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microRNA-1诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化
目的 研究microRNA-1(miRNA-1)能否诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌样细胞分化.方法 构建大鼠miRNA-1表达载体,分离扩增培养及鉴定大鼠MSCs.脂质体法转染大鼠第4代MSCs,实时定量RT-PCR(qRT-PCR)检测转染miRNA-1质粒后MSCs的miRNA-1表达水平.分别于转染2、4和6d后用RT-PCR检测心肌重要转录因子GATA4、NKx2.5和MEF2C的mRNA表达,免疫荧光检测心肌特异蛋白I(cTnI)的表达.结果 90%以上的MSCs表达MSCs重要标志物CD29、CD44;未检测到造血前体细胞标志抗原CD34、白细胞标志抗原CD45的表达.转染miRNA-1质粒后,miRNA-1表达水平明显上调.转染miRNA-1质粒2、4和6 d后,GATA4、NKx2.5和MEF2C的mRNA表达逐渐增强.第4和6天后可见cTnI阳性表达细胞.结论 miRNA-1能诱导大鼠MSCs向心肌样细胞分化.
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心肌miRNA-1和miRNA-21在七氟醚后处理老龄大鼠心肌效果中的差异性表达及意义
目的 初步探索心肌miRNA-1和miRNA-21在七氟醚后处理(SevoPoC)老龄心肌缺血/再灌注损伤(VRI)效果中的表达及其潜在作用.方法 建立年轻(3～4月龄)和老龄(22～24月龄)大鼠在体心梗模型(30 min冠脉结扎,恢复血流120 min),给予SevoPoC(1.0 MAC),采用TTC法检测心梗面积、TUNEL法检测心肌细胞凋亡和TaqMan探针法检测心肌miRNA-1和miRNA-21表达水平,并分别行miRNA-1和miRNA-21与细胞凋亡的相关性分析.结果 SevoPoC可明显降低年轻大鼠心肌I/RI引起的心肌梗死面积增加、凋亡水平升高(所有P＜0.05),但此效果在老龄大鼠中消失(所有P＞0.05).大鼠心肌I/RI可导致心肌miRNA-1和miRNA-21升高,但老龄较年轻组增幅更为明显(P＜0.05);SevoPoC能使年轻大鼠心肌miRNA-1和miRNA-21降至基础水平(P＜0.05),但老龄大鼠经SevoPoC后这两种水平仍较高(P＜0.05).相关分析结果显示,miRNA-1和miRNA-21均与凋亡水平呈现较强的正相关(P＜0.05).结论 SevoPoC并不能对在体老龄大鼠心肌I/RI发挥保护作用,表现为心肌梗死面积和细胞凋亡水平不下降,其机制可能与缺血后老龄心肌miRNA-1和miRNA-21过度激活有关.
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miRNA-1和急性心肌梗死后心肌缺血程度的相关性研究
目的：研究循环miRNA-1和急性心肌梗死后心肌缺血程度的相关性。方法入选经冠状动脉造影确诊为非急性心肌梗死的冠状动脉粥样硬化性心脏病患者为对照组；符合2012年全球统一心肌梗死定义的急性ST段抬高心肌梗死患者为实验组；对两组病例采集血液标本，采用qPCR 技术检测miRNA-1表达水平；同时对实验组进行ACC/AHA冠脉造影评分，比较两组间miRNA-1表达水平差异，并进一步分析实验组miRNA-1表达水平和ACC/AHA冠脉造影评分的相关性。结果入选42例病例，对照组21例，实验组21例。两组病例的micRNA-1相对表达量差异有统计学意义（P＜0.05）；并且实验组各病例的micRNA-1相对表达量和ACC/AHA冠脉评分存在显著相关性差异有统计学意义(相关系数R=0.6385，P＜0.05）。结论循环miRNA-1和心肌梗死后心肌缺血程度存在显著相关性，miRNA-1有望成为新的检测心肌梗死和临床风险评估的分子标志物。
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miRNA-1对大鼠心肌细胞凋亡的影响
目的：探讨微小RNA（miRNA）-1对大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法应用转染的方法使培养的大鼠H9c2心肌细胞高表达miRNA-1（miRNA-1组），real-time PCR方法检测miRNA-1表达水平以确定转染成功后，MTT法检测细胞活力，流式细胞术测定细胞凋亡情况，分别采用real-time PCR和Western Blot方法检测凋亡抑制基因Bcl-2的mRNA和蛋白表达情况，并与常规条件下培养的H9c2细胞（空白对照组）和转染随机合成的miRNA阴性对照片段（阴性对照组）比较。结果与空白对照组和阴性对照组相比，转染miRNA-1 mimics后，H9c2大鼠心肌细胞miRNA-1表达水平明显升高，细胞凋亡率显著增加，细胞生存率、Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平显著降低。结论转染的miRNA-1 mimics能够上调细胞内的miRNA-1表达水平，抑制心肌细胞增殖，促进细胞凋亡。
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凋亡相关性microRNA及其靶基因蛋白在心肺复苏后大鼠心肌中的表达变化
目的:探讨凋亡相关性微小RNA (microRNA,miRNA)在心肺复苏(CPR)后大鼠心肌中的表达变化.方法:雄性SD大鼠16只,随机分成对照组(A组)和复苏组(B组),每组8只,采用窒息法建立心搏骤停(CA)大鼠模型.以脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测自主循环恢复后(ROSC)后24 h的心肌细胞凋亡指数(AI)；实时荧光定量法检测miRNA-1和miRNA-133a的表达情况；免疫组化染色法检测Bc1-2、Bax蛋白表达.结果:B组ROSC后24 h AI、miRNA-1、miRNA-133a、Bc1-2及Bax蛋白表达比A组高(P＜ 0.01),Bc1-2/Bax值比A组低(Jp＜0.01),miRNA-1、miRNA-133a分别和Bc1-2、Bax的变化有相关性.结论:大鼠心搏骤停/心肺复苏后存在明显的心肌细胞凋亡,凋亡相关的miRNA变化可能是其机制之一.
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miRNA－1靶基因的生物信息学分析
目的：采用生物信息学的方法对miRNA－1的靶基因进行预测，并对其集合进行富集分析和生物学描述。方法分别采取TargetScan和PicTar对miRNA－1靶基因进行预测，取它们预测结果的合集。采用Cytospace的插件BiNGO和DAVID数据库，获得基因集合的基因本体注释和生物学通路信息并进行富集分析。结果获得miRNA－1预测的靶基因229个；分子功能富集在生物分子结合、酶调节和催化活动等；生物学过程富集在生物组装、代谢调控、应对刺激、生物合成和代谢等。生物学通路富集在富集于剪接体、囊泡运输中SNARE相互作用和小细胞肺癌。结论在高通量系统验证方法尚未建立的阶段，采用了生物信息学的方法，可以从miRNA－1调控网络中提出了进一步研究的线索。
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慢性心衰大鼠心肌miRNA-1、miRNA-133/Caspases表达差异研究
目的 探讨慢性心衰大鼠心肌miRNA-1、miRNA-133/Caspases表达差异.方法 30只SD大鼠随机分为正常组10只,模型组20只.正常组等容量生理盐水腹腔注射,模型组予阿霉素腹腔注射造模;采用心脏彩超检测心功能,采用生理记录仪记录血流动力学,心脏切片行Tunel染色检测细胞凋亡,采用Real-time PCR法检测miRNA-1、miRNA-133、Caspase-3mRNA、Caspase-9mRNA表达;采用Western blot及免疫组化法检测心肌组织Caspase-3、Caspase-9蛋白表达水平.结果 与正常组比,模型组大鼠左室舒张期内径(LVIDd)、左室收缩末期内径(LVESD)、左心室终末舒张压(LVEDP)明显增大(P<0.05),而左心室短轴缩短率(LVFS)、左室射血分数(LVEF)、心输出量(CO)、左心室平均压(LVAP)、左心室内压大上升速率(dp/dtmax)及左心室内压大下降速率(-dp/dtmax)下降(P<0.01),Tunel染色示心肌凋亡明显.miRNA-1、Caspase-3mRNA、Caspase-9mRNA、Cas-pase-3蛋白、Caspase-9蛋白表达增加(P<0.01),miRNA-133表达下降(P<0.01).结论 miRNA-1、Caspase-3、Caspase-9在心肌凋亡中表达增加,miRNA-133表达下降.
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利用质粒介导的miRNA-1-2抑制H9C2中Hand2蛋白的表达
目的 构建人miRNA-1-2的真核表达载体,并检测其对大鼠成肌细胞H9C2中Hand2蛋白表达的抑制作用.方法 用PCR法体外合成miRNA-1-2前体序列的DNA模板.并定向插入到发夹RNA(hairpin RNA)表达载体pSilencer-4.1-neo上.用脂质体法将构建正确的重组质粒pSilencer-4.1/nfiRNA-1-2瞬时转染H9C2细胞.检测miRNA-1-2前体转录本(pre-miRNA-1-2)和miRNA-1靶基因Hand2(heart andneural crestderivatives expressedtranscript2)的表达.结果 DNA测序表明重组质粒pSilencer-4.1/miRNA-1-2构建正确.pSilencer-4.1/miRNA-1-2转染的H9C2细胞中.pre-miRNA-1-2被有效表达,Hand2 mRNA表达无变化,Hand2蛋白表达被抑制.结论 成功构建了miRNA-1-2的真核表达载体,由表达载体介导的miRNA-1能有效抑制Hand2蛋白的表达.
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miRNA-1与糖尿病心肌病心肌细胞肥大相关性的初步探讨
[目的]观察糖尿病大鼠动物模型心脏及大鼠离体心肌细胞在高糖诱导下miRNA-1的表达水平,测定心肌细胞的大小、蛋白含量以及ANP和BNP的表达,并探讨其相关性.[方法]STZ诱导建立糖尿病大鼠模型(模型组15只,对照组10只),在成模后8周进行心功能、心肌肥大相关基因ANP和BNP mRNA、miRNA-1的检测.并分离原代乳鼠心肌细胞进行培养,在24 h、48 h和72 h时间点动态观察正常糖浓度(5 mmol/L)和高糖浓度(30 mmol/L)心肌细胞miRNA-1表达的差异,并分析比较不同葡萄糖浓度培养下心肌细胞的直径、蛋白质含量以及心肌细胞肥大基因的表达,统计分析高糖浓度培养心肌细胞miRNA-1表达与心肌细胞肥大相关指标的相关性.[结果]糖尿病大鼠模型8周末显示心功能障碍,miRNA-1较对照组明显下降,ANP及BNPmRNA明显升高,组间差别均有统计学意义.高糖诱导大鼠离体心肌细胞miRNA-1的总量随时间呈先升后降趋势并有统计学意义(F=15.109,P=0.001);高糖刺激使心肌细胞直径、心肌细胞蛋白含量随培养的时间延长而逐步增高,并明显大于正常糖浓度培养下的心肌细胞;高糖刺激时心肌细胞ANP及BNPmRNA表达变化趋势与miRNA-1表达一致,ANPmRNA表达与miRNA-1存在线性相关(r=0.990,P=0.01).[结论]糖尿病大鼠心肌组织及高糖培养诱导原代乳鼠心肌细胞miRNA-1发生明显改变,乳鼠心肌细胞miRNA-1表达与心肌细胞肥大变化相一致,与心肌细胞ANP的表达变化呈线性相关.
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血清miRNA-1、miRNA-21检测预测PCI术后患者再狭窄的临床价值
目的 探讨血清中miRNA-1、miRNA-21水平检测对经皮冠状动脉介入术(PCI)后患者半年内扩张部位再狭窄的临床预测价值.方法 选取2014年5月至2016年5月在延安大学咸阳医院接受PCI术的70例冠心病患者(再狭窄组37例,未狭窄组33例),行血管内超声(IVUS)检查,并选择33例体检健康者(对照组),检测各组血清中miRNA-1、miRNA-21水平,采用t检验、Pearson相关性分析及建立受试者工作曲线(ROC曲线)进行比较分析.结果 血清miRNA-1在再狭窄组、未狭窄组和对照组中的表达水平分别为(0.23±0.05)、(0.35±0.09)、(0.91±0.13),血清miRNA-21的水平分别为(0.85±0.15)、(0.36±0.08)、(0.20±0.03).再狭窄组血清miRNA-1水平明显低于对照组,miRNA-21水平则明显高于对照组.而与未狭窄组比较,再狭窄组miRNA-1水平显著下调,miRNA-21水平则显著上调,差异均有显著统计学意义(P<0.01).IVUS结果显示PCI术后再狭窄组外弹力膜内横截面积(EEM)、斑块面积(PLA)和小管腔面积(MLA)分别为(9.97±2.17)mm2、(11.28±2.75)mm2、(3.78±1.87)mm2;IVUS结果显示PCI术后未再狭窄组EEM、PLA和MLA分别为(13.66±2.28)mm2、(6.13±1.90)mm2、(6.07±2.07)mm2.再狭窄组与未狭窄组比较,PLA显著增高,EEM和MLA显著降低.再狭窄组miRNA-21水平分别与EEM、PLA和MLA有明显的相关性(r=-0.588,P<0.01;r=0.583,P<0.01;r=-0.608,P<0.01);再狭窄组miRNA-1水平分别与EEM、PLA和MLA有相关性(r=0.613,P<0.01;r=-0.605,P<0.01;r=0.593,P<0.01).再狭窄组的血清miRNA-1与miRNA-21水平呈负相关(r=-0.657,P<0.01).ROC曲线分析显示,血清miRNA-21水平的AUC为0.751(95%CI:0.687~0.892,P=0.000);血清miRNA-1水平的AUC为0.722(95%CI:0.679~0.883,P=0.000).根据SPSS统计结果计算出miRNA-21在佳临界值处诊断PCI术后再狭窄发生及狭窄程度监测的敏感性和特异性为96.9%和95.3%,miRNA-1的敏感性和特异性为90.6%和95.3%.结论 检测PCI术后患者血清中miRNA-1、miRNA-21水平可以预测其扩张部位再狭窄的发生.
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miRNA-1 HSP70与急性心肌梗死相关性研究
目的 探讨miRNA-1、热休克蛋白70(HSP70)与急性心肌梗死的关系.方法 选择2010年1月至2014年1月在郑州大学第二附属医院心血管内科住院患者160例,将其分为急性心肌梗死组73例和对照组87例,对所有患者采用放射免疫法检测miRNA-1、HSP70水平.结果 急性心肌梗死组MiRNA-1、HSP70均显著高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.001),急性心肌梗死组中HSP70与miRNA-1的表达水平呈正相关(r=0.776,P=0.005),对照组中HSP70与miRNA-1的表达水平无关(r=-0.121,P=0.334).结论 MiRNA-1、HSP70能在急性心肌梗死早期表达,可能是其在心肌梗死早期起到保护心肌作用的机制之一.
关键词： 心肌梗死 急性病 HSP70热休克蛋白类 miRNA-1 -
被动运动干预对大鼠失神经萎缩骨骼肌中miRNA-1表达和成肌细胞分化的影响
目的 探讨miRNA-1在大鼠早期失神经支配后骨骼肌中不同时段的表达,以及被动运动对失神经骨骼肌miRNA-1表达及成肌细胞分化的影响.方法 取SD大鼠27只,体质量(200±10)g,随机分为假手术组(A组,n=3)、失神经组(B组,n=12)和失神经被动运动组(C组,n=12).各组大鼠显露右侧坐骨神经并游离,B、C组切除坐骨神经长约1 cm,A组仅显露游离神经不切除;术后1d起,对C组大鼠右后肢行被动屈伸运动.A组于术后6h,B、C组分别于术后3、7、14、28 d,采用颈椎脱臼法各处死3只大鼠,测量腓肠肌湿重比以及行HE染色观察腓肠肌细胞直径,对肌萎缩情况进行综合评价;采用RT-PCR法检测miRNA-1、肌分化因子(myocyte differentiationfactor,MyoD)基因表达,免疫组织化学染色观察MyoD蛋白表达.结果 B、C组腓肠肌失神经后均有不同程度萎缩,随失神经时间延长,肌纤维排列逐渐紊乱,肌细胞直径逐渐减小,失去正常的结构形态.B、C组术后各时间点腓肠肌湿重及肌细胞直径均小于A组(P＜0.05);B、C组间除术后3d腓肠肌湿重比以及术后3、28 d肌细胞直径比较差异无统计学意义(P＞0.05)外,其余各时间点C组均大于B组(P＜0.05).术后随时间延长,B、C组miRNA-1和MyoD基因相对表达量呈逐渐升高趋势,但各时间点均显著低于A组(P＜0.05);B、C组间除术后3d比较差异无统计学意义外(P＞0.05),术后7、14、28 dC组miRNA-1和MyoD基因相对表达量均高于B组(P＜0.05).免疫组织化学染色示A、B、C组各时间点MyoD均呈阳性表达,A组阳性表达少于B、C组;B、C组随失神经时间延长,阳性表达逐渐增多,且C组各时间点阳性表达均多于B组.相关性分析结果示miRNA-1、MyoD分别与腓肠肌湿重比在3、7d时无相关性(P＞0.05),14、28 d时成正相关(P＜0.05);各时间点MyoD与miRNA-1基因相对表达量成正相关(P＜0.05).结论 被动运动可能通过促进miRNA-1的表达,以促进肌细胞分化发挥防止失神经骨骼肌萎缩的作用.
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心房颤动患者血浆miRNA-1和miRNA-155检测在复律后复发预测的应用研究
目的 探讨血浆miRNA-1和miRNA-155检测在心房颤动患者复律后复发预测中的临床应用价值.方法 收集2015年10月～2017年11月于西安市第八医院和咸阳市中心医院心内科住院治疗的110例房颤患者的血液及临床资料(复律组110例,复发组30例,未复发组80例),比较分析三组患者血浆miRNA-1和miRNA-155表达水平的变化与房颤复发的关系.两标志物的表达采用实时逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测.应用心动超声仪评价患者的左房内径及左心室射血分数.采用罗氏MODULARPS00全自动生化分析仪检测患者的空腹血糖及总胆固醇水平.建立受试者工作特征曲线(ROC曲线)评价miRNA-1和miRNA-155在房颤复发中的临床意义.结果 血浆miRNA-1和miRNA-155在未复发组、复律组和复发组的水平分别为0.38±0.09,0.39±0.08,0.82±0.15和0.87±0.17,0.85±0.18,0.21±0.05.它们在复发组的表达与未复发组和复律组分别比较明显上调、下调(t=21.37,20.57,均P＜0.01;t=18.77,11.71,均P＜0.01),而在未复发组与复律组的表达比较差异无统计学意义(t=0.67,0.54,均P＞0.05).房颤患者的收缩压、血清总胆固醇水平(TC)、左房内径、空腹血糖水平(FBG)和左室射血分数(EF)分别在未复发组、复律组和复发组的检测结果为(133±7mmHg,3.87±0.73 mmol/L,44.97±6.82 mm,4.13±0.57 mmol/L,61.20％±7.38％),(134±6mmHg,3.98±0.70 mmol/L,45.50±6.72 mm,4.17±0.46 mmol/L,61.07％±7.19％),(145±7 mmHg,4.03±0.71 mmol/L,58.97±7.33 mm,4.20±0.50 mmol/L,60.30％±7.21％).复发组的左心房内径和收缩压分别与复律组和未复发组比较显著增高(t=6.69,10.23,P＜0.01;t=8.42,15.53,P＜0.01);而复律组的两项指标分别与未复发组比较差异均无统计学意义(t=0.73,0.27,均P＞0.05);各组间的TC,FBG和EF比较,差异均无统计学意义(t=0.58,0.61,0.52,均P＞0.05;t=0.65,0.58,0.41,均P＞0.05;t=0.61,0.41,0.52,均P＞0.05).在复发组中,miRNA-1和miRNA-155表达具有负相关(r=-0.673,P＜0.01),且它们分别与左心房内径、收缩压也具有相关性(r=0.528,-0.537),均P＜0.01.ROC曲线的分析中,复发组分别以复律组和未复发组为参照,血浆miRNA-1的AUC分别为0.743(95％CI:0.627～0.839),P＜0.01;0.730(95％CI:0.21～0.826),P＜0.01,血浆miRNA-155的AUC分别为0.703(95％CI:0.628～0.837),P＜0.01;0.685(95％CI:0.603～0.813),P＜0.01.结论 血浆miRNA-1和miRNA-155检测可应用于房颤患者复律后复发的预测,并成为房颤复发有效的预警标志物和干预靶点.
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ET方案新辅助化疗对三阴乳腺癌患者的疗效及对血浆miRNA-1水平的影响
目的 探讨ET方案新辅助化疗对三阴乳腺癌的治疗效果及对血浆miRNA-1水平的影响.方法选择三阴乳腺癌患者120例,根据其治疗方式分为常规化疗组和ET方案新辅助化疗组各60例.观察两组患者的治疗效果,比较两组患者1年生存率,肿瘤标志物、细胞因子和血浆miRNA-1相对表达量水平的差异.结果 ET方案新辅助化疗组患者的有效率(96.67%)高于常规化疗组(83.33%),差异有显著性(χ2=5.926,P=0.015).治疗前两组患者肿瘤标志物水平和miRNA-1相对表达量差异无显著性,治疗后,ET方案新辅助化疗组患者的CEA、CA19-9、CA125水平和miRNA-1相对表达量低于常规化疗组.常规化疗组1年生存率83.33%,ET方案新辅助化疗组91.67%,差异无显著性(χ2=1.905,P=0.168).结论 ET方案新辅助化疗对三阴乳腺癌有较好的治疗效果,可明显改善细胞因子水平和miRNA-1表达.
