心脏保护作用及相互关系
本研究旨在探索在大鼠心肌梗死过程中内源性硫化氢(H<,2>S)与一氧化氮(NO)对心肌组织的保护作用和两种气体分子之间的相互作用关系.将试验动物随机分成五组,分别给予H<,2>S合成酶胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)的抑制剂炔丙基甘氨酸(PAG)和CSE内源性底物左旋半胱氨酸(L-Cysteine),以及NO的合成酶(eNOS)的抑制剂L-NAME和激活剂西地那非(sildenafil),同时设置生理盐水组为对照.给药第七天,建立大鼠心肌梗死动物模型,存活大鼠继续观察48小时.通过对五组试验动物死亡率和心肌梗死面积,血浆中NO和H<,2>S的水平,以及心肌组织中CSE酶的活性和CSE和eNOS蛋白水平表达改变和基因水平mRNA的表达变化综合分析,我们认为内源性H<,2>S和NO对大鼠心肌梗死均有保护作用,H<,2>S-CSE体系和NO-eNOS体系在大鼠心肌梗死过程中呈相互下调的关系趋势.
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非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝脏内源性H2S合成减少
目的 探讨非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)大鼠肝脏硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)变化及与肝细胞线粒体损伤的可能关系.方法 采用雄性SD大鼠26只,分为正常对照组(n=6),NASH模型组(n=10)及复方牛胎肝提取物治疗组(n=10),高脂饮食12周建立NASH大鼠模型.亚甲基蓝分光光度法测定肝组织H2S生成率,RT-PCR及免疫组织化学测定肝组织CSEmRNA及其表达.透射电子显微镜观察肝细胞超微结构、PCR法测定肝细胞线粒体DNA(mtDNA)片段ND1、ND6、CO1、CYB及ATP6.结果 NASH大鼠模型组肝细胞线粒体肿大、膜模糊或嵴消失,正常组大鼠mtDNA片段ND1、ND6、CO1、CYB及ATP6表达明显高于模型组和治疗组(P<0.05).NASH模型组肝组织H2S生成率[(1.26±0.08)nmol/min]较正常组[(2.11±0.17)nmol/min]明显减少(P<0.05),且肝脏CSEmRNA水平及其表达减少,治疗组与模型组比较差异无统计学意义.结论 NASH大鼠肝脏H2S合成减少可能与肝细胞线粒体损伤有关,H2S在NASH发病机制中可能具有保护肝脏的作用.
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内、外源性硫化氢在脂多糖所致大鼠急性肺损伤中的作用
目的:探讨内、外源性硫化氢(H2S)在脂多糖(LPS)所致大鼠急性肺损伤(ALI)中的作用并初探其机制.方法:将120只SD大鼠随机分为对照组、LPS组(经气管内滴注LPS复制ALI模型)、NaHS+LPS组和炔丙基甘氨酸(PPG)+LPS组.给药后4h或8h处死动物,测定肺系数;光镜观察肺组织形态学改变;化学法检测血浆H2S、NO和CO含量、肺组织丙二醛(MDA)含量、胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和血红素加氧酶(HO)活性以及支气管肺泡灌洗液(BALF)中中性粒细胞(PMN)数目和蛋白含量的变化;用免疫组织化学法检测肺组织iNOS、HO-1蛋白表达.再将血浆H2S含量与上述指标进行相关性分析.结果:气管内滴注LPS可引起肺组织明显的形态学改变;肺系数和肺组织MDA含量增加;BALF中PMN数目和蛋白含量增加;血浆H2S含量和肺组织CSE活性下降;肺组织iNOS活性、HO活性和iNOS蛋白表达、HO-1蛋白表达增强,血浆NO含量、CO含量增加.预先给予NaHS可显著减轻LPS所致上述指标的改变;而预先给予PPG可加重LPS所致肺损伤,使BAIF中PMN数目和蛋白含量、血浆NO含量、肺组织iNOS活性和iNOs蛋白表达进一步增加,但对血浆CO含量、肺组织HO活性和HO-1蛋白表达无明显影响.H2S含量与CSE活性、血浆CO含量、肺组织HO-1活性呈正相关(r值=0.945～0.987,P均＜0.01);与其他指标呈负相关(r值=-0.994～-0.943,P均＜0.01).结论:H2S/CSE体系的下调在LPS所致大鼠ALI的发病学中有一定作用,内、外源性H2S具有抗LPS所致ALI的作用,该作用可能与其抗氧化效应、减轻PMN所致肺过度的炎症反应以及下调NO/iNOS体系、上调CO/HO-1体系有一定关系.
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内源性硫化氢体系与低O2高CO2性肺动脉高压的相关性研究
目的:研究低O2高CO2性肺动脉高压(HHPH)时大鼠肺组织内硫化氮(H2S)体系变化的改变及相关性,并探讨其机制.方法:20只SD大鼠随机分为正常对照组(C组)和低O2高CO2组(HH组)(n=10).监测其血流动力学变化,光镜观察肺细小动脉管壁面积/管总面积比值(WA/TA),测右心室/左心室+室间隔(RV/LV + SP)比值.原位缺口末端标记法(TUNEL法)观测肺细小动脉凋亡情况,并计算凋亡指数(AI),免疫组化检测肺细小动脉Bcl-2、Bax蛋白表达.敏感硫电极法测定血浆H2S含量及肺组织匀浆胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)活性变化.RT - PCR法测定肺组织中CSE墓因表达.结果:HH组肺平均动脉压(mPAP)、WA/TA、RV/LV + SP明显高于C组(P<0.05或P< 0.01).与C组相比,HH组AI显著下降(P<0.01),Bcl-2表达加强,Bax减弱,Bax/Bcl-2比值上升(均P < 0.01).血浆H2S含量、肺组织匀浆CSE活性、肺组织CSE基因表达水平HH组明显低于C组(P<0.01).血浆H2S、肺组织CSE活性、肺组织CSE mRNA相对含量与mPAP,Bcl-2/Bax比值均呈显著负相关,与AI呈显著正相关.结论:H2S/CSE体系与低O2高CO2性肺动脉高压关系密切,HBPH时H2S/CSE体系的明显受抑,可使Bcl-2/Bax比值升高,肺动脉平滑肌细胞凋亡减少,促进肺血管重建和肺动脉高压的形成.
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NO前体对高肺血流时肺动脉胱硫醚-γ-裂解酶基因表达的调节作用
目的:研究一氧化氮(NO)前体L-精氨酸(L-Arg)对高肺血流时肺动脉胱硫醚-γ-裂解酶(内源性硫化氢生成酶)的调节作用,以探讨NO体系对高肺血流肺动脉高压及肺血管结构重建调节作用的机制.方法:30只雄性SD大鼠随机分为对照组,分流组和分流+L-Arg组.对后两组大鼠行腹主动脉-下腔静脉分流术.观察术后11周大鼠肺动脉平均压(mPAP)、右心室肥厚和肺动脉相对中膜面积的改变,用竞争逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对肺组织CSEmRNA表达进行定量分析,同时用化学法测定肺组织硫化氢产出率.结果:分流组大鼠mPAP及肺动脉相对中膜面积明显高于对照组(P＜0.01),而分流+L-Arg组大鼠mPAP及肺动脉相对中膜面积明显低于分流组(P＜0.01).分流组CSEmRNA表达与对照组相比明显降低(P＜0.01),而分流组+L-Arg组CSEmRNA表达又明显高于分流组(P＜0.05);分流组大鼠肺组织硫化氢产出率明显低于对照组(P＜0.01),而分流组+L-Arg组大鼠肺组织硫化氢产出率及血浆硫化氢含量明显高于分流组(P＜0.01).结论:高肺血流可致肺动脉CSEmRNA下调,外源性NO能够缓解CSEmRNA的改变,从而对高肺血流所致肺血管结构重建和肺动脉高压起调节作用.
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硫化氢/胱硫醚-γ-裂解酶在内毒素性急性肺损伤发生中的作用
目的 探讨硫化氢/胱硫醚-γ-裂解酶(H2S/CSE)体系在内毒素所致大鼠急性肺损伤(ALI)中的作用并初探其机制.方法 将64只SD大鼠随机分为对照组、ALl组(经气管内滴注脂多糖(LPS)复制ALI模型]、硫氢化钠(NaHS)组和炔丙基甘氨酸(PPG)组,各组再分为给药后4 h和8 h亚组,每个亚组8只.于各时间点处死动物,光镜下观察肺组织病理学改变;化学法检测血浆H2S、一氧化氮(NO)和一氧化碳(CO)含量、肺组织丙二醛(MDA)含量、髓过氧化物酶(MPO)、CSE、诱生型一氧化氮合酶(iNOS)和血红素加氧酶(HO)活性;放射免疫法检测肺组织P-选择素含量,用免疫组化法检测肺组织iNOS、HO-1的蛋白表达.结果 气管内滴注LPS可引起肺组织明显的病理学改变;肺组织MDA含量、MPO活性和P-选择素水平升高,血浆iNOS、HO活性和肺组织iNOS、HO-1蛋白表达增强,血浆NO、CO含量增加,血浆H2S含量和肺组织CSE活性下降(P<0.05或P<0.01).预先给予NaHS可显著减轻内毒素所致上述指标的改变;而预先给予PPG可加重内毒素所致肺损伤,使肺组织MDA含量、MPO活性、P-选择素水平,血浆NO含量,肺组织iNOS活性和iNOS蛋白表达进一步增加,但对血浆CO含量、肺组织HO活性和HO-1蛋白表达无明显影响.结论 H2S/CSE体系的下调在内毒素所致大鼠ALI的发病学中有一定作用,内、外源性H2S具有抗内毒素所致ALI的作用,该作用可能与其抗氧化效应、减轻中性粒细胞所致肺过度的炎症反应以及下调NO/iNOS体系、上调CO/HO-1体系有一定关系.
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硫化氢/胱硫醚-γ-裂解酶系统在肺缺血/再灌注损伤中的作用
目的 探讨硫化氢/胱硫醚-γ-裂解酶(H2S/CSE)系统在肺缺血/再灌注损伤(LIRI)中的作用.方法 将40只SD大鼠随机均分成假手术组、LIRI组、NaHS组、炔丙基甘氨酸(PPG)组4组.制备在体大鼠单肺原位LIRI模型.NaHS组和PPG组分别于制模前腹腔注射NaHS 28 μmol/kg或PPG 30 mg/kg;假手术组和LIRI组给予生理盐水0.5 ml.实验结束后取血,检测血浆H2S浓度、超氧化物歧化酶(SOD)、髓过氧化物酶(MPO)活性和丙二醛(MDA)含量;检测肺组织H2S含量、CSE活性和CSE mRNA表达水平;计算肺系数及肺泡损伤率(IAR);并观察肺组织病理改变.结果 与假手术组比较,LIRI组血浆和肺组织H2S水平、肺组织CSE活性和CSE mRNA表达均降低(均P<0.01),血浆SOD降低,MDA、MPO升高(均P<0.01);肺系数、IAR增高(均P<0.01);同时LIRI组肺组织有明显的病理改变.与LIRI组比较,预先给予NaHS组血浆和肺组织H2S水平、肺组织CSE活性和CSE mRNA表达均升高(均P<0.01),血浆SOD升高,MDA、MPO降低(均P<0.01),肺系数、IAR降低(均P<0.01);同时肺组织病理改变减轻.而预先给予PPG组则相反,可加重LIRI所致的肺损伤(P<0.05或P<0.01).结论 H2S/CSE系统功能下调参与LIRI的病理过程,预先给予NaHS对肺组织有保护作用.
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缺氧和无血清培养对骨髓间充质干细胞内源性硫化氢生成的影响
背景：大鼠骨髓间充干细胞移植后的低存活率多与缺血微环境相关，而硫化氢可以对抗多种细胞与组织的凋亡和损伤模型。
目的：检测大鼠骨髓间充质干细胞在不同缺氧和无血清培养时间后的细胞凋亡、细胞活力、硫化氢含量及其合成酶体系的变化情况。
方法：取第3代大鼠骨髓间充质干细胞，设立5个(0，3，6，12和24 h)不同的缺氧和无血清培养时间点。用SubG1法检测细胞的凋亡率，用CCK-8法检测细胞的活力，并检测细胞培养基中硫化氢的含量以及细胞中硫化氢合成酶体系的表达变化情况。
结果与结论：与正常培养组相比，缺氧和无血清培养不同时间后，细胞的凋亡率显著增高，细胞活力明显下降。缺氧和无血清时间越长，细胞凋亡越多，活力越低，并且细胞培养基中硫化氢含量和细胞中硫化氢合成酶体系的表达也越低，差异有显著性意义。表明缺氧和无血清培养可以抑制大鼠骨髓间充质干细胞中硫化氢及其合成酶体系的生成和表达。
